一种单细胞藻类总RNA提取试剂盒及提取方法与流程

一种单细胞藻类总rna提取试剂盒及提取方法
技术领域
1.本发明属于藻类rna提取技术领域，具体涉及一种单细胞藻类总rna提取试剂盒及提取方法。


背景技术：

2.藻类是原生生物中一类能够进行光合作用的水生生物，藻类中成员广泛，形态各异，既有微小的微单胞菌，也有长达60米的大型藻类。藻类细胞中的光合作用元件相对于植物而言更为多样，其细胞也有区别于动植物细胞的独立特点。藻类在生态系统中通常是氧气制造者，并作为大多数水生生物捕食的场所，同时，藻类也是原油和人类食物的来源，其加工品是药品和工业的重要原料。微藻是藻类中一类单细胞藻，藻体为单个细胞或多细胞群体，其细胞类型为原核或双核，有文献将微藻等同于浮游生物。人类发现、开发单细胞藻类已有上千年历史，其在多个领域具有巨大的潜在利用价值，除作为人类和动物的食品外，单细胞藻类富含类胡萝卜素、藻胆蛋白等物质，被用来作为药品、生物染料、化肥等生产的原料，同时，因其在营养丰富的环境中较强的养分吸收、积累金属离子的能力，也被用于水域治废治污和固碳降碳。
3.蓝藻、绿藻、小球藻等单细胞藻类长期以来是发育生物学、分子生态学等基础研究学科重要的研究材料，对单细胞藻类的基因表达研究手段，包括northern杂交、芯片杂交、rt-pcr和cdna文库构建等，首先需要从材料中获取高质量的总rna。单细胞藻富含酚类、脂质、多糖和内生的rna酶等，有文献表明在低盐离子浓度的缓冲液中多糖容易和rna共同聚沉，这使得分离提取高纯度、高完整度的总rna十分困难。
4.传统的提取方法针对性不强，效果不佳，rna得率较低，且样本处理通量有限；目前市面上针对单细胞藻类的总rna提取试剂盒较少，中国专利cn102807978一种藻类rna提取剂及使用方法和中国专利cn115678891一种微藻菌细胞总rna的提取方法，这两种藻类rna的提取方案中都要用到氯仿，存在一定的试验安全隐患。因此，开发一种安全系数高，提取效率高而且提取效果好的单细胞藻类总rna提取试剂盒及提取方法是很有必要。


技术实现要素：

5.针对目前所存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种单细胞藻类总rna提取试剂盒及提取方法，无需机械研磨和高温孵育裂解，无需用到酚、氯仿等有机物抽提和盐沉淀步骤，提高实验安全性，操作简单快捷，提取效果稳定良好，适用于多种类的单细胞藻。
6.为了达到上述目的，本发明采用如下技术手段：
7.本发明的第一方面在于提供一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，包括裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2以及洗脱液，其中：
8.所述裂解液包括盐酸胍、乙二胺四乙酸、吐温20、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮；
9.所述绑定液包括氯化锂和乙醇；
10.所述漂洗液1包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙二胺四乙酸；
11.所述漂洗液2包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙醇；
12.所述洗脱液为无核酸酶水。
13.进一步地，所述裂解液中，盐酸胍终浓度为4-8mol/l、乙二胺四乙酸终浓度为25-100mmol/l、吐温20终浓度为1-2.5％、二硫苏糖醇终浓度为20-50mmol/l和聚乙烯吡咯烷酮终浓度为1-2.5％。
14.进一步地，所述绑定液中，氯化锂终浓度为6-12mol/l，乙醇终浓度为50-85％。
15.进一步地，所述漂洗液1中，异硫氰酸胍终浓度为1-5mol/l，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐终浓度为10-20mmol/l，乙二胺四乙酸终浓度为5-20mmol/l。
16.进一步地，所述漂洗液2中，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐终浓度为10-20mmol/l，乙醇终浓度为50-85％。
17.本发明的第二方面在于提供一种前文所述的单细胞藻类总rna提取试剂盒进行rna提取的方法，包括如下步骤：
18.s1，取藻类样本置于样本管a中，加入裂解液，涡旋振荡混匀3-5分钟，将藻体细胞分散悬浮至无结块；
19.s2，室温静置3-7分钟，随后4℃，12000g，高速离心2-5min；离心后移取上清液到样本管b中；
20.s3，向样本管b中加入5-15μl磁珠悬液和350-450μl绑定液，置于混匀仪上，室温振荡混匀5-7min，随后将样本管b放置在磁力架上，静置，磁珠完全吸附后，弃上清；
21.s4，向完成s3的容器b中加入550-650μl漂洗液1，将容器b从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀30-90s，在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃上清；
22.s5，向完成s4的容器b中加入550-650μl漂洗液2，将容器b从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀30-90s，在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃上清，室温下晾干；
23.s6，向晾干的容器b中加入40-60μl洗脱液，放置在磁力架上静置2-4min，然后转移到混匀仪上，振荡混匀3-7min；
24.s7，将完成s6的容器b置于磁力架上静置2-5min，磁珠完全吸附后，将上清溶液转至容器c中，容器c中的上清液即为提取得到的rna产物，-80℃保存。
25.进一步地，所述藻类样本为单细胞藻类样本。
26.此方法中，藻体经过富集收集，通过裂解液裂解的方式将rna从藻类细胞中释放出来，并与含量丰富的次级代谢物分离，离心去除难溶的杂质，吸取上清液使用醇类绑定液聚沉其中的rna，并与硅基磁珠结合，随后进入全自动化rna制备流程，经过两次漂洗除去盐类、酚类等杂质，最终使用无核酸酶水洗脱，得到提纯的rna产物。
27.本发明的有益效果
28.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：本发明该方法不经机械研磨和高温孵育裂解，而是采用裂解液裂解藻类细胞，整个提取过程中无需用到酚、氯仿等有机物抽提和盐沉淀步骤，操作简单、安全、快捷，提取效果稳定良好，适配多种类的单细胞藻；并且该藻类rrna提取试剂盒和提取方法是基于磁珠纯化的方式，可以适配多类磁棒法全自动核酸提取设备，能够实现更高的样本处理通量，提取效率高。
附图说明
29.图1示出了本发明对比例1样本1-12的dna凝胶电泳图；
30.图2示出了本发明对比例1样本13-24的dna凝胶电泳图；
31.图3示出了本发明实施例3样本1-12的dna凝胶电泳图；
32.图4示出了本发明实施例3样本13-24的dna凝胶电泳图；
33.凝胶电泳时，从左到右按照对照组和实验组样本编号依次点样。
具体实施方式
34.除非另有说明、从上下文暗示或属于现有技术的惯例，否则本技术中所有的份数和百分比都基于重量，且所用的测试和表征方法都是与本技术的提交日期同步的。在适用的情况下，本技术中涉及的任何专利、专利申请或公开的内容全部结合于此作为参考，且其等价的同族专利也引入作为参考，特别这些文献所披露的关于本领域中的合成技术、产物和加工设计、聚合物、共聚单体、引发剂或催化剂等的定义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本技术中提供的任何定义不一致，则以本技术中提供的术语定义为准。
35.本技术中的数字范围是近似值，因此除非另有说明，否则其可包括范围以外的数值。数值范围包括以1个单位增加的从下限值到上限值的所有数值，条件是在任意较低值与任意较高值之间存在至少2个单位的间隔。例如，如果记载组分、物理或其它性质(如分子量，熔体指数等)是100至1000，意味着明确列举了所有的单个数值，例如100，101，102等，以及所有的子范围，例如100到166，155到170，198到200等。对于包含小于1的数值或者包含大于1的分数(例如1.1，1.5等)的范围，则适当地将1个单位看作0.0001，0.001，0.01或者0.1。对于包含小于10(例如1到5)的个位数的范围，通常将1个单位看作0.1。这些仅仅是想要表达的内容的具体示例，并且所列举的最低值与最高值之间的数值的所有可能的组合都被认为清楚记载在本技术中。
36.关于化学化合物使用时，除非明确地说明，否则单数包括所有的异构形式，反之亦然(例如，“己烷”单独地或共同地包括己烷的全部异构体)。另外，除非明确地说明，否则用“一个”，“一种”或“该”形容的名词也包括其复数形式。
37.术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本技术中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本技术中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，出来对操作性能所必要的那些，术语“基本上由
……
组成”将任何其他组分、步骤或过程排除在任何该术语下文叙述的范围之外。术语“由
……
组成”不包括未具体描述或列出的任何组分、步骤或过程。除非明确说明，否则术语“或”指列出的单独成员或其任何组合。
38.为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
39.实施例
40.以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实
施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
41.除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
42.实施例1
43.本实施例提供一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，包括裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2以及洗脱液，其中：
44.裂解液中，盐酸胍终浓度为4-8mol/l、乙二胺四乙酸终浓度为25-100mmol/l、吐温20终浓度为1-2.5％、二硫苏糖醇终浓度为20-50mmol/l和聚乙烯吡咯烷酮终浓度为1-2.5％。
45.绑定液中，氯化锂终浓度为6-12mol/l，乙醇终浓度为50-85％。
46.漂洗液1中，异硫氰酸胍终浓度为1-5mol/l，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐终浓度为10-20mmol/l，乙二胺四乙酸终浓度为5-20mmol/l。
47.漂洗液2中，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐终浓度为10-20mmol/l，乙醇终浓度为50-85％。
48.洗脱液为无核酸酶水。
49.实施例2
50.本实施例提供了一种利用前文所述的单细胞藻类总rna提取试剂盒进行rna提取的方法，包括如下步骤：
51.s1，取藻类样本置于样本管a中，加入裂解液，涡旋振荡混匀3-5分钟，将藻体细胞分散悬浮至无结块；
52.s2，室温静置3-7分钟，随后4℃，10000-13000g，高速离心2-5min；离心后移取上清液到样本管b中；
53.s3，向样本管b中加入5-15μl磁珠悬液和350-450μl绑定液，置于混匀仪上，室温振荡混匀5-7min，随后将样本管b放置在磁力架上，静置，磁珠完全吸附后，弃上清；
54.s4，向完成s3的容器b中加入550-650μl漂洗液1，将容器b从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀30-90s，在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃上清；
55.s5，向完成s4的容器b中加入550-650μl漂洗液2，将容器b从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀30-90s，在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃上清，室温下晾干；
56.s6，向晾干的容器b中加入40-60μl洗脱液，放置在磁力架上静置2-4min，然后转移到混匀仪上，振荡混匀3-7min；
57.s7，将完成s6的容器b置于磁力架上静置2-5min，磁珠完全吸附后，将上清溶液转至容器c中，容器c中的上清液即为提取得到的rna产物，-80℃保存。
58.样本选择和准备
59.样本种类选取蓝藻、微囊藻、绿藻、小球藻、衣藻和盐藻6类单细胞藻，确保样本的培养条件、生长状态一致，分别收集指数生长期的蓝藻、微囊藻、绿藻、小球藻、衣藻和盐藻，每份样本使用50ml藻类悬液，4
°
，1000g离心5min，弃除上清液，加入5ml无核酸酶pbs，使用宽口移液枪头轻柔吹打充分重悬底部沉淀，然后4
°
，1000g离心5min，弃除上清液，即获得藻
体细胞沉淀，置于冰上待用。
60.每类藻类取8份样本，分为实验组和对照组2组，每组4份样本，每份样本细胞数量约1
×
106个，共计48份样本，对样本进行编号，具体信息见下表：
61.类型对照组实验组类型对照组实验组蓝藻22k11r-122k11r-25微囊藻22k11r-522k11r-29蓝藻22k11r-222k11r-26微囊藻22k11r-622k11r-30蓝藻22k11r-322k11r-27微囊藻22k11r-722k11r-31蓝藻22k11r-422k11r-28微囊藻22k11r-822k11r-32绿藻22k11r-922k11r-33小球藻22k11r-1322k11r-37绿藻22k11r-1022k11r-34小球藻22k11r-1422k11r-38绿藻22k11r-1122k11r-35小球藻22k11r-1522k11r-39绿藻22k11r-1222k11r-36小球藻22k11r-1622k11r-40衣藻22k11r-1722k11r-41盐藻22k11r-2122k11r-45衣藻22k11r-1822k11r-42盐藻22k11r-2222k11r-46衣藻22k11r-1922k11r-43盐藻22k11r-2322k11r-47衣藻22k11r-2022k11r-44盐藻22k11r-2422k11r-48
62.实施例3
63.使用商品化trizol试剂(invitrogen，usa)，适配奥美泰克me-480全自动核酸提取仪，对编号22k11r-1到22k11r-24的对照组样本进行rna提取。
64.对照组样本提取过程如下：
65.(1)每份样本收集大约1
×
106个藻体细胞于2ml离心管中，加入500μl trizol试剂，涡旋振荡混匀3-5分钟，将藻体细胞重悬，确保无明显结块，保证裂解充分；
66.(2)室温静置5分钟，随后4℃，12000g，高速离心3min；离心后小心移取上清液，避免吸取到管底残渣沉淀，枪头吸液随液面下降而下移，获取上清溶液；
67.(3)向上清溶液中加入0.2倍体积，约80μl的氯仿，涡旋振荡混匀3-5分钟，室温静置3分钟；
68.(4)将样本管4℃，12000g，高速离心10min；离心后小心移取上清液，避免吸取到下层有机溶液及中间层沉淀，枪头吸液随液面下降而下移；
69.(5)准备自动化核酸提取设备适配深孔板：准备第一块深孔板，在深孔板中加入400μl绑定液和10μl充分混匀的磁珠；
70.(6)转移步骤(2)中的上清至第一块96深孔板中，上清液约400μl(如上清不到400μl则补加无核酸酶水至400μl)；
71.(7)准备第二块深孔板，向深孔板中加入600μl漂洗液1；
72.(8)准备第三块深孔板，向深孔板中加入600μl漂洗液2；
73.(9)准备第四块深孔板，向深孔板中加入50μl无核酸酶水；
74.(10)按照下图位置将样本板、漂洗液板及洗脱液板正确放置到提取设备板位上：
75.22k11r-1漂洗液1漂洗液2无核酸酶水22k11r-2漂洗液1漂洗液2无核酸酶水22k11r-3漂洗液1漂洗液2无核酸酶水
........................22k11r-23漂洗液1漂洗液2无核酸酶水22k11r-24漂洗液1漂洗液2无核酸酶水
76.(11)按照以下程序运行仪器：
77.步骤磁棒静置时间样本板混匀时间磁棒磁吸时间rna磁珠结合0min6min60s第一次漂洗0min1min60s第二次漂洗0min1min60srna洗脱3min5min180s
78.(12)自动化提取仪运行结束后立即将提取完的rna转出到96孔板中，置于冰上，防止rna降解，将每份样本写上对应的样本编号；
79.(13)将rna样本储存于-80℃，长期保存。
80.实施例4
81.采用实施例1的试剂盒，适配奥美泰克me-480全自动核酸提取仪，对编号22k11r-25到22k11r-48的实验组样本rna提取。
82.实验组样本rna提取步骤如下：
83.(1)将实验组样本分别置于2ml离心管中，加入500μl裂解液，涡旋振荡混匀3-5分钟，将藻体细胞重悬，确保无明显结块，保证裂解充分；
84.(2)室温静置5分钟，随后4℃，12000g，高速离心3min；离心后小心移取上清液，避免吸取到管底残渣沉淀，枪头吸液随液面下降而下移，获取上清溶液；
85.(3)准备自动化核酸提取设备适配深孔板：准备第一块深孔板，在深孔板中加入400μl绑定液和10μl充分混匀的磁珠；
86.(4)转移步骤(2)中的上清至第一块深孔板中，上清液约400μl(如上清不到400μl则补加无核酸酶水至400μl)；
87.(5)准备第二块深孔板，向深孔板中加入600μl漂洗液1；
88.(6)准备第三块深孔板，向深孔板中加入600μl漂洗液2；
89.(7)准备第四块深孔板，向深孔板中加入50μl无核酸酶水；
90.(8)按照下图位置将样本板、漂洗液板及洗脱液板正确放置到提取设备板位上：
[0091][0092][0093]
(9)按照以下程序运行仪器：
[0094]
步骤磁棒静置时间样本板混匀时间磁棒磁吸时间rna磁珠结合0min6min60s
第一次漂洗0min1min60s第二次漂洗0min1min60srna洗脱3min5min180s
[0095]
(10)自动化提取仪运行结束后立即将提取完的rna转出到96孔板中，置于冰上，防止rna降解，将每份样本写上对应的样本编号。
[0096]
提取得到的rna样本置于-80℃，可长期保存。
[0097]
结果检测
[0098]
使用紫外分光光度计检测上述对照组的24份样本和实验组的24份样本所提取的rna浓度和od比值，使用生物分析仪2100bioanalyzer(agilent)分析rna的片段分布，评估提取的rna的完整性情况。
[0099]
(1)rna浓度和od比值结果见下表1和表2：
[0100]
表1：对照组24份样本rna质量结果
[0101]
[0102][0103]
表2：实验组24份样本rna质量结果
[0104]
[0105][0106]
参数说明：
[0107]
od260/280通常用以指示核酸样品的蛋白污染程度；纯度较好的rna其od260/280的范围为1.5-2.2。
[0108]
od260/230用以指示在230nm波长有吸收峰的污染，多数来自提取试剂，包括胍盐、edta、tritonx-100、tween20、酚等，纯度较好的rna其od260/230的范围为1.5-2.2。
[0109]
rna完整性模拟数值，通常数值越大完整性越好，完整性较好的rna其rin大于7.5。
[0110]
(2)rna凝胶电泳
[0111]
将采用对比例1提取的rna进行凝胶电泳，结果如图1和图2所示；将实施例3提取得到的rna进行凝胶电泳，结果如图3和图4所示。凝胶电泳时，根据样本编号从左到右依次点样。
[0112]
结果显示：对照组24份样本rna的od260/280范围在1.50-2.28，od260/230范围在0.31-2.00，rna浓度在0.01-0.1；rna总量在0.52-4.89，rin范围在1.7-4.7，从od260/230值来看，对微囊藻和小球藻的提取纯度较差，提取得到的rna浓度较差；从rin值对比结果来看，采用trizol法提取蓝藻、微囊藻、绿藻、小球藻、衣藻和盐藻rna，对绿藻和盐藻的rna提取完整性要优于其他藻类，对不同藻类的提取效果的差异性较大。
[0113]
实验组24份样本rna的od260/280范围在1.96-2.18；od260/230范围在1.64-2.06；rna浓度在0.05-0.21；rna总量在2.52-10.27，rin范围在7.8-9，采用本发明的提取方法得到的蓝藻、微囊藻、绿藻、小球藻、衣藻和盐藻rna完整度高于trizol法，并且这六种藻类rna的提取，不同藻类之间的rin值差异较小，提取效果差异性较小。
[0114]
总的来说，本专利方法相对于trizol法提取的各类单细胞藻总rna纯度较好，无明显蛋白、酚糖类物质污染，浓度稳定一致，rna完整性更好，对藻类的普适性更广。
[0115]
实施例5
[0116]
为了进一步验证本试剂盒对单细胞藻类的rna提取效果，发明人对实施例1的试剂盒中的某一种组分进行替换，替换成分的浓度不变，利用实施例3的操作步骤提取蓝藻的rna，实验结果如下：
[0117][0118]
结果显示，在对本试剂盒组分进行试剂替换之后，提取得到的蓝藻rna总量以及rin均大大低于采用实施例1的试剂盒提取结果，由此可见本发明的试剂盒各组分是不可随
意替换的，否则显著影响单细胞藻类的rna提取得率以及rna的完整性。
[0119]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。

技术特征：
1.一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，其特征在于：包括裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2以及洗脱液，其中：所述裂解液包括盐酸胍、乙二胺四乙酸、吐温20、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮；所述绑定液包括氯化锂和乙醇；所述漂洗液1包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙二胺四乙酸；所述漂洗液2包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙醇；所述洗脱液为无核酸酶水。2.根据权利要求1所述的一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，其特征在于：所述裂解液中，盐酸胍终浓度为4-8mol/l、乙二胺四乙酸终浓度为25-100mmol/l、吐温20 终浓度为1-2.5％、二硫苏糖醇终浓度为20-50mmol/l和聚乙烯吡咯烷酮终浓度为1-2.5％。3.根据权利要求1所述的一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，其特征在于：所述绑定液中，氯化锂终浓度为6-12mol/l，乙醇终浓度为50-85％。4.根据权利要求1所述的一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，其特征在于：所述漂洗液1中，异硫氰酸胍终浓度为1-5mol/l，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐终浓度为10-20mmol/l，乙二胺四乙酸终浓度为5-20mmol/l。5.根据权利要求1所述的一种单细胞藻类总rna提取试剂盒，其特征在于：所述漂洗液2中，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐终浓度为10-20mmol/l，乙醇终浓度为50-85％。6.一种利用权利要求1-5任一项所述的单细胞藻类总rna提取试剂盒进行rna提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：s1，取藻类样本置于样本管a中，加入裂解液，涡旋振荡混匀3-5分钟，将藻体细胞分散悬浮至无结块；s2，室温静置3-7分钟，随后4℃，10000-13000g，高速离心2-5min；离心后移取上清液到样本管b中；s3，向样本管b中加入5-15μl磁珠悬液和350-450μl绑定液，置于混匀仪上，室温振荡混匀5-7min，随后将样本管b放置在磁力架上，静置，磁珠完全吸附后，弃上清；s4，向完成s3的容器b中加入550-650μl漂洗液1，将容器b从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀30-90s，在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃上清；s5，向完成s4的容器b中加入550-650μl漂洗液2，将容器b从磁力架上转移到混匀仪上，振荡混匀30-90s，在磁力架上静置，磁珠完全吸附后，弃上清，室温下晾干；s6，向晾干的容器b中加入40-60μl洗脱液，放置在磁力架上静置2-4min，然后转移到混匀仪上，振荡混匀3-7min；s7，将完成s6的容器b置于磁力架上静置2-5min，磁珠完全吸附后，将上清溶液转至容器c中，容器c中的上清液即为提取得到的rna产物，-80℃保存。7.根据权利要求6所述的一种rna提取的方法，其特征在于，所述藻类样本为单细胞藻类样本。

技术总结
本发明公开了一种单细胞藻类总RNA提取试剂盒及提取方法，提取试剂盒包括裂解液、绑定液、漂洗液1、漂洗液2以及洗脱液，其中：所述裂解液包括盐酸胍、乙二胺四乙酸、吐温20、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮；所述绑定液包括氯化锂和乙醇；所述漂洗液1包括异硫氰酸胍、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙二胺四乙酸；所述漂洗液2包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和乙醇；所述洗脱液为无核酸酶水。该提取试剂盒及提取方法，采用裂解液裂解藻类细胞，整个提取过程中无需用到酚、氯仿等有机物抽提和盐沉淀步骤，操作简单、安全、快捷，提取效果稳定良好，适配多种类的单细胞藻，可以适配多类磁棒法全自动核酸提取设备，样本处理通量高。样本处理通量高。样本处理通量高。


技术研发人员：蔡霖霖 邓阳红 殷楠楠 陈雪莲
受保护的技术使用者：杭州联川基因诊断技术有限公司
技术研发日：2023.05.31
技术公布日：2023/8/9