一种低表面自由能培养皿及其制备方法与流程

1.本发明涉及实验耗材技术领域，具体涉及一种低表面自由能培养皿及其制备方法。


背景技术：

2.培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般由玻璃或塑料制成。培养皿可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养。塑料培养皿材质多为ps(聚苯乙烯)，这类培养皿由于底部的表面自由能较高，不利于细胞薄膜的脱离。
3.细胞薄膜是指在体外培养的条件下，将分离得到的细胞培养于特定的材料之上，并采取特定的手段在不破坏细胞连接的情况下，使得细胞与培养基材分离，所得到的完整单层细胞薄膜。细胞薄膜与细胞注射以及高分子-细胞嵌合植入物相比，在临床应用上存在以下优势：(1)传统细胞静脉/动脉注射后，分布偏向于肝、肺等组织，难以实现间充质干细胞向移植器官部位的靶向；而细胞薄膜可以在移植手术直接移植于所需部位；(2)传统的细胞系统注射对于某些特殊部位的疾病，诸如骨关节、肌腱等，由于组织中缺乏丰富的毛细血管网络等原因，往往难以起到好的疗效；而细胞薄膜可以直接应用于这些部位，起到关键治疗作用；(3)细胞薄膜无需可降解高聚物材料的支撑，因而不易引发由高聚物材料引起的免疫反应和炎症反应；(4)细胞薄膜完整保留了细胞外基质，有利于细胞的再生和体内利用。
4.为保证制备的细胞薄膜的完整性，目前有一种方法是在低表面能培养皿中培养单层细胞并进行细胞薄膜的脱离。但制备这类低表面能培养皿多采用真空镀膜工艺，成本较高，且涉及一些可吸入有毒有害物质的排放。
5.因此，亟需开发一种工艺流程简单，减少有害物质排放的制备低表面能培养皿的方法。


技术实现要素：

6.本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种低表面自由能的培养皿及其制备方法。
7.为此，在本发明的第一方面，本发明提供一种培养皿。根据本发明的实施方案，所述培养皿的材料包括：
8.(1)75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；
9.(2)10-40重量份的聚合物；
10.(3)1-5重量份的增塑剂；
11.(4)1-5重量份的抗老化剂，
12.其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，组成所述高聚物或嵌段共聚物的单体选自以下中的至少之一：
13.乙烯基咪唑(vinylimidazole)、乙烯基吡咯烷酮(vinylpyrrolidone)、氨基苯乙
aminostyrene)、9-乙烯基咔唑(9-vinylcarbazole)、丙烯酸二甲胺基乙酯(2-dimethylaminoethyl acrylate)、丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯(diethylaminoethyl acrylate)、2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯(diethylaminoethyl acrylate)、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯(3-(dimethylamino)propyl acrylate)、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯(2-(dimethylamino)ethyl methacrylate)、2-(叔丁基氨基)甲基丙烯酸乙酯(t-butylaminoethyl methacrylate)、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺(dimethylaminomethyl styrene)、甲基丙烯酸(methacrylic acid)、丙烯酰胺(acrylamide)、乙烯基-n-甲基氯化吡啶(vinyl-n-methylpyridinium chloride)、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺(n-(4-vinylbenzyl)-n,n-dimethylamine)。
14.发明人发现，采用上述特殊原材料制备的培养皿，利用该培养皿培养细胞例如干细胞等时，尤其是采用液体培养基进行培养时，细胞在扩增过程中能够贴附在培养空间底部，并且能够在培养皿底部进行贴壁增殖，另外，鉴于该培养皿底部的表面自由能不超过90mj/m2，通过调整细胞液体培养基中的离子浓度，可以使培养皿底部与细胞之间的结合力降低，从而使贴壁培养的细胞能够从培养皿底部以细胞薄膜的形式脱落，有效地获得细胞薄膜。本发明提供的培养皿，由于表面自由能较低，可通过调整细胞液体培养基中的离子浓度，使培养皿与细胞之间的结合力降低，从而使贴壁培养的细胞能够从培养皿底部以细胞薄膜的形式脱落，有效地获得细胞薄膜。
15.根据本发明的实施方案，所述培养皿还可以具有下列附加技术特征的至少之一：
16.根据本发明的实施方案，所述聚合物包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
17.根据本发明的实施方案，所述甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比为100：(15～30)。甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比在此范围内，能够使得获得的培养皿表面更光滑，维持培养皿底部较低的表面自由能，更便于细胞薄膜脱离，同时保证细胞薄膜的完整性。
18.根据本发明的实施方案，所述增塑剂选自邻苯二甲酸二异辛酯、新戊二醇二苯甲酸酯、环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、环己烷1,2-二甲酸二异壬酯、乙酰柠檬酸三丁酯中的至少之一。
19.根据本发明的实施方案，所述抗老化剂选自四[β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸]季戊四醇酯(抗氧剂1010)、β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯(抗氧剂1076)、硫代二丙酸双月桂酯(dltp)、硫代二丙酸二硬脂醇酯(dstp)中的至少之一。这些特定种类的抗老化剂能够进一步提升培养皿的耐刮擦、耐老化性能。
[0020]
根据本发明的实施方案，所述培养皿的表面自由能不超过90mj/m2。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
[0021]
根据本发明的实施方案，所述培养皿的表面自由能不超过60mj/m2。
[0022]
本发明第二方面提供一种培养皿的制备方法。根据本发明的实施方案，所述培养皿由以下原料压制而成：
[0023]
(1)75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；
[0024]
(2)10-40重量份的聚合物；
[0025]
(3)1-5重量份的增塑剂；
[0026]
(4)1-5重量份的抗老化剂，
[0027]
其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，
[0028]
组成所述高聚物或嵌段共聚物的单体选自以下中的至少之一：
[0029]
乙烯基咪唑、乙烯基吡咯烷酮、氨基苯乙烯、甲基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、n-异丙基丙烯酰胺、4-乙烯基苄氯、氰甲基苯乙烯、1-甲基氯化吡啶、乙烯己内酰胺、丙烯酸、n,n-二甲基氨基乙酯、丙烯酸氯乙酯、丙烯酸氰乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、丙烯、苯乙烯、氯乙烯、2-乙烯吡啶、丙烯腈、己内酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、4-乙烯吡啶、二乙烯基苯、苯甲酸乙烯酯、甲基丙烯酸苯甲酯、环己基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丙酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酸烯丙酯、甲基丙烯酸异氰基乙酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、乙二醇甲酯甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、1,2,4-三乙基环己烷、糠醇甲酯、甲基丙烯酸四氢糠基酯、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸丙炔基酯、1,4-丁二醇乙烯醚、丙烯酸异冰片酯、乙二醇二丙烯酸酯、丙烯酸丙炔酯、2,4,6,8-四甲基-2,4,6,8-四乙烯基环四硅氧烷、六乙烯基二硅氧烷、2,4,6-三乙烯基-2,4,6-三甲基环三硅氧烷、三乙烯基三甲基环三硅氮烷、二甲基苯基乙烯基硅烷、(全氟辛基)乙基甲基丙烯酸酯、全氟癸基丙烯酸酯、七氟丁基甲基丙烯酸酯、1,1,1,3,3,3-六氟异丙基异丁烯酸酯、2,2,3,3,4,4-六氟-1,5-五基硅丙烯酸酯、2-(全氟己基)乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸三氟乙酯、五氟苯基甲基丙烯酸酯、1h,1h,7h-十二氟庚基丙烯酸酯、1h,1h,2h,2h-全氟癸基丙烯酸酯、二乙二醇二乙烯基醚、1,9-癸二烯、2-甲基丙烯酸酐、1,2,4-三乙烯基环己烷、乙酰乙酸烯丙酯、马来酸酐、4-乙烯基苯胺、9-乙烯基咔唑、丙烯酸二甲胺基乙酯、丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯、2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯、2-(叔丁基氨基)甲基丙烯酸乙酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、乙烯基-n-甲基氯化吡啶、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺。
[0030]
发明人发现，利用该方法制备的培养皿，具有较低的表面自由能，能够快速地完成细胞薄膜与培养皿底部的脱离。这可能是因为通过改变培养基中的离子浓度例如钙离子和/或镁离子的浓度，细胞黏着斑复合物跨膜受体的构型会随之改变，培养皿底部与细胞之间的结合力会降低，从而可以实现在不经胰蛋白酶水解细胞间蛋白的情况下，就能够促使细胞从培养皿的底部表面脱离，得到完整的细胞薄膜。本发明方法制备的培养皿，由于表面自由能较低，可通过调整细胞液体培养基中的离子浓度，使培养皿与细胞之间的结合力降低，从而使贴壁培养的细胞能够从培养皿底部以细胞薄膜的形式脱落，有效地获得细胞薄膜。该方法制得的培养皿透光率高，耐刮擦，兼具耐老化性能，适合干细胞研究大范围推广。
[0031]
传统的聚苯乙烯材料制备的培养皿因其表面自由能较高，细胞只能进行贴壁生长。本发明在聚苯乙烯中增加了特定比例的前述高聚物和嵌段共聚物种类，从而使混合材料的表面自由能降低，故该材料制成的培养皿上培养的细胞贴壁能力减弱，可通过人工方式将其剥离并进行生物医学应用。
[0032]
本发明提供的培养皿的制备方法，简化了工艺流程，直接采用挤出工艺，相比真空镀膜流程减少了可吸入有毒有害物质的排放，同时，该制备方法制得的培养皿表面光滑，维持培养皿底部较低的表面自由能，细胞薄膜能够成功脱离，同时保证细胞薄膜的完整性。
[0033]
根据本发明的实施方案，所述聚合物包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
[0034]
根据本发明的实施方案，所述甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比为100：(15～30)。甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比在此范围内，能够使得获得的培养皿表面更光滑，维持培养皿底部较低的表面自由能，更便于细胞薄膜脱离，同时保证细胞薄膜的完整性。
[0035]
根据本发明的实施方案，所述增塑剂选自邻苯二甲酸二异辛酯、新戊二醇二苯甲酸酯、环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、环己烷1,2-二甲酸二异壬酯、乙酰柠檬酸三丁酯中的至少之一。
[0036]
根据本发明的实施方案，所述抗老化剂选自四[β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸]季戊四醇酯(抗氧剂1010)、β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯(抗氧剂1076)、硫代二丙酸双月桂酯(dltp)、硫代二丙酸二硬脂醇酯(dstp)中的至少之一。
[0037]
根据本发明的实施方案，所述压制过程包括：
[0038]
(a)将所述聚苯乙烯颗粒和聚合物混合，150-160℃加热10～12h，获得第一混合料m1；
[0039]
(b)向所述第一混合料m1中加入所述增塑剂、抗老化剂，进行捏合，获得第二混合料m2；
[0040]
(c)对所述第二混合料m2进行注塑成型，以便获得所述培养皿。
[0041]
采用本发明的方法制备获得的培养皿，该培养基的培养空间底部表面自由能不超过90mj/m2。由此，通过调整细胞液体培养基中的离子浓度，可以使培养皿底部与细胞之间的结合力降低，从而使贴壁培养的细胞能够从培养皿底部以细胞薄膜的形式脱落，有效地获得完整的细胞薄膜。该方法简化了工艺流程，直接采用挤出工艺，相比真空镀膜工艺流程减少了可吸入有毒有害物质的排放，同时，该制备方法制得的培养皿表面光滑，维持培养皿底部较低的表面自由能，细胞薄膜能够成功脱离，同时保证细胞薄膜的完整性。
[0042]
根据本发明的实施方案，所述压制过程进一步包括：
[0043]
在进行步骤(b)之前，对所述第一混合料m1进行降温处理，将所述第一混合料m1降温至20-30℃。
[0044]
根据本发明的实施方案，所述降温速率不大于1.0℃/min。
[0045]
本发明提供的制备培养皿的方法，在步骤(b)之前采用特定的降温速率(不大于1.0℃/min)进行降温处理，能够使聚合物溶胶在慢速降温过程中恢复疲劳，松弛前期混炼时所受到的机械应力并减少胶料收缩，同时在慢速降温的停放过程中，不同组分的聚合物在胶料中仍能继续扩散反应，增强了材料分散均匀性，若胶料冷却速度过快会影响材料性状，导致后续成品翘曲变形。
[0046]
根据本发明的实施方案，步骤(b)中，进行捏合时的速度为400-600rpm，时间为5-15min。
[0047]
根据本发明的实施方案，步骤(c)中，所述注塑成型的过程包括：
[0048]
(a)将所述第二混合料m2投入注塑成型机中，挤压成热熔融状态熔体，其中，所述注塑成型机料筒温度为200-250℃；
[0049]
(b)将所述热熔融状态熔体注入成型磨具中，保压2-4s，获得所述培养皿。
[0050]
本发明第三方面提供第一方面所述的培养皿或第二方面所述的制备方法制备获得的培养皿在制备细胞薄膜中的用途。
[0051]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
[0052]
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0053]
图1是根据本发明一个实施例的培养皿的结构示意图，其中，100：培养皿本体；110：培养空间；200：培养皿底板；
[0054]
图2是根据本发明一个实施例的pvdf膜的结构示意图，300：pvdf膜；
[0055]
图3是根据本发明另一个实施例的pvdf膜的结构示意图，300：pvdf膜；
[0056]
图4是实施例1中方法制备获得的培养皿的结构示意图，1：培养皿本体；2：防菌盖；3：培养皿底板；
[0057]
图5是实施例2中细胞薄膜与培养皿分离的原理示意图；
[0058]
图6是实施例3中市售的苯乙烯材料的培养皿和实施例1中本发明方法制备的培养皿培养获得细胞薄膜的状态以及细胞薄膜剥离培养皿底部后的状态，其中a图为市售的苯乙烯材料的培养皿培养间充质干细胞后获得的细胞薄膜，b图为a图中细胞薄膜剥离培养皿底部后的状态；c图为采用实施例1中培养皿培养间充质干细胞后获得的细胞薄膜，d图为c图中细胞薄膜剥离培养皿底部后的状态。
具体实施方式
[0059]
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0060]
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
[0061]
此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
[0062]
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征“上”或“下”可以是第一和第二特征直接接触，或第一和第二特征通过中间媒介间接接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
[0063]
培养皿
[0064]
根据本发明一个具体的实施方案，本发明提供了一种培养皿，所述培养皿的材料包括：
[0065]
(1)75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；
[0066]
(2)10-40重量份的聚合物；
[0067]
(3)1-5重量份的增塑剂；
[0068]
(4)1-5重量份的抗老化剂，
[0069]
其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，组成所述高聚物或嵌段共聚物的单体选自以下中的至少之一：
[0070]
乙烯基咪唑、乙烯基吡咯烷酮、氨基苯乙烯、甲基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、n-异丙基丙烯酰胺、4-乙烯基苄氯、氰甲基苯乙烯、1-甲基氯化吡啶、乙烯己内酰胺、丙烯酸、n,n-二甲基氨基乙酯、丙烯酸氯乙酯、丙烯酸氰乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、丙烯、苯乙烯、氯乙烯、2-乙烯吡啶、丙烯腈、己内酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、4-乙烯吡啶、二乙烯基苯、苯甲酸乙烯酯、甲基丙烯酸苯甲酯、环己基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丙酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酸烯丙酯、甲基丙烯酸异氰基乙酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、乙二醇甲酯甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、1,2,4-三乙基环己烷、糠醇甲酯、甲基丙烯酸四氢糠基酯、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸丙炔基酯、1,4-丁二醇乙烯醚、丙烯酸异冰片酯、乙二醇二丙烯酸酯、丙烯酸丙炔酯、2,4,6,8-四甲基-2,4,6,8-四乙烯基环四硅氧烷、六乙烯基二硅氧烷、2,4,6-三乙烯基-2,4,6-三甲基环三硅氧烷、三乙烯基三甲基环三硅氮烷、二甲基苯基乙烯基硅烷、(全氟辛基)乙基甲基丙烯酸酯、全氟癸基丙烯酸酯、七氟丁基甲基丙烯酸酯、1,1,1,3,3,3-六氟异丙基异丁烯酸酯、2,2,3,3,4,4-六氟-1,5-五基硅丙烯酸酯、2-(全氟己基)乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸三氟乙酯、五氟苯基甲基丙烯酸酯、1h,1h,7h-十二氟庚基丙烯酸酯、1h,1h,2h,2h-全氟癸基丙烯酸酯、二乙二醇二乙烯基醚、1,9-癸二烯、2-甲基丙烯酸酐、1,2,4-三乙烯基环己烷、乙酰乙酸烯丙酯、马来酸酐、4-乙烯基苯胺、9-乙烯基咔唑、丙烯酸二甲胺基乙酯、丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯、2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯、2-(叔丁基氨基)甲基丙烯酸乙酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、乙烯基-n-甲基氯化吡啶、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺。
[0071]
根据本发明的一个具体的实施方案，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，组成所述高聚物的单体可以是上述单体集合中的任意一种或多种，或者所述高聚物也可以是多种高聚物的混合物；组成所述嵌段共聚物的单体可以是上述单体集合中的任意两种或多种，或者所述嵌段共聚物也可以是多种嵌段共聚物的混合物。例如，所述培养皿的材料包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物，所述甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比为100：(15～30)。
[0072]
根据本发明的一个具体的实施方案，所述增塑剂选自邻苯二甲酸二异辛酯、新戊二醇二苯甲酸酯、环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、环己烷1,2-二甲酸二异壬酯、乙酰柠檬酸三丁酯中的至少之一；所述抗老化剂选自四[β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸]季戊四醇酯(抗氧剂1010)、β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯(抗氧剂1076)、硫代二丙酸双月桂酯(dltp)、硫代二丙酸二硬脂醇酯(dstp)中的至少之一。
[0073]
需要说明的是，本发明提供的培养皿材料中含有的增塑剂、抗老化剂并不限于上述种类，也可以是本领域已知的应用于注塑领域的各种其他的增塑剂、抗老化剂，其都包含在本发明的保护范围之内。
[0074]
根据本发明的一个具体的实施方案，本发明提供了一种培养皿，参考图1，培养皿本体100内限定有培养空间110和培养皿底板200。其中，培养皿底板200的表面自由能不超过90mj/m2。更优选地，培养皿底板200的表面自由能不超过60mj/m2。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
[0075]
培养皿本体100的具体形状并不受特别限制，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择。根据本发明的一些实施例，培养皿的整体形状为圆形，其细胞承载面为光滑平底，高度为13～17cm，直径为35～100mm，有效细胞培养面积为8～57cm2。
[0076]
根据本发明的一个实施方案，所述培养皿本体100为聚苯乙烯材质，具有良好的透光率，方便观察细胞形态。在本发明的一些实施方案中，培养皿本体对波长为400～800nm的可见光的透光率在80％以上。
[0077]
根据本发明的一个优选的实施方案，所述培养皿材料中含有的聚合物包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物，且二者之间的重量比为100：(1530)。根据聚合物中含有的高聚物和嵌段共聚物的不同，可相应调整高聚物、嵌段共聚物二者之间的比例。
[0078]
培养皿的制备方法
[0079]
根据本发明的一个具体的实施方案，本发明提供一种培养皿的制备方法，所述培养皿由以下原料压制而成：
[0080]
(1)75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；
[0081]
(2)10-40重量份的聚合物；
[0082]
(3)1-5重量份的增塑剂；
[0083]
(4)1-5重量份的抗老化剂，
[0084]
其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，
[0085]
组成所述高聚物或嵌段共聚物的单体选自以下中的至少之一：
[0086]
乙烯基咪唑、乙烯基吡咯烷酮、氨基苯乙烯、甲基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、n-异丙基丙烯酰胺、4-乙烯基苄氯、氰甲基苯乙烯、1-甲基氯化吡啶、乙烯己内酰胺、丙烯酸、n,n-二甲基氨基乙酯、丙烯酸氯乙酯、丙烯酸氰乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、丙烯、苯乙烯、氯乙烯、2-乙烯吡啶、丙烯腈、己内酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、4-乙烯吡啶、二乙烯基苯、苯甲酸乙烯酯、甲基丙烯酸苯甲酯、环己基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丙酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酸烯丙酯、甲基丙烯酸异氰基乙酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、乙二醇甲酯甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、1,2,4-三乙基环己烷、糠醇甲酯、甲基丙烯酸四氢糠基酯、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸丙炔基酯、1,4-丁二醇乙烯醚、丙烯酸异冰片酯、乙二醇二丙烯酸酯、丙烯酸丙炔酯、2,4,6,8-四甲基-2,4,6,8-四乙烯基环四硅氧烷、六乙烯基二硅氧烷、2,4,6-三乙烯基-2,4,6-三甲基环三硅氧烷、三乙烯基三甲基环三硅氮烷、二甲基苯基乙烯基硅烷、(全氟辛基)乙基甲基丙烯酸酯、全氟癸基丙烯酸酯、七氟丁基甲基丙烯酸酯、1,1,1,3,3,3-六氟异丙基异丁烯酸酯、2,2,3,3,4,4-六氟-1,5-五基硅丙烯酸酯、2-(全氟己基)乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙
烯酸三氟乙酯、五氟苯基甲基丙烯酸酯、1h,1h,7h-十二氟庚基丙烯酸酯、1h,1h,2h,2h-全氟癸基丙烯酸酯、二乙二醇二乙烯基醚、1,9-癸二烯、2-甲基丙烯酸酐、1,2,4-三乙烯基环己烷、乙酰乙酸烯丙酯、马来酸酐、4-乙烯基苯胺、9-乙烯基咔唑、丙烯酸二甲胺基乙酯、丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯、2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯、2-(叔丁基氨基)甲基丙烯酸乙酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、乙烯基-n-甲基氯化吡啶、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺。优选地，所述聚合物包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物。
[0087]
根据本发明的一个具体的实施方案，所述增塑剂选自邻苯二甲酸二异辛酯、新戊二醇二苯甲酸酯、环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、环己烷1,2-二甲酸二异壬酯、乙酰柠檬酸三丁酯中的至少之一；所述抗老化剂选自四[β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸]季戊四醇酯(抗氧剂1010)、β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯(抗氧剂1076)、硫代二丙酸双月桂酯(dltp)、硫代二丙酸二硬脂醇酯(dstp)中的至少之一。需要说明的是，本发明提供的培养皿材料中含有的增塑剂、抗老化剂并不限于上述种类，也可以是本领域已知的应用于注塑领域的各种其他的增塑剂、抗老化剂，其都包含在本发明的保护范围之内。
[0088]
根据本发明的一个具体的实施方案，所述压制过程包括：
[0089]
(a)将所述聚苯乙烯颗粒和聚合物混合，150-160℃加热10～12h，获得第一混合料m1；
[0090]
(b)向所述第一混合料m1中加入所述增塑剂、抗老化剂，进行捏合，获得第二混合料m2；
[0091]
(c)对所述第二混合料m2进行注塑成型，以便获得所述培养皿。
[0092]
根据本发明的一个具体的实施方案，所述压制过程进一步包括：
[0093]
在进行步骤(b)之前，对所述第一混合料m1进行降温处理，将所述第一混合料m1降温至20-30℃，所述降温速率不大于1.0℃/min。
[0094]
根据本发明的一个具体的实施方案，步骤(b)中，进行捏合时的速度为400-600rpm，时间为5-15min。根据本发明的一个具体的实施方案，步骤(c)中，所述注塑成型的过程包括：
[0095]
(a)将所述第二混合料m2投入注塑成型机中，挤压成热熔融状态熔体，其中，所述注塑成型机料筒温度为200-250℃；
[0096]
(b)将所述热熔融状态熔体注入成型磨具中，保压2-4s，获得所述培养皿。
[0097]
根据本发明的一个更为具体的实施方案，本发明提供的培养皿由以下重量份的原料通过混合后高温压制而成：a、聚苯乙烯(polystyrene，ps)颗粒75～80份；b、甲基丙烯酸丁酯(butyl methacrylate)高聚物10～20份；c、聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物10～20份；d、增塑剂1～5份；e、抗老化剂1～5份。培养皿的具体制备步骤包括：
[0098]
g1、将聚苯乙烯颗粒、甲基丙烯酸丁酯、聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物，按比例加入反应釜中，搅拌均匀，加热至150-160℃，反应10～12小时，降温至室温，得到混合料n1；
[0099]
g2、在混合料中按比例加入增塑剂、抗老化剂，并以500rpm
±
20％速度捏合10min，得到混合料n2；
[0100]
g3、将热熔塑化的n2投入到已预热至220℃的注塑成型机中，在螺杆的作用下积压
成热熔融状态熔体，并将熔体注射至培养皿成型磨具中，保压2～4s，冷却开模即得，
[0101]
其中，所述步骤g1中降温至室温的降温速率为＜1.0℃/min，所述步骤g3中注塑压力为80mpa(
±
10％)。
[0102]
制备细胞薄膜中的用途
[0103]
根据本发明的一个具体的实施方案，本发明提供上述培养皿或上述方法制备获得的培养皿在制备细胞薄膜中的用途。如前所述，该培养基的培养空间底部自由能不超过90mj/m2。由此，通过调整细胞液体培养基中的离子浓度，可以使培养皿底部与细胞之间的结合力降低，从而使贴壁培养的细胞能够从培养皿底部以细胞薄膜的形式脱落，有效地获得细胞薄膜。
[0104]
细胞薄膜的制备方法、复合薄膜
[0105]
根据本发明的一个具体的实施方案，本发明提供细胞薄膜的制备方法，包括：
[0106]
1)利用液体培养基在上述的培养皿中，对细胞进行培养，以便形成单层细胞薄膜；
[0107]
2)使所述单层细胞薄膜处于剥离液中，所述剥离液中阳离子浓度低于所述液体培养基，所述阳离子包括钙离子和/或镁离子中的至少之一；和
[0108]
3)从所述剥离液中，收集所述单层细胞薄膜。
[0109]
下面进一步对根据本发明实施例的制备细胞薄膜的方法进行详细描述。
[0110]
本发明提出的制备细胞薄膜的方法对细胞的具体种类没有特别限制，例如可以为选自干细胞、神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞、上皮细胞、内皮细胞、肌细胞、成纤维细胞中的至少之一。具体的，干细胞包括选自诱导多能干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、心肌干细胞和肺干细胞中的至少之一；所述间充质干细胞包括选自骨髓来源的间充质干细胞、脂肪来源的间充质干细胞、脐带来源的间充质干细胞中的至少之一；所述上皮细胞包括选自角膜上皮细胞、前列腺上皮细胞、肾小管上皮细胞中的至少之一；所述内皮细胞包括选自肺动脉内皮细胞、主动脉内皮细胞中的至少之一；所述肌细胞包括选自主动脉平滑肌细胞、肺动脉平滑肌细胞、冠状动脉平滑肌细胞中的至少之一；所述成纤维细胞包括选自心肌成纤维细胞、皮肤成纤维细胞、肾间质成纤维细胞中的至少之一。优选地，上述细胞为间充质干细胞。
[0111]
根据本发明的实施方案，上述剥离液为不含钙离子和镁离子的缓冲液。由此，剥离液降低细胞薄膜与培养皿之间结合力的效果更佳。更优选地，该不含钙离子和镁离子的缓冲液的ph为6.9～7.4，例如可采用市售dpbs缓冲液。
[0112]
根据本发明的实施方案，可以采用pvdf膜收集单层细胞薄膜。具体的，单层细胞薄膜从培养皿脱离后，可以采用pvdf膜将单层细胞薄膜吸附至表面，并根据实际需要，以生理盐水冲洗数遍。优选地，该pvdf膜携带亲水改性基体，由此，可以进一步提高其对单层细胞薄膜的吸附效果。更优选地，该pvdf膜为星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的pvdf膜。由此，其对单层细胞薄膜的吸附效果更佳。
[0113]
另外，根据本发明的实施例，参考图2和3，pvdf膜300包括一个或者多个空心区域。由此，膜表面具有一定的空隙，吸附单层细胞薄膜的操作更为方便。在本发明的一些实施例中，该pvdf膜呈圆环状(如图2所示)。
[0114]
进一步地，根据本发明的实施例，上述制备细胞薄膜的方法还可以进一步包括：将多个单层细胞薄膜进行叠加，以便获得复合细胞薄膜。具体的，以将2个单层细胞薄膜进行
叠加为例，可以先利用2个pvdf膜分别收集2个单层细胞薄膜，然后将2个pvdf膜以细胞薄膜面相对的方向贴合，以便获得叠加的2个单层细胞薄膜。
[0115]
根据本发明的实施例，制备得到的复合细胞薄膜可包括2～3层细胞薄膜。
[0116]
为便于理解，下面对上述星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的pvdf膜进行详细描述。
[0117]
星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物(star-shaped pdmaea)具有如式i所示的结构
[0118][0119]
式i中，r为n为15～105的正整数。该星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物的聚合度在100～400之间，分子量在10,000～60,000道尔顿之间。发明人发现，星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物中的长烷基链具有疏水性，与pvdf具有良好的相容性；而丙烯酸二甲氨基乙酯链段具有较高的亲水性，星形结构也有助于星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物更牢固地固定在基质膜上，在改善亲水性的同时也增加了改性剂与pvdf膜结合的稳定性。由此，星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的pvdf膜具有更高的亲水性、渗透性以及抗污性，在多次、长时间使用后仍具有较高的恢复性能。
[0120]
根据本发明的一个具体的实施方案，星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物的制备方法以及星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的pvdf膜的制备可参考专利cn 114797512a。
[0121]
根据本发明的一个具体的实施方案，本发明提供一种复合细胞薄膜。根据本发明的实施例，该复合细胞薄膜包括：层叠的多个单层细胞薄膜，其中，所述单层细胞薄膜的细胞经过无钙镁缓冲液处理。具体的，该单层细胞薄膜由具有底部表面自由能不超过90mj/m2的培养皿中培养，并进一步经无钙镁缓冲液处理获得。由此，本发明的复合细胞薄膜制备方法简便高效，且治疗效果更佳。
[0122]
根据本发明的实施例，上述复合细胞薄膜包括2～3层细胞薄膜。
[0123]
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
[0124]
实施例1培养皿的制备方法
[0125]
培养皿的制备方法如下：
[0126]
(1)将80重量份聚苯乙烯颗粒、20重量份甲基丙烯酸丁酯、10重量份聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物，按比例加入反应釜中，搅拌均匀，加热至150-160℃，反应10～12小时，降温至室温(降温速率不大于1.0℃/min)，得到混合料n1；
[0127]
(2)在混合料n1中加入5重量份增塑剂环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、2重量份抗老化剂β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯，并以500rpm
±
20％速度捏合10min，得到混合料n2；
[0128]
(3)将热熔塑化的混合料n2投入到已预热至220℃的注塑成型机中(注塑压力为80mpa(
±
10％))，在螺杆的作用下积压成热熔融状态熔体，并将熔体注射至培养皿成型磨具中，保压2～4s，冷却开模即得培养皿。
[0129]
实施例2培养皿的结构和特性
[0130]
通过实施例1中方法制备获得培养皿如图4所示，培养皿包括培养皿本体1和防菌盖2，培养皿本体1由培养皿底板3和培养皿侧壁组成，防菌盖2可以扣于培养皿本体1上，并在二者之间保留有一定的间隙以便与外部进行气体交换。
[0131]
培养皿本体1以及防菌盖2为圆柱体，培养皿本体1的直径为35mm，实际培养面积约为8.8cm2，高度为13mm。培养皿本体1与防菌盖2由聚苯乙烯材料制成，保证了细胞培养皿的高透光性，以便观察体外培养时的细胞形态。培养皿本体1的底部表面的自由能不大于90mj/m2。参考图5，将该培养皿以辐照灭菌法进行充分灭菌后，用于体外细胞培养制备细胞薄膜。本实施例以间充质干细胞为例，取p5以内的间充质干细胞，以含有10％胎牛血清，1％盘尼西林/链霉素，1％谷氨酰胺，1％非必须氨基酸的dmem培养基在37℃，5％二氧化碳的环境下培养。待细胞培养至融合度达90％以上时，用胰蛋白酶将细胞消化后，以10,000个细胞/培养皿的密度接种于培养皿上，并以相同培养基以及条件继续培养细胞、待细胞生长增殖至融合度达95％以上时，移除培养基并以pbs清洗细胞薄膜，并加入dpbs使其完全覆盖细胞薄膜后，于室温下放置，待细胞薄膜自行脱落。将培养基替换为dpbs后的15min，细胞薄膜完全脱离细胞培养皿，并以完整单层薄膜的形式漂浮于dpbs溶液中。以生理盐水对细胞薄膜进行数次清洗后，该细胞薄膜可用于进一步的研究或者应用。
[0132]
实施例3
[0133]
分别利用市售的苯乙烯材料的培养皿和实施例1中本发明方法制备的培养皿，采用实施例2中相同的体外细胞培养方法制备细胞薄膜，并比较细胞薄膜剥离培养皿底部后的完整性。具体如图6所示，其中a图为市售的苯乙烯材料的培养皿培养间充质干细胞，细胞贴壁生长，b图为采用实施例2中方法进行剥离，细胞薄膜碎裂；而本发明提供的培养皿培养间充质干细胞，细胞贴培养皿底部生长状态良好(图6中c)，能够自然剥离、细胞薄膜结构完整(图6中d)。
[0134]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0135]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

技术特征：
1.一种培养皿，其特征在于，所述培养皿的材料包括：(1)75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；(2)10-40重量份的聚合物；(3)1-5重量份的增塑剂；(4)1-5重量份的抗老化剂，其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，组成所述高聚物或嵌段共聚物的单体选自以下中的至少之一：乙烯基咪唑、乙烯基吡咯烷酮、氨基苯乙烯、甲基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、n-异丙基丙烯酰胺、4-乙烯基苄氯、氰甲基苯乙烯、1-甲基氯化吡啶、乙烯己内酰胺、丙烯酸、n,n-二甲基氨基乙酯、丙烯酸氯乙酯、丙烯酸氰乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、丙烯、苯乙烯、氯乙烯、2-乙烯吡啶、丙烯腈、己内酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、4-乙烯吡啶、二乙烯基苯、苯甲酸乙烯酯、甲基丙烯酸苯甲酯、环己基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丙酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酸烯丙酯、甲基丙烯酸异氰基乙酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、乙二醇甲酯甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、1,2,4-三乙基环己烷、糠醇甲酯、甲基丙烯酸四氢糠基酯、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸丙炔基酯、1,4-丁二醇乙烯醚、丙烯酸异冰片酯、乙二醇二丙烯酸酯、丙烯酸丙炔酯、2,4,6,8-四甲基-2,4,6,8-四乙烯基环四硅氧烷、六乙烯基二硅氧烷、2,4,6-三乙烯基-2,4,6-三甲基环三硅氧烷、三乙烯基三甲基环三硅氮烷、二甲基苯基乙烯基硅烷、(全氟辛基)乙基甲基丙烯酸酯、全氟癸基丙烯酸酯、七氟丁基甲基丙烯酸酯、1,1,1,3,3,3-六氟异丙基异丁烯酸酯、2,2,3,3,4,4-六氟-1,5-五基硅丙烯酸酯、2-(全氟己基)乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸三氟乙酯、五氟苯基甲基丙烯酸酯、1h,1h,7h-十二氟庚基丙烯酸酯、1h,1h,2h,2h-全氟癸基丙烯酸酯、二乙二醇二乙烯基醚、1,9-癸二烯、2-甲基丙烯酸酐、1,2,4-三乙烯基环己烷、乙酰乙酸烯丙酯、马来酸酐、4-乙烯基苯胺、9-乙烯基咔唑、丙烯酸二甲胺基乙酯、丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯、2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯、2-(叔丁基氨基)甲基丙烯酸乙酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、乙烯基-n-甲基氯化吡啶、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺。2.根据权利要求1所述的培养皿，其特征在于，所述聚合物包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物；任选地，所述甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比为100：(15～30)。3.根据权利要求1所述的培养皿，其特征在于，所述增塑剂选自邻苯二甲酸二异辛酯、新戊二醇二苯甲酸酯、环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、环己烷1,2-二甲酸二异壬酯、乙酰柠檬酸三丁酯中的至少之一；任选地，所述抗老化剂选自四[β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸]季戊四醇酯、β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯、硫代二丙酸双月桂酯(dltp)、硫代二丙酸二硬脂醇酯中的至少之一。4.根据权利要求1所述的培养皿，其特征在于，所述培养皿的表面自由能不超过90mj/m2；任选地，所述培养皿的表面自由能不超过60mj/m2。
5.一种培养皿的制备方法，其特征在于，所述培养皿由以下原料压制而成：(1)75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；(2)10-40重量份的聚合物；(3)1-5重量份的增塑剂；(4)1-5重量份的抗老化剂，其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物，组成所述高聚物或嵌段共聚物的单体选自以下中的至少之一：乙烯基咪唑、乙烯基吡咯烷酮、氨基苯乙烯、甲基丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、n-异丙基丙烯酰胺、4-乙烯基苄氯、氰甲基苯乙烯、1-甲基氯化吡啶、乙烯己内酰胺、丙烯酸、n,n-二甲基氨基乙酯、丙烯酸氯乙酯、丙烯酸氰乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、丙烯、苯乙烯、氯乙烯、2-乙烯吡啶、丙烯腈、己内酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、4-乙烯吡啶、二乙烯基苯、苯甲酸乙烯酯、甲基丙烯酸苯甲酯、环己基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸异丙酯、丙烯酰胺、甲基丙烯酸烯丙酯、甲基丙烯酸异氰基乙酯、二甲基丙烯酸乙二醇酯、乙二醇甲酯甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸羟乙酯、1,2,4-三乙基环己烷、糠醇甲酯、甲基丙烯酸四氢糠基酯、甲基丙烯酸己酯、甲基丙烯酸羟乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、甲基丙烯酸丙炔基酯、1,4-丁二醇乙烯醚、丙烯酸异冰片酯、乙二醇二丙烯酸酯、丙烯酸丙炔酯、2,4,6,8-四甲基-2,4,6,8-四乙烯基环四硅氧烷、六乙烯基二硅氧烷、2,4,6-三乙烯基-2,4,6-三甲基环三硅氧烷、三乙烯基三甲基环三硅氮烷、二甲基苯基乙烯基硅烷、(全氟辛基)乙基甲基丙烯酸酯、全氟癸基丙烯酸酯、七氟丁基甲基丙烯酸酯、1,1,1,3,3,3-六氟异丙基异丁烯酸酯、2,2,3,3,4,4-六氟-1,5-五基硅丙烯酸酯、2-(全氟己基)乙基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸三氟乙酯、五氟苯基甲基丙烯酸酯、1h,1h,7h-十二氟庚基丙烯酸酯、1h,1h,2h,2h-全氟癸基丙烯酸酯、二乙二醇二乙烯基醚、1,9-癸二烯、2-甲基丙烯酸酐、1,2,4-三乙烯基环己烷、乙酰乙酸烯丙酯、马来酸酐、4-乙烯基苯胺、9-乙烯基咔唑、丙烯酸二甲胺基乙酯、丙烯酸n,n-二乙基氨基乙酯、2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯、3-(二甲氨基)丙烯酸丙酯、2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯、2-(叔丁基氨基)甲基丙烯酸乙酯、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺、甲基丙烯酸、丙烯酰胺、乙烯基-n-甲基氯化吡啶、n,n-二甲基乙烯基苯甲胺。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述聚合物包括甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物；任选地，所述甲基丙烯酸丁酯聚合物和聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物的重量比为100：(15～30)；任选地，所述增塑剂选自邻苯二甲酸二异辛酯、新戊二醇二苯甲酸酯、环己烷-1,2-二甲酸二异辛酯、环己烷1,2-二甲酸二异壬酯、乙酰柠檬酸三丁酯中的至少之一；任选地，所述抗老化剂选自四[β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸]季戊四醇酯、β-(3,5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸十八酯、硫代二丙酸双月桂酯、硫代二丙酸二硬脂醇酯中的至少之一。7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述压制过程包括：(a)将所述聚苯乙烯颗粒和聚合物混合，150-160℃加热10-12h，获得第一混合料m1；(b)向所述第一混合料m1中加入所述增塑剂、抗老化剂，进行捏合，获得第二混合料m2；(c)对所述第二混合料m2进行注塑成型，以便获得所述培养皿。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述压制过程进一步包括：在进行步骤(b)之前，对所述第一混合料m1进行降温处理，将所述第一混合料m1降温至20-30℃；任选地，所述降温速率不大于1.0℃/min；任选地，步骤(b)中，进行捏合时的速度为400-600rpm，时间为5-15min。9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(c)中，所述注塑成型的过程包括：(a)将所述第二混合料m2投入注塑成型机中，挤压成热熔融状态熔体，其中，所述注塑成型机料筒温度为200-250℃；(b)将所述热熔融状态熔体注入成型磨具中，保压2-4s，获得所述培养皿。10.权利要求1-4中任一项所述的培养皿或权利要求5-9中任一项所述的制备方法制备获得的培养皿在制备细胞薄膜中的用途。

技术总结
本发明涉及实验耗材技术领域，具体涉及一种低表面自由能培养皿及其制备方法。本发明公开了一种低表面自由能培养皿及其制备方法，所述培养皿的材料包括：75-80重量份的聚苯乙烯颗粒；10-40重量份的聚合物；1-5重量份的增塑剂；1-5重量份的抗老化剂，其中，所述聚合物包括高聚物和嵌段共聚物。本发明提供的培养皿，透光率高，耐刮擦，兼具耐老化性能，适合干细胞研究大范围推广。本发明提供的培养皿的制备方法，简化了工艺流程，直接采用挤出工艺，相比真空镀膜流程减少了可吸入有毒有害物质的排放。空镀膜流程减少了可吸入有毒有害物质的排放。空镀膜流程减少了可吸入有毒有害物质的排放。


技术研发人员：孙佳
受保护的技术使用者：深圳市碳源生物科技有限公司
技术研发日：2023.04.11
技术公布日：2023/8/24