一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法与流程

1.本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法。


背景技术：

2.尼泊司他汀是毒三素链霉菌的代谢产物，能选择性抑制胃肠道中胰脂肪酶的活性，减少脂肪的分解和吸收，其四氢衍生物奥利司他已经被成功的开发为减肥药，是目前唯一作为非中枢神经系统作用而上市的治疗肥胖症的药物。
3.目前，国内相关文献公开了尼泊司他汀提取纯化工艺，具体内容如下：
4.工艺一：
5.尼泊司他汀发酵液酸化经喷雾干燥获得干菌丝体；丙酮浸提，板框过滤收集滤液，加水稀释丙酮稀释液；用正庚烷萃取，萃取液减压浓缩，至无馏分析出，制得正庚烷浓缩液；加入乙腈，冷却后，分层收集乙腈相，并对其减压浓缩，制得乙腈浓缩液；用己烷稀释乙腈浓缩液，然后，上硅胶柱进行吸附；吸附完毕后，用己烷洗脱，收集洗脱液；对洗脱液进行减压浓缩，至无馏分析出；二次结晶，收集晶体，减压浓缩，制得高纯度尼泊司他汀。
6.工艺二：
7.尼泊司他汀湿菌体用去离子水清洗后，30-80％甲醇水浸提，控制ph值在5.5-7.5之间，采用超声仪进行微生物细胞破碎，得到含有尼泊司他汀的混合物；将混合物振荡提取，得到含有尼泊司他汀的提取液；将提取液离心，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品；将尼泊司他汀粗提品溶解于有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀纯品。
8.工艺三：
9.含有利普司他汀的发酵液中加入乙酸乙酯，萃取分相后，上清液浓缩至干，得黄褐色利普司他汀粗品；将所得的黄褐色利普司他汀粗品用有机溶媒进行溶解，过滤除去不溶性杂质，将滤液减压浓缩至原体积的1/4～1/6，得浓缩液；将硅胶填料装入层析柱，用庚烷平衡好后，将浓缩液上到硅胶柱，上样量为柱体积的10％～20％，用庚烷和乙酸乙酯的混合溶媒作为流动相进行洗杂和洗脱，流速控制在0.5～1.5倍柱体积/小时，收集利普司他汀洗脱液，将洗脱液减压浓缩至干，得浅黄色油状利普司他汀粗品；所得的浅黄色油状利普司他汀粗品用有机溶媒溶解，降温法结晶，过滤后得利普司他汀白色晶体。
10.以上工艺存在的问题：
11.1、国内公开的尼泊司他汀提取工艺步骤多，提取纯化周期长，以单罐100m3发酵液进行比较，单批次提取周期超过了200h，具体内容如下所示：
12.尼泊司他汀关键提取工艺单批次周期时间汇总
[0013][0014]
2、尼泊司他汀提取工艺中采用了萃取、柱层析或大孔树脂吸附工艺，首先是有机溶媒用量较多，其次是溶媒种类达到了2种或2种以上。虽然提取工艺结束后对其进行了回收处理，但部分溶媒还是造成了一定比例的浪费，提高了环保处理的成本。
[0015]
3、国内文献公开了尼泊司他汀的提取技术水平。尼泊司他汀成品含量在80-90％，收率在70-80％。目前，国内生产的尼泊司他汀50％以上用于出口，国外对其质量提取了新的要求，其内容是尼泊司他汀成品含量在90-95％，但现有的生产工艺生产的尼泊司他汀达不到国外的质量要求。


技术实现要素：

[0016]
本发明的目的在于克服上述现有技术中的缺陷，提供一种提取工艺步骤简单、有效提高尼泊司他汀提取收率，成品质量符合出口质量要求的一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法。
[0017]
为实现上述目的所采取的技术方案为：
[0018]
(1)预处理
[0019]
将尼泊司他汀发酵液加入盐酸，调节ph至2-3，搅拌20-40min，并静置30-50min。
[0020]
发酵液中加入复合助滤剂，继续搅拌20-40min，板框过滤后得到湿菌渣。
[0021]
(2)萃取
[0022]
菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯，进行萃取，萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液。
[0023]
(3)水洗
[0024]
步骤(2)中的尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，水洗1次并分离。
[0025]
(4)柱层析
[0026]
步骤(3)中水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入含有吸附剂的层析柱中进行层析，得到浅黄色有机溶液；
[0027]
(5)减压浓缩、过滤和干燥
[0028]
在步骤(4)中的黄色有机溶液中加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，经减压浓缩、过滤和干燥后得到纯品尼泊司他汀。
[0029]
其中，步骤(1)中所述盐酸浓度是20％-30％；
[0030]
其中，步骤(1)中所述复合助滤剂制备方法为：首先珍珠岩、炉渣和海泡石分别经200 目筛筛分，按照比例2:2:1的比例进行混合，搅拌均匀；其次加入10-20％的玻璃水溶液，加入比例是0.2-0.4l/kg，搅拌80-100min。搅拌过程中，每隔20min加入水，加入比例是 60-100ml/kg，搅拌结束，粉碎并过200目筛筛分，于70-80℃干燥，至水分含量低于2％以下停止干燥；最后，将干燥后的混合物进行高温热处理。在250-300℃的条件下，高温煅烧 6-10min。煅烧结束，再次进行粉碎和过200目筛筛分处理，得到复合助滤剂。
[0031]
其中，所述复合助滤剂用量是：l发酵液∶w复合助滤剂＝1m3∶4-6kg。
[0032]
其中，步骤(2)中所述萃取是指将菌渣和乙酸异丙酯投入萃取釜中，温度控制在30-35℃，萃取时间控制在200-240min。
[0033]
其中，所述菌渣和乙酸异丙酯投入比例为：w菌渣∶v乙酸异丙酯＝1kg∶2-4l
[0034]
其中，步骤(3)中所述纯化水配置的饱和氯化钠溶液使用量：v乙酸异丙酯∶v纯化水配置的饱和氯化钠溶液＝1l∶2-4l，水洗时间1-2h。
[0035]
其中，步骤(4)中所述柱层析是指：层析柱柱高与直径的比例是5:1-10:1；将吸附剂装入层析柱，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的25％～30％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在0.4～0.8倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。
[0036]
其中，步骤(4)中，所述吸附剂是指：分别将氧化铝粉、碳化硅粉、硅酸钠粉和氧化钙粉于70-80℃干燥，水分含量低于1％后过200目筛进行筛分，按照5∶3∶1∶1的比例混合均匀。混合过程中分3次加入水，其添加总量为400-500ml/kg。混合结束，于300-350℃高温煅烧10-12min，粉碎过200目筛进行筛分得到吸附剂。
[0037]
其中，步骤(5)中所述减压浓缩是指经过层析得到的尼泊司他汀有机溶液中加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，添加比例是：v饱和氯化钠溶液∶v乙酸异丙酯＝2-3l∶1l，升温至85-90℃，压力控制在-0.05至-0.1mpa。开始收集乙酸异丙酯时，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的1-3％。乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌20-40min，然后缓慢降温至0-5℃，降温的速率控制在4-6℃/h。
[0038]
降温结束，继续搅拌30-60min，静置100-120min。
[0039]
过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品。
[0040]
本发明专利中使用了复合吸附剂和复合助滤剂，并且使用了单一的有机溶剂参与尼泊司他汀的提取和纯化，整体带来的技术优势体现在以下几个方面：
[0041]
1、简化提取工艺步骤，缩短提取周期。以单罐发酵液体积100m3进行对比分析，具体内容如下所示：
[0042]
尼泊司他汀提取工艺单批次周期时间汇总
[0043][0044][0045]
数据分析认为：采用本专利提供的工艺步骤提取纯化尼泊司他汀，能够有效缩短生产周期。
[0046]
2、尼泊司他汀发酵液进行了预处理，通过调节ph和使用复合助滤剂，加速发酵液种的微粒沉淀；降低了发酵液的粘度和蛋白含量，有利于废水的环保处理。
[0047]
3、本发明在提取过程中，使用了单一的有机溶剂醋酸异丁酯，采用饱和的氯化钠溶液水洗有机溶媒，降低了醋酸异丁酯在水中的溶解度，同时也降低了醋酸异丁酯的损失，便于回收和再次利用，降低了环保成本。
[0048]
4、同国内常规生产工艺比较，优势是产品收率高，质量稳定。采用本发明工艺，尼泊司他汀提取收率＞85％，尼泊司他汀有效含量＞92％，产品质量能够满足国外客户的质量要求。
具体实施方式
[0049]
下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0050]
本发明所用的尼泊司他汀发酵液是目前国内常规技术生产，即利用毒三素链霉菌，采用三级发酵模式生产，其培养基中的氮源主要是黄豆粉、酵母粉、蛋白胨和玉米浆，碳源主要是植物油。
[0051]
实施例1
[0052]
尼泊司他汀发酵液100m3，发酵液单位12.4g/l。
[0053]
(1)预处理
[0054]
将尼泊司他汀发酵液加入20％盐酸，调节ph至2，搅拌20min，并静置30min。
[0055]
发酵液中加入复合助滤剂400kg，继续搅拌20min，板框过滤后得到湿菌渣18.7t(不包含复合助滤剂的重量)。
[0056]
(2)萃取
[0057]
菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯37.4m3，温度控制在30℃,萃取时间控制在200min。萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液36.9m3。经检测，尼泊司他汀含量31.96g/l，收率在95.1％。
[0058]
(3)水洗
[0059]
尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液74m3，水洗 1h并分离。尼泊司他汀有机溶液36.7m3。经检测，尼泊司他汀含量31.84g/l，收率在99.1％。
[0060]
(4)柱层析
[0061]
层析柱直径1m，高6m，加入复合吸附剂至高度刻度5m处，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的25％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在 0.4倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。层析结束收集尼泊司他汀有机溶液42.6m3。经检测，尼泊司他汀含量25.32g/l，收率在92.3％。
[0062]
(5)减压浓缩、过滤和干燥
[0063]
尼泊司他汀有机溶液中加入纯化水配置的饱和氯化钠溶液85.2m3，升温至85℃，压力控制在-0.05至-0.1mpa，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的1％。
[0064]
乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌20min，然后缓慢降温至5℃，降温的速率控制在4-6℃ /h。
[0065]
降温结束，继续搅拌30min，静置100min。
[0066]
过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品1067.64kg，总收率是86.1％，尼泊司他汀含量92.4％。
[0067]
实施例2
[0068]
尼泊司他汀发酵液100m3，发酵液单位12.2g/l。
[0069]
(1)预处理
[0070]
将尼泊司他汀发酵液加入25％盐酸，调节ph至2.2，搅拌25min，并静置35min。
[0071]
发酵液中加入复合助滤剂450kg，继续搅拌25min，板框过滤后得到湿菌渣18.1t(不包含复合助滤剂的重量)。
[0072]
(2)萃取
[0073]
菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯45.2m3，温度控制在31℃,萃取时间控制在210min。萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液45m3。经检测，尼泊司他汀含量25.86g/l，收率在95.4％。
[0074]
(3)水洗
[0075]
尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液112m3，水洗 80min并分离。尼泊司他汀有机溶液44.8m3。经检测，尼泊司他汀含量25.77g/l，收率在99.2％。
[0076]
(4)柱层析
[0077]
层析柱直径1m，高7m，加入复合吸附剂至高度刻度6m处，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的26％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在 0.5倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。层析结束收集尼泊司他汀有机溶液51.8m3。经检测，尼泊司他汀含量20.62g/l，收率在92.5％。
[0078]
(5)减压浓缩、过滤和干燥
[0079]
尼泊司他汀有机溶液中加入纯化水配置的饱和氯化钠溶液114m3，升温至86℃，压
力控制在-0.05至-0.1mpa，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的 1.5％。
[0080]
乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌25min，然后缓慢降温至4℃，降温的速率控制在4-6℃ /h。
[0081]
降温结束，继续搅拌40min，静置105min。
[0082]
过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品1057.74kg，总收率是86.7％，尼泊司他汀含量92.8％。
[0083]
实施例3
[0084]
尼泊司他汀发酵液100m3，发酵液单位12.8g/l。
[0085]
(1)预处理
[0086]
将尼泊司他汀发酵液加入30％盐酸，调节ph至2.5，搅拌30min，并静置40min。
[0087]
发酵液中加入复合助滤剂500kg，继续搅拌30min，板框过滤后得到湿菌渣19.2t(不包含复合助滤剂的重量)。
[0088]
(2)萃取
[0089]
菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯57.6m3，温度控制在33℃,萃取时间控制在220min。萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液57.5m3。经检测，尼泊司他汀含量21.39g/l，收率在96.1％。
[0090]
(3)水洗
[0091]
尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液172m3，水洗 100min并分离。尼泊司他汀有机溶液57.3m3。经检测，尼泊司他汀含量21.31g/l，收率在 99.3％。
[0092]
(4)柱层析
[0093]
层析柱直径1m，高8m，加入复合吸附剂至高度刻度7m处，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的28％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在 0.6倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。层析结束收集尼泊司他汀有机溶液60.4m3。经检测，尼泊司他汀含量18.76g/l，收率在92.8％。
[0094]
(5)减压浓缩、过滤和干燥
[0095]
尼泊司他汀有机溶液中加入纯化水配置的饱和氯化钠溶液150m3，升温至87℃，压力控制在-0.05至-0.1mpa，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的 2％。
[0096]
乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌30min，然后缓慢降温至3℃，降温的速率控制在4-6℃ /h。
[0097]
降温结束，继续搅拌45min，静置110min。
[0098]
过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品1116.16kg，总收率是87.2％，尼泊司他汀含量93.7％。
[0099]
实施例4
[0100]
尼泊司他汀发酵液100m3，发酵液单位11.6g/l。
[0101]
(1)预处理
[0102]
将尼泊司他汀发酵液加入20％盐酸，调节ph至2.8，搅拌35min，并静置45min。
[0103]
发酵液中加入复合助滤剂550kg，继续搅拌35min，板框过滤后得到湿菌渣17.9t(不包含复合助滤剂的重量)。
[0104]
(2)萃取
[0105]
菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯63m3，温度控制在34℃,萃取时间控制在230min。萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液62.8m3。经检测，尼泊司他汀含量17.73g/l，收率在96.0％。
[0106]
(3)水洗
[0107]
尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液220m3，水洗 110min并分离。尼泊司他汀有机溶液62.7m3。经检测，尼泊司他汀含量17.61g/l，收率在 99.2％。
[0108]
(4)柱层析
[0109]
层析柱直径1m，高9m，加入复合吸附剂至高度刻度8m处，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的29％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在 0.7倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。层析结束收集尼泊司他汀有机溶液68.4m3。经检测，尼泊司他汀含量14.96g/l，收率在92.7％。
[0110]
(5)减压浓缩、过滤和干燥
[0111]
尼泊司他汀有机溶液中加入纯化水配置的饱和氯化钠溶液190m3，升温至89℃，压力控制在-0.05至-0.1mpa，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的 2.5％。
[0112]
乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌35min，然后缓慢降温至2℃，降温的速率控制在4-6℃ /h。
[0113]
降温结束，继续搅拌50min，静置115min。
[0114]
过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品1008.04kg，总收率是86.9％，尼泊司他汀含量93.4％。
[0115]
实施例5
[0116]
尼泊司他汀发酵液100m3，发酵液单位12.2g/l。
[0117]
(1)预处理
[0118]
将尼泊司他汀发酵液加入30％盐酸，调节ph至3.0，搅拌40min，并静置50min。
[0119]
发酵液中加入复合助滤剂600kg，继续搅拌40min，板框过滤后得到湿菌渣18t(不包含复合助滤剂的重量)。
[0120]
(2)萃取
[0121]
菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯72m3，温度控制在35℃,萃取时间控制在240min。萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液71.9m3。经检测，尼泊司他汀含量16.26g/l，收率在95.8％。
[0122]
(3)水洗
[0123]
尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液287m3，水洗 120min并分离。尼泊司他汀有机溶液71.7m3。经检测，尼泊司他汀含量16.14g/l，收率在 99.0％。
[0124]
(4)柱层析
[0125]
层析柱直径1m，高10m，加入复合吸附剂至高度刻度9m处，用乙酸异丙酯平衡，水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的30％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在 0.8倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。层析结束收集尼泊司他汀有机溶液79.4m3。经检测，尼泊司他汀含量13.44g/l，收率在92.2％。
[0126]
(5)减压浓缩、过滤和干燥
[0127]
尼泊司他汀有机溶液中加入纯化水配置的饱和氯化钠溶液238m3，升温至90℃，压力控制在-0.05至-0.1mpa，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的 3％。
[0128]
乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌40min，然后缓慢降温至0℃，降温的速率控制在4-6℃ /h。
[0129]
降温结束，继续搅拌60min，静置120min。
[0130]
过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品1052.86kg，总收率是86.3％，尼泊司他汀含量92.9％。
[0131]
对比实施例1
[0132]
尼泊司他汀发酵液10m3，发酵液单位12.7g/l。
[0133]
发酵液经过板框过滤，得到湿菌体1.7t，用去离子水清洗后，悬浮在50％甲醇水溶液中，与萃取剂的质量体积比为1∶40，ph值为5.5，超声15分钟，得到含有尼泊司他汀的混合物。
[0134]
将混合物振荡4小时，得到含有尼泊司他汀的提取液。
[0135]
将提取液在4℃、高速离心机条件下离心，收集上清液，将上清液减压浓缩，得到尼泊司他汀粗提品。
[0136]
将尼泊司他汀粗提品溶解于正庚烷有机溶剂中进行重结晶，收集晶体，减压浓缩，得到尼泊司他汀成品90.2kg，收率是71％，尼泊司他汀的含量为81.9％。
[0137]
对比实施例2
[0138]
尼泊司他汀发酵液10m3，发酵液单位12.1g/l。
[0139]
发酵结束后，用25％-45％的硫酸酸化处理发酵液，使发酵液的ph值调节为4，并采用喷雾干燥的方法获得干菌丝体1.2t。
[0140]
将干菌丝体加入8倍体积的丙酮溶液中，浸泡10小时，板框过滤除去菌丝，收集滤液。
[0141]
在滤液补加纯水，制得丙酮浓度为35％的丙酮稀释液。
[0142]
向丙酮稀释液中加入正庚烷，用量是丙酮稀释液体积的70％，萃取后收集正庚烷相；对正庚烷相进行减压浓缩至30％，制得正庚烷浓缩液；向正庚烷浓缩液中加入同体积乙腈，冷却后，分层除油；收集乙腈相，并对其减压浓缩至50％，制得乙腈浓缩液；用己烷稀释乙腈浓缩液，然后，上硅胶柱进行吸附；吸附完毕后，用己烷洗脱，收集洗脱液；对洗脱液进行减压浓缩，至无馏分析出；二次结晶，收集晶体，制得尼泊司他汀90.5kg，收率74.8％，含量88.5％。
[0143]
对比实施例3
[0144]
尼泊司他汀发酵液10m3，发酵液单位12.7g/l。
[0145]
发酵液板框过滤后，用70％乙醇提取，利普斯他汀浓度为7.5g/l，而后加入饮用水
调节至酒精度数为45度、体积为12.3m3，并加入庚烷5m3、食盐82kg、三乙胺40kg；对混合溶液搅拌10分钟，而后静置15分钟分液，庚烷相中加入45度的乙醇2m3，搅拌10分钟，静置 10分钟，分液除去下层。分液后的上层庚烷相中加入饮用水3m3及醋酸150l，搅拌10分钟，而后静置10分钟；下层分液除去，得上层利普斯他汀庚烷相,经减压浓缩得到尼泊司他汀 92.9kg，收率72.9％，含量为81.3％。

技术特征：
1.一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于其工艺步骤为：(1)预处理将尼泊司他汀发酵液加入盐酸，调节ph至2-3，搅拌20-40min，并静置30-50min；发酵液中加入复合助滤剂，继续搅拌20-40min，板框过滤后得到湿菌渣；(2)萃取菌渣投入萃取釜中，加入乙酸异丙酯，进行萃取，萃取结束，收集溶液并进行分离，得到含有尼泊司他汀的有机溶液；(3)水洗尼泊司他汀的有机溶液投入水洗罐中，加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，水洗1次并分离；(4)柱层析步骤(3)中水洗后的尼泊司他汀有机溶液投入含有吸附剂的层析柱中进行层析，得到浅黄色有机溶液；(5)减压浓缩、过滤和干燥在步骤(4)中的黄色有机溶液中加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，经减压浓缩、过滤和干燥后得到纯品尼泊司他汀。2.按照权利要求1所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(1)中所述盐酸浓度为20％-30％。3.按照权利要求1所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(1)中所述复合助滤剂制备方法为：首先珍珠岩、炉渣和海泡石分别经200目筛筛分，按照比例2:2:1的比例进行混合，搅拌均匀；其次加入10-20％的玻璃水溶液，加入比例是0.2-0.4l/kg，搅拌80-100min；搅拌过程中，每隔20min加入水，加入比例是60-100ml/kg，搅拌结束，粉碎并过200目筛筛分，于70-80℃干燥，至水分含量低于2％以下停止干燥；最后，将干燥后的混合物进行高温热处理，在250-300℃的条件下，高温煅烧6-10min；煅烧结束，再次进行粉碎和过200目筛筛分处理，得到复合助滤剂。4.按照权利要求3所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于所述复合助滤剂用量为：l发酵液∶w复合助滤剂＝1m3∶4-6kg。5.按照权利要求1所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(2)中所述萃取是指将菌渣和乙酸异丙酯投入萃取釜中，温度控制在30-35℃，萃取时间控制在200-240min。6.按照权利要求5所述的利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其特征在于所述菌渣和乙酸异丙酯投入比例为：w菌渣∶v乙酸异丙酯＝1kg∶2-4l。7.按照权利要求1所述的从尼泊司他汀发酵液中提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(3)中所述纯化水配置的饱和氯化钠溶液使用量：v乙酸异丙酯∶v纯化水配置的饱和氯化钠溶液＝1l∶2-4l；水洗时间1-2h。8.按照权利要求1所述的从尼泊司他汀发酵液中提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(4)中，所述柱层析是指：层析柱柱高与直径的比例是5:1-10:1；将吸附剂装入层析柱，用乙酸异丙酯平衡，水洗
后的尼泊司他汀有机溶液投入层析柱，上样量为柱体积的25％～30％，乙酸异丙酯洗脱，流速控制在0.4～0.8倍柱体积/h，收集浅黄色区域的液体。9.按照权利要求1所述的从尼泊司他汀发酵液中提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(4)中所述吸附剂是指：分别将氧化铝粉、碳化硅粉、硅酸钠粉和氧化钙粉于70-80℃干燥，水分含量低于1％后过200目筛进行筛分，按照5∶3∶1∶1的比例混合均匀；混合过程中分3次加入水，其添加总量为400-500ml/kg；混合结束，于300-350℃高温煅烧10-12min，粉碎过200目筛进行筛分得到吸附剂。10.按照权利要求1所述的从尼泊司他汀发酵液中提取尼泊司他汀的方法，其特征在于步骤(5)中所述减压浓缩是指经过层析得到的尼泊司他汀有机溶液中加入用纯化水配置的饱和氯化钠溶液，添加比例是：v饱和氯化钠溶液∶v乙酸异丙酯＝2-3l∶1l，升温至85-90℃，压力控制在-0.05至-0.1mpa；开始收集乙酸异丙酯时，流加纯化水配置的饱和氯化钠溶液，每小时的加入量为初始体积的1-3％；乙酸异丙酯收集结束，保温并搅拌20-40min，然后缓慢降温至0-5℃，降温的速率控制在4-6℃/h；降温结束，继续搅拌30-60min，静置100-120min；过滤、干燥得到尼泊司他汀纯品。

技术总结
本发明涉及一种利用尼泊司他汀发酵液提取尼泊司他汀的方法，其工艺步骤包括分别采用了预处理、萃取、水洗、层析、减压浓缩、过滤和干燥等。本发明采用复合助滤剂和复合吸附剂代替常规的材料，提取过程中只使用了单一的有机溶剂。同目前国内常规工艺相比，具有提取周期短、提取收率高，产品质量稳定、生产成本低等特点，有利于增强产品的国外市场竞争力。有利于增强产品的国外市场竞争力。


技术研发人员：任勇 李小萍 杜珊珊
受保护的技术使用者：宁夏泰胜生物科技有限公司
技术研发日：2022.03.23
技术公布日：2023/10/8