消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法与流程

1.本发明涉及中药检测技术领域，特别是涉及一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法。


背景技术：

2.消渴丸具有滋肾养阴，益气生津之功效，主治气阴两虚所致的消渴病，收载于《中华人民共和国药典》2020年版。消渴丸处方中地黄、黄芪和玉米须等含有大量糖类成分，主要由水苏糖、棉籽糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、d-甘露醇糖等组成。
3.近年来，中药中寡糖被报告具有降血糖、调节糖代谢、降低血浆内毒素等药理作用。在消渴丸工艺过程中，处方药材通过水煎煮入药，引起糖类成分分解，产生大量的水溶性游离寡糖，这些寡糖可能是消渴丸潜在的主要药效物质。但是，消渴丸中水溶性寡糖如水苏糖和棉籽糖的含量测定鲜有研究报告，难以有效评价消渴丸的质量。行业内亟需一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，为消渴丸的全面质量控制及评价提供依据。


技术实现要素：

4.基于此，本发明提供了一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，为消渴丸的全面质量控制及评价提供依据。
5.技术方案如下：
6.一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，包括如下步骤：
7.取水苏糖对照品和棉籽糖对照品，制备混合对照品溶液；
8.取消渴丸样品，制备供试品溶液；
9.采用超高效液相色谱-质谱联用法分别对所述混合对照品溶液与所述供试品溶液进行检测；
10.其中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件包括：流动相a为水，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱；
11.所述梯度洗脱的程序包括：
12.0min～7min，流动相a的体积百分数为100％，流动相b的体积百分数为0％；
13.7min～8min，流动相a的体积百分数从100％变化至5％，流动相b的体积百分数从0％变化至95％；
14.8min～15min，流动相a的体积百分数为5％，流动相b的体积百分数为95％；
15.15min～17min，流动相a的体积百分数从5％变化至100％，流动相b的体积百分数从95％变化至0％。
16.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：流速为0.15ml/min～0.25ml/min。
17.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：柱温为28℃～32℃。
18.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：所采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。
19.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：所采用的色谱柱的柱长为100mm，内径为3.0mm，内部填充物的粒径为2.1μm。
20.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：进样体积为1.8μl～2.5μl。
21.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的质谱条件包括；
22.采用电喷雾离子源；喷雾器压力：20psi～30psi；毛细管电压：3800v～4200v；气体温度：300℃～400℃；气体流速：15l/min～20l/min；扫描方式为多反应检测；
23.负离子模式下，选择离子质荷比为665/383的离子对对水苏糖进行检测，离子质荷比为503/179的离子对对棉籽糖进行检测。
24.在其中一个实施例中，制备混合对照品溶液包括如下步骤：
25.将水苏糖对照品和棉籽糖对照品与水混合，配制所述混合对照品溶液。
26.在其中一个实施例中，在所述混合对照品溶液中，所述水苏糖的浓度为100ppb～20000ppb，所述棉籽糖的浓度为50ppb～10000ppb。
27.在其中一个实施例中，制备供试品溶液包括如下步骤：
28.取消渴丸样品，加水提取，固液分离取提取液，配制所述供试品溶液。
29.在其中一个实施例中，提取的方式为恒温震荡提取，温度为25℃～40℃，频率为40khz～60khz，时间为2min～20min。
30.在其中一个实施例中，固液分离的方法为离心，转速为8000r/min～12000r/min，时间为1min～15min。
31.本发明至少具有如下有益效果：
32.本发明通过超高效液相色谱-质谱联用法对水苏糖和棉籽糖混合对照品溶液与以及消渴丸制成的供试品溶液进行检测，能够实现对消渴丸中的水苏糖和棉籽糖进行定性定量检测，为消渴丸的全面质量控制及评价提供依据，并且，具有操作简单、检测限低、方法快速简便、专属性好及适用性强等优点。另外，该方法的线性关系良好，稳定性、精密度和重复性满足检测要求。
附图说明
33.图1为本发明一实施例所示的供试品溶液全扫描质谱图(a)、棉籽糖离子对提取质谱图(b)和水苏糖离子对提取质谱图(c)；
34.图2为本发明一实施例所示的水苏糖对照品溶液线性回归曲线图；
35.图3为本发明一实施例所示的棉籽糖对照品溶液线性回归曲线图。
具体实施方式
36.为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
37.除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的
技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。
38.在使用本文中描述的“包括”、“具有”、和“包含”的情况下，意图在于覆盖不排他的包含，除非使用了明确的限定用语，例如“仅”、“由
……
组成”等，否则还可以添加另一部件。
39.本发明中的词语“优选地”、“更优选地”、“较佳地”、“更佳地”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。即，在本发明中，“优选地”、“更优选地”、“较佳地”、“更佳地”等仅为描述效果更好的实施方式或实施例，但并不构成对本发明防护范围的限制。
40.在本发明中，“进一步”、“更进一步”、“特别”等用于描述目的，表示内容上的差异，但并不应理解为对本发明保护范围的限制。
41.在本发明中，“至少一种”的含义是一种以上，如一种，两种及两种以上。“多种”或“几种”的含义是至少两种，例如两种，三种等，“多层”的含义是至少两层，例如两层，三层等，除非另有明确具体的限定。在本发明的描述中，“若干”的含义是至少一个，例如一个，两个等，除非另有明确具体的限定。
42.当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
43.如果没有特别的说明，本发明的所有步骤可以顺序进行，也可以随机进行。例如，所述方法包括步骤(a)和(b)，表示所述方法可包括顺序进行的步骤(a)和(b)，也可以包括顺序进行的步骤(b)和(a)。例如，所述提到所述方法还可包括步骤(c)，表示步骤(c)可以任意顺序加入到所述方法，例如，所述方法可以包括按照步骤(a)、(b)和(c)，也可包括步骤(a)、(c)和(b)，也可以包括步骤(c)、(a)和(b)等。
44.除非相反地提及，否则单数形式的术语可以包括复数形式，并不能理解为其数量为一个。
45.在本发明中，“以上”或“以下”均包括本数。如，1以下，包括1。
46.在本发明中，重复x操作n次，指x操作总共进行了n次。如，重复清洗操作3次，指清洗操作总共进行了3次。
47.近年来，中药中寡糖被报告具有降血糖、调节糖代谢、降低血浆内毒素等药理作用，行业内对其定性或定量分析展开了较多研究，如目前已报道一种测定发酵豆粕中水苏糖含量的方法，或复方阿胶浆中低聚糖的检测方法及复方阿胶浆的低聚糖uplc-ms对照指纹图谱的构建。
48.消渴丸具有滋肾养阴，益气生津之功效，主治气阴两虚所致的消渴病。消渴丸处方
中地黄、黄芪和玉米须等含有大量糖类成分，主要由水苏糖、棉籽糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、d-甘露醇糖等组成，但针对消渴丸中水溶性寡糖如水苏糖和棉籽糖的含量测定鲜有研究报告，难以有效评价消渴丸的质量。
49.针对上述问题，本发明提供了一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，为消渴丸的全面质量控制及评价提供依据。
50.技术方案如下：
51.一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，包括如下步骤：
52.取水苏糖对照品和棉籽糖对照品，制备混合对照品溶液；
53.取消渴丸样品，制备供试品溶液；
54.采用超高效液相色谱-质谱联用法分别对所述混合对照品溶液与所述供试品溶液进行检测；
55.所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件包括：流动相a为水，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱；
56.所述梯度洗脱的程序包括：
57.0min～7min，流动相a的体积百分数为100％，流动相b的体积百分数为0％；
58.7min～8min，流动相a的体积百分数从100％变化至5％，流动相b的体积百分数从0％变化至95％；
59.8min～15min，流动相a的体积百分数为5％，流动相b的体积百分数为95％；
60.15min～17min，流动相a的体积百分数从5％变化至100％，流动相b的体积百分数从95％变化至0％。
61.通过超高效液相色谱-质谱联用法对水苏糖和棉籽糖混合对照品溶液与以及消渴丸制成的供试品溶液检测，能够实现对消渴丸中的水苏糖和棉籽糖进行定性定量检测，为消渴丸的全面质量控制及评价提供依据，并且，具有操作简单、检测限低、方法快速简便、专属性好及适用性强等优点。另外，该方法的线性关系良好，稳定性、精密度和重复性满足检测要求。
62.下面通过分步描述的方式对本发明的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法进行详细描述。具体地：
63.s100取水苏糖对照品和棉籽糖对照品，制备混合对照品溶液
64.在其中一个实施例中，制备混合对照品溶液包括如下步骤：
65.将水苏糖对照品和棉籽糖对照品与水混合，配制所述混合对照品溶液。
66.在其中一个实施例中，在所述混合对照品溶液中，所述水苏糖的浓度为100ppb～20000ppb，包括但不限于为100ppb、150ppb、200ppb、250ppb、300ppb、400ppb、500ppb、600ppb、700ppb、800ppb、900ppb、1000ppb、1500ppb、2000ppb、2500ppb、3000ppb、3500ppb、4000ppb、4500ppb、5000ppb、5500ppb、6000ppb、6500ppb、7000ppb、7500ppb、8000ppb、8500ppb、9000ppb、9500ppb、10000ppb、11000ppb、12000ppb、13000ppb、14000ppb、15000ppb、16000ppb、17000ppb、18000ppb、19000ppb或20000ppb；所述棉籽糖的浓度为50ppb～10000ppb，包括但不限于为50ppb、100ppb、150ppb、200ppb、250ppb、300ppb、400ppb、500ppb、600ppb、700ppb、800ppb、900ppb、1000ppb、1500ppb、2000ppb、2500ppb、3000ppb、3500ppb、4000ppb、4500ppb、5000ppb、5500ppb、6000ppb、6500ppb、7000ppb、
7500ppb、8000ppb、8500ppb、9000ppb、9500ppb或10000ppb。
67.可以理解地，混合对照品溶液的水为纯水，进一步优选为超纯水。
68.s200取消渴丸样品，制备供试品溶液
69.在其中一个实施例中，制备供试品溶液包括如下步骤：
70.取消渴丸样品，加水提取，固液分离取提取液，配制所述供试品溶液。
71.在其中一个实施例中，提取的方式为恒温震荡提取，温度为25℃～40℃，包括但不限于为25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃；频率为40khz～60khz，包括但不限于为40khz、42khz、44khz、46khz、48khz、50khz、52khz、54khz、56khz、58khz或60khz；时间为2min～20min，包括但不限于为2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min或20min。
72.可以理解地，提取的次数不限于1次，可选地，提取总次数为1次、2次、3次、4次或5次。在一个具体的示例中，提取的方式为恒温震荡提取，温度为30℃，频率为40khz，单次提取的时间为3min，提取总次数为3。
73.在其中一个实施例中，固液分离的方法为离心，离心的转速为8000r/min～12000r/min，包括但不限于为8000r/min、8500r/min、9000r/min、9500r/min、10000r/min、11000r/min或12000r/min；离心的时间为1min～15min，包括但不限于为1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min或15min。
74.可以理解地，离心的次数不限于1次，可选地，离心总次数为1次、2次、3次、4次或5次。在一个具体的示例中，离心的转速为11000r/min，单次离心的时间为1min，离心总次数为3。
75.进一步地，制备供试品溶液包括如下步骤：
76.取消渴丸样品，加水提取第1次，固液分离取提取液1；
77.加水提取第2次，固液分离取提取液2；
78.加水提取第3次，固液分离取提取液3；
79.合并提取液1、提取液2和提取液3，加水定容，稀释，配制所述供试品溶液。
80.s300采用超高效液相色谱-质谱联用法分别对所述混合对照品溶液与所述供试品溶液进行检测；其中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件包括：流动相a为水，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱；
81.所述梯度洗脱的程序包括：
82.0min～7min，流动相a的体积百分数为100％，流动相b的体积百分数为0％；
83.7min～8min，流动相a的体积百分数从100％变化至5％，流动相b的体积百分数从0％变化至95％；
84.8min～15min，流动相a的体积百分数为5％，流动相b的体积百分数为95％；
85.15min～17min，流动相a的体积百分数从5％变化至100％，流动相b的体积百分数从95％变化至0％。
86.采用超高效液相色谱-质谱联用法对水苏糖和棉籽糖混合对照品溶液与以及消渴丸制成的供试品溶液进行检测，能够实现对消渴丸中的水苏糖和棉籽糖进行定性定量检测，为消渴丸的全面质量控制及评价提供依据，并且，具有操作简单、检测限低、方法快速简
便、专属性好及适用性强等优点。另外，该方法的线性关系良好，稳定性、精密度和重复性满足检测要求。
87.本发明的超高效液相色谱，采用17min即可完成梯度洗脱程序，耗时短，结果准确，表现出省时高效的优点。
88.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：流速为0.15ml/min～0.25ml/min，包括但不限于为0.15ml/min、0.16ml/min、0.17ml/min、0.18ml/min、0.19ml/min、0.20ml/min、0.21ml/min、0.22ml/min、0.23ml/min、0.24ml/min或0.25ml/min。在一个具体示例中，流速为0.20ml/min。
89.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：柱温为28℃～32℃，包括但不限于为28℃、29℃、30℃、31℃或32℃。在一个具体示例中，柱温为30℃。
90.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：所采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，包括但不限于为waters。
91.进一步地，所述超高效液相色谱-质谱联用法所采用的色谱柱的柱长为100mm，内径为3.0mm，内部填充物的粒径为2.1μm，如waters hss t3柱。
92.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：进样体积为1.8μl～2.5μl，包括但不限于为1.8μl、1.9μl、2.0μl、2.1μl、2.2μl、2.3μl、2.4μl或2.5μl。
93.在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的质谱条件还包括；
94.采用电喷雾离子源(esi)；喷雾器压力：20psi～30psi，包括但不限于为20psi、22psi、25psi、28psi或30psi；毛细管电压：3800v～4200v，包括但不限于为3800v、3900v、4000v、4100v或4200v；气体温度：300℃～400℃，包括但不限于为300℃、320℃、350℃、380℃或400℃；气体流速：15l/min～20l/min，包括但不限于为15l/min、16l/min、17l/min、18l/min、19l/min或20l/min；扫描方式为多反应检测；
95.负离子模式下，选择离子质荷比为665/383的离子对对水苏糖进行检测，离子质荷比为503/179的离子对对棉籽糖进行检测。
96.进一步地，所述超高效液相色谱-质谱联用法的质谱条件包括；
97.采用三重四极杆质谱检测器，采用电喷雾离子源；喷雾器压力：25psi；毛细管电压：4000v；气体温度：350℃；气体流速：15l/min；扫描方式为多反应检测；
98.负离子模式下，选择离子质荷比为665/383的离子对对水苏糖进行检测，离子质荷比为503/179的离子对对棉籽糖进行检测。
99.以下结合具体实施例对本发明进行进一步描述。
100.实施例1
101.1.仪器、样品与试剂
102.仪器：agilent 1260液相色谱-g6400系列三重四级杆质谱联用仪(美国安捷伦科技有限公司)；sartorius bs 224s型十万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；mettler toledo xp26百万分之一电子天平(梅特勒-托利多国际有限公司)；sb-5200d型超声波清洗机(宁波新芒生物科技股份有限公司)；milli-q超纯水系统(密理博中国有限公司)；sha-b恒温振荡器(常州澳华仪器有限公司)；tg16-ws台式高速离心机(湖南
湘仪实验室仪器开发有限公司)。
103.对照品：水苏糖(批号：b21193，含量98％)、棉籽糖(批号：71018，含量98％)均购购自上海源叶生物科技有限公司；样品：消渴丸粉末，由广州白云山中一药业有限公司生产提供，生产批号：xs0001、xs0002、xs0003、x01051、x01052、x01053；试剂：甲醇为质谱纯；水为自制超纯水。
104.2方法与结果
105.2.1液相色谱与质谱条件
106.2.1.1色谱条件
107.色谱柱waters hss t3柱(3.0mm
×
100mm,2.1μm)；流动相a为纯水，流动相b为甲醇，梯度洗脱(0min～7.0min，体积百分数100％a；7.0min～8.0min，体积百分数100％
→
5％a；8.0min～15.0min，体积百分数5％a；15.0min～17.0min，体积百分数5％
→
100％a)，流速为0.2ml/min；柱温：30℃；进样量：2μl，运行时间：17min。
108.2.1.2质谱条件
109.采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子源(esi)；喷雾器压力：25psi；毛细管电压：4000v；氮气温度：350℃；氮气流速：15l
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；负离子模式下选择离子质荷比为(m/z)665/383的离子对与离子质荷比为(m/z)503/179的离子对分别对水苏糖和棉籽糖进行定性定量检测，mrm分析方法所得质谱图见图1。
110.2.2溶液的配制
111.2.2.1对照品溶液
112.精密称取水苏糖对照品4mg、棉籽糖对照品2mg，置于20ml容量瓶中，加入纯水溶解并定容稀释制成200μg
·
ml
－1
的水苏糖、100μg
·
ml
－1
的棉籽糖浓度的混合对照品储备液。分别精密移取混合对照品储备液1000μl、500l、250μl、50μl、25μl、5μl至不同的10ml容量瓶中，加纯水稀释并定容，对应制得1至6号混标系列工作溶液。混标系列工作溶液中各化合物对应浓度见表1。
113.表1混标系列工作溶液中各化合物浓度
[0114][0115]
2.2.2供试品溶液的配制
[0116]
精密称取消渴丸粉末0.3g，置50ml离心管中，加入纯水30ml,平放置于恒温震荡仪上，恒温30℃震荡5min，11000r/min离心1min，倾出上清液，置于100ml容量瓶中，离心管底部残渣再加入30ml纯水，重复“恒温震荡-离心”操作3次，最后纯水定容至100ml，摇匀；用移液抢准确移取100μl提取液，置于2ml pe管中，再用移液枪加入900μl的纯水，摇匀，用0.22μm水相滤膜过滤，置于进样小瓶，即得供试样品溶液。
[0117]
2.3线性关系考察
[0118]
精密移取混合对照品储备液，加入纯水稀释至相应浓度的标准曲线系列对照品溶液。按“2.1液相色谱与质谱条件”进行测定，以对照品浓度(x)为横坐标，峰面积(y)为纵坐标，进行线性回归，结果见表2。水苏糖标准曲线方程为y＝26.02x+13239.91，r2＝0.9927；
棉籽糖标准曲线方程y＝26.55x+50222.90，r2＝0.9954。结果表明，水苏糖对照品在100ppb～20000ppb线性关系良好，见图2；棉籽糖对照品在50ppb～10000ppb线性关系良好，见图3。
[0119]
表2线性关系考察结果
[0120][0121]
2.4精密度试验
[0122]
取同一浓度的混合对照品储备液平行测定6次，所得峰面积见表3。6次平行测定试验水苏糖和棉籽糖峰面积rsd分别为1.98％和0.96％，见表3。表明该方法的精密度良好。
[0123]
表3精密度检测结果表
[0124][0125]
2.5稳定性试验
[0126]
精密称取消渴丸样品粉末0.3g，按“2.2”项下制备方法制备成供试品溶液，取同一消渴丸供试品溶液，分别于0h，12h，24h按“2.1”项下条件测定水苏糖和棉籽糖，求得含量，计算rsd值，结果见表4。结果显示，棉籽糖和水苏糖的含量计算得rsd分别为2.15％和0.52％，表明24h内含量基本稳定。
[0127]
表4方法稳定性考察结果
[0128][0129]
2.6重复性试验
[0130]
取同一消渴丸粉末0.3g，按照“2.2”项下的方法制备供试品溶液，平行制备6份，分别进样，按“2.1”项下条件测定水苏糖和棉籽糖，求得含量，计算rsd值，结果见表5。结果显示，棉籽糖和水苏糖的含量计算得rsd分别为2.35％和1.17％，表明重复性良好。
[0131]
表5方法重复性考察结果
[0132]
[0133]
2.7加样回收率
[0134]
取重复性试验同批次己知含量消渴丸样品粉末约0.15g，精密称定，精密加入等比例的混合对照品溶液，平行6份，同供试品溶液制备方法制备溶液，按照样品测定方法测定2种待测物的含量，结果见表6。
[0135]
计算公式：加样回收率＝(测得总量-样品原有含量)/对照品加入量*100％，求水苏糖和棉籽糖平均回收率以及rsd，结果见表6。结果显示，水苏糖的加样回收率在98.96％～107.43％，平均加样回收率为104.45％，rsd2.75％；棉籽糖的加样回收率在95.62％～102.51％，平均加样回收率为99.70％，rsd3.87％。
[0136]
表6方法加样回收率考察结果
[0137][0138]
实施例2
[0139]
1.仪器、样品与试剂
[0140]
仪器：agilent 1260液相色谱-g6400系列三重四级杆质谱联用仪(美国安捷伦科技有限公司)；sartorius bs 224s型十万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；mettler toledo xp26百万分之一电子天平(梅特勒-托利多国际有限公司)；sb-5200d型超声波清洗机(宁波新芒生物科技股份有限公司)；milli-q超纯水系统(密理博中国有限公司)；sha-b恒温振荡器(常州澳华仪器有限公司)；tg16-ws台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司)。
[0141]
对照品：水苏糖(批号：b21193，含量98％)、棉籽糖(批号：71018，含量98％)均购购自上海源叶生物科技有限公司；样品：消渴丸粉末，由广州白云山中一药业有限公司生产提供，生产批号：xs0001、xs0002、xs0003、x01051、x01052、x01053；试剂：甲醇为质谱纯；水为自制超纯水。
[0142]
2方法与结果
[0143]
2.1各样品含量测定结果
[0144]
取消渴丸样品粉末约0.3g，根据已建立的色谱条件和质谱方法进行6批消渴丸样
品粉末测定，外标法计算消渴丸中水苏糖和棉籽糖的含量，结果见表7。
[0145]
表7 6批样品测定结果
[0146][0147]
综上可知，本发明对高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测消渴丸中的水苏糖和棉籽糖的质谱条件进行了优化，经验证，该方法的线性关系良好，稳定性、精密度和重复性满足检测要求。采用本发明建立的方法检测消渴丸中的水苏糖和棉籽糖含量，具有处理简单、检测限低、方法快速简便、专属性好及适用性强等的特点。
[0148]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0149]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

技术特征：
1.一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：取水苏糖对照品和棉籽糖对照品，制备混合对照品溶液；取消渴丸样品，制备供试品溶液；采用超高效液相色谱-质谱联用法分别对所述混合对照品溶液与所述供试品溶液进行检测；其中，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件包括：流动相a为水，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序包括：0min～7min，流动相a的体积百分数为100％，流动相b的体积百分数为0％；7min～8min，流动相a的体积百分数从100％变化至5％，流动相b的体积百分数从0％变化至95％；8min～15min，流动相a的体积百分数为5％，流动相b的体积百分数为95％；15min～17min，流动相a的体积百分数从5％变化至100％，流动相b的体积百分数从95％变化至0％。2.根据权利要求1所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括如下(1)～(2)中的至少一项：(1)流速为0.15ml/min～0.25ml/min；(2)柱温为28℃～32℃。3.根据权利要求1所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括如下(3)～(4)中的至少一项：(3)所述超高效液相色谱-质谱联用法所采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱；(4)所述超高效液相色谱-质谱联用法所采用的色谱柱的柱长为100mm，内径为3.0mm，内部填充物的粒径为2.1μm。4.根据权利要求1所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用法的色谱条件还包括：进样体积为1.8μl～2.5μl。5.根据权利要求1所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用法的质谱条件包括；采用电喷雾离子源；喷雾器压力：20psi～30psi；毛细管电压：3800v～4200v；气体温度：300℃～400℃；气体流速：15l/min～20l/min；扫描方式为多反应检测；负离子模式下，选择离子质荷比为665/383的离子对对水苏糖进行检测，离子质荷比为503/179的离子对对棉籽糖进行检测。6.根据权利要求1～5任一项所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，制备混合对照品溶液包括如下步骤：将水苏糖对照品和棉籽糖对照品与水混合，配制所述混合对照品溶液。7.根据权利要求1～5任一项所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，在所述混合对照品溶液中，所述水苏糖的浓度为100ppb～20000ppb，所述棉籽糖的浓度为50ppb～10000ppb。8.根据权利要求1～5任一项所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，制备供试品溶液包括如下步骤：
取消渴丸样品，加水提取，固液分离取提取液，配制所述供试品溶液。9.根据权利要求8所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，提取的方式为恒温震荡提取，温度为25℃～40℃，频率为40khz～60khz，时间为2min～20min。10.根据权利要求8所述的消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，其特征在于，固液分离的方法为离心，转速为8000r/min～12000r/min，时间为1min～15min。

技术总结
本发明涉及一种消渴丸中水苏糖和棉籽糖含量的测定方法，包括如下步骤：取水苏糖对照品和棉籽糖对照品，制备混合对照品溶液；取消渴丸样品，制备供试品溶液；采用超高效液相色谱-质谱联用法分别对混合对照品溶液与供试品溶液进行检测；色谱条件包括：流动相A为水，流动相B为甲醇，梯度洗脱：0～7min，流动相A的体积百分数为100％；7～8min，流动相A从100％


技术研发人员：党蕾 宁娜 何子昕 黄秋凌 雷婷 陈新阳
受保护的技术使用者：广州白云山中一药业有限公司
技术研发日：2023.07.12
技术公布日：2023/10/6