一种光电化学检测miRNA-21的方法

一种光电化学检测mirna-21的方法
技术领域
1.本发明涉及一种mirna-21的检测方法，具体是一种基于生物催化诱导cus/cuo-au半导体异质结生成的光电化学microrna-21检测方法，属于光电化学生物分析领域。


背景技术：

2.microrna(mirna)是一种内源性表达的非编码rna，约有18～25个核苷酸，其在生物过程的基因表达中发挥着至关重要的作用。然而，由于mirna体积小、丰度低、易降解和序列相似，其检测仍具有挑战性。因此，开发简单、高灵敏度的mirna检测方法具有重要意义。
3.近年来，对于mirna检测的传统方法主要有微阵列技术、northern印迹杂交技术以及荧光技术等。尽管这些方法在检测方面具有较高的准确性，但相对耗时费力、成本较高、灵敏度低等缺点阻碍了进一步发展。因此，需要一种简单、成本低、灵敏度高的mirna检测技术。
4.与传统检测方法相比，光电化学(pec)检测技术因其价格低廉、检测范围宽、检出限低、操作简单、灵敏度高等优点受到广泛关注。pec过程是指在光的作用下，分子、离子以及半导体材料因吸收光子而使电子被激发而产生电子-空穴对的过程，同时实现光能转化为电能。例如，文献(“flexible photoelectrochemical biosensor for ultrasensitive microrna detection based on concatenated multiplex signal amplification”，y.zhao et al.,biosensors and bioelectronics,194(2021)0956-5663.)中以硫化镉纳米颗粒为光电材料，利用酶催化产生抗坏血酸(aa)作为电子供体以产生电子空穴对，提高光电流响应，由此来检测mirna-21，虽然该方法提供了一个很好的mirna-21的检测方法，但准确性较低，且操作过程较复杂。


技术实现要素：

5.本发明提供的mirna-21的检测方法并非以诊断和治疗疾病为目的，旨在克服现有技术检测mirna-21的方法存在的不足与缺陷提出的改进方法，本发明的目的是在于提供一种光电化学检测mirna-21的方法，该方法基于mirna-21与锁定链的杂交反应，巧妙设计了三维dna walker信号扩增、hrp酶催化h2o2和na2s2o3生成h2s以及h2s与cuo-au反应生成cus策略，以实现对mirna-21的高灵敏度、高选择性的光电化学检测。
6.为了实现上述技术目的，本发明提供了一种光电化学检测mirna-21的方法，该方法包含以下步骤：
7.1)将锁定步行链功能化金纳米粒子、底物链功能化金纳米粒子、mirna-21、二价水溶性锰盐和水混合反应后，离心分离，在上层清液中加入硫代硫酸盐溶液和过氧化氢溶液，继续反应，得到含硫化氢的溶液；
8.2)将cuo-au纳米复合物超声分散至水中后，滴加至电极表面并进行干燥；
9.3)将含硫化氢的溶液滴加至步骤2)的电极表面进行孵育；
10.4)将步骤3)所得电极在电解液中进行光电化学检测，得到光电流响应值；
11.5)将不同浓度的标准mirna-21溶液按步骤1)～4)进行光电化学检测，得到一系列光电流响应值，并构建mirna-21浓度与光电流响应值之间的标准曲线；
12.6)将待测mirna-21溶液按步骤1)～4)进行光电化学检测，获得相应光电流响应值，并根据标准曲线计算待测mirna-21溶液的浓度。
13.本发明技术方案的关键是在于通过步骤1)～步骤3)构建具有光电响应的生物传感器，其原理为：首先，当目标物(mirna-21)存在时，其会与锁定步行链功能化金纳米粒子(wp)上的锁定链进行杂交，释放出步行链，此时步行链与mn
2+
进行识别，并不断与底物链功能化金纳米粒子(tp)上的底物链进行杂交，以诱导wp围绕tp相对运动；然后底物链被mn
2+
特异性dnazyme裂解，hrp酶也同时被释放，随着wp不断地从一个tp的表面移动到下一个tp，获得了丰富的hrp酶，随后，hrp酶可以很好地催化硫代硫酸盐和h2o2反应生成h2s，从而获得溶有h2s的溶液，将其滴加到cuo-au纳米复合物修饰的电极(ito)上，形成具有cus/cuo-au半导体异质结的生物传感器，其具有较强的光电信号，且光电信号的变化值与mirna-21的浓度在一定范围内成线性相关关系，从而可以实现mirna-21浓度的光电化学检测。
14.作为一个优选的方案，将锁定步行链功能化金纳米粒子、底物链功能化的金纳米粒子、mirna-21、二价水溶性锰盐和水在30～40℃下反应1～3h，离心分离，在上层清液中加入硫代硫酸盐溶液和过氧化氢溶液在30～40℃下继续反应10～50min。先利用目标物mirna-21与锁定步行链功能化金纳米粒子上的锁定链进行杂交，从而触发dna walker机制，使更多的底物链被mn
2+
特异性dnazyme裂解，释放出丰富的hrp酶，再通过离心使得hrp酶从walker反应中分离，再利用hrp酶催化硫代硫酸盐和h2o2反应生成含有h2s的溶液。进一步优选，二价水溶性锰盐在水中的浓度为1～3mm，硫代硫酸盐溶液的浓度为5～6nm，过氧化氢溶液的浓度为2～4mm。所述二价水溶性锰盐优选为二氯化锰。所述硫代硫酸盐优选为硫代硫酸钠。优选的水为双蒸水。
15.作为一个优选的方案，所述锁定步行链功能化金纳米粒子通过以下方法制备得到：将步行链与锁定链进行孵育后，再依次加入三(2-氯乙基)磷酸酯孵育和加入金纳米颗粒孵育，即得锁定步行链功能化金纳米粒子。先利用步行链与锁定链进行孵育，利用锁定链将步行链锁住，再加入三(2-氯乙基)磷酸酯孵育以减少dna中二硫键的形成，再利用金纳米颗粒继续孵育，成功修饰在纳米金表面得到锁定步行链功能化金纳米粒子。
16.作为一个较优选的方案，将步行链与锁定链在80～100℃孵育5～15min，再加入三(2-氯乙基)磷酸酯在30～40℃孵育1～2h，再加入金纳米颗粒在30～40℃孵育8～16h。
17.作为一个较优选的方案，所述锁定链的dna序列为：5'-ccg cgg tca aca tca gtc tga taagcta-3'。锁定链包含与mirna-21结合的dna片段。
18.作为一个优选的方案，所述步行链的dna序列为：5'-sh-ttt ttt ttt ttt ttt ttt ttt ttt ttt tct gat gtt gac cgc ggc cag gct agc tac aac gac ctg gac ga-3'。
19.作为一个优选的方案，所述底物链功能化金纳米粒子通过以下方法制备得到：将底物链与三(2-氯乙基)磷酸酯进行孵育后，再依次加入金纳米颗粒孵育和加入sa-hrp酶孵育，即得底物链功能化金纳米粒子。
20.作为一个较优选的方案，底物链与三(2-氯乙基)磷酸酯在30～40℃孵育1～2h，再加入金纳米颗粒在30～40℃孵育8～16h，再加入sa-hrp酶在30～40℃孵育20min～40min；
所述底物链的序列为：5'-sh-ttt ttt ttt ttt ttt cgt cca gg-ra-ru-ggc cgc gg-biotin-3'。
21.作为一个优选的方案，所述cuo-au纳米复合物通过以下方法制备得到：将铜盐溶液和1,3,5-苯甲酸溶液混合进行溶剂热反应，得到cu-mof；将cu-mof和季铵盐表面活性剂溶于水，在搅拌条件下加入haucl4、naoh、抗坏血酸以及金纳米颗粒进行还原反应，得到cuo-au纳米复合物。优选的季铵盐表面活性剂为ctab。
22.作为一个较优选的方案，所述溶剂热反应采用以dmf、乙醇和水按等体积混合的溶剂，反应温度为70～100℃，时间为8～16h；
23.作为一个较优选的方案，所述还原反应的温度为40～60℃，时间为1～3h。
24.作为一个优选的方案，步骤3)中，孵育的温度为室温，时间为30～70min。
25.本发明的纳米金颗粒合成方法如下：将0.6ml 0.035m柠檬酸钠溶液和20ml水加入圆底烧瓶中，然后将上述溶液快速添加到煮沸的0.2ml 0.025m haucl4溶液中，保持沸腾和不断搅拌直至溶液的颜色从黄色变为紫色，将该溶液冷却至室温。
26.本发明的wp合成方法如下：将50ml的2mm步行链和50ml的2mm锁定链在90℃的tris-hcl缓冲液(ph＝8.0)中结合10min，然后冷却到室温以获得两者的结合物，之后在37℃下加入10ml tcep(10mm)并孵化90min，随后在37℃下加入200μl上述方法制得的aunps(ph 9.0)培养12h，将10μl 0.1％tween 20添加到上述混合物中再培养30min。最后，90ml的2m nacl溶液在30min的间隔内分六次加入混合物中，并在37℃下反应24h，离心后，所得的wps在50μl去离子水中重新分散。
27.本发明的tp的制备方法如下：将10μltcep(10mm)加入50ml底物链(5mm)中并在37℃反应1.5h，在37℃下加入100μl上述方法制得的aunps(ph9.0)培养12h，10μl0.1％ tween 20溶液添加到上述混合物中再培养30min，再加入5ml sa-hrp在37℃反应半小时离心得到tps，将其分散在50μl去离子水。
28.本发明的cuo-au纳米复合物的制备方法包括以下具体步骤：(a)分别称取1.65g三水硝酸铜和0.825g btc于50ml烧杯中，再分别依次加入7ml dmf、7ml无水乙醇、7ml去离子水超声溶解10min，完全溶解后将两组液体混合，在此超声10min，转移到100ml的聚四氟乙烯高压反应釜中，放入烘箱，在85℃下反应12h，反应结束后冷却离心，得到的产物用水和乙醇交替洗三次，在50℃下干燥，得到cu-mof；(b)准确称取0.09g cu-mof和0.9g ctab于圆底烧瓶中，加入20ml去离子水，边搅拌边依次加入1ml haucl4(0.025m)、2ml naoh(1m)、200μl抗坏血酸(0.2m)以及200μl上述方法制备的金纳米颗粒，加完所有药品后反应2h，得到cuo-au纳米复合物，整个过程在恒温50℃下进行。
29.本发明的cus/cuo-au半导体异质结形成方法：(a)将cuo-au纳米复合物超声分散后滴加至ito电极表面，室温下干燥；(b)将含有h2s的溶液滴加在cuo-au/ito上，孵育数分钟。进一步优选，cuo-au纳米复合物分散液的浓度为4mg ml-1
。含有h2s的溶液与cuo-au/ito反应时间为60min。最优选的cus/cuo-au半导体异质结形成方法：(a)将4mg的cuo-au超声分散在1ml超纯水中，取20μl滴加至ito电极表面，室温下干燥；(b)将含有h2s的溶液滴加在cuo-au/ito上，孵育60min，形成cus/cuo-au半导体异质结。
30.本发明通过目标物mirna-21触发walker反应，得到hrp酶，利用hrp酶催化na2s2o3和h2o2产生h2s，而h2s与电极上的材料cuo-au具有很好的结合能，目标物mirna-21浓度越
大，最终得到的h2s越多，进而反应后得到更强的光电流信号，从而对目标物mirna-21进行定量。
31.本发明的光电化学检测过程中，采用电解液为na2so4溶液，可见光为激发光，采用三电极系统检测光电流。所述na2so4溶液的浓度为0.1m。
32.本发明技术方案通过cu-mof合成了cuo-au纳米复合物，其具有典型的米粒结构，且具有较大的特异性表面积，为cus的生成提供了丰富的原材料，从而形成了cus/cuo-au半导体异质结。与单独的cuo-au的光电信号相比，cus/cuo-au半导体异质结的光电信号明显增强，这是因为cuo-au与cus的能级相互匹配，形成了级联式的能带结构，有效的促进了光生电子空穴对的分离，显著提高光电流强度，提高检测灵敏度。
33.本发明提供的光电化学检测microrna-21的方法，包含以下具体步骤：
34.(1)光电化学生物传感器的构建：将锁定步行链功能化金纳米粒子(wp)(分散液)、底物链功能化的金纳米粒子(tp)(分散液)、mirna-21、mncl2溶液(2mm)和ddh2o各10μl混合，在37℃下反应2.5h，目标物mirna-21与wp上的锁定链进行杂交，触发dna walker机制，使更多的底物链被mn
2+
特异性dnazyme裂解，释放出丰富的hrp酶；随后，将混合物离心，hrp酶从walker反应中分离，取上清液，向其中加入20μl na2s2o3(5.6nm)和20μl h2o2(3mm)，在37℃下反应30min，使hrp酶催化na2s2o3和h2o2反应产生h2s，而h2s可与cuo反应生成cus，形成cus/cuo-au半导体异质结，使光电流信号增大，得到光电化学生物传感器；
35.(2)mirna-21电化学检测：取20μl的cuo-au(4mg/ml)滴至ito，在室温下干燥。之后，取20μl含h2s的溶液于cuo-au/gce电极，在室温下孵育60min，采用三电极系统，以0.1m的na2so4溶液为电解液，可见光为激发光，检测光电流响应。由于步骤(1)中加入的mirna-21的浓度各不相同，所以释放出步行链的数量也不相同，即含有不同数量的mn
2+
特异性dnazyme，致使释放出hrp酶的数量也不同，从而催化得到h2s的量也不同，导致生成cus/cuo-au半导体异质结的量也不同，所以光电化学响应增加的幅度也不同。重复以上操作，即可根据光电流响应值对标准样浓度绘制标准曲线；用待测液代替mirna-21标准溶液进行上述检测，通过标准曲线获得浓度结果。
36.本发明的cuo-au分散液具体制备方法如下：将4mg的cuo-au粉末超声分散在1ml的超纯水中。
37.相对现有技术，本发明的技术方案带来的有益技术效果：
38.1)由cu-mof制备米粒状的cuo-au纳米复合物具有较大的表面积，其可与h2s反应生成cus，从而形成cus/cuo-au半导体异质结，其能带可相互匹配，有效地促进了光生电子空穴对的分离，显著提高光电流强度；
39.2)本发明通过基于生物分子的扩增策略来提高检测灵敏度，dna walker信号扩增反应由目标物触发，释放的步行链可进行循环扩增，因而大量底物链与行走链杂交，释放出大量hrp酶，加入na2s2o3和h2o2后，可催化产生大量的h2s，以形成cus/cuo-au半导体异质结，从而提高光电流强度；
40.3)本发明通过mirna-21与锁定链的特异性识别，采用dna walker信号扩增策略，利用生物催化生成的cus/cuo-au半导体异质结提高光电流强度，以实现对mirna-21的高灵敏，高选择性的光电检测；
41.4)本发明构建的用于mirna-21的信号增大型光电化学传感策略，在0.01～1000pm
浓度范围内，光电流差与目标物浓度对数存在良好的线性关系，具有线性范围宽、检测线低的优点。
附图说明
42.图1为光电化学检测microrna-21的方法的原理示意图。
43.图2中(a)为cu-mof扫描电镜图，(b)为cuo-au纳米复合物扫描电镜图。
44.图3为cuo-au纳米复合物能谱图。
45.图4为实施例1对标准样的检测结果；a为实施例1检测目标物浓度与对应的光电流响应曲线；b为实施例1光电流响应值与检测目标物浓度对数线性图；c为实施例1的选择性考察结果。
具体实施方式
46.下面通过具体实施示例对本发明的技术方案做进一步说明，但是不能以此限制本发明的范围。
47.为获得该方法的最佳性能分析，对几种重要的实验条件进行了优化。
48.(1)探究了mn
2+
浓度对walker机理的影响，在1～3mm浓度范围内对其信号进行测定，得到在mn
2+
浓度为2mm时，信号值达到最佳值。(2)探究了在1～3h范围内反应持续时间对dna walker性能的影响，得到最佳反应持续时间为2.5h。(3)探究了在10～50min范围内酶催化硫化氢产生的最佳时间，得到在30min时信号值最高。(4)探究了在30～70min范围内硫化氢和cuo-au的反应时间对信号检测的影响，得到最佳反应时间为60min。以下实例条件均在最优条件进行。
49.实施例1
50.(1)分别称取1.65g三水硝酸铜和0.825g btc于50ml烧杯中，再分别依次加入7ml dmf、7ml无水乙醇、7ml去离子水超声溶解10min，完全溶解后将两组液体混合，超声10min，转移到100ml的聚四氟乙烯高压反应釜中，放入烘箱，在85℃下反应12h，反应结束后冷却离心，得到的产物用水和乙醇交替洗三次，在50℃下干燥，得到cu-mof；将0.6ml柠檬酸钠(0.035m)加入到装有20ml水的圆底烧瓶中，加热至沸后快速加入0.2ml haucl4(0.025m)，保持微沸状态，继续搅拌，颜色由浅黄到无色灰，最后变为酒红色，在4℃下避光保存得到au nps；称取0.0873g cu-mof和0.9111g ctab于圆底烧瓶中，加入去离子水，边搅拌边依次加入1ml haucl4(0.025m)、2ml naoh(1m)、200μl抗坏血酸(0.2m)以及200μl au nps，加完所有药品后反应2h，得到黑色粉末，即cuo-au纳米复合物，整个过程在恒温50℃下进行。
51.(2)将4mg步骤(1)制得的cuo-au粉末超声分散在1ml的超纯水中，并取20μl滴加在ito表面，室温下干燥后，得到cuo-au/ito电极。
52.(3)取50μl步行链(2μm)和50μl锁链(10μm)在90℃下孵育10min，冷却至室温后，加入10μl tcep(10mm)在37℃下反应1.5h，随后，加入200μlaunps(ph＝9)继续在37℃下孵育12h，加入10μl 0.1％ tween 20溶液再次反应30min。最后，以30min为间隔分六次将90μl nacl(2m)加入到所得混合物中在37℃反应24h，离心后得到wp，重新分散在50μl灭菌水中，在4℃下避光保存。
53.(4)取50μl底物链(5μm)，加入10μl tcep(10mm)在37℃下反应1.5h，随后，加入100
μlau nps在37℃下孵育12h，再加入5μl 0.1％ tween 20溶液再次反应30min，随后，以30min为间隔分六次将90μl nacl(2m)加入到所得混合物中在37℃反应24h，最后向混合物中加入5μl sa-hrp酶，并在37℃下反应30min后离心，得到tp，重新分散在50μl ddh2o中，在4℃下避光保存。
54.(5)取上述制备的wp(分散液)、tp(分散液)、mirna-21、mncl2(2mm)和ddh2o各10μl混合，在37℃下反应2.5h，目标物mirna-21与wp上的锁定链进行杂交，触发dna walker机制，使更多的底物链被mn
2+
特异性dnazyme裂解，释放出丰富的hrp酶；
55.(6)将步骤(5)所得的裂解产物进行离心，hrp酶从walker反应中分离，取上清液，向其中加入20μl na2s2o3(5.6nm)和20μl h2o2(3mm)，在37℃下反应30min，使hrp酶催化na2s2o3和h2o2反应产生h2s，得到含有h2s的溶液。
56.(7)取20μl步骤(6)所得的含硫化氢的溶液滴加在步骤(2)的电极上，室温下孵育60min，在电极表面催化形成含cus的复合沉积物，以0.1m na2so4溶液为电解液，500w xe灯为光源，检测光电流响应。由于dna walker的信号放大作用，使得光电流响应值增大，且电流响应值与mirna-21浓度具有确定的关系，从而实现对mirna-21的灵敏检测；用待测液代替mirna-21标准液进行上述检测，通过标准曲线获得浓度结果。
57.实施例1所用dna序列【购买于生工生物工程(上海)股份有限公司 如下：
[0058][0059]
图1为本发明所涉及的一种生物催化诱导cus/cuo-au半导体异质结生成的光电化学microrna-21检测方法的原理及过程示意图。图2为cu-mof和cuo-au复合材料的扫描电镜图，扫描电镜图显示cu-mof呈典型的八面体形貌，直径大约在10～20μm之间，合成cuo-au纳米复合物后，破坏了原有的八面体结构，生成了呈米粒状的小颗粒，有较大的特异性表面积，为cus的生成提供了足够大的负载面积，从而合成cus/cuo-au复合材料，增强光电响应。图3的eds能谱结果表明cuo-au纳米复合物主要由铜、氧、金组成。图4为实施例1对标准样检测结果，如图4b显示，在0.01～1000pm的mirna-21浓度范围内，光电流响应值与目标物浓度对数存在良好的线性关系。此外，为了证明此发明在生活中的实际应用性，本发明还考察了该方法对mirna-21的特异性和选择性，且选择mirna-10b、mirna-141和mirna-155作为干扰物。实验结果表明，高浓度干扰物的光电流与空白样品的光电流响应无明显差异。因此，此种用于mirna-21检测的方法具有良好的选择性和特异性(图4c)。
[0060]
以上所述仅为本发明的最佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

技术特征：
1.一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：包含以下步骤：1)将锁定步行链功能化金纳米粒子、底物链功能化金纳米粒子、mirna-21、二价水溶性锰盐和水混合反应后，离心分离，在上层清液中加入硫代硫酸盐溶液和过氧化氢溶液，继续反应，得到含硫化氢的溶液；2)将cuo-au纳米复合物超声分散至水中后，滴加至电极表面并进行干燥；3)将含硫化氢的溶液滴加至步骤2)的电极表面进行孵育；4)将步骤3)所得电极置于电解液中进行光电化学检测，得到光电流响应值；5)将不同浓度的标准mirna-21溶液按步骤1)～4)进行光电化学检测，得到一系列光电流响应值，并构建mirna-21浓度与光电流响应值之间的标准曲线；6)将待测mirna-21溶液按步骤1)～4)进行光电化学检测，获得相应光电流响应值，并根据标准曲线计算待测mirna-21溶液的浓度。2.根据权利要求1所述的一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：将锁定步行链功能化金纳米粒子、底物链功能化的金纳米粒子、mirna-21、二价水溶性锰盐和水在30～40℃下反应1～3h，离心分离，在上层清液中加入硫代硫酸盐溶液和过氧化氢溶液在30～40℃下继续反应10～50min。3.根据权利要求1或2所述的一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：所述锁定步行链功能化金纳米粒子通过以下方法制备得到：将步行链与锁定链进行孵育后，再依次加入三(2-氯乙基)磷酸酯孵育和加入金纳米颗粒孵育，即得锁定步行链功能化金纳米粒子。4.根据权利要求3所述的一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：将步行链与锁定链在80～100℃孵育5～15min，再加入三(2-氯乙基)磷酸酯在30～40℃孵育1～2h，再加入金纳米颗粒在30～40℃孵育8～16h。5.根据权利要求4所述的一种光电化学检测microrna-21的方法，其特征在于：所述锁定链的dna序列为：5'-ccgcggtcaacatcagtctgataagcta-3'；所述步行链的dna序列为：5'-sh-ttt ttt ttttttttttttttttttttt tct gat gtt gac cgc ggc cag gct agc tac aac gac ctg gac ga-3'。6.根据权利要求1或2所述的一种光电化学检测microrna-21的方法，其特征在于：所述底物链功能化金纳米粒子通过以下方法制备得到：将底物链与三(2-氯乙基)磷酸酯进行孵育后，再依次加入金纳米颗粒孵育和加入sa-hrp酶孵育，即得底物链功能化金纳米粒子。7.根据权利要求6所述的一种光电化学检测microrna-21的方法，其特征在于：底物链与三(2-氯乙基)磷酸酯在30～40℃孵育1～2h，再加入金纳米颗粒在30～40℃孵育8～16h，再加入sa-hrp酶在30～40℃孵育20min～40min；所述底物链的序列为：5'-sh-ttt ttt ttttttttt cgt cca gg-ra-ru-ggc cgc gg-biotin-3'。8.根据权利要求1所述的一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：所述cuo-au纳米复合物通过以下方法制备得到：将铜盐溶液和1,3,5-苯甲酸溶液混合进行溶剂热反应，得到cu-mof；将cu-mof和季铵盐表面活性剂溶于水后，在搅拌条件下加入haucl4、naoh、抗坏血酸以及金纳米颗粒进行还原反应，得到cuo-au纳米复合物。9.根据权利要求8所述的一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：所述溶剂热反应采用以dmf、乙醇和水按等体积混合的溶剂，反应温度为70～100℃，时间为8～16h；
所述还原反应的温度为40～60℃，时间为1～3h。10.根据权利要求1所述的一种光电化学检测mirna-21的方法，其特征在于：步骤3)中，孵育的温度为室温，时间为30～70min。

技术总结
本发明公开了一种光电化学检测miRNA-21的方法，该方法将锁定步行链功能化金纳米粒子(WP)、底物链功能化金纳米粒子(TP)、miRNA-21、二价水溶性锰盐和水混合反应产生HRP，利用HRP催化Na2S2O3和H2O2反应产生H2S，同时通过Cu-MOF合成CuO-Au纳米复合物并修饰在电极上，利用H2S和电极上修饰的CuO-Au纳米复合物反应生成CuS/CuO-Au复合物，使得光电流大幅度增大，从而构建光电流的变化与miRNA-21浓度的线性关系，以实现miRNA-21的光电化学检测。该方法基于miRNA-21与锁定链的特异性识别，设计了DNA Walker信号扩增、利用生物催化诱导CuS/CuO-Au半导体异质结放大信号，以实现对miRNA-21的高灵敏度、高选择性的光电方法检测。高选择性的光电方法检测。高选择性的光电方法检测。


技术研发人员：汤娟 简惠新 曾海森 孟文勤 翟佳羽
受保护的技术使用者：江西师范大学
技术研发日：2022.11.28
技术公布日：2023/9/23