一种烟草或烟草制品中酯类化合物的测定方法与流程

1.本发明属于分析化学领域，具体涉及一种烟草或烟草制品中酯类化合物的测定方法。


背景技术：

2.酯类化合物在香料中占有特别重要的地位，大多具有花香、果香、酒香或蜜香香气。在调配各种香型的香精时，酯类化合物虽不能赋予决定性的香气，但可以起增强与润和作用，另有部分酯类能起到定香剂的作用。酯类中的内酯是一类重要的呈香化合物，是水果、牛奶、黄油、葡萄酒等食品中的重要风味物质。内酯在香气上具有留香时间长、香气圆润的特点，并且有增香的作用。基于内酯在食品风味方面的重要作用，对其进行深入定性定量测定以判断其风味贡献具有至关重要的作用。
3.对于烟草及烟草制品，挥发性香气成分是决定其感官品质及消费者接受度的重要因素之一。烟草制品的挥发性香气成分，一部分来源于烟草本身的化学成分，另一部分则来源于外加的香料。酯类香味物质是烟草中常用的一类香料，对卷烟风味有重要贡献。研究烟草及烟草制品中的酯类化合物对了解其化学成分与气溶胶化学成分的关联性及成因规律具有重要意义。但是包括内酯在内的酯类成分含量很低，而烟草及烟草制品的化学成分非常复杂，烟碱、次要生物碱、其它调香调味物质、抗氧化剂、有机酸和色素等都会对酯类成分的检测造成干扰。因此，开发快速准确的一测多评酯类化合物定性定量测定方法是烟草及烟草制品质量监控的重要前提之一。


技术实现要素：

4.为此，本发明提供一种烟草或烟草制品中酯类化合物定性定量测定的方法。该方法基于气相色谱-质谱，前处理方法简单，能够一次定性定量测定39种酯类化合物，其中包括9种内酯化合物。
5.本发明采用了如下的技术方案：
6.一种烟草或烟草制品中酯类化合物的定性定量测定方法，包括如下步骤：
7.(1)供试品溶液的制备
8.准确称取500.0mg烟草或烟草制品，精确至0.1mg，置于50ml三角烧瓶中，加入25ml含内标物的乙醇，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml萃取液过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述供试品溶液；其中，所述内标物为2,2联吡啶-d8，内标物浓度为0.05mg/ml；
9.(2)空白溶液的制备
10.50ml三角烧瓶中加入25ml含内标物的乙醇，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml乙醇过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述空白溶液；其中，所述内标物为2,2联吡啶-d8，内标物浓度为0.05mg/ml；
11.(3)混合标准系列工作溶液的配制
12.分别准确称取酯类标准品各50.0mg于50ml棕色容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成各自浓度为1mg/ml的混合标准储备液；称取0.5g2,2-联吡啶-d8于100ml容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成浓度为5mg/ml的内标储备液；准确移取不同体积的所述混合标准储备液于10ml容量瓶中，分别加入0.1ml所述内标储备液，加入乙醇至刻度，得到所述混合标准系列工作溶液；
13.(4)测定
14.将所述供试品溶液、所述空白溶液和所述混合标准系列工作溶液分别注入气相色谱-质谱联用仪，在下述分析条件下进行定性和定量测定：
15.气相色谱柱：聚硅氧烷毛细管柱db-624(60m
×
0.32mm，1.8μm)；
16.程序升温：初温100℃，保持0.5min；以15℃/min的速率升至140℃，保持0.5min；以10℃/min的速率升至250℃，保持9.0min；
17.采用分流进样模式，分流比为10:1；
18.进样量：1.0μl；
19.溶剂延迟时间：4.0min；
20.载气：高纯氦气，纯度≥99.999％，恒流模式，流速为1.5ml/min；
21.进样口温度：250℃；
22.离子源温度：250℃；
23.接口温度：250℃；
24.质谱扫描模式：选择离子扫描；
25.定性测定：如果供试品在对照品相同的保留时间检测出相应的定量/定性离子，则供试品溶液中含有该对照品；
26.定量测定：以标准品和内标物的峰面积比值与含量建立标准工作曲线；按照式(i)计算供试品溶液中酯类化合物的含量,以两次平行测定结果的算术平均值为最终测定结果，精确至0.01mg/g：
[0027][0028]
式中：
[0029]
xi——测试的烟草或烟草制品中酯类化合物的含量，mg/g；
[0030]ci
——供试品溶液中所述酯类化合物的浓度，mg/ml；
[0031]
c0——空白溶液中所述酯类化合物的浓度，mg/ml；
[0032]
v——供试品溶液的体积，ml；
[0033]
m——测试的烟草或烟草制品的取样量，g。
[0034]
优选地，所述烟草制品选自卷烟烟丝、加热卷烟芯基材、电子烟雾化物和烟用香精中的一种或多种。
[0035]
优选地，所述电子烟物化物选自液态雾化物和固态雾化物中的一种或两种。
[0036]
优选地，所述酯类标准品选自乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸异丁酯、丁酸乙酯、乙酸丁酯、异戊酸乙酯、乙酸异戊酯、α-当归内酯、丁酸丁酯、乙酸糠酯、乙酸叶醇酯、乙酸己酯、γ-戊内酯、丁酸异戊酯、己酸烯丙酯、异戊酸异戊酯、乙酸庚酯、苯甲酸甲酯、γ-己内酯、乙酸苄酯、苯甲酸乙酯、γ-庚内酯、乙酸芳樟酯、苯乙酸乙酯、壬酸乙酯、乙酸苯乙酯、乙酸薄荷
酯、γ-辛内酯、乙酸橙花酯、乙酸香叶酯、肉桂酸甲酯、乙酸茴香酯、γ-壬内酯、肉桂酸乙酯、γ-癸内酯、δ-癸内酯、二氢猕猴桃内酯、二氢茉莉酮酸甲酯和γ-十二内酯中的至少一种。
[0037]
更优选地，所述酯类标准品选自乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸异丁酯、丁酸乙酯、乙酸丁酯、异戊酸乙酯、乙酸异戊酯、α-当归内酯、丁酸丁酯、乙酸糠酯、乙酸叶醇酯、乙酸己酯、γ-戊内酯、丁酸异戊酯、己酸烯丙酯、异戊酸异戊酯、乙酸庚酯、苯甲酸甲酯、γ-己内酯、乙酸苄酯、苯甲酸乙酯、γ-庚内酯、乙酸芳樟酯、苯乙酸乙酯、壬酸乙酯、乙酸苯乙酯、乙酸薄荷酯、γ-辛内酯、乙酸橙花酯、乙酸香叶酯、肉桂酸甲酯、乙酸茴香酯、γ-壬内酯、肉桂酸乙酯、γ-癸内酯、δ-癸内酯、二氢猕猴桃内酯、二氢茉莉酮酸甲酯和γ-十二内酯中的全部。
[0038]
优选地，所述混合标准系列工作溶液的浓度梯度为：0.5mg/l、1mg/l、2.5mg/l、5mg/l、10mg/l、25mg/l、50mg/l、100mg/l和200mg/l。
[0039]
优选地，在所述分析条件下，所述内标物和酯类标准品的保留时间和定量/定性离子信息为：
[0040]
[0041]
[0042]
附图说明
[0043]
以下结合附图，对本发明做进一步说明。
[0044]
图1为不同升温程序下得到的混合标准品溶液的总离子色谱图，图中的数字1-8表示升温程序的序号。
[0045]
图2为1mg/ml混合标准对照品溶液的总离子流色谱图。图中，1：乙酸乙酯、2：丙酸乙酯、3：乙酸异丁酯、4：丁酸乙酯、5：乙酸丁酯、6：异戊酸乙酯、7：乙酸异戊酯、8：α-当归内酯、9：丁酸丁酯、10：乙酸糠酯、11：乙酸叶醇酯、12：乙酸己酯、14：γ-戊内酯、15：丁酸异戊酯、16：己酸烯丙酯、17：异戊酸异戊酯、18：乙酸庚酯、19：苯甲酸甲酯、20：γ-己内酯、21：乙酸苄酯、22：苯甲酸乙酯、23：γ-庚内酯、24：乙酸芳樟酯、25：苯乙酸乙酯、26：壬酸乙酯、27：乙酸苯乙酯、28：乙酸薄荷酯、29：γ-辛内酯、30：乙酸橙花酯、31：乙酸香叶酯、32：肉桂酸甲酯、33：乙酸茴香酯、34：γ-壬内酯、35：肉桂酸乙酯、36：γ-癸内酯、37：δ-癸内酯、38：二氢猕猴桃内酯、39：二氢茉莉酮酸甲酯、40：γ-十二内酯、is2：2,2联吡啶-d8。
[0046]
图3示出了不同萃取溶剂对目标分析物加样回收率。
[0047]
图4示出了不同萃取时间下目标分析物的加样回收率。
[0048]
图5示出了不同萃取溶剂体积下目标分析物加样回收率。
[0049]
图6示出了不同不同称样量下目标分析物的加样回收率。
[0050]
图7示出了目标化合物在不同稀释倍数下的回收率。
[0051]
图8为典型供试品溶液总离子流色谱图。图中，5：乙酸丁酯、28：乙酸薄荷酯，31：乙酸香叶酯。
具体实施方式
[0052]
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
[0053]
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。其中，部分试剂和仪器购买情况如下：。
[0054]
仪器：
[0055]
agilent 8890(gc)-5977(ms)气相色谱联用质谱仪；
[0056]
气相色谱柱：聚硅氧烷毛细管柱db-624(60m
×
0.32mm，1.8μm)，db-5ms(30m
×
0.25mm,1.0μm)；
[0057]
cp2245电子天平(感量：0.0001g)，德国sartorius公司；
[0058]
超声仪(语盟ym-100s)，深圳市方奥微电子有限公司。
[0059]
试剂：
[0060]
α-当归内酯(纯度＞98％，tci)；γ-戊内酯标准品(纯度98％，alfa)；γ-己内酯标准品(纯度98％，alfa)；γ-庚内酯标准品(纯度98％，阿拉丁)；γ-辛内酯标准品(纯度＞99％，adamas)；γ-壬内酯标准品(纯度＞97％，sigma-aldrich)；γ-癸内酯(纯度98％，alfa)；δ-癸内酯(纯度＞97.0％，tci)；γ-十二内酯(纯度98％，sigma)；二氢猕猴桃内酯(纯度98％，block砌块化学)；乙酸乙酯(纯度99.8％，sigma)，乙酸丁酯(纯度99.7％，aladdin)，乙酸己酯(纯度＞99.5％，aladdin)，乙酸异丁酯(纯度＞99.0％，tci)，乙酸异戊酯(纯度＞98.0％，tci)，乙酸庚酯(纯度＞99％，阿拉丁)，乙酸茴香酯(纯度98％，阿拉丁)，乙酸苄酯(纯度99％，阿拉丁)，乙酸糠酯(纯度99％，阿拉丁)，乙酸香叶酯(纯度98％，alfa)，乙酸叶醇酯(纯度99％，alfa)，乙酸芳樟酯(纯度＞98％，adamas)，乙酸橙花酯(纯度＞95％，tci)，乙酸苯乙酯(纯度98％，阿拉丁)，丙酸乙酯(纯度99％，伊诺凯)，丁酸丁酯(纯度＞99％，阿拉丁)，丁酸乙酯(纯度99％，伊诺凯)，丁酸异戊酯(纯度99％，阿拉丁)，异戊酸乙酯(纯度99％，阿拉丁)，异戊酸异戊酯(纯度98％，阿拉丁)，己酸烯丙酯(纯度98％，阿拉丁)，壬酸乙酯(纯度＞99％，adamas)，苯甲酸甲酯(纯度99％，伊诺凯)，苯甲酸乙酯(纯度＞99％，伊诺凯)，二氢茉莉酮酸甲酯(纯度96％，阿拉丁)，肉桂酸甲酯酯(纯度99％，alfa)，肉桂酸乙酯(纯度99％，adamas)，2,2-联吡啶-d8(纯度98％，sigma)，乙醇(色谱纯，美国dima公司)；乙醇(色谱纯，美国dima公司)。
[0061]
下述研究例中，部分分析条件如下：
[0062]
色谱柱：db-624色谱柱(60m
×
0.32mm,1.8μm)；
[0063]
采用分流进样模式，分流比为10:1；
[0064]
进样量：1.0μl；
[0065]
溶剂延迟时间：4.0min；
[0066]
载气：高纯氦气，纯度≥99.999％，恒流模式，流速为1.5ml/min；
[0067]
进样口温度：250℃；
[0068]
离子源温度：250℃；
[0069]
接口温度：250℃；
[0070]
质谱扫描模式：选择离子扫描。
[0071]
研究例1程序升温条件的选择
[0072]
本研究例采用混合标准品溶液进样测定。混合标准品溶液通过如下方法配制：
[0073]
各个酯类标准品用乙醇分别单独配制成浓度为80mg/ml(78.65-89.83mg/ml)的单标储备液；称取0.5g2,2-联吡啶-d8于100ml容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成浓度为5mg/ml的内标储备液；然后每种单标储备液移取一定体积至同一10ml棕色容量瓶中，加入0.1ml所述内标储备液，加入乙醇至刻度，使每种标准品的浓度都为1mg/ml，摇匀，即得。
[0074]
色谱柱的升温程序对分离效果有至关重要的影响。为了在较短的时间内实现所有目标化合物的有效分离，在前期优化的色谱柱基础上，考察了8种升温程序，结果见图1和表1。
[0075]
表1升温程序及考察结果
[0076][0077]
综合考虑分离效果和分析耗时，本发明优选序号为7的升温程序。
[0078]
在本研究例优选出的升温程序条件下，得到了混合标准品溶液的总离子流色谱图，见图2。
[0079]
以加样回收率为指标，在以研究例1优选出的升温程序条件下进行提取溶剂、提取时间、提取溶剂用量、供试品称样量、稀释倍数的研究和优化。
[0080]
研究例2提取溶剂的优选
[0081]
本方法测定的酯类化合物易溶于乙醇等有机溶剂。因此本实验选用了甲醇、乙醇和丙酮为溶剂，进行提取效率的比较。
[0082]
通过如下方法制备加标供试品溶液：
[0083]
准确称取500.0mg液态电子烟雾化物，精确至0.1mg，置于50ml三角烧瓶中，加入25ml含0.05mg/ml内标物2,2-联吡啶-d8的提取溶剂和研究例1制备的混合标准品溶液0.25ml，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml提取液过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述供试品溶液。
[0084]
吸取上述加标供试品溶液注入气相色谱-质谱仪，测定并结算各标准品的加样回收率，结果见图3。从图3可知，甲醇、乙醇和丙酮对加标供试品中各目标分析的回收率分别为69.0-111.4％、81.6-114.7％和79.5-110.9％。但当使用乙醇作为提取溶剂时，其对乙酸乙酯和丙酸乙酯的提取效果显著优于另外两种溶剂。另外乙醇的毒性小于甲醇和丙酮。因此，本发明优选乙醇作为提取溶剂。
[0085]
研究例3提取时间的研究
[0086]
为确定适宜的提取时间，在其他条件不变的情况下，考察了分别超声10、20和30min对目标分析物回收率的影响。结果见图4。从图4可知，不同提取时间下各目标分析的回收率分别为77.2-114.7％、78.8-111.7％和76.6-110.3％，综合考虑提取效果和时间消耗，确定提取时间为20min。
[0087]
研究例4提取溶剂用量的研究
[0088]
为确定适宜的提取溶剂体积，在其他条件不变的情况下，考察了乙醇用量分别为10、25和30ml对目标分析物回收率的影响。结果见图5。从图5可知，不同提取溶剂用量下目标分析物的回收率分别为76.9-113.0％、77.2-114.7％和78.7-115.8％，综合考虑提取效果和溶剂消耗，确定提取溶剂用量体积为25ml。
[0089]
研究例5供试品称样量的研究
[0090]
为确定适宜的提取溶剂体积，在其他条件不变的情况下，分别称取0.1g、0.2g、0.5g和1.0g的供试品，制备得到加标供试品溶液，考察不同称样量下各目标分析物的回收率，结果见图6。从图6可知，不同称样量下目标分析物的回收率分别为75.2-110.6％、71.2-112.3％、77.2-114.7％和70.5-114.9％。表明不同称样量下目标分析物的检测结果差别不大。考虑到每支加热卷烟产品的质量为0.2g左右，为了避免因样品不均匀带来的检测结果差异，确定称样量为0.5g。
[0091]
研究例6供试品溶液不同稀释倍数的考察
[0092]
由于部分酯类化合物在溶剂中可能存在不稳定的情况，因此，考察了稀释后样品中酯类化合物的稳定性。对加标供试品溶液进行稀释：取0.5g研究例2制备的加标供试品溶液，分别用25ml、50ml、100ml、250ml、500ml和1000ml乙醇稀释(对应稀释倍数50-2000)。不同稀释倍数下的加标供试品溶液中各目标分析物的回收率测定结果见图7。另外还计算各目标分析物在不同稀释倍数下回收率的相对标准偏差。所有目标分析物在不同稀释倍数下的回收率介于80.4-116.1％，回收率的相对标准偏差介于2.8％-6.7％之间。说明稀释倍数对本发明的样品分析没有影响，稀释后样品中酯类化合物的稳定性可以满足酯类化合物的分析要求。在实际样品检测时，若样品中目标组分含量高于校准曲线工作范围的高点，可以根据《gb/t35655-2017化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南色谱分析》的规定，对样品进行稀释处理使其含量落在工作范围内。
[0093]
在研究例1-6的基础上，确定了本发明对烟草或烟草制品中酯类化合物的定性定量测定方法，包括：
[0094]
(1)供试品溶液的制备
[0095]
准确称取500.0mg烟草或烟草制品，精确至0.1mg，置于50ml三角烧瓶中，加入25ml含内标物的乙醇，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml萃取液过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述供试品溶液；其中，所述内标物为2,2联吡啶-d8，内标物浓度为0.05mg/ml；
[0096]
(2)空白溶液的制备
[0097]
50ml三角烧瓶中加入25ml含内标物的乙醇，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml乙醇过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述空白溶液；其中，所述内标物为2,2联吡啶-d8，内标物浓度为0.05mg/ml；
[0098]
(3)混合标准系列工作溶液的配制
[0099]
分别准确称取酯类标准品各50.0mg于50ml棕色容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成各自浓度为1mg/ml的混合标准储备液；称取0.5g2,2-联吡啶-d8于100ml容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成浓度为5mg/ml的内标储备液；准确移取不同体积的所述混合标准储备液于10ml容量瓶中，分别加入0.1ml所述内标储备液，加入乙醇至刻度，得到所述混合标准
系列工作溶液；优选地，所述混合标准系列工作溶液的浓度梯度为：0.5mg/l、1mg/l、2.5mg/l、5mg/l、10mg/l、25mg/l、50mg/l、100mg/l和200mg/l
[0100]
(4)测定
[0101]
将所述供试品溶液、所述空白溶液和所述混合标准系列工作溶液分别注入气相色谱-质谱联用仪，在下述分析条件下进行定性和定量测定：
[0102]
气相色谱柱：聚硅氧烷毛细管柱db-624(60m
×
0.32mm，1.8μm)；
[0103]
程序升温：初温100℃，保持0.5min；以15℃/min的速率升至140℃，保持0.5min；以10℃/min的速率升至250℃，保持9.0min；
[0104]
采用分流进样模式，分流比为10:1；
[0105]
进样量：1.0μl；
[0106]
溶剂延迟时间：4.0min；
[0107]
载气：高纯氦气，纯度≥99.999％，恒流模式，流速为1.5ml/min；
[0108]
进样口温度：250℃；
[0109]
离子源温度：250℃；
[0110]
接口温度：250℃；
[0111]
质谱扫描模式：选择离子扫描；
[0112]
定性测定：如果供试品在对照品相同的保留时间检测出相应的定量/定性离子，则供试品溶液中含有该对照品；
[0113]
定量测定：以标准品和内标物的峰面积比值与含量建立标准工作曲线；按照式(i)计算供试品溶液中酯类化合物的含量,以两次平行测定结果的算术平均值为最终测定结果，精确至0.01mg/g：
[0114][0115]
式中：
[0116]
xi——测试的烟草或烟草制品中酯类化合物的含量，mg/g；
[0117]ci
——供试品溶液中所述酯类化合物的浓度，mg/ml；
[0118]
c0——空白溶液中所述酯类化合物的浓度，mg/ml；
[0119]
v——供试品溶液的体积，ml；
[0120]
m——测试的烟草或烟草制品的取样量，g。
[0121]
研究例7标准工作曲线与检测限
[0122]
将系列标准工作溶液进行gc-ms分析，采用内标法制定标准工作曲线。以各目标物的峰面积与内标的峰面积之比与各目标物浓度与内标浓度之比进行线性回归分析，得到各个目标化合物标准工作曲线及相关系数，结果见表2。同时将最小浓度的标准溶液进样10次，计算测定结果的标准偏差，分别以标准偏差的3倍和10倍确定检测限和定量限。
[0123]
表2化合物的标准工作曲线及检出限、定量限
[0124]
[0125][0126]
表2数据表明，39种目标物的工作曲线线性良好，相关系数均高于0.99；39种目标物的检出限和定量限分别为0.12～5.57μg/g and 0.41～24.88μg/g，能够满足烟草及烟草制品中相关化合物的定量分析。
[0127]
研究例8精密度与回收率试验
[0128]
取已知含量的加热卷烟芯基材和电子烟液态雾化物样品各2份，分别按照低、中、高三种水平加入39种酯类化合物标准品，加标后的样品分别进行前处理和gc-ms分析，并由提取液中的原含量、加标量以及加标测定量计算回收率；每个添加水平重复测定6个样品，计算测定结果的rsd为日内精密度；并在连续5天内每天进行1次实验，计算5天内测定结果的rsd为日间精密度，结果见表3-表6。结果表明，加热卷烟芯基材和烟液样品中酯类化合物的日内、日间测定结果的变异系数在1.2％～8.0％和2.7％～8.0％之间，加标回收率在84.3％～118.1％之间。因此，本发明的定性定量方法精密度较好，回收率较高，适合烟草及烟草制品中酯类化合物的定量分析。
[0129]
表3 1号加热卷烟芯基材中酯类化合物的加标回收率和精密度
[0130]
[0131]
[0132][0133]
[0134]
表4 2号加热卷烟芯基材中酯类化合物的加标回收率和精密度
[0135]
[0136]
[0137]
[0138][0139]
表5 1号电子烟液态雾化物样品中酯类化合物的加标回收率和精密度
[0140]
[0141]
[0142]
[0143][0144]
表6 2号电子烟液态雾化物样品中酯类化合物的加标回收率和精密度
[0145]
[0146]
[0147]
[0148][0149]
研究例9基质效应的评价
[0150]
烟草制品中基质的存在可能会提高或降低仪器对目标组分的响应信号。为确定样品基质的影响，根据《gb/t35655-2017化学分析方法验证确认和内部质量控制实施指南色谱分析》的规定，采用相对响应值法来评价方法的基质效应。在其他条件不变的情况下，选取代表性的电子烟液态雾化物和加热卷烟芯基材各2个样品，加入标准品进行前处理，比较基质加标样品与标准溶液的响应比值变化百分比。结果见表7。
[0151]
从表7可以看出不同样品的基质干扰在-9.78％至8.73％之间，说明样品不存在基质干扰。因此，本方法使用溶剂直接配制标准工作曲线，未使用基质匹配校正法配制标准工作曲线。
[0152]
表7目标分析物在不同基质加标样品与标准溶液的响应比值变化百分比(％)
[0153]
[0154][0155]
实施例1132种烟草或烟草制品的定性定量测定
[0156]
在进行样品分析前，先进行了空白分析：即不加样品进行前处理和后续的gc-ms分析，发现空白实验中不含本方法所分析的39种目标分析物。
[0157]
将本发明所建立的测定方法应用于132种实际样品(含加热卷烟芯基材、电子烟液态和固态雾化物)的分析检测，其中某电子烟液态雾化物样品进行分析后得到的总离子流
色谱图如图8所示，在该样品中检测到了乙酸丁酯、乙酸薄荷酯和乙酸香叶酯。图8示出，目标分析物能与基质很好地分离，基质不会对目标物的定量存在干扰。
[0158]
所有132种供试的烟草或烟草制品中，一共定性定量检测出34种目标物。其中，至少定量检出一种目标物的样品有100个，占比75.8％；在能定量检测出的样品中，目标物总量介于0.011-13.6mg/g之间。

技术特征：
1.一种烟草或烟草制品中酯类化合物的定性定量测定方法，包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备准确称取500.0mg烟草或烟草制品，精确至0.1mg，置于50ml三角烧瓶中，加入25ml含内标物的乙醇，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml萃取液过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述供试品溶液；其中，所述内标物为2,2联吡啶-d8，内标物浓度为0.05mg/ml；(2)空白溶液的制备50ml三角烧瓶中加入25ml含内标物的乙醇，密闭，室温下超声20min，冷却至室温，吸取1ml乙醇过0.22μm有机相滤膜到2ml色谱瓶中，即得所述空白溶液；其中，所述内标物为2,2联吡啶-d8，内标物浓度为0.05mg/ml；(3)混合标准系列工作溶液的配制分别准确称取酯类标准品各50.0mg于50ml棕色容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成各自浓度为1mg/ml的混合标准储备液；称取0.5g2,2-联吡啶-d8于100ml容量瓶中，加入乙醇至刻度，配制成浓度为5mg/ml的内标储备液；准确移取不同体积的所述混合标准储备液于10ml容量瓶中，分别加入0.1ml所述内标储备液，加入乙醇至刻度，得到所述混合标准系列工作溶液；(4)测定将所述供试品溶液、所述空白溶液和所述混合标准系列工作溶液分别注入气相色谱-质谱联用仪，在下述分析条件下进行定性和定量测定：气相色谱柱：聚硅氧烷毛细管柱db-624(60m
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0.32mm，1.8μm)；程序升温：初温100℃，保持0.5min；以15℃/min的速率升至140℃，保持0.5min；以10℃/min的速率升至250℃，保持9.0min；采用分流进样模式，分流比为10:1；进样量：1.0μl；溶剂延迟时间：4.0min；载气：高纯氦气，纯度≥99.999％，恒流模式，流速为1.5ml/min；进样口温度：250℃；离子源温度：250℃；接口温度：250℃；质谱扫描模式：选择离子扫描；定性测定：如果供试品在对照品相同的保留时间检测出相应的定量/定性离子，则供试品溶液中含有该对照品；定量测定：以标准品和内标物的峰面积比值与含量建立标准工作曲线；按照式(i)计算供试品溶液中酯类化合物的含量,以两次平行测定结果的算术平均值为最终测定结果，精确至0.01mg/g：式中：xi——测试的烟草或烟草制品中酯类化合物的含量，mg/g；
c
i
——供试品溶液中所述酯类化合物的浓度，mg/ml；c0——空白溶液中所述酯类化合物的浓度，mg/ml；v——供试品溶液的体积，ml；m——测试的烟草或烟草制品的取样量，g。2.根据权利要求1所述的定性定量测定方法，其特征在于，所述烟草制品选自卷烟烟丝、加热卷烟芯基材、电子烟雾化物和烟用香精中的一种或多种。3.根据权利要求2所述的定性定量测定方法，其特征在于，所述电子烟物化物选自液态雾化物和固态雾化物中的一种或两种。4.根据权利要求3所述的定性定量测定方法，其特征在于，所述酯类标准品选自乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸异丁酯、丁酸乙酯、乙酸丁酯、异戊酸乙酯、乙酸异戊酯、α-当归内酯、丁酸丁酯、乙酸糠酯、乙酸叶醇酯、乙酸己酯、γ-戊内酯、丁酸异戊酯、己酸烯丙酯、异戊酸异戊酯、乙酸庚酯、苯甲酸甲酯、γ-己内酯、乙酸苄酯、苯甲酸乙酯、γ-庚内酯、乙酸芳樟酯、苯乙酸乙酯、壬酸乙酯、乙酸苯乙酯、乙酸薄荷酯、γ-辛内酯、乙酸橙花酯、乙酸香叶酯、肉桂酸甲酯、乙酸茴香酯、γ-壬内酯、肉桂酸乙酯、γ-癸内酯、δ-癸内酯、二氢猕猴桃内酯、二氢茉莉酮酸甲酯和γ-十二内酯中的至少一种。5.根据权利要求4所述的定性定量测定方法，其特征在于，所述酯类标准品选自乙酸乙酯、丙酸乙酯、乙酸异丁酯、丁酸乙酯、乙酸丁酯、异戊酸乙酯、乙酸异戊酯、α-当归内酯、丁酸丁酯、乙酸糠酯、乙酸叶醇酯、乙酸己酯、γ-戊内酯、丁酸异戊酯、己酸烯丙酯、异戊酸异戊酯、乙酸庚酯、苯甲酸甲酯、γ-己内酯、乙酸苄酯、苯甲酸乙酯、γ-庚内酯、乙酸芳樟酯、苯乙酸乙酯、壬酸乙酯、乙酸苯乙酯、乙酸薄荷酯、γ-辛内酯、乙酸橙花酯、乙酸香叶酯、肉桂酸甲酯、乙酸茴香酯、γ-壬内酯、肉桂酸乙酯、γ-癸内酯、δ-癸内酯、二氢猕猴桃内酯、二氢茉莉酮酸甲酯和γ-十二内酯中的全部。6.根据权利要求1所述的定性定量测定方法，其特征在于，所述混合标准系列工作溶液的浓度梯度为：0.5 mg/l、1 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10 mg/l、25 mg/l、50 mg/l、100 mg/l和200 mg/l。7.根据权利要求1所述的定性定量测定方法，其特征在于，在所述分析条件下，所述内标物和酯类标准品的保留时间和定量/定性离子信息为：
8.权利要求1至7中任一项所述的定性定量测定方法在烟草或烟草制品中酯类成分检测中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述烟草制品选自卷烟烟丝、加热卷烟芯基材、电子烟雾化物和烟用香精中的一种或多种。10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述电子烟物化物选自液态雾化物和固态雾化物中的一种或两种。

技术总结
本发明公开了一种烟草或烟草制品中酯类化合物的定性定量测定方法，该方法基于气相色谱-质谱法，包括：(1)供试品溶液的制备，(2)空白溶液的制备，(3)混合标准系列工作溶液的配制，和(4)测定；其中分析条件为：气相色谱柱：聚硅氧烷毛细管柱DB-624(60m


技术研发人员：罗彦波 姜兴益 张洪非 朱风鹏 李翔宇 庞永强 张海燕 刘德祥 艾丹 侯宏卫 胡清源
受保护的技术使用者：国家烟草质量监督检验中心
技术研发日：2023.06.27
技术公布日：2023/9/16