特应性皮炎的重症度的检测方法与流程

1.本发明涉及一种用于检测特应性皮炎的重症度的标记、以及使用该标记的特应性皮炎的重症度的检测方法。


背景技术：

2.特应性皮炎(以下也称为“ad”)是在具有特应性体质的人中主要发生的湿疹性皮肤疾病。ad的典型症状是左右对称性发生的慢性和反复性的瘙痒、皮疹、红斑等、以及角质化不全、屏障功能下降、肌肤干燥等。ad多在婴幼儿中发病，随着成长表现出好转的倾向，但近年来，成人型或难治性的特应性皮炎也在增加。已知在ad中，各种病因复合地相关，从而形成症状或表现型的多样性，反复进行加重和减轻(非专利文献1)。例如，报道了在通过外用剂导入缓解后不继续保湿的情况下，在14天约为4成的ad患者在28天约为6成的ad患者引起症状的复发(非专利文献2)。因此，在治疗ad时，需要正确地掌握包括症状或表现型的多样性在内的ad的重症度。
3.作为以往的ad的重症度的评价方法，可以举出基于医生的肉眼观察的评价。作为观察项目，存在干燥症状、红斑、鳞屑、丘疹、抓破痕、浮肿、痂皮附着、小水疱、糜烂、痒疹结节等各种症状。作为对它们进行了评分的指标，存在湿疹面积和严重程度指数(eczema area and severity index(easi))、特应性皮炎严重程度评分(severity scoring of atopic dermatitis(scorad))。另外，还有使用高性能的照相机或探测器等机械来取得有关ad的症状的客观数值的方法。另一方面，还进行基于通过肉眼的观察、触觉的自觉的、患者自身的ad的评价，作为用于评价的评分的指标，存在患者导向湿疹测量(patient oriented eczema measure(poem))、患者导向特应性皮炎严重程度评分(patient oriented scorad(po-scorad))和视觉模拟评分(visual analog scaling(vas))。
4.然而，上述以往的各种ad的重症度的评价方法由于评价的要点分别不同，因此，仅通过基于任意一个方法的评价，有时未必准确地评价ad的真正的重症度，优选基于多个方法的评价结果综合地判断ad的重症度。另一方面，从医生观察的必要性、测定设备的成本、取得性、或者伴随自我评价的患者本人的负担等观点出发，实际情况是难以并用多个以往的ad的重症度的评价方法。
5.近年来，不仅提出了观察、主观感知上出现的表现型(phenotype)，还提出了使用病态生物学的机制的类型(endotype)进行ad的病态的评价，作为选择最佳的治疗法的一种帮助。即，呈现类似的表现型的ad患者彼此也存在由于它们不同的分子机制而引起的可能性。认为通过结合phenotype和endotype对ad患者的病态进行细分化，从而导致适合于个别的患者的最佳治疗。目前，为了对疾病的病态的客观理解、或考虑了endotype的病情的理解，大多使用皮肤活检、血液、角质层等中包含的基因或其表达产物、特定的细胞种类的存在(有时也将它们统称为生物标记)。以往，作为用于评价有无ad的存在或重症度的生物标记，提出了血液的末梢血嗜酸性粒细胞数、血清总ige值、乳酸脱氢酶(ldh)值、血清中的胸腺活化调节因子(thymus and activation-regulated chemokine、tarc)值、鳞状细胞癌抗
原2(squamous cell carcinoma antigen 2、scca2)等(非专利文献3、4)。但是，这些生物标记的精度未必充分。
6.近年来，开发了通过生物体试样中的dna、rna等核酸的分析来研究人的生物体内的当前进而将来的生理状态的技术。来自生物体的核酸可以从血液等体液、分泌物、组织等中提取。进而，最近报道了能够将皮肤表面脂质(skin surface lipids；ssl)中所含的rna作为生物体的分析用的试样利用(专利文献1)。还报道了能够从ssl检测特应性皮炎的标记基因(专利文献2)。
7.现有技术文献
8.专利文献1：国际公开公报第2018/008319号
9.专利文献2：日本特开2020-074769号公报
10.非专利文献1：加藤等，日本皮肤科学会报，2018，128:2431-2502
11.非专利文献2：lin et al.,adv ther,2017,34:2601-2611
12.非专利文献3：sugawara et al.,allergy,2002,57:180-181
13.非专利文献4：ohta et al.,ann clin biochem,2012,49:277-284


技术实现要素：

14.本发明提供一种用于检测特应性皮炎的重症度的标记，其中，含有选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。
15.另外，本发明提供一种检测被检验者的特应性皮炎的重症度的方法，其中，包括测定被检验者的用于检测所述特应性皮炎的重症度的标记的表达水平。
16.另外，本发明提供选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种在作为用于检测特应性皮炎的重症度的标记中的用途、或用于检测特应性皮炎的重症度的标记的制造中的用途。
具体实施方式
17.本说明书中引用的所有的专利文献、非专利文献和其它出版物，其整体在本说明书中作为参考被引用。
18.在本说明书中，“核酸”或“多核苷酸”的用语是指dna或rna。dna中含有cdna、基因组dna和合成dna中的任一种，“rna”中包含总rna、mrna、rrna、trna、非编码rna(non-coding rna)和合成的rna中的任一种。
19.在本说明书中，“基因”除了包含人基因组dna的双链dna之外，还包括含有cdna的单链dna(正链)、具有与该正链互补的序列的单链dna(互补链)以及这些片段，在构成dna的碱基的序列信息中包含某些生物学信息。另外，本说明书中的“基因”不仅包含以特定的碱基序列表示的“基因”，还包含其同族体(即，同源物或直系同源物)、基因多态性等突变体及衍生物。
20.在本发明中，基因的“表达产物”是包含基因的转录产物及翻译产物的概念。“转录产物”是指从基因(dna)转录而产生的rna，“翻译产物”是指基于rna翻译合成的编码基因的蛋白质。
21.在本说明书中，“皮肤表面脂质(skin surface lipids；ssl)”是指存在于皮肤表面的脂溶性级分，有时也被称为皮脂。通常，ssl主要含有从皮肤上的皮脂腺等外分泌腺分泌的分泌物，以覆盖皮肤表面的薄层的形式存在于皮肤表面。
22.在本说明书中，“皮肤”只要没有特别限定，是包含角质层、表皮、真皮、毛囊、以及汗腺、皮脂腺和其它腺等组织的区域的总称。
23.在本说明书中，所谓“特应性皮炎(也称为“ad”)”是指反复进行加重、缓解的、以具有发痒的湿疹作为主病原的疾病，其患者大多具有特应性体质。作为特应性体质，可以举出i)家族病史、既往史(气管支哮喘、过敏性鼻炎、结膜炎、特应性皮炎中的任一种或多种疾病)、或ii)容易产生ige抗体的体质。
24.在本说明书中，特应性皮炎(ad)的“重症度”不是指ad的存在的有无，而是指ad的症状的严重的程度，并且不仅包括轻度、中等程度、重度等粗略的分类，还包括基于更轻微的差异的分类。ad的“重症度”例如能够基于评价ad的症状的公知的各种评价评分来决定。在本说明书中，将该评价评分称为“特应性皮炎(ad)的重症度所涉及的评分”。作为该ad的重症度涉及的评分的例子，可以举出ad的全身皮疹所涉及的easi评分及poem评分、ad所引起的皮肤发痒的vas评分、ad所引起的皮肤干燥的vas评分(特应性皮炎诊疗指南，日本皮肤科学会刊行，日皮会报：128(12)，2431-2502(2018))、以及ad所引起的面部红斑所涉及的红斑指数(参照日本特开2018-23756号公报、及dawson et al.，phys med biol，25(1980))，或者，也可以使用综合评价从这些评分及指数中选择的任意2个以上而决定的评分。作为“重症度”，也可以将该ad的重症度所涉及的评分本身用作ad的症状的严重的程度。
25.在本说明书中，ad的重症度的“检测”也可以用诸如检查、测定、判定或评价支持等用语来换言之。需要说明的是，本说明书中的ad的重症度的“检测”、“检查”、“测定”、“判定”或“评价”这样的用语并不包括医生对ad的重症度的诊断。
26.本发明涉及提供一种用于检测特应性皮炎的重症度的标记、以及使用该标记的特应性皮炎的重症度的检测方法。
27.本发明的用于检测特应性皮炎的重症度的标记提供用于检测特应性皮炎的重症度的指标。通过使用该标记，能够容易地检测患者的特应性皮炎的重症度，进而能够提供患者的病情正确的把握、以及适于患者的最佳治疗。
28.(1.用于检测特应性皮炎的重症度的标记)
29.需要反映ad的重症度的生物标记。以往的用于评价ad的存在与否、或重症度的标记主要基于集团分析、即属于不同重症度的组(例如，发病组与正常组、或重症组与轻症组)之间的对比来发现。但是，通过这些集团分析发现的以往的标记并不限于能够反映各组内的重症度的轻微差异的标记，这些以往的标记对ad的重症度的详细评价是困难的。如果能够更精密地检测ad患者的重症度，则能够提供患者的病情的正确把握，进而能够提供适于患者的最佳治疗。
30.本发明人发现，ad患者的重症度的轻微差异反映在该患者的特定基因的表达水平。如后述的实施例所示，调查了基于以往的各种指标的被检验者的ad的重症度的评分与
被检验者的各种基因的表达水平的关系。其结果发现，表达水平与被检验者的ad的重症度相关的评分呈正相关或负相关的基因。这样的基因或其表达产物详细地反映了ad的重症度的差异，可以作为用于检测被检验者的ad的重症度的标记使用。例如，能够以该基因或其表达产物的表达水平为指标，详细地检测被检验者的ad的重症度有多差、或检测出重症度是加重还是减轻。
31.因此，在一个方式中，本发明提供用于检测ad的重症度的标记。在一个实施方式中，本发明提供的用于检测ad的重症度的标记(以下，也称为本发明的标记)不仅能够作为用于将被检验者的ad的重症度粗略地分类为如以往的标记那样的轻度、中等程度、重度等的标记，还能够作为用于以更轻微的重症度的差异进行区分的标记来使用。进而，通过对由本发明的标记在不同的时期检测出的被检验者的ad的重症度进行比较，能够检测该被检验者的ad的重症度的变化(例如加重或减轻)。
32.本发明的标记可以包含选白下述表1a所示的7个基因和表1b所示的15个基因的共计22个基因及其表达产物中的至少1种。需要说明的是，表1a及表1b所示的基因的名称(基因符号(gene symbol))及基因编码(gene id)依照ncbi([www.ncbi.nlm.nih.gov/])中记载的官方符号(official symbol)及基因编码(gene id)。以下，将表1a所示的基因和表达产物统称为表1a的标记，将表1b所示的基因和表达产物统称为表1b的标记。本发明的标记可以是下述表1a或表1b所示的基因，或其表达产物，也可以是它们的组合。在一个实施方式中，本发明的标记是该基因的dna、作为其转录产物的rna等核酸标记。在另一实施方式中，本发明的标记是作为该基因的翻译产物的蛋白质标记。优选本发明的标记为核酸标记。
[0033]
[表1]
[0034]a[0035]
基因符号基因编码adam158751ciz125792lynx166004odc14953psme25721setd1b23067twf15756
[0036]b[0037]
基因符号基因编码 基因符号基因编码agr210551 lsm1084967alpk180216 pdk45166apod347 plxnc110154atg16l289849 sash354440csnk1d1453 slc12a69990fasn2194 tsc22d31831gsk3a2931 vsir64115itpkb3707
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[0038]
表1a及表1b所示的基因只要其自身或来自其的表达产物作为用于检测ad的重症度的标记发挥功能，则除了由ncbi中登记的核苷酸序列构成的基因以外，还包含由与该登记的序列实质上相同的序列构成的基因。在此，实质上相同的序列是，例如，使用同源性计算算法ncbi blast，期望值＝10；允许空位；过滤＝on；匹配评分＝1；失配评分＝-3的条件下进行检索的情况下，与该基因的核苷酸序列具有90％以上、优选95％以上、更优选98％以上、进一步优选99％以上的同一性的序列。
[0039]
如后述的实施例所示，表1a的标记表示其表达水平与ad的重症度相关的评分正相关。即，表1a的标记是表示其表达水平与ad的重症度正相关的正标记。另一方面，表1b的标记表示其表达水平与ad的重症度相关的评分负相关。即，表1b的标记是其表达水平表示ad的重症度负相关的负标记。在本发明中，可以使用前者的正标记和后者的负标记中的任一方，或者也可以将双方组合使用。
[0040]
在优选的一个实施方式中，本发明的标记是用于检测ad所引起的全身的皮疹的重症度的标记，例如是能够检测与easi评分对应的ad的重症度的标记。该标记包含选自以下的基因：ciz1、adam15、setd1b和twf1、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0041]
这些标记是包含在表1a中的正标记。该正标记的表达水平表示ad所引起的全身的皮疹的重症度，例如与easi评分正相关。
[0042]
在另一个优选的实施方式中，本发明的标记是用于检测ad所引起的全身的皮疹的重症度的标记，例如是能够检测与poem评分对应的ad的重症度的标记。该标记包含选自以下的基因：lynx1和psme 2、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0043]
这些标记是包含在表1a中的正标记。该正标记的表达水平表示ad所引起的全身的皮疹的重症度，例如与poem评分正相关。
[0044]
在另一个优选的实施方式中，本发明的标记是用于检测ad所引起的皮肤发痒的重症度的标记，例如是能够检测与皮肤发痒的vas评分对应的ad所引起的皮肤发痒的重症度的标记。该标记包含选自以下的基因：alpk1、atg16l2、csnk1d、gsk3a、lsm10、sash3和vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0045]
这些标记是包含在表1b中的负标记。该负标记的表达水平表示ad所引起的皮肤发痒的重症度，例如与皮肤发痒的vas评分负相关。
[0046]
在另一个优选的实施方式中，本发明的标记是用于检测ad所引起的皮肤干燥的重症度的标记，例如是能够检测与皮肤干燥的vas评分对应的ad所引起的皮肤干燥的重症度的标记。该标记包含选自以下的基因：tsc22d3、plxnc1和slc12a6、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0047]
这些标记是包含在表1b中的负标记。该负标记的表达水平表示ad所引起的皮肤干燥的重症度，例如与皮肤干燥的vas评分负相关。
[0048]
在另一个优选的实施方式中，本发明的标记是用于检测ad所引起的面部红斑的重症度的标记，例如是能够检测与红斑指数对应的ad所引起的面部红斑的重症度的标记。该标记包含选自以下的基因：odc1、agr2、fasn、apod、itpkb和pdk4、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0049]
这些标记包含表1a中包含的正标记和表1b中包含的负标记。该正标记的表达水平表示ad所引起的面部红斑的重症度、例如与红斑指数正相关。另一方面，该负标记的表达水
平表示ad所引起的面部红斑的重症度，例如与红斑指数负相关。
[0050]
本发明的标记可以按照常规方法由从被检验者采集的生物体试样、例如细胞、组织(活检等)、体液(组织浸出液等体液、血液、由血液制备的血清、血浆等)、器官、皮肤、尿、唾液、汗、角质层、皮肤表面脂质(ssl)、粪便、毛发等制备。例如，对于来自生物体试样的核酸或蛋白质的制备，可以使用市售的试剂盒。优选本发明的标记为核酸标记，作为由生物体试样制备的核酸的优选例，可以举出基因组dna等dna和mrna等rna等。
[0051]
作为采集包含本发明的标记的生物体试样的被检验者的例子，可以举出包含人和非人哺乳动物的哺乳动物，优选为人。在被检验者为人的情况下，其性别、年龄以及人种等没有特别限定，能够包括从婴儿到老人。例如，可以举出ad发病的人、需要或希望进行ad的重症度的检测的人、需要或希望检测ad的重症度变化的人等。
[0052]
更优选本发明的标记为由被检验者的ssl制备的核酸或蛋白质，进一步优选为mrna。作为采集ssl的皮肤的部位，没有特别限定，可以举出头、脸、颈、躯干、手脚等身体的任意部位的皮肤，优选皮脂的分泌多的部位，例如头或脸的皮肤，更优选脸的皮肤。另外，采集ssl的皮肤的部位可以是ad发病的皮疹部，也可以是未发病的无疹部，但优选为皮疹部或皮疹部附近的无疹部。在此，皮疹部附近是指与皮疹部相邻的10cm以内的范围。
[0053]
在来自被检验者的皮肤的ssl的采集中，可以采用用于从皮肤的ssl的回收或除去的所有手段。优选使用后述的ssl吸收性原材料、ssl粘接性原材料、或从皮肤擦拭ssl的器具。作为ssl吸收性原材料或ssl粘接性原材料，只要是与ssl具有亲和性的原材料就没有特别限定，例如可以举出聚丙烯、纸浆等。作为来自皮肤的ssl的采集步骤的更详细的例子，可以举出：使ssl吸收到吸油纸、吸油膜等片状原材料的方法；使ssl与玻璃板、胶带等粘接的方法；利用刮刀、刮片等将ssl摩擦而回收的方法等。为了提高ssl的吸附性，也可以使用预先含有脂溶性高的溶剂的ssl吸收性原材料。另一方面，ssl吸收性原材料若含有水溶性高的溶剂、水分，则ssl的吸附受到阻碍，因此优选水溶性高的溶剂、水分的含量少。ssl吸收性原材料优选在干燥的状态下使用。
[0054]
所采集的ssl可以立即用于后述的核酸或蛋白质的提取工序，或者也可以保存至用于该核酸或蛋白质提取工序。在保存的情况下，ssl优选在低温条件下保存。ssl保存的温度条件为0℃以下即可，优选为-20
±
20℃～-80
±
20℃，更优选为-20
±
10℃～-80
±
10℃，进一步优选为-20
±
20℃～-40
±
20℃，进一步优选为-20
±
10℃～-40
±
10℃，进一步优选为-20
±
10℃，进一步优选为-20
±
5℃。ssl的保存的期间没有特别限定，优选为12个月以下，例如为6小时以上且12个月以下，更优选为6个月以下，例如为1天以上且6个月以下，进一步优选为3个月以下，例如为3天以上且3个月以下。
[0055]
在采集的来自ssl的核酸或蛋白质的提取中，可以使用通常用于提取或精制来自生物体试样的核酸或蛋白质的方法。作为核酸的提取或精制方法的例子，可以举出苯酚/氯仿法、agpc(酸性硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取(acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction))法、或trizol(注册商标)、rneasy(注册商标)、qiazol(注册商标)等使用柱的方法、使用涂覆了二氧化硅的特殊磁性体颗粒的方法、使用固相可逆固定化(solid phase reversible immobilization)磁性体颗粒的方法、利用isogen等市售的rna提取试剂的提取等。蛋白质的提取或精制中，可以使用qiazol lysis reagent(qiagen)等市售的蛋白质提取试剂。
[0056]
(2.特应性皮炎的重症度检测方法)
[0057]
在另一方式中，本发明提供使用了上述1.中说明的本发明的标记的ad的重症度的检测方法。在本发明的ad的重症度的检测方法(以下，称为本发明的方法)中，基于被检验者中的本发明的标记的表达水平，检测该被检验者中的ad的重症度。在一个实施方式中，在本发明的方法中，以本发明的标记的表达水平为指标，检测被检验者的ad的重症度、即症状差到什么程度。进而，通过对在不同的时期检测出的重症度进行比较，能够检测被检验者的ad的重症度的变化(例如加重或减轻)。因此，在本发明的方法的另一实施方式中，以本发明的标记的表达水平的变化为指标，检测被检验者的ad的重症度的变化(例如症状的加重或减轻)。
[0058]
(2.1标记表达的分析)
[0059]
供于本发明方法的被检验者与采集包含上述本发明的标记的生物体试样的被检验者相同。在优选的实施方式中，本发明的方法包括测定从被检验者采集的生物体试样中的本发明的标记的表达水平。该生物体试样的种类如上所述，优选为ssl。在一个实施方式中，本发明的方法还可以包括采集该被检验者的ssl。ssl的采集步骤和从ssl提取标记的步骤如上所述。
[0060]
本发明的标记的表达水平可以根据该领域中通常使用的核酸或蛋白质的定量法进行测定。所测定的标记的表达水平可以是基于生物体试样中的该目标标记的绝对量的表达水平，也可以是相对于其它标准物质、全部核酸或全部蛋白质的表达水平的相对表达水平。
[0061]
例如，核酸标记的表达水平只要按照该领域中通常使用的基因表达分析的步骤进行测定即可。作为基因表达分析的方法的例子，可以举出pcr、多重pcr、实时pcr、杂交(dna芯片、dna微阵列、斑点杂交、条形斑点杂交、northern印迹杂交等)、测序、色谱法等对核酸或其扩增产物进行定量的方法。在核酸为rna的情况下，优选在通过逆转录将rna转换为cdna后，通过上述方法进行定量。
[0062]
蛋白质标记的表达水平可以使用该领域中通常使用的蛋白质定量法、例如免疫测定法(例如蛋白质印迹、elisa、免疫染色等)、荧光法、电泳、蛋白质芯片、色谱法、质谱法(例如lc-ms/ms、maldi-tof/ms)、1-杂交法(pnas，100，12271-12276(2003))、2-杂交法(biol.reprod，58，302-311(1998))等进行测定。或者，也可以通过测定作为本发明的标记的核酸或与蛋白质相互作用的分子，测定本发明的标记的表达水平。作为与本发明的标记相互作用的分子，可以举出dna、rna、蛋白质、多糖、低聚糖、单糖、脂质、脂肪酸以及它们的磷酸化物、烷基化物、糖加成物等，以及上述任一种复合体。
[0063]
优选本发明的方法中使用的标记为ssl来源的rna。在该情况下，测定ssl中所含的rna的表达水平。优选通过逆转录将从ssl提取的rna转换为cdna后，利用上述方法对该cdna或其扩增产物进行定量，由此测定该ssl来源的rna的表达水平。
[0064]
rna的逆转录中，可以使用以想要分析的特定的rna为目标的引物，为了更全面的核酸的保存及分析，优选使用随机引物。该逆转录可以使用一般的逆转录酶或逆转录试剂盒。优选使用准确性和效率性高的逆转录酶或逆转录试剂盒，作为其例子，可以举出:m-mlv逆转录酶(m-mlv reverse transcriptase)及其突变体、或市售的逆转录酶或逆转录试剂盒，例如primescript(注册商标)逆转录酶系列(takara bio公司)、superscript(注册商
标)逆转录酶系列(thermo scientific公司)、superscript(注册商标)iii逆转录酶、superscript(注册商标)vilo cdna合成试剂盒(synthesis kit)(均为thermo scientific公司)等。
[0065]
该逆转录中的伸长反应中，优选将温度调节为42℃
±
1℃、更优选调节为42℃
±
0.5℃、进一步优选调节为42℃
±
0.25℃，另一方面，优选将反应时间调节为优选60分钟以上、更优选调节为80～120分钟。
[0066]
在使用pcr测定核酸标记的表达水平的情况下，根据需要将来自生物体试样的rna逆转录为cdna后，使用引物对扩增来自该生物体试样的dna。在pcr中，可以使用以想要分析的特定的dna为目标的引物对，仅扩增该特定的1种dna，但也可以使用多个引物对同时扩增多个特定的dna。优选该pcr为多重pcr。多重pcr是通过在pcr反应体系中同时使用多个引物对，同时扩增多个基因区域的方法。多重pcr可以使用市售的试剂盒(例如ion ampliseq转录组人基因表达试剂盒(ion ampliseqtranscriptome human gene expression kit)；life technologies japan株式会社等)来实施。
[0067]
该pcr中的退火及伸长反应的温度依赖于所使用的引物，因此不能一概而论，但在使用上述多重pcr试剂盒的情况下，优选为62℃
±
1℃，更优选为62℃
±
0.5℃，进一步优选为62℃
±
0.25℃。因此，在该pcr中，优选在1个步骤中进行退火和伸长反应。该退火和伸长反应的步骤的时间可以依赖于应扩增的dna的尺寸等进行调节，优选为14～18分钟。该pcr中的改性反应的条件可以依赖于应扩增的dna进行调节，优选为95～99℃下10～60秒。如上所述的温度和时间的逆转录和pcr可以使用通常用于pcr的热循环仪来执行。
[0068]
该pcr中得到的反应产物的精制优选通过反应产物的尺寸分离来进行。通过尺寸分离，能够将目标pcr反应产物从pcr反应液中所包含的引物、或其它杂质分离。dna的尺寸分离例如可以通过尺寸分离柱、尺寸分离片、尺寸分离中可利用的磁珠等来进行。作为可用于尺寸分离的磁珠的优选例，可以举出ampure xp等固相可逆固定化(solid phase reversible immobilization)(spri)磁性珠。
[0069]
也可以对精制后的pcr反应产物实施用于进行其后的定量分析所需的进一步的处理。例如，为了dna测序，可以将纯化的pcr反应产物调制成适当的缓冲液溶液，或者将pcr扩增的dna中含有的pcr引物区域切断，或者对扩增的dna进一步附加接头序列。例如，可以将纯化的pcr反应产物制备成缓冲液溶液，对扩增dna进行pcr引物序列的去除和自适应连接，根据需要对所得到的反应产物进行扩增，制备用于定量分析的文库。这些操作例如可以使用superscript(注册商标)vilo cdna合成试剂盒(synthesis kit)(life technologies japan株式会社)附带的5
×
vilo rt reaction mix、以及ion ampliseq转录组人基因表达试剂盒(ion ampliseq transcriptome human gene expression kit)(life technologies japan株式会社)附带的5
×
ion ampliseq hifi mix、以及ion ampliseq转录组人基因表达核心组(ion ampliseq transcriptome human gene expression core panel)，按照各试剂盒附带的操作手册进行。
[0070]
在使用实时pcr测定核酸标记的表达水平的情况下，根据需要将来自生物体试样的rna逆转录为cdna后，使用预先用放射性同位素(ri)、荧光物质等标记的引物进行pcr，对所产生的标记双链dna进行检测、定量。
[0071]
在使用northern印迹杂交测定核酸标记的表达水平的情况下，例如，按照常规方
法将来自生物体试样的rna转移到膜上，接着，使由ri、荧光物质等标记的探针dna与该rna杂交。通过从形成的标记探针dna和rna的双链检测来源于该标记的信号，能够测定核酸标记的表达水平。
[0072]
在使用dna微阵列测定核酸标记的表达水平的情况下，例如使用在支撑体上固定化有与目标核酸标记特异性杂交的核酸(cdna或dna)的微阵列。通过使由生物体试样制备的核酸(cdna或crna)结合于微阵列上，检测微阵列上的标记，能够测定生物体试样中的核酸标记的表达水平。
[0073]
作为固定化于上述微阵列的核酸，只要是在严格的条件下与目标核酸标记特异性(即，实质上仅与目标核酸标记)杂交的核酸即可，可以是具有本发明的核酸标记的全部序列的核酸，也可以是由部分序列构成的核酸。作为该“部分序列”，可以举出至少由15～25个碱基构成的核酸。在此，作为严格的条件，通常可以举出“1
×
ssc、0.1％sds、37℃”左右的清洗条件、优选为“0.5
×
ssc、0.1％sds、42℃”左右的条件、进一步优选为“0.1
×
ssc、0.1％sds、65℃”左右的条件。严格的杂交条件例如记载于j.sambrook et al.，molecular cloning:a laboratory manual,third edition,cold spring harbor laboratory press(2001)中。
[0074]
在使用测序来测定核酸标记的表达水平的情况下，优选使用下一代测序仪(例如ion s5/xl系统、life technologies japan株式会社)。可根据测序中制作的读取的数量(读取计数)，测定dna或rna的表达水平。
[0075]
在通过测序来测定多个核酸标记的表达水平的情况下，能够将上述的读取计数用作表达水平的数据。或者，可以将校正了该读取计数中的样品间的总读取数的差异的、该读取计数的rpm(reads per million mapped reads)值、该rpm值的对数值(log2rpm值、或log2(rpm+1)值)、使用deseq2(love mi et al.,genome biol,2014)校正的计数值(normalized count值)或其对数值(log2(normalized count+1)值)等作为表达水平的数据来使用。或者，作为表达水平的数据，可以使用一般的每千碱基百万片段(fragments per kilobase of exon per million reads mapped)(fpkm)、每千碱基百万读取数(reads per kilobase of exon per million reads mapped)(rpkm)、每百万转录本(transcripts per million)(tpm)等作为rna-seq的定量值。
[0076]
用于核酸标记的测定的探针或引物例如可以是用于特异性地扩增本发明的核酸标记的引物、或用于特异性地检测该核酸标记的探针。在此，“特异性”是指例如在northern印迹杂交法中，实质上仅检测出本发明的标记，或者在pcr中实质上仅放大本发明的标记等，实质上能够以生成来自本发明的标记的生成物或检测物的方式识别或检测核酸。这些探针或引物可以基于该核酸标记的核苷酸序列来设计。
[0077]
作为该探针或引物的具体例，可以利用由本发明的核酸标记的全部序列或部分序列构成的寡核苷酸或其互补链。该“互补链”只要特异性地识别目标标记，则不限于完全互补的序列，优选为具有80％以上、更优选为90％以上、进一步优选为95％以上、进一步优选为98％以上的序列同一性的序列即可。序列的同一性可以通过上述ncbi blast等算法来决定。
[0078]
作为用于该核酸标记的测定的引物的例子，可以举出相对于目标核酸标记能够进行特异性的退火及链伸长的引物，优选为具有10个碱基以上、更优选为15个碱基以上、进一
步优选为20个碱基以上、且优选为100个碱基以下、更优选为50个碱基以下、进一步优选为35个碱基以下的链长的引物。
[0079]
作为用于该核酸标记的测定的探针的例子，可以举出相对于目标核酸标记能够进行特异性杂交的探针，优选为具有10个碱基以上、更优选为15个碱基以上、且优选为100个碱基以下、更优选为50个碱基以下、进一步优选为25个碱基以下的链长的探针。
[0080]
该探针或引物可以是dna或rna，可以是合成的，也可以是天然的。杂交中使用的探针通常使用标记过的探针。
[0081]
在使用免疫测定法测定蛋白质标记的表达水平的情况下，例如，使针对该蛋白质标记的抗体与生物体试样接触，对与该抗体结合的蛋白质标记进行定量即可。例如，在蛋白质印迹中，使用针对该蛋白质标记的一次抗体后，使用由ri、荧光物质、酶等标记的二次抗体对该一次抗体进行标记，接着，通过测定来自该标记的信号，能够测定该蛋白质标记的表达水平。对于该蛋白质标记的抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体。这些抗体可以按照公知的方法制造。
[0082]
(2.2基于标记的表达水平的重症度检测)
[0083]
在本发明的方法的一个实施方式中，基于来自被检验者的本发明的标记(从该被检验者采集的生物体试样中包含的本发明的标记)的表达水平，检测该被检验者中的ad的重症度。
[0084]
如上所述，表1a和表1b的标记是其表达水平基于ad的重症度而变动的标记。更详细而言，表1a的标记是表示其表达水平与ad的重症度正相关的正标记，另一方面，表1b的标记是表示其表达水平与ad的重症度负相关的负标记。因此，能够以该正标记或该负标记的表达水平为指标，检测被检验者中的ad的重症度。
[0085]
在本实施方式的优选的一个例子中，通过本发明的方法检测的ad的重症度是ad所引起的全身的皮疹的重症度，例如是与easi评分对应的ad的重症度。本检测中使用的标记是用于检测上述ad所引起的全身的皮疹的重症度的检测的标记，例如，能够检测与easi评分对应的ad的重症度的标记。这些标记是正标记，其表达水平表示ad所引起的全身的皮疹的重症度，例如与easi评分正相关。以该标记的表达水平为指标，能够检测被检验者的ad所引起的全身的皮疹的重症度。
[0086]
在本实施方式的另一优选的一例中，通过本发明的方法检测的ad的重症度是ad所引起的全身的皮疹的重症度，例如是与poem评分对应的ad的重症度。本检测中使用的标记是用于检测上述ad所引起的全身的皮疹的重症度的检测的标记，例如，能够检测与poem评分对应的ad的重症度的标记。这些标记是正标记，其表达水平表示ad所引起的全身的皮疹的重症度，例如与poem评分正相关。以该标记的表达水平为指标，能够检测被检验者的ad所引起的全身的皮疹的重症度。
[0087]
在本实施方式的另一优选的一例中，通过本发明的方法检测的ad的重症度是ad所引起的皮肤发痒的重症度，例如是与皮肤发痒的vas评分对应的ad的重症度。用于本检测的标记是用于检测上述ad所引起的皮肤发痒的重症度的检测的标记，例如，能够检测与皮肤发痒的vas评分相对应的ad的重症度的标记。这些标记是负标记，其表达水平表示ad所引起的皮肤发痒的重症度，例如与皮肤发痒的vas评分负相关。以该标记的表达水平为指标，能够检测被检验者的ad所引起的皮肤发痒的重症度。
[0088]
在本实施方式的另一优选的一例中，通过本发明的方法检测的ad的重症度是ad所引起的皮肤干燥的重症度，例如是与皮肤干燥的vas评分对应的ad的重症度。本检测中使用的标记是用于检测上述ad对皮肤干燥的重症度的检测的标记，例如，能够检测与皮肤干燥的vas评分对应的ad的重症度的标记。这些标记是负标记，其表达水平表示ad所引起的皮肤干燥的重症度，例如与皮肤干燥的vas评分负相关。以该标记的表达水平为指标，能够检测被检验者的ad所引起的皮肤干燥的重症度。
[0089]
在本实施方式的另一优选的一例中，通过本发明的方法检测出的ad的重症度是ad所引起的面部红斑的重症度，例如是与红斑指数对应的ad的重症度。本检测中使用的标记是用于检测上述ad所引起的面部红斑的重症度的检测的标记，例如，能够检测与红斑指数对应的ad的重症度的标记。在这些标记为正标记的情况下，其表达水平表示ad所引起的面部红斑的重症度、例如与红斑指数正相关。另一方面，在这些标记为负标记的情况下，其表达水平表示ad所引起的面部红斑的重症度，例如与红斑指数负相关。以该正标记或该负标记的表达水平为指标，能够检测被检验者的ad所引起的面部红斑的重症度。
[0090]
在本实施方式中，能够将从被检验者采集的生物体试样中的、从该正标记和该负标记中选择的1种以上的标记作为上述的检测的指标而使用的目标标记。如上所述，该正标记和该负标记是与ad所引起的全身的皮疹相关的easi评分或poem评分、ad所引起的皮肤发痒的vas评分、ad所引起的皮肤干燥的vas评分、或与ad所引起的面部红斑所涉及的红斑指数相关的标记。在本实施方式中，使用与上述评分或指数中的任一个相关的至少1种标记作为目标标记即可。优选使用分别与不同的评分或指数相关的2种以上的标记作为目标标记。更优选的是，将与easi评分、poem评分、ad所引起的皮肤发痒的vas评分、ad所引起的皮肤干燥的vas评分、及ad所引起的面部红斑所涉及的红斑指数分别相关的标记组合用作目标标记。在本发明的方法中，可以使用该正标记和该负标记中的任意1种作为目标标记，或者，也可以将从该正标记和该负标记中选择的2种以上组合用作目标标记。或者，也可以将由全部的该正标记及该负标记的组成的核酸标记或蛋白质标记组合而作为目标标记使用。
[0091]
在一个实施方式中，通过测定被检验者中的目标标记的表达水平，并将测定出的目标标记的表达水平与预先设定的基准值进行比较，能够检测该被检验者的ad的重症度。
[0092]
该基准值可以基于ad的重症度(基于与ad的重症度有关的评分值而分类的ad重症度水平或与ad重症度有关的评分值)与目标标记的表达水平之间的关系而预先确定。例如，可以将某个集团基于ad的重症度分为不同的重症度的多个组，以各组中的目标标记的表达水平的统计值(例如平均值)为参考，确定基准值以判断是否属于各组。在使用多种标记作为目标标记的情况下，优选地针对每个标记求出基准值。作为该集团，可以是具有ad的患者组，也可以是健康者和具有ad的患者组组合的组，还可以是具有特定的重症度的ad的患者组。另外，也可以根据作为检测对象的被检验者，按照年代、世代、男女或人种组成集团。
[0093]
作为基准值的计算中使用的组的例子，可以举出具有轻度的ad的组(轻症度组)、具有中等程度的ad的组(中等症度组)、具有重度的ad的组(重症度组)等。或者，也可以选出基于更详细的重症度分类的患者组，针对每个该患者组计算基准值。也可以包含作为对照的健康组(不具有ad的组)。
[0094]
在一例中，在检测ad所引起的全身的皮疹的重症度(例如，与easi评分对应的ad的重症度)的情况下，可以根据从ad患者组基于easi评分进行了分组的具有特定的ad的重症
度的2个以上的组计算出基准值。
[0095]
在另一例中，在检测ad所引起的全身的皮疹的重症度(例如，与poem评分对应的ad的重症度)的情况下，可以根据从ad患者组基于poem评分进行了分组的具有特定的ad的重症度的2个以上的组计算出基准值。
[0096]
在另一例中，在检测ad所引起的皮肤发痒的重症度的情况下，能够根据从ad患者组基于与皮肤发痒有关的vas评分而被分组的、具有特定的ad的重症度的2个以上组计算出基准值。
[0097]
在另一例中，在检测ad所引起的皮肤干燥的重症度的情况下，能够根据从ad患者组基于与皮肤干燥相关的vas评分而被分组的、具有特定的ad的重症度的2个以上的组计算基准值。
[0098]
在另一例中，在检测ad所引起的面部红斑的重症度的情况下，能够根据从ad患者组基于与面部红斑有关的红斑指数进行了分组的、具有特定的ad的重症度的2个以上的组计算基准值。
[0099]
在使用该正标记的情况下，其表达水平越高，则被检验者的ad的重症度被检测为越重。另一方面，在使用该负标记的情况下，其表达水平越低，则被检验者的ad的重症度被检测为越重。
[0100]
基准值的设定、以及基于该基准值的重症度分类的具体方法能够按照本领域技术人员的公知常识适当实施。
[0101]
在另一实施方式中，通过在不同的时期测定被检验者的目标标记的表达水平，并对测定出的目标标记的表达水平进行比较，能够检测该被检验者的ad的重症度的变化(例如加重或减轻)。
[0102]
在一个例子中，检测由ad产生的全身的皮疹的重症度(例如，与easi评分对应的ad的重症度)的变化。目标标记使用用于检测上述ad的全身皮疹的重症度的标记，例如，能够检测与easi评分对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0103]
在另一例中，检测ad所引起的全身的皮疹的重症度(例如，与poem评分对应的ad的重症度)的变化。在目标标记中，使用用于检测上述ad的全身皮疹的重症度的标记，例如，能够检测与poem评分对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0104]
在另一例中，检测ad所引起的皮肤发痒的重症度的变化。在目标标记中，使用用于检测上述ad所引起的皮肤发痒的重症度的标记，例如能够检测与ad所引起的皮肤发痒的vas评分相对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0105]
在另一例中，检测ad所引起的皮肤干燥的重症度的变化。在目标标记中，使用用于检测上述ad所引起的皮肤干燥的重症度的标记，例如能够检测与ad所引起的皮肤干燥的vas评分对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0106]
在另一例中，检测ad所引起的面部红斑的重症度的变化。在目标标记中，使用用于检测基于上述ad所引起的面部红斑的重症度的标记，例如，能够检测与ad所引起的面部红斑所涉及的红斑指数对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0107]
在使用正标记的情况下，其表达水平的经时增加表示被检验者的ad的重症度的加重，另一方面，表达水平的经时降低表示被检验者的ad的重症度的减轻。在一个例子中，将过去的测定中的相同的被检验者中的标记的表达水平作为基准值。在从被检验者测定的正
标记的表达水平比基准值高的情况下，检测出该被检验者的ad的重症度加重，另一方面，在从被检验者测定的正标记的表达水平比基准值低的情况下，检测出该被检验者的ad的重症度减轻。也可以根据需要，在该过去的测定时利用以往的方法进行该被检验者的ad的重症度判定。在该情况下，当从被检验者测定的正标记的表达水平比基准值高时，该被检验者的ad的重症度可以被检测为比该过去的测定中的ad的重症度重或轻。
[0108]
在使用负标记的情况下，其表达水平的经时增加表示被检验者的ad的重症度的减轻，另一方面，表达水平的经时降低表示被检验者的ad的重症度的加重。在一个例子中，将过去的测定中的相同的被检验者中的标记的表达水平作为基准值。在从被检验者测定的负标记的表达水平比基准值高的情况下，检测出该被检验者的ad的重症度减轻，另一方面，在从被检验者测定的负标记的表达水平比基准值低的情况下，检测出该被检验者的ad的重症度加重。也可以根据需要，也可以在该过去的测定时用以往的方法进行该被检验者的ad的重症度判定。在该情况下，在从被检验者测定的负标记的表达水平高于或低于基准值时，可以检测到该被检验者的ad的重症度比该过去的测定中的ad的重症度轻或重。
[0109]
在本发明的方法的一个实施方式中，如果源自被检验者的本发明的标记的表达水平相对于基准值优选为91％以下，更优选为83％以下，进一步优选为77％以下，则可判断为该标记的表达水平低于基准值，本发明的标记的表达水平相对于基准值优选为110％以上，更优选为120％以上，进一步优选为130％以上，则可判断为该标记的表达水平高于基准值。或者，来自被检验者的标记的表达水平与基准值的差异例如能够根据两者在统计学上是否显著地不同来判断。在使用多个标记作为目标标记的情况下，将各个目标标记的表达水平与基准值进行比较，通过调查一定比例、例如50％以上、优选为70％以上、更优选为90％以上、进一步优选为100％的标记的表达水平是否与基准值不同，能够检测ad的重症度。
[0110]
(2.3基于预测模型的ad的重症度的检测)
[0111]
在本发明的方法的另一实施方式中，基于使用源自被检验者的本发明的标记(从该被检验者采集的生物体试样中所含的本发明的标记)的表达水平的数据(以下，称为表达图谱)构建的预测模型，检测该被检验者中的ad的重症度。作为表达图谱的例子，可以举出与测序的读取计数等表达水平相关的数据。
[0112]
例如，能够通过以从示范样本集团(例如，包含不同重症度的多个组的集团)的各人取得的1个以上的标记(基因或其表达产物)各自的表达图谱作为说明变量，以表示该集团中的各人属于哪个重症度的组的变量为目的变量的机器学习，构建用于检测任意的被检验者中的ad的重症度的预测模型(例如判别式)。利用构建的预测模型，能够检测被检验者中的ad的重症度，具体而言属于哪个重症度的组。
[0113]
在本说明书中，“特征量”与机器学习中的“说明变量”同义。在本说明书中，有时将该表达图谱作为机器学习的说明变量(特征量)而使用的标记称为“特征量标记(组)”。另外，在特征量标记为基因或其转录物的情况下，有时称为特征量基因。
[0114]
本实施方式中使用的特征量标记(组)只要是选自表1a及表1b所示的基因及该基因的表达产物中的至少1种即可。特征量标记的表达图谱可以是绝对值也可以是相对值，或者也可以进行归一化处理。在使用多个标记作为特征量标记组的情况下，例如，能够从本发明的标记中选择多个与ad的重症度的相关性高的标记，并将它们的表达图谱分别用作说明变量。
[0115]
在一个实施方式中，组合表1a的基因或其表达产物的全部，作为特征量标记组使用。在另一实施方式中，将表1b的基因或其表达产物全部组合而作为特征量标记组使用。在另一实施方式中，将表1a和表1b的基因或其表达产物全部组合而作为特征量标记组使用。
[0116]
在优选的实施方式中，作为用于机器学习的示范样本，使用包含2个以上的不同重症度的ad患者组(例如，可以举出：没有ad的症状、以及从ad的轻症度组、中等症度组以及重症度组中选择的2个以上的组，但并不限定于这些组)的集团中的特征量标记(组)的表达图谱。使用该示范样本构建用于区分被检验者的ad的重症度的判别式(预测模型)。作为用于构建判别式的说明变量，可以使用特征量标记(组)的表达图谱。作为目的变量，例如能够使用表示来自特征量标记(组)的被检验者属于哪个重症度的ad患者组的变量。根据构建的判别式，能够求出用于判别ad的重症度的临界值。接着，测定来自被检验者的该特征量标记(组)的表达图谱，将得到的测定值代入该判别式，将从该判别式得到的结果与该临界值进行比较，由此判别该被检验者的ad的重症度。临界值可以根据公知的方法来决定。例如，能够使用构建的判别式求出roc(receiver operating characteristic curve、受试者操作特征曲线)曲线，并将该约登指数(youden index)决定为临界值。
[0117]
或者，在预测模型的构建中使用标记的表达图谱的情况下，也可以根据需要，通过降维来压缩数据后进行预测模型的构建。例如，从表1a及表1b所示的基因组或其表达产物中提取多个标记。接着，对该提取出的标记的表达图谱实施主成分分析。将通过该主成分分析计算出的1个以上的主成分作为说明变量，通过将表示该说明变量所引起的被检验者属于哪个重症度的组(例如轻症度组或重症度组)的变量作为目的变量的机器学习，能够构建用于判别被检验者的ad的重症度的预测模型。
[0118]
预测模型的构建中的算法能够利用机器学习中使用的算法等公知的算法。作为机器学习算法的例子，虽然没有限定，但可以举出线性回归模型(linear model)、拉索回归(lasso)、随机森林(random forest)、神经网络(neural net)、线性内核的支持向量机(svm(linear))、rbf内核的支持向量机(svm(rbf))、正则化线性判别分析(regularized linear discriminant analysis)、正则化逻辑回归(regularized logistic regression)等算法。
[0119]
向构建的预测模型输入验证用的数据来计算预测值。能够将该预测值与实测值最适合的模型、例如相对于该预测值的实测值的正确率(accuracy)最大的模型选择为最佳模型。或者，根据预测值和实测值计算出检测率(recall)、精度(precision)以及它们的调和平均即f值，将其f值最大的模型选择为最佳模型。通过对构建的预测模型输入被检验者实测的特征量标记(组)的表达图谱，能够检测该被检验者的ad的重症度。
[0120]
(3.ad的重症度检测试剂盒)
[0121]
在进一步的一个方式中，本发明提供一种用于按照在上述2.中说明的本发明的方法来检测被检验者中的ad的重症度的试剂盒。在一个实施方式中，本发明的试剂盒具备用于测定上述本发明的标记的表达水平的试剂或器具。例如，本发明的试剂盒可以具备用于对本发明的核酸标记进行扩增或定量的试剂(例如逆转录酶、pcr用试剂、引物、探针、测序用接头序列等)、或用于对本发明的蛋白质标记进行定量的试剂(例如免疫学测定用的试剂、抗体等)。优选本发明的试剂盒含有与本发明的核酸标记特异性杂交的寡核苷酸(例如pcr用的引物、或探针)、或者识别本发明的蛋白质标记的抗体。优选本发明的试剂盒具备用于评价本发明的标记的表达水平的指标或指南。例如，本发明的试剂盒可以具备说明与各
标记相关的ad的症状(例如皮疹、皮肤发痒、皮肤干燥、面部红斑等)的指南、说明各标记的表达水平的增减与ad的重症度的关系的指南、或为了ad的重症度检测而说明各标记的表达水平的基准值的指南、或基于预测模型的判别式和对其输入的特征量标记的指南等。另外，本发明的试剂盒还可以具备生物体试样采集设备(例如，上述的ssl吸收性原材料或ssl粘接性原材料)、用于从生物体试样中提取本发明的标记的试剂(例如核酸纯化用试剂)、生物体试样采集后的试样采集设备的保存剂、保存用容器等。
[0122]
作为本发明的例示性的实施方式，在本说明书中进一步公开以下物质、制造方法、用途、方法等。但是，本发明并不限定于这些实施方式。
[0123]
[1]一种用于检测特应性皮炎的重症度的标记，其中，包括以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0124]
[2]根据[1]所述的标记，其中，优选的是，所述特应性皮炎的重症度是特应性皮炎所引起的全身的皮疹的重症度、特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度、特应性皮炎所引起的皮肤的干燥的重症度、或者特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度。
[0125]
[3]根据[1]或[2]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度的标记，含有选自以下的基因：ciz1、adam15、setd1b及twf1、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0126]
[4]根据[3]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测与湿疹面积和严重程度指数(eczema area and severity index)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0127]
[5]根据[1]或[2]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度的标记，含有选自以下的基因：lynx1及psme 2、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0128]
[6]根据[5]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测与患者导向湿疹测量(patient oriented eczema measure)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0129]
[7]根据[1]或[2]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度的标记，含有选自以下的基因：alpk1、atg16l2、csnk1d、gsk3a、lsm10、sash3及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0130]
[8]根据[7]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测与特应性皮炎所引起的皮肤发痒的视觉模拟评分(visual analog scaling)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0131]
[9]根据[1]或[2]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度的标记，含有选自以下的基因：tsc22d3、plxnc1及slc12a6、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0132]
[10]根据[9]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测与特应性皮炎所引起的皮肤干燥的视觉模拟评分(visual analog scaling)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0133]
[11]根据[1]或[2]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度的标记，含有选自以下的基因：odc1、agr2、fasn、apod、itpkb及
pdk4个基因、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0134]
[12]根据[11]所述的标记，其中，优选的是，所述标记为用于检测与特应性皮炎所引起的面部红斑所涉及的红斑指数对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0135]
[13]根据[1]～[12]中任一项所述的标记，其中，优选的是，所述标记为核酸标记。
[0136]
[14]根据[13]所述的标记，其中，优选的是，所述核酸为从皮肤表面脂质采集的mrna。
[0137]
[15]一种取得用于检测被检验者的特应性皮炎的重症度的数据的方法，其中，优选的是，包括测定被检验者的[1]～[14]中任一项所述的标记的表达水平。
[0138]
[16]一种检测被检验者的特应性皮炎的重症度的方法，其中，优选的是，包括测定被检验者的[1]～[14]中任一项所述的标记的表达水平。
[0139]
[17]根据[16]所述的方法，其中，优选的是，还包括基于所述标记的表达水平来检测所述被检验者中的特应性皮炎的重症度。
[0140]
[18]根据[15]～[17]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为[3]所述的标记，所述重症度为特应性皮炎所引起的全身的皮疹的重症度。
[0141]
[19]根据[18]所述的方法，其中，优选的是，所述重症度是与湿疹面积和严重程度指数(eczema area and severity index)对应的特应性皮炎的重症度。
[0142]
[20]根据[15]～[17]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为[5]所述的标记，所述重症度为特应性皮炎所引起的全身的皮疹的重症度。
[0143]
[21]根据[20]所述的方法，其中，优选的是，所述重症度是与患者导向湿疹测量(patient oriented eczema measure)对应的特应性皮炎的重症度。
[0144]
[22]根据[15]～[17]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为[7]所述的标记，所述重症度为特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度。
[0145]
[23]根据[22]所述的方法，其中，优选的是，所述重症度是与特应性皮炎所引起的皮肤发痒的视觉模拟评分(visual analog scaling)对应的特应性皮炎的重症度。
[0146]
[24]根据[15]～[17]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为[9]所述的标记，所述重症度为特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度。
[0147]
[25]根据[24]所述的方法，其中，优选的是，所述重症度是与特应性皮炎所引起的皮肤干燥的视觉模拟评分(visual analog scaling)对应的特应性皮炎的重症度。
[0148]
[26]根据[15]～[17]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为[11]所述的标记，所述重症度为特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度。
[0149]
[27]根据[26]所述的方法，其中，优选的是，所述重症度是与特应性皮炎所引起的面部红斑所涉及的红斑指数对应的特应性皮炎的重症度。
[0150]
[28]根据[16]～[27]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为选自上述表1a所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，该标记的表达水平越高，则检测为所述被检验者的特应性皮炎的重症度越重。
[0151]
[29]根据[16]～[27]中任一项所述的方法，其中，优选的是，所述标记为选自上述表1b所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，该标记的表达水平越低，则检测为所述被检验者的特应性皮炎的重症度越重。
[0152]
[30]根据[15]～[27]中任一项所述的方法，其中，优选的是，包括在不同的时期测
定所述被检验者中的标记的表达水平。
[0153]
[31]根据[30]所述的方法，其中，优选的是，所述标记为选自上述表1a所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，
[0154]
在从所述被检验者测定的该标记的表达水平高于过去的测定中的该被检验者的表达水平的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度加重，或者，在从所述被检验者测定的该标记的表达水平低于过去的测定中的该被检验者的表达水平的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度减轻。
[0155]
[32]根据[30]所述的方法，其中，优选的是，所述标记为选自上述表1b所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，
[0156]
在从所述被检验者测定的该标记的表达水平低于过去的测定中的该被检验者的表达水平的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度加重，或者，在从所述被检验者测定的该标记的表达水平比过去的测定中的该被检验者的表达水平高的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度减轻。
[0157]
[33]一种用于检测特应性皮炎的重症度的试剂盒，其中，能够在[15]～[32]中任一项所述的方法中使用，其含有与作为[1]～[12]中任一项所述的标记的核酸特异性杂交的寡核苷酸、或识别作为[1]～[12]中任一项所述的标记的蛋白质的抗体。
[0158]
[34]选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种在作为用于检测特应性皮炎的重症度的标记中的用途。
[0159]
[35]选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种在作为用于检测特应性皮炎的重症度的标记的制造中的用途。
[0160]
[36]根据[34]或[35]所述的用途，其中，优选的是，所述特应性皮炎的重症度是特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度、特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度、特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度、或特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度。
[0161]
[37]根据[34]～[36]中任一项所述的用途，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：ciz1、adam15、setd1b及twf1、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0162]
[38]根据[37]所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测与湿疹面积和严重程度指数(eczema area and severity index)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0163]
[39]根据[34]～[36]中任一项所述的用途，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的全身的皮疹的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：lynx1及psme 2、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0164]
[40]根据[39]所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测与患者导向湿疹测量(patient oriented eczema measure)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0165]
[41]根据[34]～[36]中任一项所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：alpk1、
atg16l2、csnk1d、gsk3a、lsm10、sash3及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0166]
[42]根据[41]所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测与特应性皮炎所引起的皮肤发痒的视觉模拟评分(visual analog scaling)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0167]
[43]根据[34]～[36]中任一项所述的用途，其中，优选的是，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：tsc22d3、plxnc1及slc12a6、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0168]
[44]根据[43]所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测与特应性皮炎所引起的皮肤干燥视觉模拟评分(visual analog scaling)对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0169]
[45]根据[34]～[36]中任一项所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：odc1、agr2、fasn、apod、itpkb及pdk4个基因、以及该基因的表达产物中的至少1种。
[0170]
[46]根据[45]所述的用途，其中，优选的是，所述标记是用于检测与特应性皮炎所引起的面部红斑所涉及的红斑指数对应的特应性皮炎的重症度的标记。
[0171]
[47]根据[34]～[46]中任一项所述的用途，其中，优选的是，所述标记为核酸标记。
[0172]
[48]根据[47]所述的用途，其中，优选的是，所述核酸是从皮肤表面脂质采集的mrna。
[0173]
[实施例]
[0174]
以下，基于实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明并不限定于此。
[0175]
实施例1使用ssl来源的rna的特应性皮炎的重症度检测标记的探索
[0176]
1)特应性皮炎患者的重症度评分的取得和ssl采集
[0177]
将具有特应性皮炎(ad)的18名成人(23～57岁，男性)作为被检验者。被检验者是在初次测定时被皮肤科专科医生诊断为重症度是轻症和中等症的特应性皮炎的ad患者。被检验者每隔14天共计4次就诊，接受了与ad的重症度相关的评分的取得和ssl的采集。以下，将收集到的ad的重症度所涉及的评分以及ssl分别基于从初次的就诊起的顺序，称为第1次、第2次、第3次、第4次的评分以及ssl样本。作为与ad的重症度相关的评分，分别使用了由医生进行的全身的easi评分(hanifin et al.,exp dermatol,10,2001，基于全身的皮疹将症状评分为0～72)、由被检验者自身进行的全身的poem评分(charman et al.,arch dermatol,140,2004、基于全身的皮疹将症状评分为0～28)、全身皮肤发痒的vas评分(将发痒的强度评分为0～100)和全身皮肤干燥的vas评分(将干燥的强度评分为0～100)、和基于高光谱成像装置(高光谱照相机nh-7、eba japan)的面部图像的面部的红斑指数(参见日本特开2018-23756号公报、以及dawson et al.,phys med biol,25,1980)。在面部的红斑指数的计算中，按照下式(1)，针对由高光谱成像装置得到的面部正面图像上的各像素计算红斑指数。在图像上的额头、两眼的上部及相当于两脸颊的部分确定任意的roi(感兴趣区域(region of interest))，将5处的roi中的红斑指数的平均值用作面部的红斑指数。
[0178]
红斑指数＝100{a
560
+1.5(a
543
+a
576
)-2(a
510
+a
610
)}
…
(1)
[0179]
这里、a
λ
＝log
10
(1/r
λ
)
[0180]aλ
；波长λ处的表观吸光度
[0181]rλ
；波长λ时的反射率
[0182]
从各被检验者的全部脸，使用吸油膜(5
×
8cm、聚丙烯制、3m公司)回收皮脂。将该吸油膜移至小瓶中，在-80℃下保存约1个月直至用于rna提取。
[0183]
2)rna制备及测序
[0184]
将上述1)的吸油膜切断为适当的大小，使用qiazol lysis reagent(qiagen)，按照附带的操作手册使rna转移到水层。从该水层中，用使用了rna提取用旋转柱的市售的rna提取试剂盒，按照附带的操作手册提取rna。使用superscript vilo cdna合成试剂盒(superscript vilo cdna synthesis kit)(life technologies japan株式会社)，将提取出的rna在42℃下逆转录90分钟，合成cdna。逆转录反应的引物使用试剂盒所附带的随机引物。从得到的cdna中，通过多重pcr制备含有来源于20802个基因的dna的文库。多重pcr是使用ion ampliseq转录组人基因表达试剂盒(ion ampliseqtranscriptome human gene expression kit)(life technologies japan株式会社)，在[99℃、2分钟
→
(99℃、15秒
→
62℃、16分钟)
×
20个循环
→
4℃、保持(hold)]的条件下进行的。将得到的pcr产物用ampure xp(beckman coulter株式会社)精制后，进行缓冲液的再构成、引物序列的消化、自适应连接和纯化、以及扩增，制备文库。将制备的文库装载到ion 540chip，使用ion s5/xl系统(life technologies japan株式会社)测序。将测序得到的各读取序列使用作为人基因组的参考序列的hg19 ampliseq transcriptome ercc v1进行基因映射，由此确定各读取序列来源的基因。
[0185]
3)使用数据
[0186]
将上述2)中测定的被检验者的ssl来源的rna的测序得到的各读取的读取计数作为各rna的表达水平的数据。将测序中的扩增区域跨越至少2个以上的外显子的基因作为分析对象基因。为了校正样品间的总读取计数的差异，将分析对象基因的读取计数转换为rpm(reads per million mapped reads)值。其中，将在90％以上的样品中得到20个以上的读取计数的4845个基因用于以下的分析。进而，为了将rpm值近似为正态分布，将整数1变换为相加后的底2的对数值(log2(rpm+1)值)。按照以上的顺序，针对18名被检验者的第1次、第2次、第3次、以及第4次的ssl样品分别制作4845个基因的表达水平数据(log2(rpm+1)值)。将它们分别基于从初次的就诊起的顺序，称为第1次、第2次、第3次和第4次的基因表达水平数据。
[0187]
4)数据分析
[0188]
i)与easi评分相关基因的探索
[0189]
基于上述1)中取得的18名ad患者的第1次easi评分和上述3)中计算出的18名ad患者的4845个基因的第1次基因表达水平数据(log2(rpm+1)值)，计算easi评分和各基因表达水平的斯皮尔曼(spearman)相关系数rs。同样地，分别算出第2～4次的easi评分和基因表达水平的rs。将计算出的rs分别称为针对各基因的第1次～第4次的rs。
[0190]
对于各基因，调查第1次～第4次的rs的p值(p_val)低于0.1的次数(将该次数设为a值)、以及第1次～第4次的rs的p值低于0.05的次数(将该次数设为b值)。表2所示的ciz1、adam15、sted1b、twf1的4个基因的a值为4或b值为3以上，与easi评分的相关性高。这4个基因迄今为止没有与特应性皮炎的关联性的报道，因此判断为可成为新的特应性皮炎的重症
度检测标记。
[0191]
[表2]
[0192][0193]
ii)与poem评分相关的基因的探索
[0194]
基于上述1)中取得的18名ad患者的第1次poem评分和上述3)中计算出的18名ad患者的4845个基因的第1次基因表达水平数据(log2(rpm+1)值)，算出poem评分和各基因表达水平的斯皮尔曼相关系数rs。同样地，分别算出第2～4次poem评分和基因表达水平的rs。将计算出的rs分别称为针对各基因的第1次～第4次的rs。
[0195]
对于各基因，调查第1次～第4次的rs的p值(p_val)低于0.1的次数(将该次数设为a值)、以及第1次～第4次的rs的p值低于0.05的次数(将该次数设为b值)。表3所示的lynx1、psme的2个基因的a值为4或b值为3以上，与poem评分的相关性高。这2个基因迄今为止没有与特应性皮炎的关联性的报道，因此判断为可成为新的特应性皮炎的重症度检测标记。
[0196]
[表3]
[0197][0198]
iii)与皮肤发痒的vas评分相关基因的探索
[0199]
基于上述1)中取得的18名ad患者的第1次皮肤发痒的vas评分、和上述3)中计算出的18名ad患者的4845个基因的第1次基因表达水平数据(log2(rpm+1)值)，算出该vas评分和各基因表达水平的斯皮尔曼相关系数rs。同样地，分别算出第2～4次的该vas评分和基因表达水平的rs。将计算出的rs分别称为针对各基因的第1次～第4次的rs。
[0200]
对于各基因，调查第1次～第4次的rs的p值(p_val)低于0.1的次数(将该次数设为a值)、以及第1次～第4次的rs的p值低于0.05的次数(将该次数设为b值)。表4所示的alpk1、atg16l2、csnk1d、gsk3a、lsm10、sash3、vsir的7个基因的a值为4或b值为3以上，与发痒的相关性高。这些7个基因迄今为止没有与特应性皮炎的关联性的报道，因此判断为能够成为新的特应性皮炎的重症度检测标记。
[0201]
[表4]
[0202]
[0203]
iv)与皮肤干燥的vas评分相关的基因的探索
[0204]
基于上述1)中取得的18名ad患者的第1次皮肤干燥的vas评分、和上述3)中计算出的18名ad患者的4845个基因的第1次基因表达水平数据(log2(rpm+1)值)，算出该vas评分和各基因表达水平的斯皮尔曼相关系数rs。同样地，分别算出第2～4次的该vas评分和基因表达水平的rs。将计算出的rs分别称为针对各基因的第1次～第4次的rs。
[0205]
对于各基因，调查第1次～第4次的rs的p值(p_val)低于0.1的次数(将该次数设为a值)、以及第1次～第4次的rs的p值低于0.05的次数(将该次数设为b值)。表5所示的tsc22d3、plxnc1、slc12a6的3个基因的a值为4或b值为3以上，与干燥的相关性高。这些3个基因迄今为止没有与特应性皮炎的关联性的报道，因此判断为可成为新的特应性皮炎的重症度检测标记。
[0206]
[表5]
[0207][0208]
v)与面部红斑指数相关基因的探索
[0209]
基于上述1)中取得的18名ad患者的第1次面部红斑指数和上述3)中计算出的18名ad患者的4845个基因的第1次基因表达水平数据(log2(rpm+1)值)，计算出该面部红斑指数和各基因表达水平的斯皮尔曼相关系数rs。同样地，分别算出第2～4次的该面部红斑指数和基因表达水平的rs。将计算出的rs分别称为针对各基因的第1次～第4次的rs。
[0210]
对于各基因，调查第1次～第4次的rs的p值(p_val)低于0.1的次数(将该次数设为a值)、以及第1次～第4次的rs的p值低于0.05的次数(将该次数设为b值)。表6a所示的odc1表示与面部红斑指数正相关，表6b所示的agr2、fasn、apod、itpkb、pdk4的5个基因表示与面部红斑指数的负相关。这些共计6个基因的a值为4或b值为3以上，与面部红斑的相关性高。迄今为止尚未报道这6个基因与特应性皮炎有关，因此判断为能够成为新的特应性皮炎的重症度检测标记。
[0211]
[表6]
[0212]a[0213][0214]b[0215]

技术特征：
1.一种检测被检验者的特应性皮炎的重症度的方法，其中，包括测定用于检测被检验者的特应性皮炎的重症度的标记的表达水平，该用于检测特应性皮炎的重症度的标记为选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。2.根据权利要求1所述的方法，其中，还包括基于所述标记的表达水平来检测所述被检验者中的特应性皮炎的重症度。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述标记为选自以下的基因：ciz1、adam15、setd1b和twf1、以及该基因的表达产物中的至少1种，所述重症度是特应性皮炎所引起的全身的皮疹的重症度。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述重症度是与湿疹面积和严重程度指数对应的特应性皮炎的重症度。5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述标记为选自以下的基因：lynx1和psme 2、以及该基因的表达产物中的至少1种，所述重症度为特应性皮炎所引起的全身的皮疹的重症度。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述重症度是与患者导向湿疹测量对应的特应性皮炎的重症度。7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述标记为选自以下的基因：alpk1、atg16l2、csnk1d、gsk3a、lsm10、sash3和vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种，所述重症度是特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度。8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述重症度是与特应性皮炎所引起的皮肤发痒的视觉模拟评分对应的特应性皮炎的重症度。9.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述标记为选自以下的基因：tsc22d3、plxnc1和slc12a6、以及该基因的表达产物中的至少1种，所述重症度为特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度。10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述重症度是与特应性皮炎所引起的皮肤干燥的视觉模拟评分对应的特应性皮炎的重症度。11.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述标记为选自以下的基因：odc1、agr2、fasn、apod、itpkb和pdk4个基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，所述重症度为特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度。12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述重症度是与特应性皮炎所引起的面部红斑所涉及的红斑指数对应的特应性皮炎的重症度。13.根据权利要求1～12中任一项所述的方法，其中，所述标记为选自表1所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，该标记的表达水平越高，则检测为所述被检验者的特应性皮炎的重症度越重。[表1]
基因符号adam15ciz1lynx1odc1psme2setd1btwf114.根据权利要求1～12中任一项所述的方法，其中，所述标记为选自表2所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，该标记的表达水平越低，则检测为所述被检验者的特应性皮炎的重症度越重。[表2]基因符号基因符号agr2lsm10alpk1pdk4apodplxnc1atg16l2sash3csnk1dslc12a6fasntsc22d3gsk3avsiritpkb15.根据权利要求1～12中任一项所述的方法，其中，包括在不同的时期测定所述被检验者的标记的表达水平。16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述标记为选自表3所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，在从所述被检验者测定的该标记的表达水平高于过去的测定中的该被检验者的表达水平的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度加重，或者，在从所述被检验者测定的该标记的表达水平低于过去的测定中的该被检验者的表达水平的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度减轻。[表3]基因符号adam15ciz1lynx1odc1psme2setd1btwf117.根据权利要求15所述的方法，其中，
所述标记为选自表4所示的基因、以及该基因的表达产物中的至少1种，在从所述被检验者测定的该标记的表达水平低于过去的测定中的该被检验者的表达水平的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度加重，或者，在从所述被检验者测定的该标记的表达水平比过去的测定中的该被检验者的表达水平高的情况下，检测出该被检验者的特应性皮炎的重症度减轻。[表4]基因符号基因符号agr2lsm10alpk1pdk4apodplxnc1atg16l2sash3csnk1dslc12a6fasntsc22d3gsk3avsiritpkb18.选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种在作为用于检测特应性皮炎的重症度的标记中的用途。19.选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16i，2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种在用作检测特应性皮炎的重症度的标记的制造中的用途。20.根据权利要求18或19所述的用途，其中，所述特应性皮炎的重症度为特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度、特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度、特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度、或特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度。21.根据权利要求18～20中任一项所述的用途，其中，所述标记是用于检测特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：ciz1、adam15、setd1b及twf1、以及该基因的表达产物中的至少1种。22.根据权利要求21所述的用途，其中，所述标记是用于检测与湿疹面积和严重程度指数对应的特应性皮炎的重症度的标记。23.根据权利要求18～20中任一项所述的用途，其中，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的全身皮疹的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：lynx1及psme 2、以及该基因的表达产物中的至少1种。24.根据权利要求23所述的用途，其中，所述标记是用于检测与患者导向湿疹测量对应的特应性皮炎的重症度的标记。25.根据权利要求18～20中任一项所述的用途，其中，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的皮肤发痒的重症度的标记，且该标记包含选
自以下的基因：alpk1、atg16l2、csnk1d、gsk3a、lsm10、sash3、及vsir、以及该基因的表达产物中的至少1种。26.根据权利要求25所述的用途，其中，所述标记是用于检测与特应性皮炎所引起的皮肤发痒的视觉模拟评分对应的特应性皮炎的重症度的标记。27.根据权利要求18～20中任一项所述的用途，其中，所述标记为用于检测特应性皮炎所引起的皮肤干燥的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：tsc22d3、plxnc1及slc12a6、以及该基因的表达产物中的至少1种。28.根据权利要求27所述的用途，其中，所述标记是用于检测与特应性皮炎所引起的皮肤干燥的视觉模拟评分对应的特应性皮炎的重症度的标记。29.根据权利要求18～20中任一项所述的用途，其中，所述标记是用于检测特应性皮炎所引起的面部红斑的重症度的标记，且该标记包含选自以下的基因：odc1、agr2、fasn、apod、itpkb和pdk4个基因、以及该基因的表达产物中的至少1种。30.根据权利要求29所述的用途，其中，所述标记是用于检测与特应性皮炎所引起的面部红斑所涉及的红斑指数对应的特应性皮炎的重症度的标记。31.根据权利要求18～30中任一项所述的用途，其中，所述标记为核酸标记。32.根据权利要求31所述的用途，其中，所述核酸是从皮肤表面脂质采集的mrna。33.一种用于检测特应性皮炎的重症度的试剂盒，其中，所述试剂盒在权利要求1～17中任一项所述的方法中使用，所述试剂盒含有以下的寡核苷酸或抗体：所述寡核苷酸与选自以下的基因：adam15、agr2、alpk1、apod、atg16l2、ciz1、csnk1d、fasn、gsk3a、itpkb、lsm10、lynx1、odc1、pdk4、plxnc1、psme2、sash3、setd1b、slc12a6、tsc22d3、twf1、及vsir、以及该基因的转录产物中的至少1种核酸特异性杂交，所述抗体识别选自该基因的翻译产物中的至少1种蛋白质。

技术总结
本发明提供一种用于检测特应性皮炎的重症度的标记、以及使用该标记的特应性皮炎的重症度的检测方法。症度的检测方法。


技术研发人员：高田直人 桑野哲矢 井上高良
受保护的技术使用者：花王株式会社
技术研发日：2021.11.29
技术公布日：2023/8/24