黄花蒿醇A-C及其药物组合物和其制备方法与应用

黄花蒿醇a-c及其药物组合物和其制备方法与应用
技术领域：
1.本发明属于药物技术领域。具体地，涉及3个结构新颖的倍半萜-黄酮醇杂合体，黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)，及其制备方法和应用，以及以化合物1
–
3为有效成分的药物组合物在制备抗肝癌的药物中的应用。


背景技术：

2.原发性肝癌已经成为全世界癌症死亡的第三大原因。乙型肝炎病毒(hbv)和丙型肝炎病毒(hcv)是主要致病原因，在所有hcc病例中至少有75％是由它们造成的。迄今为止，共五种合成药物(索拉非尼、瑞戈非尼、伦瓦替尼、卡博赞替尼和多纳非尼)和三种单克隆抗体药物(尼沃鲁单抗、彭博利珠单抗和拉莫齐鲁单抗)在临床上用于治疗hcc。然而，相对单一的结构类型和作用靶点，以及不良反应极大地限制了其治疗效果。天然产物因其结构多样，并具有多种生物活性，引起了广泛的关注。淫羊藿素是从淫羊藿属植物钟分离得到的淫羊藿苷通过酶解作用得到的一种异五烯基取代的黄酮类化合物，是一个多靶点免疫调节小分子，作为第一个创新的中药已经在我国批准用于治疗hcc。
3.黄花蒿(artemisia annua)又称青蒿、臭蒿、草蒿，是菊科蒿属一年生草本植物，干燥地上部分入药，广泛分布于北美洲、欧洲、非洲和亚洲，其中70％集中在我国。黄花蒿为传统抗疟中药，性寒，味苦、辛，归肝、胆经，有清透虚热、凉血除蒸、解暑、截疟的功效，用于治疗温邪伤阴、夜热早凉、阴虚发热、骨蒸劳热、暑邪发热、疟疾寒热、湿热黄疸等症状，外用治蚊虫咬伤、疮肿、烫伤等。青蒿始载于战国时期《五十二病方》：“青蒿者，荆名曰萩5432，主疗痔疮”，晋代葛洪《肘后备急方》治疟病方载有：“青蒿一握，以水二升渍，绞取汁尽服之”，以后历代本草均有收录，如明代李时珍称青蒿“制疟疾寒热”，清代《瘟病条辨》用“青蒿鳖甲煎”治“少阳疟”。随着对青蒿研究的深入，发现其除了可治疗疟疾外，临床上还可用于治疗红斑狼疮、支气管哮喘、慢性支气管哮喘、秋季腹泻、皮肤瘙痒、荨麻疹、毛虫过敏等疾病，具有抗病毒、抗真菌、抗炎、抗癌等作用。文献调研发现黄花蒿中除了挥发性成分外，非挥发性成分的结构类型主要涉及倍半萜、二萜、黄酮、香豆素、黄酮、苯丙酸等，其中的一些化合物具有抗疟疾、抗肿瘤、抑菌杀虫、解热抗炎、免疫调节、抗纤维化、抑制脂肪变性等药理活性。
4.迄今为止，现有技术中无黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)及其具有的药理活性的报道，也没有其作为有效成分的药物组合物的报道，也没有其药物组合物在制备或治疗肝癌药物中的应用报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值如结构式所示的黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)，其制备方法、以黄花蒿醇a
–
c为活性成分的药物组合物及其应用。本发明从黄花蒿中分离得到了3个结构新颖的倍半萜-黄酮醇杂合体，黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)。该类化合物对人肝癌细胞株hepg2、huh7和sk-hep-1具有抑制作用，能够用于制备抗肝癌药物。
6.为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
7.本发明提供了一系列倍半萜-黄酮醇杂合体，黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)，结构如下式所示：
[0008][0009]
本发明同时提供了所述的黄花蒿醇a
–
c(化合物1
–
3)的制备方法，该方法包括下述步骤：
[0010]
将干燥的黄花蒿地上部分，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分，随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比10:90、20:80、30:70和乙酸乙酯梯度洗脱得到4个流分frs.a-d；lc-ms分析发现个流分a和b中含有倍半萜二聚体类化合物，同时tlc检测两者交叉成分较多，因此合并后再经硅胶柱层析，以meoh-chcl3体积比1:99,2:98,5:95,10:90,20:80,40:60和meoh梯度洗脱，得到5个流分frs.b-1-b-5；fr.b-2过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10的meoh-h2o和meoh洗脱得到了四个亚流分frs.b-2a-b-2d；fr.b-2c经过rp-c
18
柱层析，以50:50、60:40、70:30和80:20的meoh-h2o梯度洗脱得到了亚流分frs.b-2c-1-b-2c-5；fr.b-2c-3经过硅胶柱层析，以2:98、5:95和10:90的meoh-chcl3为洗脱剂洗脱得到5个亚流分frs.b-2c-3a-b-2c-3e；fr.b-2c-3c经过sephadex lh-20(柱层析，用50:50的meoh-chcl3洗脱后，再经半制备hplc在安捷伦xdb-c
18
柱上以78:22甲醇-水纯化得到化合物1和2；fr.b-4过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10和100:0的甲醇-水洗脱得到了四个亚流分frs.b-4a-b-4d；fr.b-4b首先用rp-c
18
柱层析，以甲醇-水50:50、60:40和70:30处理，再经sephadex lh-20柱层析用甲醇-氯仿50:50洗脱后，经半制备高效液相hplc在安捷伦xdb-c
18
柱上以50:50的乙腈-水纯化得到化合物3。
[0011]
本发明提供了结构式所示的化合物1
–
3在制备抗肝癌药物中的应用，本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
[0012]
本发明同时提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括结构式所示的化合物1-3中的至少一种和药学上可接受的载体。
[0013]
并此，还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。并同时提供了所述的药物组合物的制备方法：采用上述制备化合物的方法制备得到本发明化合物1-3，然后加入药学上可接受的载体。
[0014]
当所述化合物1-3中的至少一种用于制备抗肝癌药物时，本发明优选将所述化合物1-3直接使用，或以药物组合物的形式使用
[0015]
本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-3中的至少一种和药学上可接受的载体。在本发明中，所述药学上可接受的载体优选为固体、半固体或液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体即可。
[0016]
本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-3中的至少一种与药学上可接受的载体混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。
[0017]
本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用，对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。
[0018]
在本发明中，当所述药物组合物用于制备抗肝癌药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-3中的至少一种在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
[0019]
与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：
[0020]
1.本发明提供了3个结构新颖的倍半萜-黄酮醇杂合体，黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)。
[0021]
2.本发明提供了制备新化合物1
–
3的新的方法，该方法原料易得，易于操作，适于工业化生成。
[0022]
3.本发明提供了新化合物1
–
3作为有效成分的药物组合物，为新的抗肝癌药物提供了具有较好药用作用的新的药物。
[0023]
4.本发明的化合物1
–
3对三株肝癌细胞hepg2、huh7、sk-hep-1具有抑制活性，其ic
50
为32.7-70.4μm。其中，化合物1和3对hepg2和huh7细胞具有抑制作用，其ic
50
分别为49.1和48.2，41.1和32.7μm；化合物2对hepg2和huh7细胞具有适中的抑制活性，其ic
50
为59.1和59.3μm。化合物1-3对sk-hep-1细胞具有手中的抑制活性，其ic
50
在57.7至70.4μm之间。以上结果表明黄花蒿中分离得到的化合物1-3可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。
附图说明：
[0024]
图1为本发明化合物1-3的结构式示意图。
具体实施方式：
[0025]
为了更好地理解本发明的实质，下面结合附图，用本发明的试验例和实施例来进一步说明本发明黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)制备方法、结构鉴定、药理作用，以及本发明的制备方法及药物组成，但不以此试验例和实施例来限定本发明。
[0026]
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0027]
实施例1：
[0028]
本发明倍半萜二聚体，黄花蒿醇a
–
c(artemannuols a-c，1
–
3)的制备：
[0029]
将干燥的黄花蒿地上部分48kg，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分3.1kg。随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比10:90、20:80、30:70和乙酸乙酯梯度洗脱得到4个流分frs.a-d。lc-ms分析发现个流分a和b中含有倍半萜二聚体类化合物，同时tlc检测两者交叉成分较多，因此合并后再经硅胶柱层析，以meoh-chcl3体积比1:99,2:98,5:95,10:90,20:80,40:60和meoh梯度洗脱，得到5个流分frs.b-1-b-5。51.6g fr.b-2过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10的meoh-h2o和meoh洗脱得到了四个亚流分frs.b-2a-b-2d。10.3g fr.b-2c经过rp-c
18
柱层析，以50:50、60:40、70:30和80:20的meoh-h2o梯度洗脱得到了亚流分frs.b-2c-1-b-2c-5。4.2g fr.b-2c-3经过硅胶柱层析，以2:98、5:95和10:90的meoh-chcl3为洗脱剂洗脱得到5个亚流分frs.b-2c-3a-b-2c-3e。910mg fr.b-2c-3c经过sephadex lh-20(柱层析，用50:50的meoh-chcl3洗脱后，再经半制备hplc在安捷伦xdb-c
18
柱上以78:22甲醇-水纯化得到化合物1(18mg)和2(18mg)。8gfr.b-4过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10和100:0的甲醇-水洗脱得到了四个亚流分frs.b-4a-b-4d。2.3g fr.b-4b首先用rp-c
18
柱层析，以甲醇-水50:50、60:40和70:30处理，再经sephadex lh-20柱层析用甲醇-氯仿50:50洗脱后，经半制备高效液相hplc在安捷伦xdb-c
18
柱上以50:50的乙腈-水纯化得到化合物3(22mg)。
[0030]
化合物1-3的结构数据：
[0031]
旋光由autopol vi旋光仪(rudolph research analytical,hackettstown,usa)测定；红外光谱(ir)采用kbr压片法，由bio-rad fts-135型红外光谱仪(hercules,california,usa)测定；紫外光谱由uv-2401pc型紫外光谱仪(shimadzu,kyoto,japan)测定；ecd谱由applied photophysics圆二色谱仪(agilent,santa clara,united states)测定；核磁共振谱(1d和2d nmr)用avance iii-600型超导核磁共振仪(bruker,bremerhaven,germany)测定，以氘代氯仿作为溶剂；高分辨质谱(hresims)用岛津lcms-it-tof型质谱仪(shimadzu,kyoto,japan)测定；薄层层析硅胶板hsgf254是烟台江友硅胶开发有限公司产品；柱层析硅胶(200～300目)为临沂市海祥化工有限公司生产；葡聚糖凝胶lh-20(sephadex lh-20)购自ge healthcare bio-sciences ab公司；高效液相色谱仪为岛津公司生产，控制器型号是cbm-20a，泵型号是lc-20ar，检测器型号为spd-m20a，柱温箱型号为at-350，使用的色谱柱型号为agilent-eclipse xdb-c18(5μm,9.4
×
250mm)；色谱纯乙腈购自迈瑞达公司；mci gel chp20p(75～150μm)购自mitsubishi chemical corporation(tokyo,japan)；显色剂为10％ h2so
4-etoh溶液。
[0032]
[0033]
黄花蒿醇a(artemannuol a，1)
[0034]
分子式：c
33h42o11
[0035]
分子量：614
[0036]
性状：黄色粉末；
[0037]
hresims m/z:615.2796[m+h]
+
(calcd.for c
33h43o11
,615.2800)；
[0038]
ir(kbr)ν
max
:3433,1722,1652,1597,1513,1461,1353,1290,1274,1218,1165,1132,1007cm
–1；
[0039]
ecd(c 0.27,meoh)λ
max
(δε):203(+13.11),252(+1.72),351(+0.78)nm；
[0040]
uv(meoh)λ
max
(logε):257(3.21),270(3.16),350(3.26)nm；
[0041][0042]1h nmr和
13
c nmr(dept)数据见表1。
[0043][0044]
黄花蒿醇b(artemannuol b，2)
[0045]
分子式：c
33h42o11
[0046]
分子量：614
[0047]
性状：黄色粉末；
[0048]
hresims m/z:615.2791[m+h]
+
(calcd.for c
33h43o11
,615.2800)；
[0049]
ir(kbr)ν
max
:3434,1723,1650,1598,1560,1511,1460,1362,1270,1219,1165,1143,1006cm
–1；
[0050]
ecd(c 0.22,meoh)λ
max
(δε):203(+8.16),248(+1.52),352(+0.89)n；
[0051]
uv(meoh)λ
max
(logε):257(3.16),272(3.11),348(3.20)nm；
[0052][0053]1h nmr和
13
c nmr(dept)数据见表1。
[0054][0055]
黄花蒿醇c(artemannuol c，3)
[0056]
分子式：c
33h40
o1[0057]
分子量：596
[0058]
性状：黄色粉末；
[0059]
hresims m/z:597.2687[m+h]
+
(calcd.for c
33h41o10
,597.2694)；
[0060]
ir(kbr)ν
max
:3431,1714,1651,1601,1562,1511,1460,1361,1270,1219,1165,1142,1065,1008cm
–1；
[0061]
uv(meoh)λ
max
(logε):257(3.13),269(3.07),348(3.14)nm；
[0062][0063]1h nmr和
13
c nmr(dept)数据见表1。
[0064]
表1化合物1-3的
13
c nmr数据(150mhz,cdcl3,δin ppm,j in hz)和1h nmr数据(600mhz,cdcl3,δin ppm,j in hz)
[0065]
[0066]arecorded in acetone-d6；brecorded in cd3od.
[0067]
实施例2：
[0068]
化合物1-3对三株肝癌细胞株的抑制活性。
[0069]
1.材料和方法
[0070]
1.1材料
[0071]
hepg2细胞株由中国科学院昆明植物研究所活性筛选中心赠予，sk-hep-1和huh7细胞株购自上海纪宁生物科技有限公司；培养基(dulbecco's modified eagle medium,dmem)购自thermo fisher scientific(苏州，中国)；血清(fetal bovine serum,fbs)购自life technologies(ny,usa)；rpmi-1640购自thermofisher biochemical products(北京，中国)。
[0072]
1.2仪器
[0073]
flex station 3台式多功能酶标仪(bio-rad 680,美国)；分析天平(ag135,metler toledo，中国)；恒温箱(dhp-9082,上海)。
[0074]
1.3实验过程
[0075]
1).取对数期生长的肝癌细胞，弃去旧培养基，用pbs清洗两遍，弃去pbs；
[0076]
2).用0.25％的胰蛋白酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞轮廓加深并有变圆趋势时，迅速吸去胰蛋白酶；
[0077]
3)用含10％ fbs的dmem完全培养基终止消化并重悬细胞，取10μl细胞悬液，用细胞计数仪计数，并用培养基调整细胞浓度至1
×
104/ml，接种在96孔板上，每孔加入100μl细胞悬液，在37℃，5％ co2的培养箱中孵育24h，使细胞贴壁；
[0078]
4).吸去培养基，将稀释好的样品加入板中，每孔加入100μl，每个浓度设置3个复孔，培养箱中继续孵育48h；
[0079]
5).吸去培养基，加入配好的mtt溶液(1mg/ml)，每孔加入100μl，培养箱中孵育4h；
[0080]
6).吸去mtt溶液，加入dmso，每孔加入100μl，培养箱中孵育10min；
[0081]
7).使用酶标仪在490nm波长下测量吸光度值，通过公式抑制率＝(阴性－实验组)/(阴性－空白组)
×
100％计算细胞抑制率，并用统计软件graphpad prism 5计算ic
50
，实验重复3次。
[0082]
表2化合物1-3对三株肝癌细胞的细胞毒活性结果
[0083][0084]
2.结果
[0085]
对所有分离得到的进行了抗肝癌细胞毒活性评价，实验结果如表2所示，化合物1
–
3对三株肝癌细胞hepg2、huh7、sk-hep-1具有抑制活性，其ic
50
为32.7-70.4μm。其中，化合物1合3对hepg2和huh7细胞具有抑制作用，其ic
50
分别为49.1和48.2，41.1和32.7μm；化合物2对hepg2和huh7细胞具有适中的抑制活性，其ic
50
为59.1和59.3μm。化合物1-3对sk-hep-1细胞具有手中的抑制活性，其ic
50
在57.7至70.4μm之间。
[0086]
3.结论
[0087]
实验结果显示，化合物1
–
3对三株肝癌细胞hepg2、huh7、sk-hep-1具有抑制活性，其ic
50
为32.7-70.4μm。其中，化合物1合3对hepg2和huh7细胞具有抑制作用，其ic
50
分别为49.1和48.2，41.1和32.7μm；化合物2对hepg2和huh7细胞具有适中的抑制活性，其ic
50
为59.1和59.3μm。化合物1-3对sk-hep-1细胞具有手中的抑制活性，其ic
50
在57.7至70.4μm之间。以上结果表明黄花蒿中分离得到的化合物1-3可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。
[0088]
制剂实施例
[0089]
在以下制剂实施例中，选择常规试剂，并按照现有常规方法进行制剂制备，本应用例仅体现本发明所述化合物1-3中的至少一种能够制备成不同的制剂，对具体试剂和操作不作具体限定：
[0090]
1.取化合物1-3任其一或任其组合,按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0091]
2.取化合物1-3任其一或任其组合,将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
[0092]
3.取化合物1-3任其一或任其组合,与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
[0093]
4.取化合物1-3任其一或任其组合,按其与赋形剂重量比为1:5
–
1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。
[0094]
5.取化合物1-3任其一或任其组合,按常规口服液制法制成口服液。
[0095]
6.取化合物1-3任其一或任其组合,按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
[0096]
由以上实施例可知，本发明提供了一种黄花蒿中化合物及其制备方法和应用，药物组合物及其应用。本发明提供的黄花蒿醇，主要包括3个结构新颖的倍半萜-黄酮醇杂合体，这些化合物对肝癌细胞具有不同程度的抑制作用，能够与可药用载体或赋型剂组成药物组合物，能够用于制备抗肝癌药物。
[0097]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

技术特征：
1.如下结构式所示的黄花蒿醇a
–
c，即化合物1
–
3，2.权利要求1所述的结构式所示的黄花蒿醇a
–
c即化合物1
–
3的制备方法，其特征在于该方法包括下述步骤：将干燥的黄花蒿地上部分，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分，随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比10:90、20:80、30:70和乙酸乙酯梯度洗脱得到4个流分frs.a-d；lc-ms分析发现个流分a和b中含有倍半萜二聚体类化合物，同时tlc检测两者交叉成分较多，因此合并后再经硅胶柱层析，以meoh-chcl3体积比1:99,2:98,5:95,10:90,20:80,40:60和meoh梯度洗脱，得到5个流分frs.b-1-b-5；fr.b-2过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10的meoh-h2o和meoh洗脱得到了四个亚流分frs.b-2a-b-2d；fr.b-2c经过rp-c
18
柱层析，以50:50、60:40、70:30和80:20的meoh-h2o梯度洗脱得到了亚流分frs.b-2c-1-b-2c-5；fr.b-2c-3经过硅胶柱层析，以2:98、5:95和10:90的meoh-chcl3为洗脱剂洗脱得到5个亚流分frs.b-2c-3a-b-2c-3e；fr.b-2c-3c经过sephadex lh-20(柱层析，用50:50的meoh-chcl3洗脱后，再经半制备hplc在安捷伦xdb-c
18
柱上以78:22甲醇-水纯化得到化合物1和2；fr.b-4过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10和100:0的甲醇-水洗脱得到了四个亚流分frs.b-4a-b-4d；fr.b-4b首先用rp-c
18
柱层析，以甲醇-水50:50、60:40和70:30处理，再经sephadex lh-20柱层析用甲醇-氯仿50:50洗脱后，经半制备高效液相hplc在安捷伦xdb-c
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柱上以50:50的乙腈-水纯化得到化合物3。3.权利要求1所述的结构式所示的黄花蒿醇a
–
c在制备抗肝癌药物中的应用。4.包括权利要求1所述的结构式所示的黄花蒿醇a
–
c的至少一种和药学上可接受的载体的药物组合物。5.权利要求4所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。6.权利要求4所述的药物组合物的制备方法：其特征在于该方法包括下述步骤：将干燥的黄花蒿地上部分，粉碎，用3倍量的90％乙醇提取两次，合并提取液减压浓缩后得到的粗浸膏分散于水中，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取部分，随后，将乙酸乙酯萃取部分过硅胶柱层析，并用丙酮-石油醚体积比10:90、20:80、30:70和乙酸乙酯梯度洗脱得到4个流分
frs.a-d；lc-ms分析发现个流分a和b中含有倍半萜二聚体类化合物，同时tlc检测两者交叉成分较多，因此合并后再经硅胶柱层析，以meoh-chcl3体积比1:99,2:98,5:95,10:90,20:80,40:60和meoh梯度洗脱，得到5个流分frs.b-1-b-5；fr.b-2过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10的meoh-h2o和meoh洗脱得到了四个亚流分frs.b-2a-b-2d；fr.b-2c经过rp-c
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柱层析，以50:50、60:40、70:30和80:20的meoh-h2o梯度洗脱得到了亚流分frs.b-2c-1-b-2c-5；fr.b-2c-3经过硅胶柱层析，以2:98、5:95和10:90的meoh-chcl3为洗脱剂洗脱得到5个亚流分frs.b-2c-3a-b-2c-3e；fr.b-2c-3c经过sephadex lh-20(柱层析，用50:50的meoh-chcl3洗脱后，再经半制备hplc在安捷伦xdb-c
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柱上以78:22甲醇-水纯化得到化合物1和2；fr.b-4过mci gel chp 20p柱层析，用50:50、70:30、90:10和100:0的甲醇-水洗脱得到了四个亚流分frs.b-4a-b-4d；fr.b-4b首先用rp-c
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柱层析，以甲醇-水50:50、60:40和70:30处理，再经sephadex lh-20柱层析用甲醇-氯仿50:50洗脱后，经半制备高效液相hplc在安捷伦xdb-c
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柱上以50:50的乙腈-水纯化得到化合物3；然后取化合物1
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3中的其中一种或其任意组合，加入药学上可接受的载体。

技术总结
本发明提供黄花蒿醇A


技术研发人员：陈纪军 何小凤 李天泽 耿长安 马云保 张雪梅 黄晓燕 胡敬
受保护的技术使用者：中国科学院昆明植物研究所
技术研发日：2023.05.22
技术公布日：2023/8/23