一种棉铃虫幼虫表皮蛋白基因LCP17及其应用的制作方法

一种棉铃虫幼虫表皮蛋白基因lcp17及其应用
技术领域
1.本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种棉铃虫幼虫表皮蛋白基因lcp17及其应用。


背景技术：

2.棉铃虫是世界范围内一种多食性害虫，对玉米、棉花、大豆、烟草等作物危害较严重，造成严重的经济损失(sivakumar et al.，2007)。多年来，减轻棉铃虫对作物的为害一直是一项严峻的挑战。目前，棉铃虫的田间防治主要采用化学防治，然而长期大量使用化学药剂使其抗药性增强，防治难度大大提高，同时也引起一系列环境污染以及农残超标等问题。因此，迫切需要探索一种新的安全高效的防治方法。其中，rnai技术在防控害虫及物种特异性杀虫剂方面有巨大的潜力。
3.rna干扰(rna interference，rnai)自在秀丽中被隐杆线虫中被首次发现以来目前已被广泛应用于害虫防治。rnai是指由双链rna被核酸内切酶识别并将其切割加工成小干扰rna(sirna)，与同源序列结合使特定基因的mrna降解，从而成功沉默靶标基因的现象。rnai技术与传统的基因敲除技术相比，具有低投入，周期短，易于操作等优势，极大的推动了非模式昆虫功能基因的研究。
4.碳量子点(carbon quantum dots,cqds)是一种粒径在10nm以下的纳米粒子，由于其水溶性好，毒性极低，近年来备受关注。


技术实现要素：

5.本发明的目的是为生物防治昆虫提供一种新选择。
6.本发明的技术方案是棉铃虫幼虫表皮蛋白在调控昆虫生长发育中的应用，其氨基酸序列如seq idno.3所示。
7.进一步，棉铃虫幼虫表皮蛋白的编码序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
8.其中，所述调控为负调控。
9.特别的，所述负调控通过rnai技术实现。
10.具体的，所述rnai技术中采用dslcp17实现。
11.特别的，所述dslcp17的核苷酸序列如seq id no.4所示。
12.其中，扩增dslcp17的引物对的核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示。
13.本发明还提供了棉铃虫幼虫表皮蛋白在昆虫防治中的应用，其氨基酸序列如seq id no.3所示。
14.进一步的，棉铃虫幼虫表皮蛋白的编码序列如seq id no.1或seq id no.2所示。
15.具体的，所述昆虫为棉铃虫。
16.本发明还提供了一种防治昆虫的方法，主要步骤为降低昆虫基因lcp17的表达。
17.进一步的，采用rnai技术降低昆虫基因lcp17的表达。
18.具体的，所述rnai技术中采用dslcp17实现。
19.特别的，所述dslcp17的核苷酸序列如seq id no.4所示。
20.其中，扩增dslcp17的引物对的核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示。
21.进一步的，采用dslcp17注射昆虫。
22.特别的，所述dslcp17采用纳米材料负载。
23.特别的，所述纳米材料为碳量子点(cqds)。
24.其中，将dslcp17与cqds分别配置成100ng/μl的溶液，然后混合。
25.具体的，所述dslcp17与cqds的体积比为11︰1。
26.优选的，混合后的溶液中，dsrna的最终浓度13000ng/μl。
27.具体的，所述昆虫为棉铃虫。
28.其中，所述昆虫为二龄幼虫。
29.本发明还提供了降低基因lcp17的表达的物质。
30.进一步的，所述降低基因lcp17的表达的物质为dslcp17。
31.特别的，所述dslcp17的核苷酸序列如seq id no.4所示。
32.其中，扩增dslcp17的引物对的核苷酸序列如seq id no.5和seq id no.6所示。
33.本发明还提供了降低基因lcp17的表达的物质在昆虫防治中的应用。
34.本发明的有益效果：本发明从棉铃虫中克隆了幼虫表皮蛋白基因lcp17，对其表达模式进行分析。并进一步研究了该基因的功能，通过rnai技术证明了干扰该基因的表达可以降低幼虫的进食量，使幼虫发育迟缓、生活力降低并死亡。本发明的基因可作为生物防治昆虫的靶标，为减轻化学农药使用，无公害防治害虫提供新途径。本发明还引入了纳米材料(碳量子点)作为dsrna的载体，有效提高了dsrna的沉默效率。
附图说明
35.图1、碳量子点结构示意图。
36.图2、碳量子点(cqds)与dsrna结合后电泳检测结果；第1泳道为对照条带，6条带分别为100bp、250bp、500bp、750bp、1000bp、2000bp；后面其余泳道为cqds与dsrna不同比例混合之后的电泳条带。
37.图3、lcp17基因在棉铃虫不同发育阶段表达模式；横坐标1l:1龄；2l：2龄；3l：3龄；4l：4龄；5l：5龄；6l：6龄；p：蛹；m：雄成虫；f：雌成虫；纵坐标英文为lcp17基因相对表达量。
38.图4、lcp17基因在棉铃虫不同组织表达模式；fb：脂肪体；mt：马氏管；ct：表皮；mg：中肠；纵坐标英文为lcp17基因相对表达量。
39.图5、lcp17基因沉默棉铃虫体内lcp17基因表达量；纵坐标为lcp17基因相对表达量。
40.图6、lcp17基因沉默对棉铃虫发育历期的影响；横坐标2l：2龄；3l：3龄；4l：4龄；5l：5龄；6l：6龄；prepupa：预蛹期；pupa：蛹期；adult：成虫期；纵坐标为发育时间。
41.图7、lcp17基因沉默对棉铃虫死亡率的影响；纵坐标为死亡率。
42.图8、lcp17基因沉默后棉铃虫的表型变化。
43.图9、lcp17基因沉默对棉铃虫取食量的影响；纵坐标为取食量。
44.图10、lcp17基因沉默对棉铃虫体重的影响；横坐标为实验时间，纵坐标为体重。
45.图11、注射cqds-dslcp17后棉铃虫体内lcp17基因表达量；纵坐标为lcp17基因相
对表达量。
46.图12、注射cqds-dslcp17后对棉铃虫死亡率的影响；纵坐标为死亡率。
具体实施方式
47.昆虫的角质层，又称为外骨骼，一种由交联蛋白和几丁质聚合物组成的细胞外结构。在昆虫激素的作用下昆虫每次蜕皮时都会更新角质层，角质层蛋白作为昆虫体表的主要组成部分，近年来一直作为研究变态过程中激素调节和蜕皮过程中基因调控的模型系统而备受关注。目前，有多种昆虫的角质层蛋白已经被鉴定和研究。lcp基因是在昆虫中存在比较多的一个表皮蛋白基因家族，目前在家蚕中分离到lcp17、和lcp22，在德国甲虫中分离得到aglcp9.2、aglcp12.3和aglcp12.6等。在家蚕中，在第4次蜕皮的第一天检测到大量的lcp17和lcp22，并且表达水平一直保持到最后的幼虫龄期的第4天。从德国甲虫中克隆了3个编码角质层蛋白的cdna，命名为aglcp9.2、aglcp12.3和aglcp12.6，发现三种角质层蛋白在表皮中有差异表达。
48.本发明通过序列比对获得了棉铃虫lcp17基因。为了弄清该基因的用途，发明人首先分析了该基因表达的时空特点。结果显示，lcp17基因在棉铃虫的发育阶段均有表达，在其6龄表达量最高，其次是5龄，lcp17在卵、1龄、2龄、3龄、4龄、蛹及成虫(雌虫和雄虫)期的表达量相对较低。棉铃虫lcp17的表达量在其不同组织的表达量不同，在其马氏管中表达量最高，其次是中肠和脂肪体，在表皮中的表达量最低。
49.根据前述表达模式分析结果，为了进一步弄清该基因的作用，申请人考虑沉默该基因的表达。因此，基于rnai技术设计了针对该基因的dsrna，通过注射dslcp17有效降低了虫体内该基因的表达，进而导致幼虫进食减少、发育迟缓并死亡。可见，该基因可作为后续生物防治棉铃虫及其亲缘关系较近昆虫的靶点。为了提高dsrna的沉默效率，发明人选择了碳量子点作为载体，并优化了碳量子点与dsrna的用量关系。
50.下述实施例中所用棉铃虫购买于河南省济源白云实业有限公司，继代饲养于广东省农业害虫生物防治工程技术中心，幼虫饲养材料为人工饲料，成虫用10％的蜂蜜水喂养。在本实验室的人工智能培养箱饲养，培养条件：温度27～28℃，湿度控制在30～40％，光周期14l︰10d。
51.表1下述实施例中用到的引物
52.[0053][0054]
实施例1lcp17基因序列的获得
[0055]
经过ncbi网站使用blast功能比对斜纹夜蛾lcp17基因的棉铃虫同源基因，得到棉铃虫的lcp17核苷酸序列。斜纹夜蛾lcp17基因登录号：loc111347903，棉铃虫lcp17基因登录号：loc110383613。
[0056]
seq id no.1lcp17基因全长
[0057]
cagatttatattcttcgacgaacggccggtttttcaaactggtagcaaaacctcctcatttctattctggacgtttagtatataaagacgaacttgctttaattcaatcagattgaaacaaaaagttgacatcccgcaagcaacatgaaattcttagtagtcctcgccgtagccgtcgcgtgcgcaagcgccgacgtgtctcacgttgtcagcgctgactacagcgcccctgtcgtcaagtccagctacgacatcagccctgagggtgccttccaatacgcgtatgaaaccggcaacggcatctacgcccaggcctctggatctgtcaagaaccagaactccgaatacccctccctggaggtagctggagcctacaaatacaccgcccccgatggtacccccgtggaactgtcctacgtcgctgacgagaacggttacaaaccccagggcgctcatctccccgtcggccccgccatccctgagtacatcgctcgctccctggcctacatcgctgctcaccccccaccagttgagggagtcaagtctgtccccaaacccgcttacggttaagatgtcaacaacaccagctagtacaaaccctactgccattgtattgtagtcaataaagttattattgttcgtga
[0058]
seq id no.2lcp17 cds区
[0059]
atgaaattcttagtagtcctcgccgtagccgtcgcgtgcgcaagcgccgacgtgtctcacgttgtcagcgctgactacagcgcccctgtcgtcaagtccagctacgacatcagccctgagggtgccttccaatacgcgtatgaaaccggcaacggcatctacgcccaggcctctggatctgtcaagaaccagaactccgaatacccctccctggaggtagctggagcctacaaatacaccgcccccgatggtacccccgtggaactgtcctacgtcgctgacgagaacggttacaaaccccagggcgctcatctccccgtcggccccgccatccctgagtacatcgctcgctccctggcctacatcgctgctcaccccccaccagttgagggagtcaagtctgtccccaaacccgcttacggttaa
[0060]
seq id no.3lcp17的编码蛋白
[0061]
mkflvvlava vacasadvsh vvsadysapv vkssydispe gafqyayetg ngiyaqasgs vknqnseyps levagaykyt apdgtpvels yvadengykp qgahlpvgpa ipeyiarsla yiaahpppve gvksvpkpay g
[0062]
实施例2lcp17基因在棉铃虫不同发育阶段和不同组织中的表达模式
[0063]
棉铃虫总rna提取和cdna第一链合成
[0064]
(1)总rna提取按照trizol抽提法进行，并使用琼脂糖凝胶电泳和nanodrop(thermo fisher scientific inc.)来确定质量和浓度；
[0065]
(2)cdna第一链合成：采用反转录试剂盒primescript
tm rt reagent kit with gdna eraser(prefect real time)(takara,rro47a)，根据说明书对所提取的总rna样品进行cdna第一条链的合成，将试剂冰上解冻，瞬时离心，将所有试剂收集与于管底，置于冰上待用。反转录反应体系：5
×
gdna eraser buffer2μl，gdna eraser 1μl，total rna 1μl，rnase free dh2o加至10μl；42℃温育2min。反应体系中继续加入如下成分：primescript rt enzyme mix i 1μl，rt primer mix 1μl，5
×
primerscript buffer 2 4μl，rnase free dh2o加至20μl；37℃，15min；85℃温育5s后，迅速置于冰上冷却，得到的cdna溶液可于-20℃中保存。
[0066]
rt-pcr分析
[0067]
rt-qpcr反应体系如下:cdna 2μl，tb greenⅱ5μl，primer f 0.5μl，primer r 0.5μl，ddh2o 2μl。反应程序为：95℃30s，(98℃：10s，60℃：45s)
×
40，溶解曲线95℃：5s(4.4℃/s)，60℃(2.2℃/s)，95℃0.11℃/s，每上升1℃拍照5次。目的基因的相对表达水平用2-δδct方法计算。
[0068]
结果显示，lcp17基因在棉铃虫的发育阶段均有表达，在其6龄表达量最高，其次是5龄，lcp17在卵、1龄、2龄、3龄、4龄、蛹及成虫(雌虫和雄虫)期的表达量相对较低(图3)。
[0069]
棉铃虫lcp17的表达量在其不同组织的表达量不同，在其马氏管中表达量最高，其次是中肠和脂肪体，在表皮中的表达量最低(图4)。
[0070]
实施例3dslcp17体外合成
[0071]
采用primerpriemer软件设计dsrna引物(表1)，分别在上下游的5’端加上t7启动子序列，并交予生工生物工程公司(上海)股份有限公司进行合成。以收集得到的棉铃虫不同发育阶段的混合cdna为模板，利用合成的引物进行pcr扩增反应，根据试剂盒说明书纯化回收之后(dna纯化回收试剂盒，上海生工)，得到含有t7聚合启动子序列的dslcp17的模板。用从广州擎科生物科技股份有限公司购买得到的绿色荧光蛋白gfp质粒作为模板，通过上述方法得到用于合成dsgfp的模板。用dsrna合成试剂盒hiscribetm t7 in vitreo transcription kit，new england biolabs)分别合成dslcp17以及dsgfp。使用nanodrop2000(thermo scientific)进行定量。保存于-80℃超级低温冰箱备用。
[0072]
seq id no.4dslcp17
[0073]
tagtagtcctcgccgtagccgtcgcgtgcgcaagcgccgacgtgtctcacgttgtcagcgctgactacagcgcccctgtcgtcaagtccagctacgacatcagccctgagggtgccttccaatacgcgtatgaaaccggcaacggcatctacgcccaggcctctggatctgtcaagaaccagaactccgaatacccctccctggaggtagctggagcctacaaatacaccgcccccgatggtacccccgtggaactgtcctacgtcgctgacgagaacggttacaaaccccagggcgctcatctccccgtcggccccgccatccctgagtacatcgctcgctccctggcctacatcgctgctcaccccccaccagttgagggagtcaagtctgtccccaa
[0074]
实施例4dslcp17对棉铃虫lcp基因沉默效率的影响
[0075]
利用显微注射仪(wpi,micro-2t)按照100nl/头的量，分别将dslcp17和dsgfp从腹部倒数第二节注入到体型相同的棉铃虫二龄幼虫体内，每组注射60头，分别于24h和48h挑
取活泼的棉铃虫二龄幼虫，每8头一管，所有样本均设置三个生物学重复。提取所有样本的总rna并逆转录为cdna，采用rt-qpcr检测rnai后lcp17基因的沉默效率。
[0076]
rt-qpcr反应体系如下:cdna 2μl，tb greenⅱ5μl，primer f 0.5μl，primer r 0.5μl，ddh2o 2μl。反应程序为：95℃30s，(98℃：10s，60℃：45s)
×
40，溶解曲线95℃：5s(4.4℃/s)，60℃(2.2℃/s)，95℃0.11℃/s，每上升1℃拍照5次。目的基因的相对表达水平用2-δδct方法计算。
[0077]
结果说明，注射dslcp17后的24小时，lcp17的相对表达量下降了1.95倍，注射dslcp17后的48小时，lcp17的相对表达量下降了3.89倍，与对照组相比均有显著差异(图5)。
[0078]
实施例5dslcp17对棉铃虫发育历期率的影响
[0079]
为了研究注射dslcp17对棉铃虫发育历期的影响，干扰组和处理组分别挑选大小一致的健康二龄幼虫30头，分别注射100ng dslcp17和dsgfp，10头幼虫为一个生物学重复，所有样本均设置3个生物学重复。将上述处理组和对照组幼虫分别放置于温度27～28℃，湿度控制在30～40％，光周期14l︰10d的人工气候箱中培养，饲喂新鲜人工饲料，每天上午十点和下午三点固定时间点统计龄期变化的幼虫数量，计算龄期变化的百分比，分析lcp17基因对棉铃虫发育历期的影响。
[0080]
结果表明：dsgfp对照组的2l幼虫全部变为3l平均需要1.95d；3l幼虫全部变为4l平均需要2.43d；4l幼虫全部变为5l平均需要2.35d；5l幼虫平均在2.45d全部变为6l；6l幼虫平均2.13d全部变为预蛹；预蛹平均2.16d全部化蛹完成；平均历时11.28d全部的蛹羽化为成虫；成虫的生存时间平均在11d，而后死亡。与dsgfp对照相比，沉默lcp17基因后，历期的统计结果显示处理组的2l虫龄持续2.08d，比对照延迟了0.13d；3l虫龄持续2.76d，比对照延迟0.33d；4l虫龄持续2.83d，比对照延迟0.48d；5l虫龄持续2.65d，比对照延迟0.2d；6l虫龄持续2.73d，比对照延迟0.6d；预蛹期持续2.27d，比对照延迟0.11d；蛹期持续11.68d，比对照延迟0.6d；成虫期持续11.02d，比对照延迟0.02d。其中处理组3l、4l、6l、pupa虫龄与对照组相比均差异显著，而2l、5l、prepupa、adult虫龄与对照组无显著差异(图6)。
[0081]
实施例6dslcp17对棉铃虫存活率和取食的影响
[0082]
将dsrna处理组幼虫和对照组的各30头幼虫分别放置于温度27～28℃，湿度控制在30～40％，光周期14l︰10d的人工气候箱中培养，饲喂新鲜人工饲料，每天统计幼虫的死亡数，统计7天。同时拍照观察和记录处理组和对照组棉铃虫的生长发育情况差异。
[0083]
统计注射dslcp17后2龄幼虫发育7天的死亡率，结果表明死亡率为23.33％，对照组死亡率为6.67％，且有显著性差异(图7)。可能因为dsrna在其消化道被部分降解，使其沉默dslcp17后棉铃虫幼虫没有较高的死亡率。但观察其表型，发现在第4天时，对照组已经进入3龄末，而dslcp17处理组中存活的16％仍停留在三龄初(图8)。
[0084]
dsrna处理组幼虫和对照组幼虫各挑选大小一致的健康幼虫30头分别放置于温度27～28℃，湿度控制在30～40％，光周期14l︰10d的人工气候箱中培养，正常饲喂，每天按时称量幼虫鲜重及取食前后的饲料重，用于观察取食量和体重变化。取食量＝取食后的饲料质量-取食前的饲料质量。
[0085]
以注射dsgfp的幼虫为对照，对照取食量的变化是受到蜕皮的影响。在注射dslcp17后前三天幼虫的取食量与对照相比均有下降，但没有显著性差异；到干扰后第四天
注射lcp17基因dsrna的幼虫的取食量显著低于对照，降低了28.97％；第五天注射lcp17基因dsrna的幼虫取食量显著低于对照，为对照取食量的76.56％；干扰后第六天注射lcp17基因dsrna的幼虫取食量显著低于对照，为对照取食量的83.44％；干扰后第七天，注射lcp17基因dsrna的幼虫取食量显著低于对照，比对照降低了23.17％(图9)。
[0086]
分析注射dsrna对棉铃虫的体重的影响，统计两组幼虫的体重发现dslcp17处理组个时间点体重均低于对照，但前四天处理组幼虫的体重与对照组相比没有显著性差异；第五天第六天和第七天处理组幼虫的体重与对照组相比有显著性差异，对照组体重分别是处理组的1.38倍、1.24倍和1.25倍(图10)。
[0087]
实施例7dslcp17搭载cqds后对棉铃虫沉默效率和死亡率的影响
[0088]
选取咪唑修饰的石墨烯纳米材料碳量子点(cqds)(图1)，碳量子点纳米材料购于先丰纳米材料科技有限公司，其直径《10nm，外表带有正电荷，可以与核酸进行静电结合。配置100ng/μl的cqds溶液，将dslcp17稀释到100ng/μl。dsrna︰cqds的体积比依次为1︰0、2︰1、3︰1、4︰1、5︰1、10︰1、11︰1、12︰1、13︰1、14︰1、15︰1、20︰1混合均匀。在1％琼脂糖凝胶上检测了dsrna与不同量cqds的复合物结合的效果。随着体积比的增加，400-bp-dsrna的迁移带强度逐渐增大(图2)，可以看出在除dsrna︰cqds＝1︰0这个比例出现双链条带以外，在dsrna︰cqds＝5︰1时二次出现双链条带，比例越大条带越明显，当dsrna︰cqds＝11︰1时，cqds对dsrna的包裹能力越来越弱，由此可以确定cqds对400-bp-dsrna的承载能力在这个比例时超出限度，故选取这个比例进行后续实验。
[0089]
dsrna与100ng/μl的纳米载体(cqds)以体积比11︰1混合，形成cqds-dslcp17复合物，对照按前述同样方法制备得到cqds-dsgfp复合物。
[0090]
因要保证注射dsrna与注射cqds-dslcp17的总质量一致，所以经过计算，将cqds-dslcp17复合物和cqds-dsgfp复合物从腹部倒数第二节分别注入到体型相同的棉铃虫二龄幼虫体内，每组注射60头，每头处理组注射109nl。
[0091]
将处理组幼虫和对照组的各60头幼虫分别放置于温度27～28℃，湿度控制在30～40％，光周期14l︰10d的人工气候箱中培养，饲喂新鲜人工饲料，分别于注射后24h和48h挑取活泼的棉铃虫二龄幼虫，每8头一管，进行收样，所有样本均设置三个生物学重复。提取所有样本的总rna并逆转录为cdna，采用rt-qpcr检测dslcp17搭载cqds后对棉铃虫的24h和48h的沉默效率。
[0092]
结果表明，注射dslcp17混合液后的24小时，lcp17的相对表达量下降了2.66倍，注射dslcp17混合液后的48小时，lcp17基因的相对表达量下降了6.46倍，与对照组相比均有显著差异(图11)。
[0093]
再将cqds-dslcp17复合物和cqds-dsgfp复合物从腹部倒数第二节分别注入到体型相同的棉铃虫二龄幼虫体内，每组注射60头，每头处理组注射109nl。将处理组幼虫和对照组的各30头幼虫分别放置于温度27～28℃，湿度控制在30～40％，光周期14l︰10d的人工气候箱中培养，饲喂新鲜人工饲料，每天统计幼虫的死亡数，统计7天。
[0094]
统计注射cqds-dslcp17复合物和cqds-dsgfp复合物后2龄幼虫发育7天的死亡率，结果表明处理组死亡率为40％，对照组死亡率为6.67％，且有显著性差异(图12)。
[0095]
此外，鳞翅目昆虫体内有降解rna的酶存在，dsrna在中肠和血淋巴中被降解，使目标害虫最终摄入的量变少，部分rnai成分缺失。用纳米材料包裹了dsrna以后，纳米材料在
dsrna外层，可以保护dsrna不被或减少被dsrna酶的降解，提高dsrna的干扰效率。实验表明负载后，昆虫死亡率由20％提高到了40％(图7和图12)。

技术特征：
1.棉铃虫幼虫表皮蛋白在调控昆虫生长发育和/或昆虫防治中的应用，其特征在于：其氨基酸序列如seq id no.3所示。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于：棉铃虫幼虫表皮蛋白的编码序列如seq id no.1或seq id no.2所示。3.一种防治昆虫的方法，其特征在于：采用rnai技术降低昆虫基因lcp17的表达。4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：所述rnai技术中采用dslcp17实现；所述dslcp17的核苷酸序列如seq id no.4所示。5.根据权利要求4所述方法，其特征在于：采用dslcp17注射昆虫，所述昆虫为棉铃虫。6.根据权利要求5所述方法，其特征在于：所述昆虫为二龄幼虫。7.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述dslcp17采用碳量子点负载；将dslcp17与cqds分别配置成100ng/μl的溶液，然后混合；所述dslcp17与cqds的质量比为11︰1；混合溶液中ds lcp17的最终浓度13000ng/μl。8.降低基因lcp17表达的物质。9.根据权利要求8所述物质，其特征在于：所述降低基因lcp17的表达的物质为dslcp17，所述dslcp17的核苷酸序列如seq id no.4所示。10.权利要求8或9所述降低基因lcp17的表达的物质在昆虫防治中的应用。

技术总结
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种棉铃虫幼虫表皮蛋白基因LCP17及其应用。本发明的目的是为生物防治昆虫提供一种新选择。本发明的技术方案是一种棉铃虫幼虫表皮蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。本发明还提供了棉铃虫幼虫表皮蛋白基因LCP17，其核苷酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示。本发明的基因可作为生物防治昆虫的靶标，为减轻化学农药使用，无公害防治害虫提供新途径。无公害防治害虫提供新途径。无公害防治害虫提供新途径。


技术研发人员：孟建玉 桑文 阳显斌 张梦珂 汪汉成 秦鹏
受保护的技术使用者：贵州省烟草科学研究院
技术研发日：2023.07.25
技术公布日：2023/9/14