一种以临时保护的氨基酸作为氨组分合成酰胺和/或多肽的方法

1.本发明涉及有机合成化学技术领域，特别涉及一种以临时保护的氨基酸作为氨组分合成酰胺和/或多肽的方法。


背景技术：

2.多肽和蛋白质是由若干天然α-氨基酸通过酰胺键(肽键)有序连接而形成的具有重要功能活性的分子，其中酰胺键的构建则是多肽和蛋白质合成过程中最基本的化学反应。构建酰胺键的方法主要是通过活化试剂或缩合剂将羧酸转化为酰氯、酸酐、活化酯、酰基叠氮等活泼中间体，然后与另一分子胺进行反应形成酰胺键。但是在合成肽键时，由于氨基酸同时存在氨基和羧基，两种氨基酸缩合将会生成各种任意顺序的混合物，因此必须将不需要反应的氨基或羧基用适当的基团暂时保护起来，然后再进行连接反应，以保证合成的定向进行。常用的氨基酸n端保护基团有芴甲氧羰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基等，c端保护基有甲酯、乙酯、叔丁酯、苄酯等，引入这些保护基需要额外的试剂，另外脱去这些保护基时还需要用到大大过量的强酸、强碱、钯催化剂等化学试剂。氨基酸保护基的使用不仅直接造成了多肽合成的步骤经济性和原子经济性极其低下，提高了多肽的合成成本，对环境也造成了严重的污染。
3.2016年有学者设计开发出新型炔酰胺类缩合剂用于酰胺键和肽键的合成。这种新型缩合剂容易制备、稳定性好、分子量小、反应条件温和、使用过程中无需任何添加剂，更重要的是α-手性酸在缩合过程中不发生消旋，大大提高了产物的纯度和收率。但是，该缩合剂在多肽合成过程中仍然以羧基保护的氨基酸作为氨组分进行反应，反应完成后得到的仍然是保护的多肽，继续延伸肽链仍然需要进行脱保护处理，致使多肽的合成步骤冗长，耗时、费力，并且成本较高。


技术实现要素：

4.本发明旨在至少解决现有多肽合成技术中由于氨基酸保护基的使用导致步骤繁杂、效率低下的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供一种以临时保护的氨基酸作为氨组分合成酰胺和/或多肽的方法。本发明中使用硅烷化试剂将氨基、羧基均未保护的氨基酸或肽段的羧基先临时保护起来，再与羧酸的α-酰氧基烯酰胺类衍生物形成酰胺键或肽键后，临时保护的羧基在酸处理步骤中即可现场脱保护得到目标羧酸产物，进而继续下一个肽键的构筑循环。另一方面，本发明使用的炔酰胺缩合剂能够有效避免消旋，即现有相关技术采用不保护氨基酸合成多肽时所采用的缩合剂或缩合方法只能合成二肽，合成三肽或含三个以上氨基酸的多肽时会诱发严重的消旋。本发明方法避免了合成多肽过程中的消旋问题，而且这种“临时保护”的策略使保护-缩合-脱保护”三步反应在一锅内进行，将原来的三步合并为一个步，避免了预制备保护氨基酸以及脱去这些保护基时所需要用到大大过量化学试剂、时间、人力和能耗，提高了多肽合成的步骤经济性和原子经济性，大幅降低了多肽
合成的成本。
5.为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
6.本发明的第一个方面，提出了一种酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0007][0008]
将式i化合物、式ii化合物在溶剂i反应后，再加入式iii化合物、硅烷化试剂、溶剂ii进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物；
[0009]
其中，r1选自烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、c端羧基缺失的氨基酸残体、c端羧基缺失的氨基酸类衍生物残体或多肽片段；r2选自氢、氘、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、硅基或烷基硅基；r3选自烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基；r4选自烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、氨基酸残基或者多肽片段；ewg选自硝基、氰基、磺酰基、芳磺酰基、烷酰基、膦酰基；其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、硅基、烷基硅基任选为非取代，或被一个或多个r
11
取代；每个r
11
独立选自卤素、羟基、羰基、c1～c6烷基。
[0010]
在本发明的一些实施方式中，所述芳基选自苯基、邻甲苯基、间甲苯基、对甲苯基、2,4-二甲苯基、对枯烯基、均三甲苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基、9-蒽基、1-菲基、9-菲基、1-苊基、2-薁基、1-芘基、2-三亚苯基、邻联苯基、间联苯基、对联苯基、三联苯基。
[0011]
在本发明的一些实施方式中，所述杂芳基选自具有1个或2个氮原子、氧原子或硫原子，并且优选为5～10元的杂环基，例如，可以举出三唑基、3-噁二唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-吡嗪基、2-噁唑基、3-异噁唑基、2-噻唑基、3-异噻唑基、2-咪唑基、3-吡唑基、2-喹啉基、3-喹啉基、4-喹啉基、5-喹啉基、6-喹啉基、7-喹啉基、8-喹啉基、1-异喹啉基、2-喹噁啉基、2-苯并呋喃基、2-苯并噻吩基、n-吲哚基、n-咔唑基。
[0012]
在本发明的一些实施方式中，r1中，所述c端羧基缺失的氨基酸残体或c端羧基缺失的氨基酸类衍生物残体是指氨基酸或氨基酸衍生物中c端羧基缺失后剩余的部分；优选地，所述c端羧基缺失的氨基酸残体包括c端羧基缺失的α-氨基酸残体、c端羧基缺失的β-氨基酸残体或c端羧基缺失的γ-氨基酸残体的至少一种；优选地，所述c端羧基缺失的氨基酸类衍生物残体包括c端氨基保护的c端羧基缺失的氨基酸残体，如c端氨基被n-烷氧羰基和/或n-酰基保护的c端羧基缺失的氨基酸残体；优选地，一般以来表示α-氨基酸，则r1中，所述c端羧基缺失的氨基酸残体为可为r或s构型；具体地，所述c端羧基缺失的氨基酸残体选自
[0013]
优选地，所述c端羧基缺失的氨基酸类衍生物残体选自上述c端羧基缺失的氨基酸残体中c端氨基被n-烷氧羰基和/或n-酰基保护的c端羧基缺失的氨基酸残体。
[0014]
在本发明的一些实施方式中，当溶剂ii与溶剂i不同时，所述酰胺和/或多肽的制备方法还包括将反应后的所述溶剂i除去后再进行所述亲核取代反应。
[0015]
在本发明的一些实施方式中，所述酸化的酸化剂包括有机酸和/或无机酸。
[0016]
术语“酸化剂”可以意指通过溶于水而降低溶液的ph的任何材料。在一些实施方式中，酸化剂可以是可通过溶于水中以将溶液的ph降低至5或更低(如ph≤4、ph≤3、ph≤2、ph≤1)的无机酸和/或有机酸。
[0017]
无机酸可以包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、磺酸、氨基磺酸、硫酸、硝酸或其任何组合。然而，实施方式不限于此。有机酸可以包括柠檬酸、乳酸、酒石酸、富马酸、三氟乙酸、邻苯二甲酸、乙酸、草酸、丙二酸、己二酸、植酸、琥珀酸、戊二酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、抗坏血酸、苯甲酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、癸酸、己酸、辛酸、月桂酸、花生酸、芥酸、亚油酸、亚麻酸、油酸、棕榈酸、肉豆蔻酸、乙二磺酸(edisilic acid)、硬脂酸或其任何组合。然而，实施方式不限于此。
[0018]
本发明的第二个方面，提出了另一种酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0019][0020]
将式v化合物、式iii化合物、硅烷化试剂溶于溶剂ii中进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物；
[0021]
其中，r1、r2、r3、r4的定义如前所述。
[0022]
本发明中，由于式iii化合物(同时存在氨基与羧基的化合物)在中性条件下式以式iii-a化合物(分子内的两性离子)的形式存在的，在一般条件下iii-a化合物中的氨基不具备亲核性，难以进行缩合反应，采用硅烷化试剂能够将式iii-a化合物临时保护其羧基暂时形成式iii-b化合物(硅酯化合物)，同时使其氨基游离出来，进而能够与式v化合物发生亲核取代反应形成酰胺键/肽键，制得酰胺或多肽式iv化合物，同时形成副产物式vi化合物。其反应机理如下：
[0023][0024]
在本发明的一些实施方式中，所述硅烷化试剂包括n-三甲基硅基乙酰胺、n-甲基-n-三甲基硅基乙酰胺、n-三甲基硅基吡咯酮、n-(特丁基二甲基硅)-n-甲基三氟乙酰胺、n,o-双(叔丁基二甲硅基)乙酰胺、n,o-双三甲硅基乙酰胺、n,o-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺、n-甲基-n-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺、六甲基二硅脲、三甲基硅咪唑、二甲基二氯硅烷、三甲基氯硅烷以及叔丁基二甲基氯硅烷中的至少一种。
[0025]
在本发明的一些实施方式中，所述硅烷化试剂与式iii化合物的摩尔比为(0.5～20)：1；优选为(1～15)：1；进一步优选为(2～10)：1。
[0026]
在本发明的一些实施方式中，式iii化合物为同时具有氨基与羧基的有机化合物；优选地，式iii化合物包括氨基酸类化合物、氨基与羧基均游离的多肽类化合物或其他同时具有氨基与羧基的化合物的任意一种；进一步优选地，式iii化合物包括α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸或氨基和羧基均不保护的多肽类化合物的任意一种；更进一步优选地，式ii化合物包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、色氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、瓜氨酸或上述氨基酸的衍生化合物的任意一种。应当理解，式iii化合物所包括的二十一种氨基酸均可为其l-构型的天然α-氨基酸和/或其对应的d-构型α-氨基酸。
[0027]
在本发明的一些实施方式中，所述溶剂ii包括乙腈、乙醚、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二氧六环、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n-甲基吡咯烷酮、甲苯、间二甲苯、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷或氯仿的至少一种。
[0028]
在本发明的一些实施方式中，所述亲核取代反应的温度为-20℃～150℃；优选为0℃～90℃，进一步优选为5℃～50℃。
[0029]
在本发明的一些实施方式中，所述酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：将式iii化合物与硅烷化试剂溶于溶剂ii中，再添加式v化合物进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物。
[0030]
在本发明的一些实施方式中，所述酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：将式iii化合物与硅烷化试剂搅拌5min～24h溶于溶剂ii中，再添加式v化合物进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物。
[0031]
在本发明的一些实施方式中，所述酰胺和/或多肽的制备方法还包括在所述亲核取代反应后对产物进行提纯的步骤，所述提纯包括萃取、重结晶或柱层析的至少一种。
[0032]
在本发明的一些实施方式中，式v化合物的制备方法包括以下步骤：
[0033][0034]
式i化合物与式ii化合物溶于溶剂i，搅拌反应制得式v化合物；
[0035]
其中，r1、r2、r3、ewg的定义如前所述。
[0036]
在本发明的一些实施方式中，所述溶剂i包括二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、乙醚、甲苯、乙腈、甲醇或乙醇的至少一种。
[0037]
在本发明的一些实施方式中，式i化合物为羧酸类化合物；优选地，式i化合物包括脂肪酸、芳香酸、杂环酸、炔酸、烯酸、n-酰基氨基酸、n-烷氧羰基氨基酸或多肽羧酸的至少一种；进一步优选地，式i化合物包括n-苄氧羰基氨基酸、n-叔丁氧羰基氨基酸、n-芴甲氧羰基氨基酸、n-乙酰基氨基酸或多肽羧酸的至少一种。
[0038]
在本发明的一些实施方式中，式i化合物与式ii化合物的摩尔比为1：(1～5)；优选为1：(1.1～4)；进一步优选为1：(1.2～3)。
[0039]
在本发明的一些实施方式中，所述搅拌反应的温度为-20℃～90℃；优选为0℃～50℃。
[0040]
在本发明的一些实施方式中，所述酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0041][0042]
s1：式i化合物与式ii化合物溶于溶剂i，搅拌反应制得式v化合物；
[0043]
s2：将式v化合物、式iii化合物、硅烷化试剂溶于溶剂ii中进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物；
[0044]
其中，r1、r2、r3、r4、ewg的定义如前所述。
[0045]
根据本发明的第三个方面，提出了一种所述酰胺和/或多肽的制备方法在制备多肽中的应用。
[0046]
本发明的有益效果是：
[0047]
本发明酰胺和/或多肽的制备方法中，以炔酰胺类化合物作为缩合试剂，使用低成本的不保护氨基酸作为原料，使用硅烷化试剂临时保护氨基酸进行缩合反应，使“保护-缩合-脱保护”在一锅内进行，将三步反应合并为一个步骤。在实现了肽键的构筑后，简单酸处理即可得到目标多肽羧酸，直接用于下一个氨基酸的缩合。同时，基于炔酰胺类缩合剂的特点，该方法还能够完全避免消旋副产物的生成，保证了产物的收率以及纯度。该方法节省了传统方法中“氨基酸上保护基”、“产物脱保护”所用到大量的试剂和溶剂，减少大量化学废物的产生，同时节省了时间、人力资源和能量消耗，大幅降低了多肽合成的成本，提升了多肽合成的原子经济性与步骤经济性，高效地实现了节能减排，极大地提高多肽合成的效率，具有广阔的工业应用前景。
具体实施方式
[0048]
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。实施例和对比例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有技术方法得到。除非特别说明，试验或测试方法均为本领域的常规方法。
[0049]
实施例1
[0050]
本实施例制备了一种式1多肽，具体过程为：
[0051][0052]
取boc-val-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n-三甲基硅基乙酰胺(1mmol)与3ml n,n-二甲基甲酰胺的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝2，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率94％。
[0053]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0054]1h nmr(400mhz,dmso)δ8.04(d,j＝7.8hz,1h),7.30
–
7.16(m,5h),6.54(d,j＝9.2hz,1h),4.47(dd,j＝13.3,8.3hz,1h),3.78(t,j＝8.0hz,1h),3.06(dd,j＝13.9,5.0hz,1h),2.90(dd,j＝13.9,9.1hz,1h),1.97
–
1.77(m,1h),1.38(s,9h),0.83
–
0.71(m,6h).
[0055]
13
c nmr(100mhz,dmso)δ＝172.8,171.3,155.2,137.4,129.1,128.1,126.4,78.0,59.7,53.2,36.8,30.5,28.2,19.1,18.1.
[0056]
hrms(esi)m/z calcd.for c
19h29
n2o5[m+h]
+
:365.2071,found:365.2077
[0057]
实施例2
[0058]
本实施例制备了一种式2多肽，具体过程为：
[0059][0060]
取cbz-pro-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-甲磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯乙烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(1mmol)、3ml二氯乙烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝2，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率93％。
[0061]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0062]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.38
–
8.03(m,1h),7.42
–
7.11(m,10h),5.12
–
5.02(m,
1h),5.01
–
4.82(m,1h),4.53
–
4.40(m,1h),4.23(d,j＝8.1hz,1h),3.40
–
3.29(m,2h),3.12
–
3.00(m,1h),2.99
–
2.84(m,2h),2.13
–
1.96(m,1h),1.80
–
1.59(m,3h).
[0063]
13
c nmr(100mhz,dmso)δ＝172.9,172.8,172.1,171.8,154.2,153.8,137.6,137.5,137.1,129.2,129.0,128.4,128.2,128.1,128.1,127.8,127.5,127.0,126.4,126.3,65.9,65.7,59.7,59.3,53.5,53.1,47.1,46.5,36.6,31.0,29.7,23.7,22.8.
[0064]
hrms(esi)m/z calcd.for c
22h25
n2o5[m+h]
+
:397.1758,found:397.1764
[0065]
实施例3
[0066]
本实施例制备了一种式3多肽，具体过程为：
[0067][0068]
取cbz-phe-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.5mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(1mmol)和3ml n,n-二甲基甲酰胺的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝2，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率95％。
[0069]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0070]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.28(d,j＝7.7hz,1h),7.46(d,j＝8.7hz,1h),7.37
–
7.17(m,15h),4.95(s,2h),4.52(dd,j＝13.1,7.7hz,1h),4.37
–
4.28(m,1h),3.12(dd,j＝13.8,5.0hz,1h),3.03
–
2.90(m,2h),2.78
–
2.67(m,1h).
[0071]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.2,172.0,156.2,138.5,137.8,137.5,129.7,128.7,128.7,128.5,128.1,127.9,126.9,126.7,65.7,56.5,53.9,37.9,37.2.
[0072]
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26h27
n2o6[m+h]
+
:447.1914,found:447.1919
[0073]
实施例4
[0074]
本实施例制备了一种式4多肽，具体过程为：
[0075][0076]
取cbz-thr-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、六甲基二硅脲(1mmol)和3ml乙腈的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝2，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率95％。
[0077]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0078]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.06(d,j＝7.7hz,1h),7.41
–
7.17(m,10h),6.95(d,j＝8.7hz,1h),5.05(s,2h),4.48(q,j＝7.3hz,1h),3.96(dd,j＝8.2,5.2hz,1h),3.88
–
3.76(m,1h),3.05(dd,j＝13.7,5.0hz,1h),2.93(dd,j＝13.6,8.1hz,1h),1.01(d,j＝6.1hz,3h).
[0079]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.6,170.0,156.0,137.3,137.0,129.2,128.3,128.1,127.8,127.7,126.4,66.8,65.5,60.5,53.3,36.9,19.6.
[0080]
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21h24
n2nao6[m+na]
+
:423.1527,found:423.1524
[0081]
实施例5
[0082]
本实施例制备了一种式5多肽，具体过程为：
[0083][0084]
取boc-met-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.5mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、三甲基硅基咪唑(1mmol)、3ml乙腈的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率97％。
[0085]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0086]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.97(d,j＝7.8hz,1h),7.34
–
7.16(m,5h),6.91(d,j＝8.2hz,1h),4.46(q,j＝8.0hz,1h),4.01(q,j＝7.9hz,1h),3.07(dd,j＝13.8,4.9hz,1h),2.92(dd,j＝13.9,8.7hz,1h),2.45
–
2.29(m,2h),2.01(s,3h),1.85
–
1.64(m,2h),1.37(s,9h).
[0087]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.8,171.6,155.2,137.3,129.2,128.1,126.4,78.2,53.6,53.2,36.7,31.9,29.6,28.2,14.6.
[0088]
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19h28
n2nao5s[m+na]
+
:419.1611,found:419.1609
[0089]
实施例6
[0090]
本实施例制备了一种式6多肽，具体过程为：
[0091][0092]
取boc-glu(o
t
bu)-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-甲磺酰基乙炔胺(0.5mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n,o-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(1mmol)、
3ml二甲亚砜的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率94％。
[0093]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0094]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.95(d,j＝7.9hz,1h),7.36
–
7.10(m,5h),6.82(d,j＝8.3hz,1h),4.52
–
4.40(m,1h),4.01
–
3.85(m,1h),3.07(dd,j＝13.8,4.8hz,1h),2.92(dd,j＝13.9,8.8hz,1h),2.16(t,j＝7.6hz,2h),1.85
–
1.72(m,1h),1.70
–
1.58(m,1h),1.40(s,9h),1.37(s,9h).
[0095]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.7,171.7,171.5,155.1,137.3,129.2,128.1,126.4,79.5,78.2,53.5,53.2,36.7,31.2,28.1,27.8,27.4.
[0096]
hrms(esi)m/z calcd.for c
23h34
n2o7[m+h]
+
:451.2439,found:451.2445
[0097]
实施例7
[0098]
本实施例制备了一种式7多肽，具体过程为：
[0099][0100]
取cbz-ala-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml三氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-thr-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(2mmol)、3ml三氯甲烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝2，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用乙酸乙酯和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率92％。
[0101]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0102]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ7.67(d,j＝8.6hz,1h),7.53(d,j＝7.7hz,1h),7.39
–
7.26(m,5h),5.03(s,2h),4.25
–
4.14(m,3h),1.24(d,j＝7.1hz,3h),1.06(d,j＝6.1hz,3h).
[0103]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.0,172.2,155.8,137.1,128.5,127.9,127.8,66.5,65.5,57.5,50.2,20.4,18.2.
[0104]
hrms(esi)m/z calcd.for c
15h20
n2o6[m+na]
+
:347.1214,found:347.1221
[0105]
实施例8
[0106]
本实施例制备了一种式8多肽，具体过程为：
[0107]
[0108]
取cbz-ala-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-gln-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(2mmol)、3ml n,n-二甲基乙酰胺的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝1，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率95％。
[0109]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0110]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.13(d,j＝7.6hz,1h),7.59
–
7.12(m,7h),6.79(s,1h),5.09
–
4.95(m,2h),4.22
–
4.05(m,2h),2.22
–
2.07(m,2h),2.01
–
1.91(m,1h),1.86
–
1.73(m,1h),1.22(d,j＝7.1hz,3h).
[0111]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.6,173.3,172.7,155.7,137.1,128.4,127.8,127.8,65.4,51.6,49.9,31.4,27.0,18.2.
[0112]
hrms(esi)m/z calcd.for c
16h21
n3nao6[m+na]
+
:374.1323,found:374.1321
[0113]
实施例9
[0114]
本实施例制备了一种式9多肽，具体过程为：
[0115][0116]
取cbz-ala-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-trp-oh(1mmol)、六甲基二硅脲(1mmol)、3ml n-甲基吡咯烷酮的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝1，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离，得到纯的产物，淡黄色固体，dr》99:1，产率95％。
[0117]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0118]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.89(s,1h),8.12
–
8.03(m,1h),7.57(t,j＝6.0hz,1h),7.44(dd,j＝8.1,4.1hz,1h),7.34(d,j＝15.7hz,8h),7.20(s,1h),7.07(s,1h),6.98(s,1h),5.13
–
4.94(m,3h),4.54(s,1h),4.15(q,j＝5.8,4.9hz,2h),3.22(d,j＝14.3hz,2h),3.17
–
3.05(m,2h),1.26
–
1.19(m,7h).
[0119]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.3,172.6,155.7,137.1,136.1,128.4,127.8,127.8,127.4,123.8,121.0,118.4,118.3,111.4,109.7,65.5,53.0,50.0,27.1,18.3.
[0120]
hrms(esi)m/z calcd.for c
22h23
n3nao5[m+na]
+
:432.1530,found:432.1530
[0121]
实施例10
[0122]
本实施例制备了一种式10多肽，具体过程为：
[0123][0124]
取fmoc-ala-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于3ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n-甲基-n-三甲基硅基乙酰胺(1mmol)、3ml二氯甲烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝1，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，柱层析分离，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率93％。
[0125]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0126]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.02(d,j＝7.5hz,1h),7.89(d,j＝7.5hz,2h),7.74(d,j＝6.8hz,1h),7.48(d,j＝7.7hz,1h),7.42(t,j＝7.4hz,2h),7.33(t,j＝7.3hz,2h),7.27
–
7.16(m,4h),4.50
–
4.39(m,1h),4.26(d,j＝6.1hz,1h),4.24
–
4.18(m,1h),4.12
–
4.06(m,1h),3.07(dd,j＝13.7,4.8hz,1h),2.93(dd,j＝13.7,8.4hz,1h),1.20(d,j＝7.1hz,3h).
[0127]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.8,172.4,155.6,143.9,143.8,140.7,137.4,129.2,128.1,127.6,127.1,126.3,125.3,120.1,65.7,53.5,49.9,46.6,36.7,18.2.
[0128]
hrms(esi)m/z calcd.for c
22h23
n3nao5[m+na]
+
:432.1530,found:432.1530
[0129]
实施例11
[0130]
本实施例制备了一种式11多肽，具体过程为：
[0131][0132]
取boc-phe-ala-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.5mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-ser(o
t
bu)-oh(1mmol)、n-三甲基硅基吡咯酮(1mmol)、5ml 1,2-二氯乙烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用二氯甲烷萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率94％。
[0133]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0134]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.04(d,j＝7.4hz,1h),7.94(d,j＝7.9hz,1h),7.32
–
7.15(m,5h),6.94(d,j＝8.5hz,1h),4.49
–
4.41(m,1h),4.40
–
4.30(m,1h),4.22
–
4.11(m,1h),3.69
–
3.60(m,1h),3.54
–
3.48(m,1h),3.05
–
2.94(m,1h),2.78
–
2.65(m,1h),1.29(s,9h),1.24(d,j＝6.8hz,3h),1.11(s,9h)
[0135]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.1,171.4,171.3,155.2,138.2,129.2,127.9,126.1,78.0,72.8,61.5,55.6,52.8,47.8,37.4,28.1,27.1,18.4.
[0136]
hrms(esi)m/z calcd.for c
24h38
n3o7[m+h]
+
:480.2704,found:480.2710
[0137]
实施例12
[0138]
本实施例制备了一种式12多肽，具体过程为：
[0139][0140]
取cbz-ala-leu-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.5mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(1mmol)、5ml二氯甲烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用2m的盐酸酸化至ph＝1，用二氯甲烷萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率91％。
[0141]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0142]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.04(d,j＝7.6hz,1h),7.86(d,j＝8.3hz,1h),7.43(d,j＝7.6hz,1h),7.37
–
7.17(m,10h),5.02(s,2h),4.47
–
4.41(m,1h),4.36
–
4.30(m,1h),4.10
–
4.04(m,1h),3.07(dd,j＝13.9,5.2hz,1h),2.93(dd,j＝13.8,8.5hz,1h),1.67
–
1.50(m,1h),1.43(d,j＝6.7hz,1h),1.17(d,j＝7.0hz,3h),0.90
–
0.76(m,6h).
[0143]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ1172.8,172.2,171.9,155.7,137.5,137.1,129.2,128.4,128.2,127.8,127.8,126.4,65.4,53.4,51.0,50.1,41.1,36.7,24.1,23.1,21.8,18.2.
[0144]
hrms(esi)m/z calcd.forc
26h34
n3o6[m+h]
+
:484.2442,found:284.2448
[0145]
实施例13
[0146]
本实施例制备了一种式13多肽，具体过程为：
[0147][0148]
取cbz-ala-ala-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-gln(trt)-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(2mmol)、5ml二氯甲烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相1次，用水洗涤2次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，淡黄色固体，dr》99:1，产率95％。
[0149]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0150]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(s,1h),8.05(d,j＝8.2hz,1h),7.93(t,j＝6.5hz,1h),7.44(t,j＝5.9hz,1h),7.38
–
7.14(m,22h),5.06
–
4.97(m,2h),4.37
–
4.29(m,1h),4.22
–
4.15(m,1h),4.11
–
4.05(m,1h),2.41
–
2.29(m,2h),1.99
–
1.88(m,1h),1.79
–
1.69(m,1h),1.26
–
1.16(m,6h).
[0151]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.3,172.1,172.0,171.2,155.7,144.9,137.0,128.5,128.3,127.8,127.7,127.4,126.3,69.3,65.4,51.6,50.0,47.9,32.6,27.3,18.3,18.1.
[0152]
hrms(esi)m/z calcd.for c
38h40
n4nao7[m+na]
+
:687.2789,found:687.2874
[0153]
实施例14
[0154]
本实施例制备了一种式14多肽，具体过程为：
[0155][0156]
取boc-ala-phe-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-tyr(otbu)-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(2mmol)、5ml二氯甲烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相1次，用水洗涤2次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用乙醚和石油醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，淡黄色固体，dr》99:1，产率91％。
[0157]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0158]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35
–
8.22(m,1h),7.80
–
7.66(m,1h),7.27
–
7.11(m,7h),6.94
–
6.78(m,3h),4.64
–
4.52(m,1h),4.48
–
4.37(m,1h),3.99
–
3.82(m,1h),3.07
–
2.96(m,2h),2.93
–
2.84(m,1h),2.82
–
2.69(m,1h),1.36(s,9h),1.26(s,9h),1.06(d,j＝6.6hz,3h).
[0159]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.64,172.15,170.76,154.86,153.59,137.44,131.81,129.53,129.28,127.86,126.12,123.34,78.09,77.58,53.41,53.20,49.81,37.67,36.04,28.53,28.14,18.14.
[0160]
hrms(esi)m/z calcd.for c
30h41
n3nao7[m+na]
+
:578.2837,found:578.2840.
[0161]
实施例15
[0162]
本实施例制备了一种式15多肽，具体过程为：
[0163][0164]
取cbz-ala-phe-met-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-glu(otbu)-oh(1mmol)、六甲基二硅脲(1mmol)、3ml二氯甲烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率92％。
[0165]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0166]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.13(d,j＝7.5hz,1h),8.07(d,j＝7.4hz,1h),7.93(d,j＝7.3hz,1h),7.43(d,j＝7.1hz,1h),7.40
–
7.28(m,5h),7.25
–
7.15(m,5h),5.09
–
4.93(m,2h),4.60
–
4.49(m,1h),4.44
–
4.36(m,1h),4.28
–
4.20(m,1h),4.05
–
3.98(m,1h),3.09
–
3.00(m,1h),2.90
–
2.80(m,1h),2.49
–
2.40(m,2h),2.33
–
2.23(m,2h),2.03(s,3h),2.02
–
1.89(m,2h),1.88
–
1.74(m,2h),1.39(s,9h),1.14(d,j＝7.0hz,3h)
[0167]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.0,172.4,171.5,170.9,170.7,155.7,137.6,136.9,129.3,128.3,127.9,127.8,127.7,126.2,79.8,65.5,53.6,51.7,51.1,50.3,37.2,32.2,31.2,29.3,27.7,26.3,18.0,14.6.
[0168]
hrms(esi)m/z calcd.for c
34h47
n4o9s[m+h]
+
:687.3058,found:687.3065
[0169]
实施例16
[0170]
本实施例制备了一种式16多肽，具体过程为：
[0171][0172]
取cbz-phe-gly-ala-glu(tbu)-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-phe-oh(1mmol)、n-甲基-n-三甲基硅基乙酰胺(2mmol)、5ml乙腈的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率90％。
[0173]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0174]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.43
–
8.25(m,1h),8.12
–
7.89(m,3h),7.57(d,j＝
7.1hz,1h),7.37
–
7.13(m,15h),5.04
–
4.87(m,2h),4.52
–
4.42(m,1h),4.40
–
4.24(m,3h),3.84
–
3.71(m,2h),3.12
–
3.01(m,2h),2.99
–
2.89(m,1h),2.84
–
2.72(m,1h),2.32
–
2.13(m,2h),1.96
–
1.83(m,1h),1.81
–
1.66(m,1h),1.39(s,9h),1.20(d,j＝6.2hz,3h)
[0175]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.7,171.9,171.9,171.8,170.9,168.4,156.0,138.1,137.3,137.0,129.2,129.1,128.3,128.2,128.0,127.7,127.4,126.4,126.2,79.6,65.3,56.3,53.4,51.6,48.1,42.1,37.3,36.6,31.2,27.8,27.5,18.2.
[0176]
hrms(esi)m/z calcd.for c
40h50
n5o
10
[m+h]
+
:760.3552,found:760.3557
[0177]
实施例17
[0178]
本实施例制备了一种式17多肽，具体过程为：
[0179][0180]
取boc-β-ala-trp-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-met-oh(1mmol)、n,o-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(1mmol)、3ml乙腈的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率94％。
[0181]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0182]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.80(s,1h),8.28(d,j＝7.7hz,1h),8.06(d,j＝8.1hz,1h),7.62(d,j＝7.8hz,1h),7.33(d,j＝8.0hz,1h),7.15(s,1h),7.06(t,j＝7.4hz,1h),6.98(t,j＝7.4hz,1h),6.65(t,j＝5.2hz,1h),4.66
–
4.53(m,1h),4.41
–
4.29(m,1h),3.18
–
3.01(m,3h),2.96
–
2.85(m,1h),2.52
–
2.41(m,2h),2.29
–
2.14(m,2h),2.04(s,3h),2.02
–
1.95(m,1h),1.95
–
1.84(m,1h),1.36(s,9h).
[0183]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.2,171.9,170.3,155.5,136.1,127.4,123.6,120.9,118.5,118.2,111.3,110.2,77.6,53.2,51.0,36.7,35.7,30.8,29.7,28.3,27.7,14.7.
[0184]
hrms(esi)m/z calcd.for c
24h35
n4o6s[m+h]
+
:507.2272,found:507.2278
[0185]
实施例18
[0186]
本实施例制备了一种式18多肽，具体过程为：
[0187][0188]
取cbz-tyr(tbu)-gly-gly-phe-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，减压蒸馏除去二氯甲烷，转移至预先搅拌混合了h-leu-oh(1mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(1mmol)、5ml n,n-二甲基甲酰胺的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率90％。
[0189]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0190]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.35
–
8.20(m,2h),8.09
–
7.93(m,2h),7.60
–
7.46(m,1h),7.38
–
7.14(m,12h),6.85(d,j＝7.9hz,2h),5.04
–
4.84(m,2h),4.70
–
4.54(m,1h),4.36
–
4.20(m,2h),3.82
–
3.70(m,3h),3.69
–
3.62(m,1h),3.12
–
2.97(m,2h),2.84
–
2.65(m,2h),1.74
–
1.49(m,3h),1.26(s,9h),0.97
–
0.80(m,6h).
[0191]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ173.9,171.9,171.1,168.9,168.3,155.9,153.5,137.8,137.0,132.7,129.7,129.3,128.3,128.0,127.7,127.5,126.2,123.3,77.6,65.3,56.3,53.6,50.4,42.1,41.8,40.0,37.7,36.8,28.6,24.3,22.8,21.4
[0192]
hrms(esi)m/z calcd.for c
40h52
n5o9[m+h]
+
:746.3760,found:746.3766
[0193]
实施例19
[0194]
本实施例制备了一种式19多肽，具体过程为：
[0195][0196]
取cbz-tyr(tbu)-gly-gly-oh(0.5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(0.55mmol)溶于5ml二氯乙烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-phe-met-oh(1mmol)、n-三甲基硅基吡咯酮(1mmol)、5ml二氯乙烷的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水15ml，用10％的柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，白色固体，dr》99:1，产率93％。
[0197]
产物核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0198]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.40
–
8.20(m,2h),8.16
–
8.07(m,1h),8.07
–
7.97(m,1h),7.54(d,j＝8.1hz,1h),7.35
–
7.15(m,12h),6.86(d,j＝7.6hz,2h),4.94(s,2h),4.64
–
4.52(m,1h),4.38
–
4.24(m,2h),3.79
–
3.63(m,4h),3.11
–
2.97(m,2h),2.86
–
2.69(m,2h),
2.51
–
2.41(m,2h),2.08
–
1.96(m,4h),1.94
–
1.86(m,1h),1.26(s,9h).
[0199]
13
c nmr(100mhz,dmso)δ173.3,172.0,171.1,169.0,168.5,156.0,153.5,137.8,137.0,132.8,129.7,129.3,128.3,128.1,127.7,127.5,126.3,123.3,77.6,65.4,56.3,53.8,51.3,42.2,41.9,37.6,36.8,30.9,29.7,28.6,14.6
[0200]
hrms(esi)m/z calcd.for c
39h50
n5o9s[m+h]
+
:764.3324,found:764.3330
[0201]
实施例20
[0202]
本实施例制备了卡非佐米，具体过程为：
[0203][0204]
取氯乙酸(5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(5.5mmol)溶于5ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了l-高苯丙氨酸(10mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(10mmol)、二氯甲烷(5ml)的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水20ml，用1m盐酸酸化至ph＝2，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到纯的产物，重复上述步骤，依次与l-苯丙氨酸、l-亮氨酸和(2s)-2-氨基-4-甲基-1-[(2r)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐进行缩合，最后得到的中间体在反应瓶中与吗啉(10mmol)，碘化钾(ki，5mmol)以及四氢呋喃(thf，30ml)，在氮气保护下室温搅拌反应，并通过tlc和hplc监测反应。反应完成后，浓缩反应液，加入水和乙酸乙酯，用乙酸乙酯萃取三次并合并有机相，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩反应液，用乙酸乙酯和石油醚重结晶即得卡非佐米，白色固体，总收率65％。以下是产物的结构式及核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0205]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.25(d,j＝6.8hz,1h),8.09(d,j＝7.7hz,1h),7.97(d,j＝7.7hz,1h),7.90(d,j＝7.6hz,1h),7.33
–
7.23(m,2h),7.22
–
7.02(m,8h),4.61
–
4.49(m,1h),4.42
–
4.33(m,2h),4.32
–
4.23(m,1h),3.71
–
3.50(m,4h),3.41
–
3.32(m,1h),3.12(d,j＝4.2hz,1h),3.05
–
2.85(m,4h),2.80
–
2.70(m,1h),2.57
–
2.51(m,1h),2.47
–
2.38(m,4h),1.93
–
1.76(m,2h),1.69
–
1.59(m,1h),1.55
–
1.47(m,1h),1.43
–
1.28(m,7h),0.89
–
0.83(m,6h),0.83
–
0.76(m,6h).
[0206]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ208.2,171.5,171.0,170.9,168.8,141.4,137.3,129.1,128.2,128.2,127.9,126.1,125.8,66.0,61.3,58.7,53.2,53.0,51.8,51.5,51.2,49.2,40.7,38.5,37.4,34.3,31.4,24.5,24.1,23.2,23.0,21.6,21.0,16.3.
[0207]
hrms(esi)m/z calcd.for c
40h58
n5o7[m+h]
+
:720.4331,found:720.4330.
[0208]
实施例21
[0209]
本实施例制备了奥曲肽，具体过程为：
[0210][0211]
取boc-d-phe-oh(5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(5.5mmol)溶于20ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-cys(trt)-oh(10mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(10mmol)、二氯甲烷(40ml)的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水50ml，用10％柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到boc-d-phe-cys(trt)-oh。重复上述步骤，依次与h-d-trp-oh，h-lys(boc)-oh，h-thr(tbu)-oh，h-cys(trt)-oh，l-苏氨醇进行缩合，得到保护的奥曲肽直链boc-d-phe-cys(trt)-phe-d-trp-lys(boc)-thr(tbu)-cys(trt)-thr-ol，将该中间体加入预先混合了三氟乙酸(42.5ml)、1,2-乙二硫醇(2.5ml)、三异丙基硅烷(2.5ml)与水(2.5ml)的反应瓶中，搅拌并通过tlc和hplc监测反应，反应完成后用乙醚重结晶得到奥曲肽直链。最后将奥曲肽直链溶于水中，浓度稀释至10-4
m，用1mmol氨水调节ph＝8，在室温下通入空气氧化48h，冻干后得到奥曲肽，白色固体，总收率56％。
[0212]
以下是产物的结构式及核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0213]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.88(s,1h),9.04(d,j＝8.2hz,1h),8.70(d,j＝4.5hz,1h),8.52(d,j＝7.5hz,1h),8.40(d,j＝7.3hz,1h),8.34(d,j＝8.4hz,1h),8.28
–
8.09(m,3h),7.98
–
7.85(m,3h),7.71(d,j＝8.5hz,1h),7.45(d,j＝7.8hz,1h),7.39
–
7.26(m,8h),7.21
–
7.18(m,2h),7.14
–
7.05(m,4h),7.02
–
6.97(m,2h),5.09(d,j＝4.0hz,1h),5.03
–
4.97(m,1h),4.90
–
4.84(m,1h),4.83
–
4.72(m,1h),4.64(s,1h),4.42(dd,j＝8.4,
5.4hz,1h),4.24(dd,j＝14.5,7.5hz,2h),4.12
–
4.06(m,1h),4.00
–
3.92(m,2h),3.66
–
3.61(m,1h),3.18(dd,j＝13.8,5.2hz,1h),3.02
–
2.95(m,3h),2.92
–
2.72(m,7h),2.65
–
2.57(m,2h),1.73
–
1.64(m,1h),1.42
–
1.31(m,3h),1.11(d,j＝6.2hz,3h),1.05(d,j＝6.4hz,3h),0.89
–
0.77(m,2h).
[0214]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ172.53,171.87,170.65,170.39,169.59,168.47,168.10,136.81,136.14,134.76,129.66,129.04,128.54,128.09,127.23,127.05,126.44,123.69,120.90,118.26,118.18,111.34,109.03,66.63,64.23,60.20,58.58,55.90,55.22,53.97,53.36,53.23,52.55,52.01,44.17,42.39,38.78,38.52,37.42,30.26,26.44,26.38,22.03,19.92,19.50.
[0215]
hrms(esi)m/z calcd.for c
49h67n10o10
s2[m+h]
+
:1019.4478,found:1019.4484.
[0216]
实施例22
[0217]
本实施例制备了保护的赖氨加压素直链，具体过程为：
[0218][0219]
取boc-cys(trt)-oh(5mmol)、n-甲基-n-对甲苯磺酰基乙炔胺(5.5mmol)溶于20ml二氯甲烷中，在室温下搅拌反应，tlc监测反应过程。待原料酸消耗完全，转移至预先搅拌混合了h-tyr(otbu)-oh(10mmol)、n,o-双三甲硅基乙酰胺(10mmol)、二氯甲烷(40ml)的体系中进行反应，tlc监测反应过程。反应结束后，加入水50ml，用10％柠檬酸酸化至ph＝3，用乙酸乙酯萃取水相2次，合并有机相，用水洗涤1次，饱和食盐水洗涤有机相1次，无水硫酸钠干燥有机相，减压蒸馏除去溶剂，用二氯甲烷和乙醚重结晶，过滤收集固体，得到boc-cys(trt)-tyr(otbu)-oh。重复上述步骤，依次与h-phe-oh，h-gln(trt)-oh，h-asn(trt)-oh,h-cys(trt)-oh,h-pro-oh,h-lys(boc)-oh,h-gly-nh2进行缩合，得到保护的赖氨加压素直链boc-cys(trt)-tyr(otbu)-phe-gln(trt)-asn(trt)-cys(trt)-pro-lys(boc)-gly-nh2，白色固体，总收率55％。
[0220]
以下是产物的结构式及核磁共振实验数据、质谱实验数据：
[0221]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.67
–
8.60(m,1h),8.46
–
7.94(m,8h),7.65
–
7.54(m,2h),7.42
–
7.31(m,24h),7.24
–
6.96(m,43h),6.81
–
6.75(m,1h),6.73
–
6.46(m,3h),4.76
–
4.64(m,2h),4.53
–
4.43(m,2h),4.30
–
4.20(m,2h),4.15
–
4.07(m,1h),3.87
–
3.75(m,1h),3.69
–
3.59(m,2h),3.52
–
3.46(m,2h),3.17
–
3.05(m,2h),2.98
–
2.80(m,5h),2.77
–
2.65(m,3h),2.62
–
2.53(m,2h),2.46
–
2.33(m,4h),2.29
–
2.09(m,2h),2.04
–
1.89(m,2h),1.84
–
1.73(m,2h),1.66
–
1.57(m,2h),1.44
–
1.37(m,18h),1.34
–
1.28(m,4h),1.20(s,9h).
[0222]
13
c nmr(100mhz,dmso-d6)δ171.81,171.77,171.57,171.34,171.15,170.85,170.76,170.66,169.27,168.60,168.18,155.57,154.83,153.24,144.92,144.71,144.31,144.26,137.67,132.03,129.86,129.84,129.19,129.11,129.07,128.58,128.55,128.07,127.99,127.46,127.44,126.70,126.31,126.14,123.24,78.53,77.39,69.42,69.26,66.45,65.85,59.31,53.74,53.14,52.93,52.01,50.90,49.79,46.42,41.98,37.43,37.33,33.93,32.72,32.46,31.30,31.24,29.30,29.24,29.17,28.56,28.32,28.15,24.25,22.69,22.63.
[0223]
hrms(esi)m/z calcd.for c
136h148n13o16
s2[m+h]
+
:2283.0603,found:2283.0610.
[0224]
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将式i化合物、式ii化合物在溶剂i反应后，再加入式iii化合物、硅烷化试剂、溶剂ii进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物；其中，r1选自烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、c端羧基缺失的氨基酸残体、c端羧基缺失的氨基酸类衍生物残体或多肽片段；r2选自氢、氘、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、硅基或烷基硅基；r3选自烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基；r4选自烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、氨基酸残基或者多肽片段；ewg选自硝基、氰基、磺酰基、芳磺酰基、烷酰基、膦酰基；其中，所述烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、硅基、烷基硅基任选为非取代，或被一个或多个r
11
取代；每个r
11
独立选自卤素、羟基、羰基、c1～c6烷基。2.根据权利要求1所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：当溶剂ii与溶剂i不同时，所述酰胺和/或多肽的制备方法还包括将反应后的所述溶剂i除去后再进行所述亲核取代反应。3.一种酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将式v化合物、式iii化合物、硅烷化试剂溶于溶剂ii中进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物；其中，r1、r2、r3、r4的定义如权利要求1所述。4.根据权利要求1或3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：所述硅烷化试剂包括n-三甲基硅基乙酰胺、n-甲基-n-三甲基硅基乙酰胺、n-三甲基硅基吡咯酮、n-(特丁基二甲基硅)-n-甲基三氟乙酰胺、n,o-双(叔丁基二甲硅基)乙酰胺、n,o-双三甲硅基乙酰胺、n,o-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺、n-甲基-n-(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺、六甲基二硅脲、三甲基硅咪唑、二甲基二氯硅烷、三甲基氯硅烷以及叔丁基二甲基氯硅烷中的至少一种。5.根据权利要求1或3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：所述硅烷化试剂与式iii化合物的摩尔比为(0.5～20)：1。6.根据权利要求1或3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：所述溶剂i包括二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、乙醚、甲苯、乙腈、甲醇或乙醇的至少一种；优选地，所述溶剂ii包括乙腈、乙醚、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、二氧六环、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、n-甲基吡咯烷酮、甲苯、间二甲苯、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷或氯仿的至少一种。7.根据权利要求1或3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：所述亲核取代反
应的温度为-20℃～150℃。8.根据权利要求1或3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：式iii化合物包括氨基酸类化合物、氨基与羧基均游离的多肽类化合物或其他同时具有氨基与羧基的化合物的任意一种。9.根据权利要求3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：所述酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：将式iii化合物与硅烷化试剂溶于溶剂ii中，再添加式v化合物进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物。10.根据权利要求3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：式v化合物的制备方法包括以下步骤：式i化合物与式ii化合物溶于溶剂i，搅拌反应制得式v化合物；其中，r1、r2、r3、ewg的定义如权利要求1所述。11.根据权利要求1或3所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：所述酰胺和/或多肽的制备方法，包括以下步骤：s1：式i化合物与式ii化合物溶于溶剂i，搅拌反应制得式v化合物；s2：将式v化合物、式iii化合物、硅烷化试剂溶于溶剂ii中进行亲核取代反应，酸化后制得式iv化合物；其中，r1、r2、r3、r4、ewg的定义如权利要求1所述。12.根据权利要求11所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：式i化合物包括脂肪酸、芳香酸、杂环酸、炔酸、烯酸、氨基酸、多肽羧酸及上述化合物的衍生物的至少一种。13.根据权利要求11所述的酰胺和/或多肽的制备方法，其特征在于：式i化合物与式iii化合物的摩尔比为1：(0.1～5)。14.一种如权利要求1～13任一项所述的酰胺和/或多肽的制备方法在制备酰胺和/或多肽中的应用。

技术总结
本发明公开了一种以临时保护的氨基酸作为氨组分合成酰胺和/或多肽的方法，本发明以炔酰胺类化合物作为缩合试剂，使用低成本的不保护氨基酸作为原料，使用硅烷化试剂临时保护氨基酸进行缩合反应，使“保护-缩合-脱保护”在一锅内进行，将三步反应合并为一个步骤。在实现了肽键的构筑后，简单酸处理即可得到目标多肽羧酸，直接用于下一个氨基酸的缩合。同时，基于炔酰胺类缩合剂的特点，该方法还能够完全避免消旋副产物的生成，保证了产物的收率以及纯度。该方法节省了传统方法中“氨基酸上保护基”、“产物脱保护”所用到大量的试剂和溶剂，减少大量化学废物的产生，大幅降低了多肽合成的成本，提升了多肽合成的原子经济性与步骤经济性。性。


技术研发人员：赵军锋 刘涛 彭泽军
受保护的技术使用者：广州医科大学
技术研发日：2023.05.05
技术公布日：2023/9/5