银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法与流程

1.本发明涉及中药的提取，尤其涉及一种银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法。


背景技术：

2.舒血宁注射液具有扩张血管、改善微循环的作用，主要用于缺血性心脑血管疾病、冠心病、心绞痛、脑栓塞、脑血管痉挛等。舒血宁注射液是银杏叶经提取制成的灭菌水溶液。而银杏叶中含有大量的银杏酸、鞣质、蛋白质等物质，直接提取制得的银杏叶提取物中仍含有大量银杏酸、鞣质等，并不能直接用于舒血宁注射液的生产，需要去除银杏酸、鞣质等物质后才能用于舒血宁注射液的生产。且当银杏叶提取物中银杏酸、鞣质等物质去除不干净时，还会引发致敏反应，导致制成的舒血宁注射液的应用风险提高。
3.为保证舒血宁注射液的用药安全，目前针对银杏叶提取物均采用柱层析的方式去除银杏酸、鞣质等易致敏物质；同时为保留黄酮类化合物、内酯类化合物等有效成分，还需对吸附柱中的填充材料进行限定。但在实际生产过程中，采用柱层析的方式处理银杏叶提取物中的银杏酸、鞣质等物质，具有溶剂消耗量大、耗时长、工艺复杂等缺点。


技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提供一种银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法。
5.为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：
6.一种银杏叶提取物的提取方法，是取银杏叶加入提取剂，加热提取，过滤，共提取3次，每次的提取剂均为浓度为45～50wt％的乙醇水溶液和适量碳酸钙，合并滤液，浓缩，所得清膏中加入乙醇至乙醇的浓度为85～90wt％，冷藏醇沉，过滤，滤液中边搅拌边滴加氢氧化钙水溶液至无沉淀产生，粗滤，超滤，浓缩至干，即得所述银杏叶提取物。
7.进一步的，每次提取过程中，所述银杏叶与提取剂中的碳酸钙的重量比为1:0.15～0.2。
8.进一步的，每次提取过程中，所述银杏叶与提取剂中乙醇水溶液的重量体积比为1g：8～9ml。
9.进一步的，每次提取的温度为65～70℃、时间为3～4h。
10.进一步的，浓缩后，所述清膏的相对密度(70℃)为1.15～1.20。
11.进一步的，所述冷藏醇沉的时间≥24h。
12.一种舒血宁注射液的制备方法，所述制备方法是利用上述提取方法提取的银杏叶提取物制成所述舒血宁注射液。
13.进一步的，所述制备方法是取磷酸氢二钠和磷酸二氢钠制成缓冲液，加入抗氧化剂和1,2-丙二醇溶解，再加入所述银杏叶提取物溶解，补充水至全量，滤过，超滤，即得所述舒血宁注射液。
14.进一步的，缓冲液的ph值为7.5～8.0。
15.进一步的，所述银杏叶提取物、缓冲液、抗氧化剂及1,2-丙二醇四者之间的重量体积比为14g：200ml：1.8～2.2g：400～450ml；
16.所述补充水至全量是补充水至4000ml。
17.本发明的银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法的有益效果为：
18.本发明通过选择特定浓度的乙醇水溶液浓度，并在提取过程中加入碳酸钙，使体系呈弱碱性，促进芦丁、黄酮醇苷、萜内酯等黄酮类化合物和内酯类化合物溶解至乙醇水溶液中；且提取过程中，体系中的钙离子与溶解的鞣质接触后，会反应形成沉淀物，从而抑制鞣质溶解在体系中，同时由于碳酸根离子与氢离子结合后在加热条件下不稳定，会转化成二氧化碳气体自体系中溢出，使得钙离子增加，从而促使鞣质与钙离子的形成沉淀的反应正向进行；
19.另外，在提取过程中，碳酸钙还能够与银杏酸发生络合形成不溶物，从而抑制银杏酸在体系中的溶解；
20.由于鞣质与钙离子形成的不溶物及银杏酸与碳酸钙络合形成的沉淀物无法溶于本发明的提取剂体系中，可通过过滤随药渣一并过滤除去，从而有效降低了滤液中鞣质和银杏酸的含量，保证了后续制备的银杏叶提取物的用药安全；
21.进一步的，本发明通过进一步醇沉除去大分子蛋白质，并且进一步加入氢氧化钙除去残存的鞣质，能够有效除去制得的银杏叶提取物中的致敏成分；
22.本发明通过选择特定的提取剂体系，有效提取有效成分，并抑制致敏成分溶解，整个过程无需柱层析，即可有效除去鞣质和银杏酸等致敏成分，整个提取过程操作简单、方便，减少了溶剂用量，降低了生产成本；
23.本发明的工艺路线简单，操作方便，适合工业化生产。
具体实施方式
24.下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
25.实施例1一种银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法
26.本实施例为一种银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法，具体包括以下步骤：
27.一、银杏叶提取物的提取方法
28.取1kg银杏叶加入8l浓度为45wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，边搅拌加热至65℃提取3h，过滤，得滤液和滤渣，滤渣再次加入8l浓度为45wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，边搅拌加热至65℃提取3h，过滤，得滤液和滤渣，滤渣最后一次加入8l浓度为45wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，边搅拌加热至65℃提取3h，过滤，得滤液，合并滤液，浓缩得到70℃时相对密度为1.15的清膏，加入乙醇至乙醇浓度为90wt％，于4
±
2℃冷藏醇沉24h，过滤，在所得滤液中边搅拌边滴加浓度为10wt％的氢氧化钙水溶液至无沉淀产生，停止滴加，粗滤除去不溶物，再经超滤，浓缩至干，粉碎，即得银杏叶提取物，标记为y1，其中，银杏
叶提取物y1中银杏酸含量为0.122μg/g，且未检出鞣质和蛋白质。
29.其中，银杏叶提取物y1中的银杏酸含量依据《舒血宁注射液质量控制研究》(林珊，2014年6月，福建中医药大学硕士学位论文)中记载的方法进行检测。
30.鞣质检测：取样品20mg(三组平行)，精密称定，加5ml注射用水使其溶解，取1ml，加入5ml新鲜配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液，静置10min，观察发生的现象。鞣质检查结果，三组样品均未出现浑浊或沉淀。
31.蛋白质检测：取样品20mg(三组平行)，精密称定，加5ml注射用水使其溶解，取1ml，加1～3滴新配制的30％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，放置5min，观察发生的现象(观察是否出现浑浊或沉淀)。蛋白质检查结果，三组样品均未出现浑浊或沉淀。
32.因，银杏酸提取物y1中银杏酸含量极低，且不含鞣质和蛋白质，后续利用其制备的舒血宁注射液则不再进一步考察银杏酸、鞣质及蛋白质。
33.二、舒血宁注射液的制备方法
34.取12.47g十二水合磷酸氢二钠和0.81g二水合磷酸二氢钠配制200ml的ph值为7.6的缓冲液，加入亚硫酸钠2g和1,2-丙二醇400ml搅拌溶解，再加入14g银杏叶提取物y1搅拌至完全溶解，补充水至全量4000ml，过滤，所得滤液经超滤，即得舒血宁注射液，标记为n1。其中，舒血宁注射液n1中含有的银杏内酯总和为467.37μg/ml、总黄酮为1467.32μg/ml、总黄酮醇苷为921.57μg/ml。
35.其中，银杏内酯总和是指银杏内酯a、银杏内酯b及银杏内酯c的总和。
36.舒血宁注射液n1中银杏内酯含量总和总黄酮含量总和均依据《舒血宁注射液质量控制研究》(林珊，2014年6月，福建中医药大学硕士学位论文)中记载的方法进行检测。
37.舒血宁注射液n1中总黄酮醇苷含量依据《高效液相色谱法测定舒血宁注射液总黄酮醇苷的含量》(田吉等，天津中医药.2017,34(06))。
38.实施例2～5银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法
39.实施例2～5分别为一种银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法，它们的步骤与实施例1基本相同，不同之处仅在于工艺参数的不同，具体详见表1：
40.表1实施例2～5中各项工艺参数一览表
[0041][0042]
实施例2～5其它部分的工艺步骤和参数与实施例1相同。
[0043]
实验例1对比试验
[0044]
对比例1～7为实施例1中银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法的对比试验，所用银杏叶与实施例1为同一批银杏叶药材，工艺和原料用量也基本相同，不同之处仅在于：
[0045]
对比例1中每次提取采用的提取剂为8l浓度为20wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，所得银杏叶提取物，标记为dy1，利用银杏叶提取物dy1制得舒血宁注射液，标记为dn1。其中，银杏叶提取物dy1中银杏酸含量为0.127μg/g，未检出鞣质和蛋白质；舒血宁注射液dn1中含有银杏内酯总和为216.54μg/ml、总黄酮为705.91μg/ml、总黄酮醇苷为432.76μg/ml。可见，虽然降低提取剂中的乙醇浓度不会影响银杏酸、鞣质和蛋白质的去除，但会导致舒血宁注射液dn1中有效成分含量降低，从而影响舒血宁注射液dn1的疗效。
[0046]
对比例2中每次提取采用的提取剂为8l浓度为80wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，所得银杏叶提取物，标记为dy2，利用银杏叶提取物dy2制得舒血宁注射液，标记为dn2。其中，银杏叶提取物dy2中银杏酸含量为12.246μg/g(银杏叶提取物dy2中银杏酸含量超标)，未检出鞣质和蛋白质；舒血宁注射液dn2中含有银杏内酯类化合物总和为465.93μg/ml、总黄酮为1468.36μg/ml、总黄酮醇苷为920.76μg/ml、银杏酸为0.043μg/ml。可见，提高提取剂中的乙醇浓度会影响银杏酸的去除，但不影响鞣质和蛋白质的去除，同时也不会影响舒血宁注射液dn2中有效成分含量。而银杏叶提取物dy2中银杏酸含量的增高，会导致利用其制备的舒血宁注射液dn2中银杏酸含量增高，进而导致利用舒血宁注射液dn2的应用风险提高。
[0047]
其中，舒血宁注射液dn2中银杏酸含量依据《舒血宁注射液质量控制研究》(林珊，2014年6月，福建中医药大学硕士学位论文)中记载的方法进行检测。
[0048]
对比例3中每次提取采用的提取剂为8l浓度为45wt％的乙醇水溶液和0.05kg碳酸钙，制备过程中氢氧化钙用量明显增加(约2倍左右)，所得银杏叶提取物，标记为dy3，利用银杏叶提取物dy3制得舒血宁注射液，标记为dn3。其中，银杏叶提取物dy3中银杏酸含量为25.581μg/g(银杏叶提取物dy3中银杏酸含量超标)，检出鞣质(有微量沉淀)，未检出蛋白质；舒血宁注射液dn3中含有的银杏内酯为464.62μg/ml、总黄酮为1465.94μg/ml、总黄酮醇苷为922.05μg/ml、银杏酸为0.090μg/ml，检出鞣质(出现轻微浑浊)。可见，后续利用氢氧化钙去除鞣质过程中氢氧化钙用量明显增多，且直接利用氢氧化钙去含有鞣质较多的体系中的鞣质，无法很好的去除干净，说明减少提取剂中碳酸钙的用量，能够明显影响银杏酸和鞣质的去除，同时利用银杏叶提取物dy3制备的舒血宁注射液dn3中的银杏酸含量超标，且检出鞣质，极大的提高了舒血宁注射液dn3的应用风险。
[0049]
其中，舒血宁注射液dn3中的鞣质检测方法：取样品1ml(三组平行)，精密称定，加入5ml新鲜配制的含1％鸡蛋清的生理氯化钠溶液，静置10min，观察发生的现象，观察发现出现浑浊。
[0050]
对比例4中每次提取采用的提取剂为6l浓度为45wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，所得银杏叶提取物，标记为dy4，利用银杏叶提取物dy4制得舒血宁注射液，标记为dn4。其中，银杏叶提取物dy4中银杏酸含量为0.119μg/g，且未检出鞣质和蛋白质；舒血宁注射液dn4中含有的银杏内酯为316.82μg/ml、总黄酮为313.97μg/ml、总黄酮醇苷为574.35μg/ml。可见，虽然降低提取剂中的乙醇水溶液的用量不会影响银杏酸、鞣质和蛋白质的去除，但会导致舒血宁注射液dn4中有效成分含量降低，从而影响舒血宁注射液dn4的疗效。
[0051]
对比例5中每次提取采用的提取剂为15l浓度为45wt％的乙醇水溶液和0.15kg碳酸钙，所得银杏叶提取物，标记为dy5，利用银杏叶提取物dy5制得舒血宁注射液，标记为dn5。其中，银杏叶提取物dy5中银杏酸含量为16.732μg/g(银杏叶提取物dy5中银杏酸含量超标)，检出鞣质(出现浑浊)，未检出蛋白质；舒血宁注射液dn5中含有的银杏内酯为465.92μg/ml、总黄酮为1466.89μg/ml、总黄酮醇苷为920.45μg/ml、银杏酸为0.059μg/ml，检出鞣质(出现浑浊)。可见，增加提取剂中乙醇水溶液的用量，会降低提取剂中碳酸钙的浓度，从而影响银杏酸和鞣质的去除，同时利用银杏叶提取物dy5制备的舒血宁注射液dn5中的银杏酸含量也相应提高，且能够检出鞣质，极大的提高了舒血宁注射液dn5的应用风险。
[0052]
对比例6中每次提取的温度为50℃，所得银杏叶提取物，标记为dy6，利用银杏叶提
取物dy6制得舒血宁注射液，标记为dn6。其中，银杏叶提取物dy6中银杏酸含量为1.192μg/g，检出鞣质，未检出蛋白质；舒血宁注射液dn6中含有的银杏内酯总和为315.47μg/ml、总黄酮为1464.98μg/ml、总黄酮醇苷为920.93μg/ml，检出鞣质(出现浑浊)。可见，虽然降低提取温度会影响鞣质的去除，尤其是鞣质的去除，可能是由于温度降低不利于体系中的二氧化碳溢散，不利于鞣质与钙离子反应形成沉淀的正向进行。利用银杏叶提取物dy6制备的舒血宁注射液dn6中的含量也相应提高，极大的提高了舒血宁注射液dn6的应用风险。
[0053]
对比例7中每次提取的温度为80℃，所得银杏叶提取物，标记为dy7，利用银杏叶提取物dy7制得舒血宁注射液，标记为dn7。其中，银杏叶提取物dy7中银杏酸含量为8.942μg/g，未检出鞣质和蛋白质；舒血宁注射液dn7中含有的银杏内酯为466.63μg/ml、总黄酮为1462.40μg/ml、总黄酮醇苷为919.68μg/ml，银杏酸为0.031μg/ml。可见，增加提取温度会影响银杏酸的去除，同时利用银杏叶提取物dy7制备的舒血宁注射液dn7中的银杏酸含量也相应提高，提高了舒血宁注射液dn7的应用风险。
[0054]
显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

技术特征：
1.一种银杏叶提取物的提取方法，其特征在于，所述提取方法是取银杏叶加入提取剂，加热提取，过滤，共提取3次，每次的提取剂均为浓度为45～50wt％的乙醇水溶液和适量碳酸钙，合并滤液，浓缩，所得清膏中加入乙醇至乙醇的浓度为85～90wt％，冷藏醇沉，过滤，滤液中边搅拌边滴加氢氧化钙水溶液至无沉淀产生，粗滤，超滤，浓缩至干，即得所述银杏叶提取物。2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的提取方法，其特征在于，每次提取过程中，所述银杏叶与提取剂中的碳酸钙的重量比为1:0.15～0.2。3.根据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的提取方法，其特征在于，每次提取过程中，所述银杏叶与提取剂中乙醇水溶液的重量体积比为1g：8～9ml。4.根据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的提取方法，其特征在于，每次提取的温度为65～70℃、时间为3～4h。5.根据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的提取方法，其特征在于，浓缩后，所述清膏的相对密度为1.15～1.20。6.根据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的提取方法，其特征在于，所述冷藏醇沉的时间≥24h。7.一种舒血宁注射液的制备方法，其特征在于，所述制备方法是利用权利要求1-6中任一项所述的提取方法提取的银杏叶提取物制成所述舒血宁注射液。8.根据权利要求7所述的舒血宁注射液的制备方法，其特征在于，所述制备方法是取磷酸氢二钠和磷酸二氢钠制成缓冲液，加入抗氧化剂和1,2-丙二醇溶解，再加入所述银杏叶提取物溶解，补充水至全量，滤过，超滤，即得所述舒血宁注射液。9.根据权利要求8所述的舒血宁注射液的制备方法，其特征在于，缓冲液的ph值为7.5～8.0。10.根据权利要求8或9所述的舒血宁注射液的制备方法，其特征在于，所述银杏叶提取物、缓冲液、抗氧化剂及1,2-丙二醇四者之间的重量体积比为14g：200ml：1.8～2.2g：400～450ml；所述补充水至全量是补充水至4000ml。

技术总结
本发明提供一种银杏叶提取物的提取方法及舒血宁注射液的制备方法，属于中药提取技术领域，所述提取方法是取银杏叶加入提取剂，加热提取，过滤，共提取3次，每次的提取剂均为乙醇水溶液和适量碳酸钙，合并滤液，浓缩，所得清膏中加入乙醇，冷藏醇沉，过滤，滤液中边搅拌边滴加氢氧化钙水溶液至无沉淀产生，粗滤，超滤，浓缩至干，即得所述银杏叶提取物。所述舒血宁注射液是利用所述银杏叶提取物制成。本发明通过选择特定的提取剂体系，有效提取有效成分，并抑制致敏成分溶解，整个过程无需柱层析，即可有效除去鞣质和银杏酸等致敏成分，整个提取过程操作简单、方便，减少了溶剂用量，降低了生产成本。产成本。


技术研发人员：李菲 李响明 周永妍 邹妍 郭勇 李丹
受保护的技术使用者：神威药业集团有限公司
技术研发日：2023.05.31
技术公布日：2023/9/9