布立西坦起始物料对映异构体的柱前衍生检测方法与流程

1.本发明属于分析化学领域及制药领域，具体涉及布立西坦起始物料(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对映异构体的柱前衍生检测方法。


背景技术：

2.布立西坦（brivaracetam）是由比利时优时比制药公司（ucb pharma）研制的第3代抗癫痫药物。2016年2月19日被美国食品和药物管理局（fda）批准，用于16岁及以上患者的部分性癫痫发作的辅助治疗，具有广泛的抗癫痫活性和较高的安全性。与上一代药物左乙拉西坦相比，布立西坦药有相似的化学结构和作用机制，是自2013年以来fda批准的首个治疗部分性癫痫发作的抗癫痫药物。布立西坦化学名(2s)-2-[(4r)-2-氧代-4-丙基吡咯烷-1-基)丁酰胺，结构式为：
[0003]
药物研发过程中，异构体的含量在药物质量中有着严格的限度规定，因此建立起始物料、关键中间体及原料药的手性分析方法尤为重要。


技术实现要素：

[0004]
布立西坦的手性中心来源于起始物料，而(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮是合成布立西坦的重要起始物料，是光学活性化合物，根据ich的规定，要控制布立西坦的异构体，必须首先控制起始物料的异构体。目前暂无液相色谱分析方法，而cn109828049a报道了一种（r）-呋喃酮的对映异构体（s）-呋喃酮的气相色谱检测方法，该方法采用气相色谱仪按外标法以峰面积计算（s）-呋喃酮的含量。为更好的控制布立西坦的活性成分，且考虑到(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮及其对映异构体在常温下用液相色谱条件测定更稳定，且综合评估对映异构体对照品合成难度及购买成本等原因，需对(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮用液相色谱条件建立如面积归一化法或外标法进行对映异构体质量控制。
[0005]
起始物料(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮化学结构式为：
[0006]
对映异构体(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮化学结构式为：
。
[0007]
本发明的目的在于提供一种布立西坦起始物料(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对映异构体的液相分离测定方法，该方法可以准确测定出布立西坦起始物料对映异构体的含量，为布立西坦手性杂质的控制提供了可靠的依据，有利于保证布立西坦原料药和制剂的质量。
[0008]
本发明提供了一种布立西坦起始物料(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的对映异构体(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的检测方法，该方法使用三甲基碘硅烷（tmsi）对(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮及其对映异构体(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮进行开环反应，再使用无水乙醇对三甲基硅基进行取代反应，从而改变色谱峰型提高紫外吸收，然后再使用反相高效液相色谱法，并以水-乙腈作为流动相，以手性柱作为色谱柱，对布立西坦起始物料(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮样品中的对映异构体(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮进行检测。
[0009]
在本发明的实施方案中，本发明提供了一种布立西坦起始物料(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的对映异构体(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的检测方法，该检测方法的操作步骤如下：（1）流动相配制流动相a：水流动相b：乙腈（2）制备供试品溶液：称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品，加三甲基碘硅烷和乙腈后于水浴恒温振荡器中振荡反应，再加入无水乙醇，继续用水浴恒温振荡器振荡反应，放至室温，用乙腈水溶液混合配制成供试品溶液，即得；（3）制备对照品溶液：称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品，加三甲基碘硅烷和乙腈后于水浴恒温振荡器中振荡反应，再加入无水乙醇，继续用水浴恒温振荡器振荡反应，放至室温，用乙腈水溶液混合配制成对照品溶液，即得；（4）分别取上述等量的对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件为：色谱柱为手性色谱柱；检测器为紫外检测器；洗脱方式为梯度洗脱；（5）分析色谱图，按外标法以峰面积计算或按面积归一化法计算。
[0010]
进一步地，所述梯度洗脱的程序如下：。
sm1-zz1-21110301)-s1，含量：97.7%）；乙腈（hplc）（北京迈瑞达科技有限公司，批号：0211128）；三甲基碘硅烷（ar）（上海麦克林生化科技股份有限公司，批号：c13078049）；无水乙醇（hplc）（成都市诺尔施科技有限责任公司，批号：2021122001）。
[0044]
（2）主要仪器高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；电子天平：xse105du；水浴恒温振荡器：shz-b。
[0045]
（3）检测方法参照高效液相色谱法（《中国药典》2020年版四部通则0512）测定。
实施例
[0046]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为30℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.3ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：
[0047]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品（批号dz(d01-sm1-zz1-21110301)-s1，由重庆柳江医药科技有限公司提供，下同）47.63mg，置10ml量瓶中，加乙腈（批号0211128，由北京迈瑞达科技有限公司提供，下同）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0048]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷（批号c13078049，由上海麦克林生化科技股份有限公司提供，下同）0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇（批号2021122001，由成都市诺尔施科技有限责任公司提供，下同）4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0049]
c. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品[批号d01-sm1-z033202 20301，由弈柯莱（台州）药业有限公司提供，下同]53.95mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0050]
d. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品[批号：dz(d01-sm1
‑ꢀ
z03320220301)-s1，由弈柯莱（台州）药业有限公司提供，下同]50.94mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0051]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.4ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0052]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图1～图2，系统适用性溶液结果见表1。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；
[0053]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.53大于2.0，符合标准要求。
[0054]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图，色谱图见图3～图4，对照品溶液和供试品溶液结果见表2：。
[0055]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0056]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0057]
计算结果为：0.079%。
[0058]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0059]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0060]
计算结果为：0.084%。
[0061]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0062]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为30℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.25ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：。
[0063]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品10.42mg，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0064]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0065]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品47.78mg，置
10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0066]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品48.47mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0067]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.4ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0068]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表3。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0。
[0069]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.49大于2.0，符合标准要求。
[0070]
b. 量取对照品溶液与供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液及供试品溶液结果见表4：。
[0071]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0072]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0073]
计算结果为：0.081%。
[0074]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0075]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0076]
计算结果为：0.086%。
[0077]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0078]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为30℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.35ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：。
[0079]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品10.42mg，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0080]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0081]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品47.78mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷
0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0082]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品48.47mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0083]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.4ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0084]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表5。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；
[0085]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.56大于2.0，符合标准要求。
[0086]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液和供试品溶液结果见表6：。
[0087]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0088]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0089]
计算结果为：0.078%。
[0090]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0091]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0092]
计算结果为：0.083%。
[0093]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0094]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为27℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.3ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：。
[0095]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品10.42mg，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0096]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0097]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品47.78mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇
4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0098]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品48.47mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0099]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.4ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0100]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表7。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；
[0101]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.73大于2.0，符合标准要求。
[0102]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液和供试品溶液结果见表8：。
[0103]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0104]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0105]
计算结果为：0.074%。
[0106]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0107]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0108]
计算结果为：0.078%。
[0109]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0110]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为33℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.3ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：。
[0111]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品10.42mg，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0112]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0113]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品47.78mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻
度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0114]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品48.47mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0115]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.4ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在60℃下振荡反应0.5h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0116]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表9。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；。
[0117]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.42大于2.0，符合标准要求。
[0118]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液和供试品溶液结果见表10：。
[0119]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0120]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0121]
计算结果为：0.068%。
[0122]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：
对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0123]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0124]
计算结果为：0.073%。
[0125]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0126]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为30℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.3ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：
[0127]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品10.67mg，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0128]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.35ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在57℃下振荡反应0.45h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应0.9h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0129]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品57.68mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.35ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在57℃下振荡反应0.45h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应0.9h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系
统适用性溶液。
[0130]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品59.12mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.35ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在57℃下振荡反应0.45h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应0.9h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0131]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.35ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在57℃下振荡反应0.45h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应0.9h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0132]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表11。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；。
[0133]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.54大于2.0，符合标准要求。
[0134]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液和供试品溶液结果见表12：。
[0135]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0136]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0137]
计算结果为：0.080%。
[0138]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0139]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0140]
计算结果为：0.086%。
[0141]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0142]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为30℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.3ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：。
[0143]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品10.67mg，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0144]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.45ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在63℃下振荡反应0.55h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1.1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0145]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品43.84mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.45ml，再加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在63℃下振荡反应0.55h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1.1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0146]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品46.32mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.45ml，再加入乙腈3.0ml，于水浴恒温振荡器中在63℃下振荡
反应0.55h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1.1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0147]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.45ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于水浴恒温振荡器中在63℃下振荡反应0.55h，再加入无水乙醇4ml，继续用水浴恒温振荡器振荡反应1.1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0148]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表13。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；。
[0149]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.63大于2.0，符合标准要求。
[0150]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液和供试品溶液结果见表14：。
[0151]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0152]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0153]
计算结果为：0.085%。
[0154]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0155]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0156]
计算结果为：0.087%。
[0157]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的含量基本一致。
实施例
[0158]
1、高效液相色谱法主要技术参数高效液相色谱仪：赛默飞ultimate 3000；检测器为紫外检测器；检测波长为250nm；柱温为30℃；色谱柱型号：表面有直链淀粉-三（3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯）的共价键合硅胶为填充剂[chiralpak ig-3（2.1
×
150mm，3mm）适用]；流速为0.3ml/min；进样量为20ml；流动相：以纯化水为流动相a，以乙腈为流动相b；按下表进行线性梯度洗脱，洗脱条件如下：。
[0159]
2、测定法（1）溶液配制a. (s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液：精密称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品12.27mg，置25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液。
[0160]
b. 对照品溶液：精密量取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于60℃水浴加热，并每隔5分钟手动振摇一次，反应0.5h后取出，再加入无水乙醇4ml，继续每隔5分钟手动振摇反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0161]
c. 系统适用性溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品50.45mg，置10ml量瓶中，精密加入(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品贮备液1.0ml和三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈2.0ml，于60℃水浴加热，并每隔5分钟手动振摇一次，反应0.5h后取出，再加入无水乙醇4ml，继续每隔5分钟手动振摇反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。
[0162]
d. 供试品溶液：精密称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮待测样品50.91mg，置10ml量瓶中，加入三甲基碘硅烷0.4ml，再加入乙腈3.0ml，于60℃水浴加热，并每隔5分钟手动振摇一次，反应0.5h后取出，再加入无水乙醇4ml，继续每隔5分钟手动振摇反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙
腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
[0163]
e. 空白溶液：精密量取三甲基碘硅烷0.4ml，置10ml量瓶中，加入乙腈2.0ml，于60℃水浴加热，并每隔5分钟手动振摇一次，反应0.5h后取出，再加入无水乙醇4ml，继续每隔5分钟手动振摇反应1h，取出，放至室温，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用60体积%乙腈水溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。
[0164]
（2）检测a. 量取空白溶液和系统适用性溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。系统适用性溶液结果见表15。要求(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度应大于2.0；
[0165]
结论：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮与(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮之间的分离度为3.21大于2.0，符合标准要求。
[0166]
b. 量取对照品溶液和供试品溶液各20ml注入高效液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液和供试品溶液结果见表16：。
[0167]
结果：(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按外标法以峰面积计算公式为：对映异构体含量（%）=c
对照品
×a供试品
×k供试品
/a
对照品
/m
供试品
×
100%。
[0168]c对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的浓度，mg/ml；a
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；k
供试品
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的稀释倍数，ml；a
对照品
——对照品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；m
供试品
为供试品溶液中供试品的称样量。
[0169]
计算结果为：0.105%。
[0170]
(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮含量按不加校正因子的面积归一化法计算公式为：对映异构体含量（%）=a
对映异构体
/a
总
×
100%（只积分主峰和对映异构体峰）。
[0171]a对映异构体
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积；a
总
——供试品溶液中(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积和(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的峰面积之和。
[0172]
计算结果为：0.107%。
[0173]
结论：按上述两种计算方式所得(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中(s)-4-丙基-二氢
呋喃-2-酮的含量基本一致。

技术特征：
1.一种布立西坦起始物料对映异构体的检测方法，其中，所述布立西坦起始物料为(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮；所述布立西坦起始物料对映异构体为(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮；其特征在于，制备供试品溶液和制备对照品溶液分别包括对(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮样品和(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品用三甲基碘硅烷和乙醇进行衍生化。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的检测方法包括如下步骤：（1）配制流动相：流动相a：水流动相b：乙腈（2）制备供试品溶液：称取(r)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮样品，加三甲基碘硅烷和乙腈后于水浴恒温振荡器中振荡反应，再加入无水乙醇，继续用水浴恒温振荡器振荡反应，放至室温，用乙腈水溶液混合配制成供试品溶液，待用；（3）制备对照品溶液：称取(s)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮对照品，加三甲基碘硅烷和乙腈后于水浴恒温振荡器中振荡反应，再加入无水乙醇，继续用水浴恒温振荡器振荡反应，放至室温，用乙腈水溶液混合配制成对照品溶液，待用；（4）分别吸取上述等量的供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪进行测定，其色谱条件包括：色谱柱：手性柱；检测器：uv检测器；检测波长：240nm～260nm；柱温：27℃～33℃；流速：0.25ml/min～0.35ml/min；采用上述色谱条件，使用流动相a和流动相b进行线性梯度洗脱；（5）计算方式：按外标法以峰面积计算或按面积归一化法计算。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱的程序为：。4. 根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：在所述的步骤（4）中，所述色谱柱为：chiralpak ig-3；长150mm，内径2.1mm，填充料粒径3μm；或在所述的步骤（4）中，所述检测波长为250nm；或在所述的步骤（4）中，所述柱温为30℃；或在所述的步骤（4）中，所述流速为0.3ml/min。5. 根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：在所述的步骤（2）和（3）中，所述振荡
方式为用仪器振荡，或用手动振荡；或在所述的步骤（2）和（3）中，所述振荡反应的温度为50℃～70℃，优选地，57℃～63℃；或在所述的步骤（2）和（3）中，所述乙腈水溶液的浓度为60体积%；或在所述步骤（2）和步骤（3）中，第一次振荡时间为0.45h～0.55h；或在所述步骤（2）和步骤（3）中，第二次振荡时间为0.9h～1.1h。6.根据权利要求2至5中任一项所述的检测方法，其特征在于：在所述的步骤（2）和步骤（3）中，所述供试品溶液和对照品溶液中加入的三甲基碘硅烷的体积为0.35～0.45ml，加入的乙腈体积为2.0ml～3.0ml，加入的无水乙醇体积为3.5ml～4.5ml，任选地，为三甲基碘硅烷0.4ml，乙腈2.0ml，无水乙醇4ml。7. 根据权利要求2至5中任一项所述的检测方法，其特征在于：所述的步骤（2）中，所述供试品溶液的浓度为0.4mg/ml～0.6mg/ml，优选地，为0.45 mg/ml～0.55mg/ml，更优选地为0.5mg/ml。8.根据权利要求2至5中任一项所述的检测方法，其特征在于：所述的步骤（3）中，所述对照品溶液的浓度为0.1μg/ml～5μg/ml，任选地，为5
µ
g/ml。9.根据权利要求2至5中任一项所述的检测方法，其特征在于：在所述的步骤（4）中，其中供试品溶液和对照品溶液各5μl～100μl，任选地，20μl；注入液相色谱仪。

技术总结
本发明涉及布立西坦起始物料(R)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的对映异构体(S)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮的检测方法；所述的检测方法包括使用三甲基碘硅烷（TMSI）和乙醇对(R)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮及其对映异构体(S)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮进行衍生化，从而改变色谱峰型提高紫外吸收，然后再使用反相高效液相色谱法，并以水-乙腈作为流动相，以手性柱作为色谱柱，对布立西坦起始物料(R)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮样品中的对映异构体(S)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮进行检测。该检测方法能够使(R)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮及其对映异构体完全分离并可以定量检出(R)-4-丙基-二氢呋喃-2-酮中高于0.09％的异构体，灵敏度高、实用性强，检测过程简单、快捷。快捷。


技术研发人员：谢扬 崔波 谭瑶 赵理 严紫薇
受保护的技术使用者：植恩生物技术股份有限公司
技术研发日：2023.04.20
技术公布日：2023/9/14