一种基于依达拉奉的前体化合物、制备方法和应用

1.本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种基于依达拉奉的前体化合物、制备方法和应用。


背景技术：

2.依达拉奉(edaravone，mci-186，pmp)，其化学名为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，商品名为必存，由日本三菱研发生产，化学结构式如下：
[0003][0004]
依达拉奉在临床上主要用于治疗缺血性脑卒中(ischaemic stroke，is)、肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，als)、蛛网膜下腔出血等疾病，其在使用时通过清除自由基，抑制脂质过氧化，并抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤从而发挥保护作用。目前，依达拉奉已成为脑卒中后的脑保护首选药物。但依达拉奉胃肠道吸收差，代谢速度快，难以达到有效的血药浓度，从而导致治疗效果差，最终限制了其在临床上的应用。
[0005]
现阶段，采用依达拉奉治疗缺血性脑卒中的主要临床给药方式为静脉注射，通常需持续静脉注射10-14天以巩固对脑卒中的治疗效果。然而，长期静脉注射对患者的经济基础及身心压力均具有很大挑战。同时，由于依达拉奉在水中极难溶解或几乎不溶，且易氧化变质，因此制备制剂时需加入增溶剂丙二醇、抗氧化剂焦亚硫酸钠等药物辅料，药物安全性降低。
[0006]
相较于静脉注射方式，口服给药更为方便安全、经济适用，且顺应性好，是患者首选给药方式。然而，依达拉奉口服生物利用度低且代谢速度快，难以维持有效的血药浓度，对脑卒中治疗效果差，极大地阻碍了其在临床上的使用。现有研究发现，大鼠直接口服灌胃30mg/kg依达拉奉，与静注1.5mg/kg疗效相当，提示依达拉奉口服生物利用度极低，并不适合直接口服给药。因此，许多药学研究者试图通过改变药物剂型、合成前体药物等方式来提高依达拉奉口服生物利用度从而达到改变依达拉奉给药方式的目的。
[0007]
专利申请cn104257603a公布了一种依达拉奉/环糊精包合物，以期通过改变制剂类型达到口服递药目的，该专利包合后所得包合物与依达拉奉cmc-na悬液相比，其相对生物利用度为cmc-na悬液的9.8-11倍，可显著提高依达拉奉口服生物利用度，但其无法维持血药浓度。此外，药物合成学家通过对依达拉奉结构进行改造，力图提高依达拉奉胃肠道稳定性，从而实现口服递药。专利申请cn102190622a公开了一种氨基甲酸酯依达拉奉前体化合物，可进行口服给药，其大鼠药效学结果表明，通过口服灌胃依达拉奉衍生物与静脉注射
等量依达拉奉相比，大鼠脑梗死体积和脑组织含水量无显著性差异，说明相较于直接给药依达拉奉，该前药口服生物利用度无显著升高。专利申请cn112714760a公开的依达拉奉前体化合物，可以采用口服递药方式，其药代动力学结果显示，其生物利用度高达88.20％，相较于直接口服给药依达拉奉(生物利用度为5.23％)，口服生物利用度显著提高，但其最高血药浓度较低，仅为1.70-1.80μg/ml。
[0008]
综合上述研究现状可知，如何进一步对依达拉奉进行结构改造，从而得到一种不仅能够有效增加依达拉奉口服生物利用度，而且能够提高依达拉奉血药浓度、显著提高其药效，并且适于口服给药的新型化合物以供临床选择，成为亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

[0009]
为了克服现有技术的不足，本发明的第一目的在于提供一种基于依达拉奉的前体化合物，该前体药物不仅能够显著提高原药依达拉奉的口服生物利用度，而且还能显著提高血药浓度，提高药效。
[0010]
本发明的第二目的在于提供一种基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，其工艺简单，条件温和，易于实现前体药物的制备。
[0011]
本发明的第三目的在于提供一种基于依达拉奉的前体化合物的应用。
[0012]
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
[0013]
一种基于依达拉奉的前体化合物，为式ⅰ或式ⅱ所示的化合物：
[0014][0015]
其中，式ⅰ中，r1为c1～c10的烷基、芳基或吡啶基；
[0016]
式ⅱ中，r2为c1～c10的烷基或芳基。
[0017]
为提高药物的口服生物利用度和血药浓度，优选地，式ⅰ中，r1为乙基、异丙基、叔丁基、苯基或吡啶基；式ⅱ中，r2为丙基、异丙基、叔丁基或苯基。
[0018]
更优选地，所述基于依达拉奉的前体化合物，选自如下结构的化合物：
[0019][0020]
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
[0021]
上述基于依达拉奉的前体化合物的制备方法中，式ⅰ所示的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉、酸类物质、缩合剂于溶剂中进行反应，然后纯化，即得式ⅰ所示的基于依达拉奉的前体化合物；
[0022]
式ⅱ所示的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉、三乙胺、含羧基化合物于溶剂中进行反应，然后纯化，即得式ⅱ所示的基于依达拉奉的前体化合物。
[0023]
本发明提供的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，通过酯化反应修饰依达拉奉3号位暴露出的羟基，形成具有一定稳定性的酯类前体药物。该药物口服后可在体内快速代谢为原药发挥作用，显著高于原药依达拉奉的作用效果，能够改变依达拉奉给药方式，具有明显的临床优势。并且，本发明的制备方法条件温和，易操作，适于化合物的工业制备。
[0024]
优选地，所述酸类物质为丙酸、异丁酸、三甲基乙酸、烟酸中的一种；所述缩合剂为n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；所述含羧基化合物为氯甲酸正丙酯、氯甲酸异丙酯、二碳酸二叔丁酯中的一种。
[0025]
进一步优选地，式ⅰ、式ⅱ所示化合物制备时，所述溶剂选自二氯甲烷、乙腈、丙酮、四氢呋喃、氯仿中的一种。
[0026]
优选地，式ⅰ、式ⅱ所示化合物制备时，所述反应是在室温下反应0.5～12h。
[0027]
更优选地，所述依达拉奉、酸类物质、缩合剂反应时的摩尔比为2.9∶(5.74～11.5)∶(4.2～11.2)；所述依达拉奉、三乙胺、含羧基化合物反应时的摩尔比为(1.7～2.9)∶(5.16～14.4)∶(5.16～14.4)。
[0028]
本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
[0029]
基于依达拉奉的前体化合物的应用，具体是在制备缺血性脑卒中、阿尔茨海默症或肌萎缩侧索硬化的治疗药物中的应用。
[0030]
进一步地，所述治疗药物为口服药物；口服药物的剂型为片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、溶液剂、混悬剂的一种或多种。
[0031]
相较于现有技术，本发明的有益效果在于：
[0032]
本发明提供的基于依达拉奉的前体化合物，通过结构修饰，口服后可在体内快速代谢为原药发挥药物疗效，显著高于原药依达拉奉的作用效果，能够改变依达拉奉给药方式，适于口服给药。并且，本发明的前体药物可有效提高依达拉奉的口服生物利用度，增加
药物血药浓度，以达到维持治疗时间的目的，具有明显临床优势。
[0033]
因此，本发明提供的前体药物作为活性成分能够用于针对缺血性脑卒中、阿尔茨海默症及肌萎缩侧索硬化的治疗药物的制备，且能够有效发挥治疗疗效，具有良好的应用前景。
附图说明
[0034]
图1为本发明实施例2和4的基于依达拉奉结构的前体药物即化合物2、4的ttc染色结果以及脑梗死面积测试结果图；其中图a为ttc染色结果，图b为脑梗死面积结果；
[0035]
图2为本发明实施例2和4的基于依达拉奉结构的前体药物即化合物2、4对于超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、丙二醛(mda)活力的测试结果；其中图a为sod活力影响图；图b为gsh-px活力影响图；图c为mda活力影响图；
[0036]
图3为本发明实施例2和4的基于依达拉奉结构的前体药物即化合物2、4的he染色结果图；
[0037]
图4为本发明实施例2和4的基于依达拉奉结构的前体药物即化合物2、4的ros测试荧光定量结果图。
具体实施方式
[0038]
以下结合附图以及具体实施例，对本发明的技术方案作进一步阐述。应当理解，下述实施例仅是对本发明的进一步阐明，而非对本发明的限制。除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均可从商业渠道获得。
[0039]
实施例1
[0040]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物1：
[0041][0042]
化合物1的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉(0.51g，2.90mmol)，丙酸(0.85g，11.20mmol)溶解于10ml的二氯甲烷(dcm)，然后加入n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺(dic，1.45g，11.20mmol)，室温搅拌反应过夜，薄层色谱法监测反应。然后减压蒸除dcm，石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1柱层析提纯得到产物，产物旋干，正己烷复溶，50℃旋干，即得化合物1，产率为67.52％。
[0043]
化合物1的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.57
–
7.49(m,2h),7.47
–
[0044]
7.38(m,2h),7.36
–
7.27(m,1h),6.09(s,1h),2.54(q,j＝7.5hz,2h),2.32(s,3h),1.19(t,j＝7.5hz,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ169.74,148.95,144.45,138.10,129.04,128.85,127.11,125.07,123.12,118.90,95.80,77.37,77.05,76.73,43.13,27.54,17.05,14.50,8.76,0.01.其中，77.37,77.05,76.73为cdcl3中c的化学位移。
[0045]
实施例2
[0046]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物2：
[0047][0048]
化合物2的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉(0.51g，2.90mmol)，异丁酸(1.01g，11.50mmol)溶解于25ml的dcm，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci，0.83g，4.20mmol)，三乙胺(0.29g，2.80mmol)室温搅拌，反应过夜，薄层色谱法监测反应。减压蒸除dcm，石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1柱层析提纯得到产物，产物旋干，dcm∶正己烷＝10∶1柱层析二次纯化，50℃旋干，即得化合物2，产率为89.16％。
[0049]
化合物2的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.56
–
7.48(m,2h),7.47
–
[0050]
7.38(m,2h),7.36
–
7.27(m,1h),6.08(s,1h),2.79
–
2.62(m,1h),2.33(s,3h),1.20(dd,j＝
[0051]
10.7,7.0hz,8h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ172.35,148.94,144.60,138.04,128.97,127.20,123.39,95.72,77.38,77.06,76.74,34.07,18.64,14.51.其中，77.38,77.06,76.74为cdcl3中c的化学位移。
[0052]
实施例3
[0053]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物3：
[0054][0055]
化合物3的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉(0.51g，2.90mmol)，三甲基乙酸(1.17g，11.20mmol)溶解于10ml的dcm，加入n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺(dic，1.45g，11.20mmol)，室温搅拌反应过夜，薄层色谱法监测反应。减压蒸除dcm，石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1柱层析提纯得到产物，产物旋干，dcm∶正己烷＝20∶1柱层析二次纯化，50℃旋干，得到化合物3，产率为87.47％。
[0056]
化合物3的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.55
–
7.47(m,2h),7.47
–
[0057]
7.38(m,2h),7.36
–
7.27(m,1h),6.08(s,1h),2.32(s,3h),1.25(s,9h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ173.83,148.94,144.81,137.97,128.91,128.85,127.28,125.06,123.61,118.90,95.59,77.37,77.05,76.74,43.13,39.21,26.92,17.05,14.51.其中，77.37,77.05,76.74为cdcl3中c的化学位移。
[0058]
实施例4
[0059]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物4：
[0060][0061]
化合物4的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉(0.51g，2.90mmol)，烟酸
[0062]
(0.71g，5.74mmol)溶解于40ml的丙酮，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edci，1.10g，5.74mmol)，三乙胺(0.44g，2.80mmol)，室温搅拌反应过夜，薄层色谱法监测反应。减压蒸除丙酮，dcm复溶，加入等体积正己烷，置于4℃冰箱过夜，沉淀二环己基脲(dcu)，过滤，dcm∶丙酮＝80∶1柱层析纯化，得到化合物4，产率为44.31％。
[0063]
化合物4的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.27(dd,j＝2.3,0.8hz,1h),8.85(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.33(dt,j＝8.0,2.0hz,1h),7.62
–
7.54(m,2h),7.49
–
7.40(m,3h),7.40
–
7.29(m,1h),6.31(s,1h),2.37(s,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ160.62,154.57,151.38,149.19,143.93,137.95,137.81,129.24,128.85,127.50,125.06,124.27,123.72,123.39,118.90,95.84,77.38,77.06,76.74,43.13,29.71,17.05,14.55,0.01.其中，77.38,77.06,76.74为cdcl3中c的化学位移。
[0064]
实施例5
[0065]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物5：
[0066][0067]
化合物5的制备方法，包括以下步骤：依达拉奉(0.31g，1.70mmol)，三乙胺(0.52g，5.16mmol)溶解于25ml的dcm，加入氯甲酸正丙酯(0.63g，5.16mmol)，室温搅拌，过夜反应，薄层色谱法监测反应。减压蒸除dcm，石油醚∶乙酸乙酯＝20∶1柱层析提纯，得到化合物5，产率为89.23％。
[0068]
化合物5的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60
–
7.52(m,2h),7.43(t,j＝7.9hz,2h),7.35
–
7.27(m,1h),6.09(s,1h),4.18(t,j＝6.7hz,2h),2.32(s,3h),1.71(p,j＝7.2hz,2h),0.94(t,j＝7.4hz,3h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)(101mhz,cdcl3)δ151.04,148.90,144.72,137.94,129.13,127.14,122.89,95.42,77.37,77.05,76.73,71.38,21.81,14.53,10.01.其中，77.37,77.05,76.73为cdcl3中c的化学位移。
[0069]
实施例6
[0070]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物6：
[0071][0072]
化合物6的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉(0.51g，2.90mmol)，三乙胺(1.45g，14.4mmol)溶解于25ml的dcm，加入氯甲酸异丙酯(1.76g，14.4mmol)，室温搅拌反应0.5h，薄层色谱法监测反应。减压蒸除dcm，石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1柱层析提纯，得到化合物6。
[0073]
化合物6的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60
–
7.52(m,2h),7.48
–
[0074]
7.38(m,2h),7.37
–
7.26(m,1h),6.08(s,1h),4.91(hept,j＝6.3hz,1h),2.32(s,3h),1.29(d,j＝6.3hz,6h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ150.38,148.87,144.80,138.00,129.12,127.11,122.89,95.42,77.38,77.06,76.74,74.54,21.50,14.53,0.01.其中，77.38,77.06,76.74为cdcl3中c的化学位移，产率为67.25％。
[0075]
实施例7
[0076]
本实施例的基于依达拉奉结构的前体药物，结构式如下，记为化合物7：
[0077][0078]
化合物7的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉(0.51g，2.90mmol)，三乙胺(0.85g，8.41mmol)溶解于25ml的dcm，加入二碳酸二叔丁酯(1.83g，8.41mmol)，室温搅拌反应0.5h，薄层色谱法监测反应。减压蒸除dcm，石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1柱层析提纯，得到化合物7，产率为74.48％。
[0079]
化合物7的结构表征结果为：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.60
–
7.51(m,2h),7.49
–
7.38(m,2h),7.35
–
7.26(m,1h),6.05(s,1h),2.32(s,3h),1.45(s,9h).
13
c nmr(101mhz,cdcl3)δ148.95,148.84,144.93,138.09,129.24,129.08,127.04,122.91,95.52,85.24,77.36,77.05,76.73,28.41,27.42,14.52,0.01.其中，77.36,77.05,76.73为cdcl3中c的化学位移。
[0080]
试验例1
[0081]
本试验例为实施例1～7制备得到的基于依达拉奉结构的前体药物(化合物1～7)在体内的药代动力学研究。
[0082]
试验方法是：取spf级别的雄性sd大鼠，体重250
±
5g，实验前禁食12h，自由饮水，实验随机分为8组，分别为依达拉奉(pmp)静脉注射组(i.v.)、pmp口服组(p.o.)、化合物1口服组、化合物2口服组、化合物3口服组、化合物4口服组、化合物5口服组、化合物6口服组及
化合物7口服组。前体化合物均与pmp(16mg/kg)等摩尔给药。大鼠于给药后0.033，0.083，0.167，0.333，0.5，0.667，1，2，4，8h眼眶取血约0.5ml，加入10μl 50％磷酸水溶液酸化含药血液，4℃、4000rpm离心10min，吸取100μl血浆沉淀蛋白。采用hplc测定血浆中药物浓度，得到药-时曲线，然后根据曲线得到药代动力学参数实验结果。结果如表1所示。其中，i.v.表示静脉注射组，p.o.表示口服组，化合物1～7采用compound 1～7表示。*p《0.05,**p《0.01,***p《0.001表示实验组相较于pmp(p.o.)组有显著差异。
[0083]
表1pmp静脉注射、口服组以及本发明化合物1～7口服组的药代动力学参数
[0084][0085]
由表1可知，pmp(p.o.)、化合物1(p.o.)～化合物7(p.o.)的药-时曲线下面积(auc
0-t
)分别为3.40
±
0.76、5.60
±
1.49、6.82
±
2.81、7.71
±
4.54、7.02
±
2.90、9.12
±
4.56、3.13
±
1.37及3.56
±
2.9mg/l*h。与pmp(p.o.)组相比，化合物1～7的auc
0-t
分别提高1.65、2.00、2.27、2.06、2.68、0.92及1.05倍。pmp(p.o.)、化合物1(p.o.)～化合物7(p.o.)的体内药物最大浓度(c
max
)分别2.43
±
1.17、7.19
±
4.46、9.89
±
4.42、3.19
±
1.07、8.30
±
2.23、6.88
±
2.81、5.14
±
3.99及2.49
±
1.52mg/l，化合物1～7相对直接口服pmp组提高2.96、4.07、1.31、3.41、2.83、2.12及1.02倍。并且绝对口服生物利用度(fa)分别提高1.65、2.00、2.27、2.06、2.68、0.92及1.05倍。以上结果表明本发明的化合物1～7相较于依达拉奉原药，其血药浓度和口服生物利用度均有不同程度的提高。
[0086]
试验例2
[0087]
综合试验例1的auc
0-t
、c
max
及fa结果，在此主要选择化合物2及化合物4进行药效学研究。本试验例为基于依达拉奉结构的前体药物化合物2及化合物4的口服制剂的抗脑缺血研究。
[0088]
试验方法是：参照改良zea-longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。戊巴比妥钠1％，45mg/kg，腹腔注射麻醉，依据动物麻醉后状况酌情增减给药剂量。大鼠呈仰卧位固定于操作台中央。于大鼠颈前区下颌骨下0.5cm处消毒，颈部正中偏右纵行切口，显微剪分离肌肉及筋膜，使颈总动脉(cca)暴露于视野之中，分离cca下侧的迷走神经。沿cca找
到颈外动脉(eca)和颈内动脉(ica)。使用辅助线结扎cca及eca，微动脉夹夹闭ica。于cca结扎部下方约10mm处剪出创口，插入线栓，辅助线轻微扎紧，取下微动脉夹，将线栓缓慢送入ica，直至有轻微阻力为止，扎紧辅助线，标记线栓，缝合。1h后，
[0089]
进行再灌输，将线栓抽至cca内，大脑中动脉恢复血供。其中假手术组不插入线栓。
[0090]
采用口服灌胃给予相应药物。与颈部手术及血管处理同模型组(mcao组)给予pmp(16mg/kg)、化合物2组给予化合物2(22.42mg/kg，与pmp等摩尔)、化合物4组给予化合物4(25.64mg/kg，与pmp等摩尔)、假手术组给予生理盐水(与pmp等体积)。给予药物治疗24h后处死，取脑。生理盐水冲洗残血，并进行后续实验。整个过程均在室温(24-25℃)下进行。
[0091]
模型成功的标志是模型动物麻醉清醒后出现horner's征及对侧前肢为主的偏瘫。大鼠再灌注24h进行各项病理指标测定。使用ttc法检测脑梗死面积，image j对脑组织梗死灶进行积分测定。结果如图1所示。
[0092]
由图1可知，与假手术mcao组及依达拉奉pmp口服(p.o.)组相比，化合物2与化合物4试验组的脑部梗死灶体积为15.31
±
4.92％、11.23
±
2.77％(p《0.01)，均可显著降低脑部梗死灶体积，表明化合物2及化合物4均具有更好的抗缺血作用。
[0093]
试验例3
[0094]
本试验例对基于依达拉奉结构的前体药物化合物2及化合物4的抗氧化能力以及脑卒中疗效进行考察。
[0095]
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，sod)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，gsh-px)、丙二醛(malondialdehyde,mda)为氧化应激标志物，常用来评价细胞氧化应激水平。sod是一种重要的内源性抗氧化酶，通过催化细胞线粒体产生的超氧自由基转化为过氧化氢和氧气来发挥抗氧化作用，降低活性氧对细胞的损伤作用。mda作为脂质氧化的次级产物之一可加重组织氧化损伤，因此作为脂质过氧化的重要指标，用来评价组织氧化应激水平。gsh-px是一种存在于线粒体内的抗氧化酶抑制脂质过氧化，从而保护细胞免受氧化应激，从而保护细胞免受氧化应激损伤。
[0096]
试验时，大鼠于再灌注1h后，根据分组分别给予生理盐水(与pmp等体积)，pmp、化合物2及化合物4(与pmp等摩尔量)。给予药物治疗24h后处死，取脑。生理盐水冲洗残血，吸干水分后称重，并按照相应说明书对抗氧化因子进行检测。结果如图2所示。
[0097]
由图2可知，相较于mcao组，化合物2(p.o.)组及化合物4(p.o.)中sod(图a)、gsh-px(图b)活力显著升高，mda(图c)活力显著降低，表明化合物2、化合物4有良好的抗氧化能力。
[0098]
试验例4
[0099]
he染色与脑组织活性氧免疫荧光染色(ros)能够直接反映出脑组织神经细胞损伤程度与氧化应激水平。he染色结果以及脑组织活性氧免疫荧光(ros)定量分析结果分别如图3、图4所示。
[0100]
由图3可知，对照组(control组)脑部神经元细胞清晰可见，胞质着色深，胞核呈紫蓝色圆形，形态正常且排列紧密，无病理改变。模型组(mcao组)细胞数量数显著减少，细胞核染色变浅，间质空隙变大，大量神经元死亡，神经元完整度较低。经化合物2或化合物4治疗后，模型大鼠细胞核固缩数量明显减少，正常细胞数量增加，间质空隙与对照组基本相同，由此表明化合物2与化合物4可显著降低脑组织损伤，对脑卒中有很好的治疗作用。
[0101]
经4',6-二脒基-2-苯基吲哚(dapi)与二氢乙锭(dhe)(染料名称)染色后，control组脑组织细胞核大部分呈现荧光，仅有少量活性氧荧光存在于脑组织中，提示正常脑组织中ros存在数量较少。进一步对活性氧进行定量研究，由图4可知，相较于control组，mcao组中活性氧荧光大量存在，表明mcao组缺血再灌注产生较严重的氧化损伤；pmp组活性氧荧光水平较低，化合物2及化合物4组活性氧荧光显著降低(p《0.001)，说明本发明提供的化合物2和4能减少脑部因缺血再灌注而产生的活性氧，改善脑部氧化应激反应损伤。
[0102]
综上所述，本发明提供的基于依达拉奉的前体化合物，通过结构修饰，口服后可在体内快速代谢为原药发挥药物疗效，显著高于原药依达拉奉的作用效果，能够改变依达拉奉给药方式，适于口服给药。并且，本发明的前体药物可有效提高依达拉奉的口服生物利用度，增加药物血药浓度，以达到维持治疗时间的目的，具有明显临床优势。因此，本发明提供的前体药物作为活性成分能够用于针对缺血性脑卒中、阿尔茨海默症及肌萎缩侧索硬化的治疗药物的制备，且能够有效发挥治疗疗效，具有良好的应用前景。

技术特征：
1.一种基于依达拉奉的前体化合物，其特征在于，为式ⅰ或式ⅱ所示的化合物：其中，式ⅰ中，r1为c1～c10的烷基、芳基或吡啶基；式ⅱ中，r2为c1～c10的烷基或芳基。2.根据权利要求1所述的基于依达拉奉的前体化合物，其特征在于，式ⅰ中，r1为乙基、异丙基、叔丁基、苯基或吡啶基；式ⅱ中，r2为丙基、异丙基、叔丁基或苯基。3.根据权利要求1所述的基于依达拉奉的前体化合物，其特征在于，所述基于依达拉奉的前体化合物，选自如下结构的化合物：4.如权利要求1～3任一项所述的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，其特征在于，式ⅰ所示的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉、酸类物质、缩合剂于溶剂中进行反应，然后纯化，即得式ⅰ所示的基于依达拉奉的前体化合物；式ⅱ所示的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，包括以下步骤：将依达拉奉、三乙胺、含羧基化合物于溶剂中进行反应，然后纯化，即得式ⅱ所示的基于依达拉奉的前体化合物。5.根据权利要求4所述的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，其特征在于，所述酸类物质为丙酸、异丁酸、三甲基乙酸、烟酸中的一种；所述缩合剂为n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；所述含羧基化合物为氯甲酸正丙酯、氯甲酸异丙酯、二碳酸二叔丁酯中的一种。6.根据权利要求4所述的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，其特征在于，式ⅰ、式ⅱ所示化合物制备时，所述溶剂选自二氯甲烷、乙腈、丙酮、四氢呋喃、氯仿中的一种。7.根据权利要求4所述的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，其特征在于，式ⅰ、式ⅱ所示化合物制备时，所述反应是在室温下反应0.5～12h。
8.根据权利要求4所述的基于依达拉奉的前体化合物的制备方法，其特征在于，所述依达拉奉、酸类物质、缩合剂反应时的摩尔比为2.9∶(5.74～11.5)∶(4.2～11.2)；所述依达拉奉、三乙胺、含羧基化合物反应时的摩尔比为(1.7～2.9)∶(5.16～14.4)∶(5.16～14.4)。9.根据权利要求1～3任一项所述的基于依达拉奉的前体化合物的应用，其特征在于，在制备缺血性脑卒中、阿尔茨海默症或肌萎缩侧索硬化的治疗药物中的应用。10.根据权利要求9所述的基于依达拉奉的前体化合物的应用，其特征在于，所述治疗药物为口服药物；口服药物的剂型为片剂、软胶囊剂、硬胶囊剂、溶液剂、混悬剂的一种或多种。

技术总结
本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种基于依达拉奉的前体化合物、制备方法和应用。本发明的基于依达拉奉的前体化合物，通过酯化反应修饰依达拉奉3号位暴露出的羟基，形成具有一定稳定性的酯类前体药物。该药物口服后可在体内快速代谢为原药发挥药物疗效，显著高于原药依达拉奉的作用效果，能够改变依达拉奉给药方式，适于口服给药。并且，本发明的前体药物可有效提高依达拉奉作用后药物的血药浓度，达到维持治疗时间的目的，具有明显临床优势。势。势。


技术研发人员：李建波 张金洁 王辰旭 黄静雯 叶尔泰 徐萌 张捷柯 杨洋 王修霞 完迪迪 赵阳
受保护的技术使用者：郑州大学
技术研发日：2023.08.02
技术公布日：2023/10/7