一种CDK4蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用

一种cdk4蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用
技术领域
1.本发明属于化药技术领域，具体涉及一种cdk4蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用。


背景技术：

2.通过双功能小分子诱导目标蛋白降解，即蛋白水解靶向嵌合体(protacs)，是近年来开创的最令人兴奋的新药物模式之一。protac由靶蛋白配体、e3泛素连接酶配体以及适当的连接子组成，以“靶蛋白-protac-e3连接酶”三元复合物的形式，通过泛素-蛋白酶体系统（ups）降解靶蛋白。与传统小分子抑制剂相比，protac具有独特优势，如催化性质、减少的给药剂量和频率、更有效和更持久的作用、增加的选择性、降低的潜在毒性、克服耐药性、扩大靶点空间等。protac的设计需要已知的靶蛋白配体和e3连接酶配体作为蛋白质诱饵，其开发依赖于这些配体的发现与优化。可用的e3连接酶配体的缺乏及现存主要e3连接酶配体的低成药性限制着protac的发展。
3.分子胶降解剂是一类可以诱导e3泛素连接酶底物受体与靶蛋白之间发生相互作用，经泛素化降解靶蛋白的小分子，其与e3泛素连接酶和靶蛋白具有双配体结构特征。而分子胶结合e3连接酶这一特性也使得其成为发现新型e3连接酶配体的有效手段。
4.细胞周期蛋白依赖性激酶（cdks）是调控真核细胞分裂和细胞增殖的关键细胞酶。cdks的催化单元被细胞周期蛋白激活。已有多种哺乳动物细胞周期蛋白已被鉴定出来，其中cyclin b/cdk1、cyclin a/cdk2、cyclin e/cdk2、cyclin d/cdk4和cyclin d/cdk6在细胞周期进程中起重要调节作用。cyclin/cdks的其他功能（如转录调节、dna修复、分化和凋亡）也有报道。cdks活性增强或暂时性异常激活可导致多种肿瘤的发生。因此，周期蛋白依赖性激酶抑制剂被认为是治疗癌症的有力药物。具体而言，cdk4/6抑制剂在乳腺癌和其他癌症中作为单一药物或与其他治疗药物联合使用已显示出显著的高临床疗效。例如，cdk4/6抑制剂palbociclib和ribociclib已获批上市。然而，随着原发性或获得性耐药的发展，cdk4/6抑制剂也逐渐受到限制。


技术实现要素：

5.本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种cdk4蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用，具体采用以下的技术方案：一种cdk4蛋白水解靶向嵌合体，其结构式如式i所示：
式i，其中linker为任一化学上可行的连接结构。
6.此前发明人偶然发现对天然三萜齐墩果酸（oa）半合成改造而得到的具有较高透膜性、成药性的抗肿瘤先导化合物cp0371能够作为分子胶结合dna损伤结合蛋白1（ddb1）进而介导磷酸甘油酸脱氢酶（phgdh）的降解，通过进一步调研，我们发现ddb1是组成多种e3连接酶的重要部分，开发能够结合ddb1的e3连接酶配体可能有助于扩展protac靶蛋白库，可能有望靶向更多不可成药蛋白。利用cp0371能够结合ddb1且透膜性好的特点，cp0371有作为新型e3连接酶配体应用于protac分子设计和开发的潜力。
7.于是本发明基于五环三萜类天然产物齐墩果酸衍生物的分子胶机制，将其作为e3连接酶配体，应用于蛋白水解靶向嵌合体的设计中，并基于经典cdk4抑制剂作为靶蛋白配体开发了新型egfr-protac降解剂，并且本发明的发明人在大量研究中发现，上述蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐能够应用在制备治疗和/或预防癌药物中，可以作为治疗癌症的药物组合物的活性成分，在蛋白水平能够有效降解各种恶性肿瘤细胞中的cdk4，在细胞水平能够显著抑制恶性肿瘤细胞增殖。该药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，上述药物组合物的剂型为药学上可接受的任一剂型，还可以应用在作为靶向降解cdk4药物中。
8.上述癌症包括：妇科癌类，例如：卵巢癌、子宫颈癌、阴道癌、阴部癌、子宫/子宫内膜癌、妊娠滋养细胞肿瘤、输卵管癌、子宫肉瘤；内分泌癌类，例如：肾上腺皮质癌、脑垂体癌、胰癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、胸腺癌、多发性内分泌肿瘤；骨癌类，例如：骨肉瘤、尤因肉瘤、软骨肉瘤等；肺癌类，例如：小细胞肺癌、非小细胞肺癌；脑和cns肿瘤，例如：神经母细胞瘤、听神经瘤、神经胶瘤和其他脑肿瘤，脊髓肿瘤、乳癌、结肠直肠癌、晚期结肠直肠腺癌；胃肠癌类，例如：肝癌、肝外胆管癌、胃肠类癌性肿瘤、胆囊癌、胃癌、食道癌、小肠癌；泌尿生殖器癌类，例如：阴茎癌、翠丸癌、前列腺癌；头和颈部肿瘤类，例如：鼻癌、鼻窦癌、鼻咽癌、口腔癌、唇癌、唾腺癌、喉头癌、下咽癌、正咽癌；血癌类，例如：急性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、儿童白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、发状细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、血浆细胞性白血病；骨髓癌血液病症，例如：骨髓分化不良症候群、骨髓增生性病症、范禾尼贫血、再生障碍性贫血、特发性巨球蛋白血症；淋巴癌类，例如：霍奇金病、非霍奇金氏淋巴瘤、周围t-细胞林巴瘤、皮肤型t-细胞淋巴瘤、aids相关性淋巴瘤；眼癌类，包括：视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤；皮肤癌类，例如：黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞癌；软组织肉瘤类，例如：卡波希肉瘤、儿童软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、泌尿系统癌症，例如：肾癌维尔姆斯肿瘤、膀肤癌、尿道癌和转移性细胞癌。优选用于结直肠癌的治疗。
9.作为进一步优选的实施方式，上述linker为饱和脂肪链、不饱和脂肪链或脂肪酸链。
10.作为进一步优选的实施方式，上述cdk4蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如式ii-式iv中的任意一种：式ii、式iii、式iv；其中，式ii中，n选自1-12中的任一正整数；式iii中，n选自0-8中的任一整数；式iv中，n选自1-9中的任一正整数。
11.作为进一步优选的实施方式，上述蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如下：。本发明制备得到的化合物在几种不同的细胞系中表现出较好抗增殖活性，并且这些化合物普遍在结直肠癌细胞中表现更好，特别是在hct-116细胞系中；此外，化合物m1在多种肿瘤细胞系中均表现出较高抗增殖活性。
12.本发明还提供了一种上述cdk4蛋白水解靶向嵌合体或其药学上可接受的盐的制备方法，路线简便，所述路线中所用原料廉价易得，反应总体收率较高，其制备路线为路线一、路线二或路线三：路线一：
；路线二：；路线三：。
13.上线路线一中使用齐墩果酸a与n-boc乙二胺在hatu作用下酰胺缩合获得中间体c，脱除boc后与4-甲氧基异氰酸酯发生反应获得脲基中间体d，d与不同长度的二酸发生单酯化反应得到e1-e2，随后与瑞博西利f酰胺缩合得到终产物g1-g2；路线二中使用2-叠氮基乙醇与对甲苯磺酰氯在三乙胺（tea）作用下获得中间体j，随后与瑞博西利在cs2co3和ki作
[m-h]-:788.5219, found. 788.5217。
[0020]
上述步骤中化合物d的化学式如下：步骤2：化合物g1的制备：具体制备方法为：将e1（158 mg, 0.200 mmol）和化合物f（86.9 mg，0.0.200 mmol）溶于n,n-二甲基甲酰胺（2 ml）中，加入n,n,n`,n`-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲（152 mg，0.400 mmol）、二异丙基乙胺（64.6 mg，0.500 mmol），室温反应过夜，反应完成后用1n hcl溶液（10 ml）、饱和碳酸氢钠溶液（10 ml）和饱和 nacl 溶液（10 ml）分别洗反应液，乙酸乙酯萃取（3
×
10 ml），有机相使用无水硫酸钠进行干燥，浓缩，将得到的粗品用硅胶柱层析进行纯化（石油醚：乙酸乙酯=4：1 至2：1）得化合物g1（白色固体，101 mg，42%）。
[0021]
对化合物g1进行检测，其检测结果如下：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 9.49 (s, 1h), 9.00 (s, 1h), 8.11 (d,j= 1.3 hz, 1h), 7.56 (d,j= 3.2 hz, 2h), 7.36
ꢀ–ꢀ
7.24 (m, 2h), 7.16
ꢀ–ꢀ
6.97 (m, 2h), 6.93
ꢀ–ꢀ
6.76 (m, 2h),6.52 (d,j= 0.7 hz, 1h), 6.18 (d,j= 0.7 hz, 1h), 5.49 (s, 1h),4.71 (s, 1h), 4.41 (s, 1h), 3.80 (s, 3h), 3.62 (d,j= 20.7 hz, 4h),3.40 (d,j= 1.1 hz, 2h), 3.38
ꢀ–ꢀ
3.28 (m, 2h), 3.24 (d,j= 1.8hz, 4h), 3.05 (s, 6h), 2.33 (s, 2h), 2.31
ꢀ–ꢀ
2.20 (m, 3h), 2.17
ꢀ–ꢀ
2.07 (m, 3h),2.04
ꢀ–ꢀ
1.89 (m, 6h), 1.86
ꢀ–ꢀ
1.77 (m, 4h), 1.77
ꢀ–ꢀ
1.60 (m, 6h), 1.60
ꢀ–ꢀ
1.56 (m,4h), 1.53 (dd,j= 13.0, 5.7 hz, 2h), 1.46
ꢀ–ꢀ
1.39 (m, 3h), 1.38
ꢀ–ꢀ
1.34(m, 4h), 1.34
ꢀ–ꢀ
1.28 (m, 2h), 1.24 (s, 1h), 1.07
ꢀ–ꢀ
1.01 (m, 7h), 1.00 (s, 3h),0.96 (s, 3h), 0.91 (s, 3h), 0.86 (d,j= 3.1 hz, 6h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 177.7, 174.5, 174.8,166.6, 159.9, 159.3, 159.2, 149.2, 148.5, 145.1, 138.8, 138.3, 137.8, 134.0,124.3, 123.0, 121.2, 118.9, 117.0, 116.4, 118.6, 110.8, 83.5, 71.2, 62.3, 56.6,55.6, 55.1, 49.9, 48.2, 48.1, 47.8, 43.6, 42.0, 41.7, 40.1, 40.0, 38.4, 38.1,38.0, 37.8, 37.2, 37.0, 36.4, 35.6, 34.5, 33.0, 32.8, 32.3, 31.0, 29.7, 29.3,29.0, 27.3, 25.8, 25.7, 25.2, 23.4, 22.5, 19.9, 17.5. hrms (esi): m/z calcd for c
70h100n11o7+
[m+h]
+
: 1206.7802; found 1206.7805.上述步骤中化合物f的化学式如下：实施例2
cdk4蛋白水解靶向嵌合体的制备化合物g2的制备化合物g2的结构如下：，其制备过程如下：按照实施例1所述化合物g1的合成步骤仅将庚二酸改为了辛二酸，其他实验条件保持不变，获得化合物g2。
[0022]
对化合物g2进行检测，其检测结果如下：1h nmr (400 mhz, cdcl3)δ 9.49 (s, 1h), 9.00 (s, 1h), 8.11 (d,j= 1.3 hz, 1h), 7.56 (d,j= 3.2 hz, 2h), 7.40
ꢀ–ꢀ
7.25 (m, 2h), 7.17
ꢀ–ꢀ
7.00 (m, 2h), 6.91
ꢀ–ꢀ
6.80 (m, 2h),6.52 (d,j= 0.7 hz, 1h), 6.18 (d,j= 0.7 hz, 1h), 5.49 (s, 1h),4.71 (s, 1h), 4.41 (s, 1h), 3.80 (s, 3h), 3.62 (d,j= 20.7 hz, 4h),3.40 (d,j= 1.1 hz, 2h), 3.38
ꢀ–ꢀ
3.28 (m, 2h), 3.24 (s, 4h), 3.05 (s,6h), 2.33 (s, 2h), 2.31
ꢀ–ꢀ
2.21 (m, 3h), 2.16
ꢀ–ꢀ
2.06 (m, 3h), 2.03
ꢀ–ꢀ
1.88 (m,6h), 1.85 (s, 1h), 1.83
ꢀ–ꢀ
1.60 (m, 9h), 1.58 (s, 2h), 1.56
ꢀ–ꢀ
1.48 (m, 4h), 1.44
–ꢀ
1.39 (m, 3h), 1.38
ꢀ–ꢀ
1.27 (m, 8h), 1.24 (s, 1h), 1.07
ꢀ–ꢀ
1.01 (m, 7h), 1.00(s, 3h), 0.96 (s, 3h), 0.91 (s, 3h), 0.86 (d,j= 3.1 hz, 6h).
13
c nmr (100 mhz, cdcl3) δ 177.1, 174.8, 174.0,166.6, 159.3, 159.1, 159.0, 149.0, 148.5, 145.1, 138.3, 138.0, 137.8, 134.7,124.3, 123.0, 121.5, 118.9, 117.0, 116.4, 113.2, 110.6, 83.5, 65.2, 56.3, 55.8,55.1, 49.9, 48.2, 48.1, 47.8, 43.1, 42.8, 42.0, 41.4, 40.5, 40.9, 38.9, 38.7,38.0, 37.8, 37.2, 37.1, 36.4, 35.3, 33.0, 32.8, 32.3, 31.7, 31.0, 29.9, 29.7,29.3, 29.0, 27.5, 26.0, 25.8, 25.2, 23.4, 22.5, 19.9, 17.9. hrms (esi): m/z calcd forc
71h102n11o7+
[m+h]
+
:1220.7958; found 1220.7953。
[0023]
实施例3cdk4蛋白水解靶向嵌合体的制备化合物m1的制备化合物m1的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物l1的制备：化合物l1的结构如下：
；具体制备方法为：在冰浴下，将化合物d（648 mg，1.00 mmol）溶解在二氯甲烷（10 ml）中，分别加入n,n'-二环己基碳二亚胺（413 mg，2.00 mmol）、4-二甲氨基吡啶（61.3 mg, 0.500 mmol）和丙炔酸（84.1 mg, 1.20 mmol），5分钟后撤去冰浴，室温搅拌过夜后，将瓶内的液体用旋转蒸发仪浓缩，随后用水（20 ml）洗、乙酸乙酯萃取（3
ꢀ×
20 ml），有机相使用无水硫酸钠进行干燥，浓缩后通过硅胶快速柱色谱（石油醚∶乙酸乙酯= 3∶1）得到化合物l1。
[0024]
对化合物l1进行检测，其检测结果如下：hrms (esi) calculated forc
43h62
n3o
5+
[m+h]
+
:700.4684, found. 700.4687。
[0025]
步骤2：化合物m1的制备：具体制备方法为：将l1（140 mg, 0.200 mmol）和化合物k（77.8 mg, 0.0.200 mmol）溶于
t
buoh/h2o（6.4 ml, 1:1）混合溶剂中，加入cuso4•
5h2o（25.0 mg, 0.100 mmol）、l-抗坏血酸钠（35.6 mg, 0.180 mmol），室温反应过夜，反应完成后过滤除去cuso4•
5h2o，滤液真空浓缩后通过硅胶快速柱色谱（二氯甲烷: 甲醇=8:1）分离得化合物m1（白色固体，74.1 mg, 34%）。
[0026]
对化合物m1进行检测，其检测结果如下：1h nmr (400 mhz, cdcl3) δ8.71 (s, 1h), 7.99 (s, 2h), 7.21 (d,j= 8.4 hz, 2h), 6.82 (d,j= 8.5 hz, 2h), 6.55 (t,j= 5.4 hz, 1h), 6.45 (s, 1h), 5.64 (s, 1h),5.39 (d,j= 3.7 hz, 1h), 4.78 (t,j= 8.8 hz, 1h), 4.32 (t,j= 4.9 hz, 2h), 3.77 (s, 3h), 3.69 (t,j= 5.1 hz, 4h), 3.48 (t,j= 5.0 hz, 2h), 3.42 (dd,j= 9.8, 5.4 hz, 1h), 3.39
ꢀ–ꢀ
3.34 (m, 1h), 3.30(q,j= 5.9, 5.5 hz, 1h), 3.20 (dt,j= 7.6, 4.1 hz, 2h), 3.15(s, 6h), 2.60
ꢀ–ꢀ
2.53 (m, 2h), 2.05 (dt,j= 16.4, 8.1 hz, 5h), 1.90
ꢀ–
1.85 (m, 2h), 1.76
ꢀ–ꢀ
1.69 (m, 4h), 1.58 (d,j= 13.0 hz, 5h), 1.52 (d,j= 15.1 hz, 4h), 1.46 (d,j= 1.9 hz, 1h), 1.43 (s, 1h), 1.39 (d,j= 4.7 hz, 1h), 1.35 (s, 1h), 1.32 (d,j= 2.9 hz, 1h), 1.25 (s, 6h),1.13 (s, 3h), 0.98 (s, 3h), 0.93
ꢀ–ꢀ
0.80 (m, 13h), 0.77 (s, 3h), 0.72 (s, 3h).hrms (esi): m/z calcd for c
68h95n14o6+
[m+h]
+
: 1203.7554; found 1203.7559。
[0027]
上述步骤中化合物k的化学式如下：实施例4cdk4蛋白水解靶向嵌合体的制备化合物m2的制备化合物m2的结构如下：
134.0,128.9, 124.3, 123.0, 121.2, 118.9, 117.0, 116.4, 114.2, 110.8, 83.0, 63.2,59.9, 56.7, 56.3, 55.6, 55.1, 54.8, 54.3, 49.9, 48.2, 47.8, 43.1, 42.0, 41.7,40.5, 40.2, 38.9, 38.7, 38.0, 37.9, 37.2, 37.0, 33.0, 32.8, 32.3, 32.2, 31.0,30.5, 29.7, 29.0, 25.8, 25.2, 24.1, 23.3, 22.5, 19.9, 17.5. hrms (esi): m/z calcd forc
70h99n14o6+
[m+h]
+
:1231.7867; found 1231.7866。
[0031]
实施例6cdk4蛋白水解靶向嵌合体的制备化合物o1的制备化合物o1的结构如下：，其制备过程如下：步骤1：化合物n1的制备：化合物n1的结构如下：；具体制备方法为：在冰浴下，将化合物d（648 mg，1.00 mmol）溶解在四氢呋喃（10 ml）中，缓慢加入氢化钠（40 mg，1.00 mmol），10分钟后缓慢加入3-溴丙炔（143 mg, 1.20 mmol），10分钟后撤去冰浴，室温搅拌过夜后，将瓶内的液体用旋转蒸发仪浓缩，随后用水（20 ml）洗、乙酸乙酯萃取（3
ꢀ×
20 ml），有机相使用无水硫酸钠进行干燥，浓缩后通过硅胶快速柱色谱（石油醚∶乙酸乙酯= 3∶1）得到化合物n1。
[0032]
对化合物n1进行检测，其检测结果如下：hrms (esi) calculated forc
43h64
n3o
4+
[m+h]
+
:686.4891, found. 686.4894。
[0033]
上述步骤中化合物d的化学式如下：；步骤2：化合物o1的制备：具体制备方法为：将n1（137 mg, 0.200 mmol）和化合物k（77.8 mg, 0.0.200 mmol）溶于
t
buoh/h2o（6.4 ml, 1:1）混合溶剂中，加入cuso4•
5h2o（25.0 mg, 0.100 mmol）、l-抗坏血酸钠（35.6 mg, 0.180 mmol），室温反应过夜，反应完成后过滤除去cuso4•
5h2o，滤液真空浓缩后通过硅胶快速柱色谱（二氯甲烷: 甲醇=8:1）分离得化合物o1（白色固体，98.9 mg, 44%）。
62.7,56.8, 56.3, 55.8, 54.8, 54.6, 54.3, 49.9, 48.2, 47.8, 43.1, 42.0, 41.8, 40.1,39.7, 39.6, 39.0, 38.1, 38.0, 37.9, 37.6, 33.0, 32.5, 32.3, 31.6, 30.9, 30.2,29.1, 29.0, 26.4, 25.8,25.8, 23.2, 22.7, 19.5, 17.2.hrms (esi): m/z calcd for c
70h101n14o5+
[m+h]
+
: 1217.8074; found 1217.8077。
[0038]
实施例9化合物抗肿瘤细胞增殖效果筛选对上述基于五环三萜分子胶cp0371（实施例1-8中制备得到的蛋白水解靶向嵌合体）作为e3连接酶配体、基于ribociclib作为靶蛋白配体的protac分子进行抗肿瘤细胞增殖实验的筛选，分别在三个不同的恶性肿瘤细胞系（人结直肠癌细胞hct-116、hct-15、人肺癌细胞hcc-827）中进行了mtt实验，结果如下表所示，为了较为直观比较化合物活性差异，将ic
50
分为四类：1 μm《ic
50
《3 μm (a)，3 μm《ic50《10 μm(b)，10 μm《ic50 (c)。检测结果见下表：具体测试结果如下列所示。
[0039]
从上述结果可知，上述化合物在几种不同的细胞系中表现出较好抗增殖活性，并且这些化合物普遍在结直肠癌细胞中表现更好，特别是在hct-116细胞系中；此外，化合物m1在多种肿瘤细胞系中均表现出较高抗增殖活性，因此，后续评价将选择化合物m1在hct-116细胞系中进行进一步的评价。
[0040]
实施例10化合物m1剂量依赖性降解cdk4将实施例9中优选的化合物m1应用蛋白质免疫印迹法在人结直肠癌细胞系hct-116中进行降解egfr能力的评估，结果见图1，结果显示，化合物随着化合物m1浓度的增加，hct-116细胞中cdk4降解量明显提高，说明化合物m1对egfr的降解是呈浓度依赖性的。
[0041]
实施例11化合物m1生物利用度评价protac分子的低生物利用度通常限制着其体内药效的发挥，而限制protac分子生物利用度的关键因素之一便是常规e3连接酶配体的溶解度差，本发明选用的新型e3连接酶
配体cp0371具有溶解度好的特点，有望发挥出更高的体内生物利用度。对优选的化合物m1进行了大鼠体内药物动力学评价，大鼠禁食过夜后，三只灌胃给药（20 mg/kg），三只尾静脉给药（5 mg/kg），随后在5 min, 15 min, 30 min, 1h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h分别取血，置于预肝素钠化管中，轻弹数下使血液与肝素钠充分混匀后离心（4 ℃, 3000 rpm, 10 min）得到血浆，取50 μl血浆样品，加入50 μl稀释液（50%甲醇/水）和250 μl甲醇沉淀剂，涡旋后离心（4 ℃, 12000 rpm, 10 min），将上清液过膜封存送lc-ms/ms检测。并通过winnonlin软件分析参数，结果显示化合物m1具有良好的口服生物利用度，为32.7%，相较于其他protac分子具有较大的改善。
[0042]
实施例12化合物m1安全性评价对优选的化合物m1进行了herg心脏毒性评价，使用稳定转染并表达人源心肌herg离子通道的hek293细胞，将培养好的细胞放置在倒置显微镜下，通过微操作仪使记录电极接触细胞表面，随后进行膜电容补偿和串联电阻补偿，使电流线平滑，用于后续测试。采用磁阀控制8道灌流给药系统，通过给药电极灌流给药，将配好的化合物m1母液分别按照比例稀释至30 μm、10 μm、3 μm、1 μm、0.3 μm，加入灌流给药系统中，通过重力作用控制流速对细胞进行持续灌流，连接给药电极，调节位置于细胞左上，当细胞进行电流记录后卖给与对照组（不含化合物m1）灌流，待电流稳定后，换成化合物m1灌流，观察其作用。通过clampfit软件分析，化合物m1心脏毒ic
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为15.89 μm，显示出较高安全性。
[0043]
实施例13化合物m1体内药效评价对化合物m1进行了体内药效的评价，选用hct-116细胞进行异种移植模型的建立。将hct-116细胞接种于裸鼠腋窝皮下，肿瘤生长至70-110 mm3时，将其随机分为对照组（5只）和化合物m1给药组（40 mpk，5只），给药15天。给药组小鼠体重和对照组小鼠体重均无明显波动且小鼠状态无明显异常，表明化合物m1安全性良好，给药组小鼠肿瘤重量和肿瘤体积均明显低于对照组，肿瘤抑制率（（1-给药组肿瘤重量/对照组肿瘤重量）*100%）为66.7%。表明，化合物m1具有较强的体内药效。
[0044]
尽管本发明的描述已经相当详尽且特别对几个所述实施例进行了描述，但其并非旨在局限于任何这些细节或实施例或任何特殊实施例，而是应当将其视作是通过参考所附权利要求考虑到现有技术为这些权利要求提供广义的可能性解释，从而有效地涵盖本发明的预定范围。此外，上文以发明人可预见的实施例对本发明进行描述，其目的是为了提供有用的描述，而那些目前尚未预见的对本发明的非实质性改动仍可代表本发明的等效改动。

技术特征：
1.一种cdk4蛋白水解靶向嵌合体，其特征在于，其结构式如式i所示：式i，其中linker为任一化学上可行的连接结构。2.根据权利要求1所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体，其特征在于，linker为饱和脂肪链、不饱和脂肪链或脂肪酸链。3.根据权利要求1或2所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体，其特征在于，所述cdk4蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如式ii-式iv中的任意一种：式ii、式iii、式iv；其中，式ii中，n选自1-12中的任一正整数；式iii中，n选自0-8中的任一整数；式iv中，n选自1-9中的任一正整数。4.根据权利要求3所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体，其特征在于，所述cdk4蛋白水解靶向嵌合体的分子结构如下所示：。5.一种权利要求3所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体的制备方法，其特征在于，其制备路
线为路线一、路线二或路线三：路线一：；路线二：；路线三：。6.一种权利要求1-4任一项所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐
在制备治疗和/或预防癌药物中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，癌症包括乳腺癌、结直肠癌、肺癌。8.一种权利要求1-4任一项所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体在制备用于靶向降解cdk4药物中的应用。9.一种药物组合物，其特征在于，以权利要求1-4任一项所述的cdk4蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐为主要活性成分。10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。

技术总结
本发明属于化药技术领域，具体涉及一种CDK4蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法、药物组合物和应用。该蛋白水解靶向嵌合体结构如式I所示，Linker为任一化学上可行的连接结构。本发明制备过程简单易行，制备得到的蛋白水解靶向嵌合体或其在药学上可接受的盐具有高效靶向降解CDK4的效果，并且抑制肿瘤细胞的增殖，发挥高效的抗肿瘤活性，适合用于抗肿瘤药物的开发。式I。式I。式I。


技术研发人员：王捷夫 杨光 魏明明 张坤 马岚 王宇博
受保护的技术使用者：天津市肿瘤医院（天津医科大学肿瘤医院）
技术研发日：2023.06.01
技术公布日：2023/10/7