克林霉素磷酸酯注射液有关物质检测方法与流程

1.本发明涉及检测方法技术领域，具体涉及克林霉素磷酸酯注射液有关物质检测方法。


背景技术：

2.克林霉素磷酸酯是以盐酸克林霉素2位羟基进行酯化的半合成抗生素，因此又称为克林霉素-2-磷酸酯，其注射剂现广泛应用于临床，主要治疗感受性厌氧菌所引起的严重感染，合成该品工艺很多，但无论哪种合成方法，克林霉素磷酸酯中均含有多种杂质，主要有克林霉素b-2-磷酸酯、表克林霉素-2-磷酸酯(由于盐酸克林霉素原料中含有克林霉素b、表克林霉素而产生)、克林霉素(为反应物的残留，或克林霉素磷酸酯的降解产物)，以及其它未知杂质(根据不同工艺有差异)。
3.药物中的工艺杂质含量决定着药物的品质，想要得到高品质的克林霉素磷酸酯药物，则需要提高检测水平，控制好药物的质量。因此，bp1998年版，ep1997年版均采用高效液相色谱法来测定其含量和有关物质，且规定其含量以无水物计不小于95％，有关物质不大于4.0％，任一杂质不大于2.5％。除此之外，日本、中国也收载了克林霉素磷酸酯药物的标准。但现有技术色谱条件下杂质检测不完全、分离度较差。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于针对现有技术中的不足，提供一种操作简便、杂质检测完全的克林霉素磷酸酯注射液有关物质制样方法及检测技术。
5.发明人在对克林霉素磷酸酯注射液进行长期稳定性试验中发现了氧化杂质和高温杂质，氧化杂质含量均超过0.2％，不超过0.5％，高温杂质含量超过0.5％，不超过1％，在提供本发明检测方法之前，采用现有技术对克林霉素磷酸酯注射液有关物质进行检测，无法检出氧化杂质、高温杂质。发明人曾尝试对流动相组分、浓度及其体积比、洗脱程序、流速、柱温、检测波长、进样体积进行优化筛选实验，但都无法实现氧化杂质和高温杂质的检测。在经过多种尝试后最终发现，若选用经端基封尾的十八烷基硅烷硅胶色谱柱作为色谱柱固定相进行检测，不仅能够检测出氧化杂质和高温杂质，还能检测出另一种新的杂质a。
6.本发明技术方案具体在于：
7.一种克林霉素磷酸酯注射液有关物质检测方法，采用高效液相色谱进行定性或/和定量检测克林霉素磷酸酯相关杂质，液相色谱的检测条件包括：
8.色谱柱固定相：经端基封尾的十八烷基硅烷硅胶色谱柱；
9.采用流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱；
10.流动相a中水相、有机相的体积比为79：21，流动相b中水相、有机相的体积比为40：60；梯度洗脱程序为：
[0011][0012]
在本发明的一个优选实施方式中，所述色谱柱商品名为岛津shimpack gist c18，只要满足上述描述的色谱柱均可运用于本发明的检测方法，不限于上述商品。
[0013]
在本发明的一个优选实施方式中，所述水相为磷酸盐缓冲液，有机相为乙腈。
[0014]
在本发明的一个优选实施方式中，所述梯度洗脱程序为：
[0015][0016]
在本发明的一个优选实施方式中，所述磷酸盐缓冲液中含有磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子、磷酸根离子和碱金属离子；进一步地，所述碱金属离子选自钾离子、钠离子中的一种或两种。如可以是含有磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子、磷酸根离子和钾离子的溶液，或含有磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子、磷酸根离子和钠离子的溶液，或含有磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子、磷酸根离子、钾离子和钠离子的溶液。
[0017]
在本发明的一个优选实施方式中，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液；
[0018]
进一步地，所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.013～0.014g/ml,用碱液调节ph至6.0～6.5。
[0019]
在本发明的一个优选实施方式中，所述液相色谱检测条件还包括以下的i～
ⅴ
中的一项或多项：
[0020]
i色谱柱规格：4.6mm
×
150mm，2～5μm；
[0021]
ii柱温：25～40℃；
[0022]
iii流速：0.8～1.3ml/min；
[0023]
iv检测波长：205～215nm；
[0024]
ⅴ
进样体积：10～25μl；
[0025]
进一步地，所述液相色谱检测条件还包括以下的i～
ⅴ
中的一项或多项：
[0026]
i色谱柱规格：4.6mm
×
150mm，5μm；
[0027]
ii柱温：30℃；
[0028]
iii流速：1.1ml/min；
[0029]
iv检测波长：210nm；
[0030]
ⅴ
进样体积：20μl。
[0031]
本发明所述杂质为合成等工艺过程中引入的杂质，包括反应物、中间体、副产物、试剂、催化剂等。
[0032]
所述检测方法可检测克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素磷酸酯纯度和相关杂质，是指当药物中含有克林霉素磷酸酯，或克林霉素磷酸酯和其相关杂质均含有时，都能用此方法进行检测。
[0033]
本发明所述杂质选自杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g、杂质i、杂质j、杂质k、杂质l、亚砜杂质、α-异构体杂质的一种或几种；
[0034]
进一步地，所述杂质的结构如下表：
[0035]
[0036]
[0037][0039]
在本发明的一个优选实施方式中，杂质f、杂质e按照已知杂质进行控制，并采用外标法进行定量检测，其它杂质采用自身对照法进行检测。
[0040]
所述自身对照法包括加校正因子的自身对照法或不加校正因子的自身对照法。
[0041]
本发明所述的检测方法步骤包括制备供试品溶液或/和对照品溶液，是将样品用流动相a溶解并稀释到指定浓度即得。
[0042]
本发明的有益效果是：
[0043]
(1)采用本发明的检测方法较欧、美、日、中国药典方法杂质检出数多，能实现杂质与杂质间、杂质与主峰间的有效分离，且更容易获得良好的峰形及分离。
[0044]
(2)本发明的检测方法线性、专属性、精密度、准确度、重复性好，杂质检出能力强，更适用于克林霉素磷酸酯的质量控制。
附图说明
[0045]
图1为本发明有关物质系统适用性溶液典型色谱图；
[0046]
图2为参考欧洲药典方法得到的有关物质系统适用性溶液典型色谱图；
[0047]
图3为亚砜杂质线性图；
[0048]
图4为α-异构体线性图；
[0049]
图5为克林霉素磷酸酯线性图；
[0050]
图6为中国药典中有关物质方法系统适应性图谱；
[0051]
图7为usp有关物质方法系统适应性图谱；
[0052]
图8为jp17有关物质方法系统适应性图谱；
[0053]
图9为bp有关物质方法系统适应性图谱。
具体实施方式
[0054]
下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。相关技术人员应理解，对本发明的技术特征所作的等同替换，或相应的改进，
仍属于本发明的保护范围之内。
[0055]
实施例1克林霉素磷酸酯注射液有关物质的检测方法
[0056]
供试品溶液精密量取本品适量，用流动相a定量稀释制成每1ml中约含克林霉素3mg的溶液。
[0057]
对照溶液精密量取供试品溶液适量，用流动相a定量稀释制成每1ml中约含克林霉素6μg的溶液。
[0058]
灵敏度溶液精密量取对照溶液适量，用流动相a定量稀释制成每1ml中约含克林霉素1.5μg的溶液。
[0059]
苯甲醇对照品溶液取苯甲醇对照品约19mg，精密称定，置100ml量瓶中，用流动相a溶解并稀释至刻度。
[0060]
杂质对照品溶液取杂质e与杂质f对照品各适量，精密称定，加流动相a溶解并定量稀释制成每1ml中约含杂质e 45μg与杂质f 90μg的溶液。
[0061]
杂质a对照品贮备液取杂质a对照品约3mg，精密称定，置100ml量瓶中，用苯甲醇对照品溶液溶解并稀释至刻度。
[0062]
亚砜杂质对照品贮备液取亚砜杂质对照品约4mg，置50ml量瓶中，用苯甲醇对照品溶液溶解并稀释至刻度。
[0063]
α-异构体杂质对照品贮备液取α-异构体杂质对照品约4mg，置25ml量瓶中，用苯甲醇对照品溶液溶解并稀释至刻度。
[0064]
系统适用性溶液取克林霉素磷酸酯系统适用性对照品(含杂质b、杂质e、杂质f、杂质g、杂质i、杂质j、杂质k与杂质l)约3mg，加苯甲醇对照品溶液0.5ml使溶解，再加杂质a对照品贮备液、亚砜杂质对照品贮备液与α-异构体对照品贮备液各约0.2ml，摇匀。
[0065]
色谱条件用岛津shim-pack gist c18 150*4.6 5u为填充剂(inertsil ods-3，4.6mm
×
150mm，5μm或效能相当的色谱柱，固定相:封端十八烷基硅烷硅胶；以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾13.6g，加水1000ml使溶解，用8mol/l氢氧化钾溶液调节ph值至6.0)-乙腈(79：21)为流动相a，以磷酸盐缓冲液-乙腈(40：60)为流动相b，流速为每分钟1.1ml；柱温为30℃；检测波长为210nm；进样体积20μl。按下表进行线性梯度洗脱：
[0066][0067]
系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中，克林霉素磷酸酯峰的保留时间约为12min，各杂质峰相对于克林霉素磷酸酯峰的相对保留时间分别为杂质f约0.15min，杂质g约0.19min，杂质a约0.25min，亚砜杂质约0.35min，杂质i约0.37min，杂质b约0.45min，杂质l约0.64min，α-异构体约0.77min，杂质j约1.20min，杂质e约1.73min，杂质k约1.90min；杂
质b峰与苯甲醇峰间分离度应符合要求，亚砜杂质峰与杂质i峰间分离度应不低于1.0。在灵敏度溶液色谱图中，主成分峰高的信噪比应大于10。有关杂质系统适用性检测结果见图1。
[0068]
测定法精密量取供试品溶液、对照溶液、杂质对照品溶液与苯甲醇对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0069]
限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰(除苯甲醇峰外)，杂质e和杂质f按外标法以峰面积计算，杂质e不得过标示量的1.5％，杂质f不得过标示量的3.0％；杂质g峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2.5倍(0.5％)，亚砜杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2.5倍(0.5％)，α-异构体杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的5倍(1.0％)，杂质b峰面积不得大于对照溶液主峰面积的5倍(1.0％)，杂质a峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0.2％)；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0.2％)；杂质总量不得过6.0％，小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计(0.05％)。
[0070]
克林霉素磷酸酯注射液中检测出的有关物质如表1：
[0071]
表1
[0072]
[0073]
[0074][0075]
欧洲药典克林霉素磷酸酯中杂质统计如下表2、图2：
[0076]
表2
[0077]
杂质名称ep标准rrt克林霉素磷酸酯杂质f0.15克林霉素磷酸酯杂质g0.19克林霉素磷酸酯杂质a/克林霉素磷酸酯杂质i0.34克林霉素磷酸酯杂质b0.45克林霉素磷酸酯杂质l0.64克林霉素磷酸酯杂质j1.20克林霉素磷酸酯杂质e1.73克林霉素磷酸酯杂质h/克林霉素磷酸酯杂质k1.90
[0078]
注：表中“/”代表未检出。
[0079]
上述结果表明，本发明检测条件相比欧洲标准，多检测出了亚砜杂质、α-异构体、杂质a这2种杂质，亚砜杂质、α-异构体尚未收入欧、美、日及中国现行版药典。且本发明分离
得到的杂质a化学结构与欧洲药典中记载的杂质a化学结构不同。
[0080]
实施例2亚砜杂质和α-异构体分析方法验证
[0081]
(1)定量限和检测限验证
[0082]
亚砜杂质贮备液：取本品10.50mg置50ml量瓶中，用流动相a溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0083]
α-异构体贮备液：取本品10.79mg置50ml量瓶中，用流动相a溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0084]
定量限溶液的配制：量取氧化杂质贮备液1ml，用流动相a稀释至25ml，作为氧化杂质对照品溶液，量取α-异构体贮备液1ml，用流动相a稀释至25ml，作为α-异构体对照品溶液，再分别量取氧化杂质对照品溶液4ml、α-异构体对照品溶液10ml至同一20ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液。
[0085]
检测限溶液的配制：量取定量限溶液3ml，置10ml量瓶中，用流动相a定容至刻度，即得。
[0086]
取定量限溶液进样，记录色谱图，亚砜杂质信噪比为10.50，计算定量限为：32.95ng，α-异构体信噪比为9.61，计算定量限为：89.91ng。
[0087]
取检测限溶液进样，记录色谱图，亚砜杂质信噪比为3.65，计算检测限为：8.53ng，α-异构体信噪比为3.32，计算检测限为：23.42ng。
[0088]
取定量限溶液连续进样6次，记录色谱图，计算平均峰面积和rsd，结果如表3：
[0089]
表3
[0090]
杂质名称123456平均峰面积rsd％亚砜杂质83828462844284688490853884640.61α异构体125301262412719125711278112536126270.82
[0091]
(2)亚砜杂质和α-异构体线性验证
[0092]
α-异构体对照品贮备液、亚砜杂质对照品贮备液的制备同该实施例中(1)的方法。
[0093]
克林霉素磷酸酯对照品贮备液：精密称取克林霉素磷酸酯对照品10.39mg，至50ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度。
[0094]
线性1：精密移取克林霉素磷酸酯对照品贮备液苯甲醇对照品储备液1.5ml、亚砜杂质对照品贮备液0.6ml、α-异构体对照品贮备液3.0置同一10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度。
[0095]
线性2：精密移取线性1(6ml)
→
10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度。
[0096]
线性3：精密移取线性2(6ml)
→
10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度。
[0097]
线性4：精密移取线性3(6ml)
→
10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度。
[0098]
线性5：精密移取线性4(6ml)
→
10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度。
[0099]
线性6：精密移取线性5(6ml)
→
10ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度。
[0100]
取线性1～6溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，图谱见附图2～4，相关系数见表4～6，亚砜杂质在0.39～12.6μg/ml范围内呈线性关系：
[0101]
表4亚砜杂质线性
[0102][0103]
表5α-异构体线性
[0104][0105]
表6克林霉素磷酸酯线性
[0106][0107]
实施例3
[0108]
对杂质f的定量方法进行进一步优化。采用加校正因子的自身对照法、外标法对样品中的杂质f进行了检测，比较两种方法检测结果的差异。
[0109]
杂质f准确度验证：
[0110]
(1)杂质f对照品溶液:精密称取杂质f对照品56.15mg置50ml量瓶中，加流动相a溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液液(1.123mg/ml)；精密量取对照品储备液2ml置
25ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(89.84μg/ml)。
[0111]
(2)供试品溶液:精密量取克林霉素磷酸酯注射液1ml置50ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀，即得。
[0112]
(3)回收率测定溶液:精密量取克林霉素磷酸酯注射液各0.5ml置9个编号的25ml量瓶中，
①
～
③
号加杂质f对照品储备液1ml；
④
～
⑥
号溶液加杂质f对照品储备液2ml；
⑦
～
⑨
号溶液加杂质f对照品储备液3ml,均用流动相a稀释至刻度，摇匀，即得。
[0113]
(4)测定:精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0114]
(5)计算:按外标法以峰面积进行计算。
[0115]
杂质f精密度验证：
[0116]
精密度验证中包括重复性、中间精密度和重现性，按验证要求，进行重复性及中间。精密度验证评价。用中试ec190501批制备6份供试品进行杂质检测，并进行评价。
[0117]
验证要求:用中试批产品不同6份供试品进行杂质检测，对检测出的杂质进行杂质计算并计算rsd值《2.0％。
[0118]
具体验证过程:
[0119]
(1)供试品溶液:精密量取ec190501批各1.0ml，置编号的6个50ml量瓶中，加
[0120]
流动相a稀释至刻度，摇匀，即得。
[0121]
(2)对照品溶液:精密量取对照品储备液2ml置25ml量瓶中，加流动相a稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(89.84μg/ml)。
[0122]
(3)测定:精密量取上述各溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0123]
(4)计算:杂质f按杂质外标法以峰面积进行计算。
[0124]
表7
[0125]
[0126][0127]
对比例1中国药典2015年版克林霉素磷酸酯有关物质方法
[0128]
色谱柱:c18(inertsil 0ds-3，250mmx4.6mm，5um)
[0129]
流动相:流动相a为磷酸缓冲液(ph3.9)-90％乙腈甲醇溶液(92:8)；流动相b为磷酸缓冲液(ph3.9)-90％乙腈甲醇溶液(52:48)。
[0130]
洗脱程序：
[0131]
时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0955
405954195546955
[0132]
流速为1.2ml/min，检测波长为210nm，柱温40℃，进样量为50μl。
[0133]
系统适用性溶液配制：精密称取克林霉素磷酸酯系统适用性对照品3.14mg，加入实施例1中的流动相a 1ml溶解，即可。有关物质保留时间见表8，图谱见图6。
[0134]
表8有关物质保留时间
[0135]
名称(ep命名)定位溶液保留时间系统适应性保留时间杂质f8.1658.217杂质g7.1427.214杂质a11.548/杂质b15.34615.391杂质l19.72919.796杂质j19.10919.114杂质e21.98422.036杂质i19.75219.796苯甲醇15.277/edta2.061/克林霉素磷酸酯/20.442
[0136]
注：表格中的杂质命名采用欧洲药典的杂质命名，与中国药典的命名不一样，比如中国药典的杂质a与欧洲药典的杂质l为同一物质。
[0137]
从图中可以看出杂质l与杂质i重叠，且与主峰未分离开，影响杂质和含量检测，此方法不适合作为本品的有关物质检测。
[0138]
对比例2 usp克林霉素磷酸酯有关物质方法
[0139]
色谱柱：c8(venusil xbp c8，250mmx4.6mm，5μm)
[0140]
流动相：流动相a为磷酸缓冲液(量取磷酸14ml加水4000ml加入氨水10ml用氨水调ph至5.6)-90％乙腈甲醇溶液(92∶8)；流动相b为磷酸缓冲液(量取磷酸14ml加水4000ml加入氨水10ml用氨水调ph至5.6)-90％乙腈甲醇溶液(52∶48)。
[0141]
洗脱程序：
[0142]
时间(分钟)流动相a(％)流动相b(％)0955405954195546955
[0143]
流速为1.2ml/min，检测波长为214nm，柱温40℃，进样量为20ul。
[0144]
系统适用性溶液配制：精密称取克林霉素磷酸酯系统适用性对照品3.14mg，实施例1中的流动相a 1ml溶解，即可。有关物质保留时间见表9，图谱见图7。
[0145]
表9有关物质保留时间
[0146]
名称定位溶液保留时间系统适应性保留时间杂质f9.99110.035杂质g11.53711.570杂质a14.295/杂质b19.97819.996杂质l22.21822.241杂质j26.12026.151杂质e35.76135.753杂质i19.16019.177苯甲醇16.276/edta1.931/克林霉素磷酸酯/24.987
[0147]
此方法在系统适用性对照品溶液的图谱中，没有看到杂质k的峰。
[0148]
对比例3 jp17克林霉素磷酸酯有关物质方法
[0149]
色谱柱：c18(inertsil ods-3，250mmx4.6mm，5μm)
[0150]
流动相：称取磷酸二氢钾10.54g加水775ml用磷酸调节ph至2.5加入乙腈225ml。
[0151]
流速为1.2ml/min，检测波长为210nm，柱温25℃，进样量为20μl。
[0152]
系统适用性溶液配制：精密称取克林霉素磷酸酯系统适用性对照品3.14mg，实施例1中的流动相a 1ml溶解，即可。有关物质保留时间见表10，图谱见图8。
[0153]
表10有关物质保留时间
[0154]
名称定位溶液保留时间系统适应性保留时间杂质f3.0193.262杂质g2.9852.999杂质a3.121/杂质b4.8934.961杂质l8.711/杂质j7.5127.559杂质e12.20512.257杂质i11.502/苯甲醇11.47311.476edta2.254/克林霉素磷酸酯/9.30l
[0155]
杂质f与杂质g未分离开，杂质l与杂质i重叠且被包裹至主峰中，未分离出来，影响杂质和含量检测。
[0156]
对比例4 bp克林霉素磷酸酯有关物质方法
[0157]
色谱柱：c18(inertsil ods-3，250mmx4.6mm，5μm)
[0158]
流动相：13.6g/l的磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节ph至2.5)-乙腈(80：20)。
[0159]
流速为1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温35℃，进样量为20μl。
[0160]
系统适用性溶液配制：精密称取克林霉素磷酸酯系统适用性对照品3.14mg，用实
施例1中的流动相a 1ml溶解，即可。有关物质保留时间见表11，图谱见图9。
[0161]
表11有关物质保留时间
[0162]
名称定位溶液保留时间系统适应性保留时间杂质f3.393/杂质g3.292/杂质a3.471/杂质b6.6206.685杂质l13.33613.455杂质j11.14511.169杂质e19.47619.569杂质i13.52013.455苯甲醇12.854/edta2.295/克林霉素磷酸酯/14.277
[0163]
从图中可以看出杂质f与杂质g未出峰，杂质l与杂质i重叠且与主峰未分离开，影响杂质和含量检测。

技术特征：
1.一种克林霉素磷酸酯注射液有关物质检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱进行定性或/和定量检测克林霉素磷酸酯相关杂质，液相色谱的检测条件包括：色谱柱固定相：经端基封尾的十八烷基硅烷硅胶色谱柱；采用流动相a和流动相b为混合流动相进行梯度洗脱；流动相a中水相、有机相的体积比为79：21，流动相b中水相、有机相的体积比为40：60；梯度洗脱程序为：2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述色谱柱为岛津shimpack gist c18。3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述水相为磷酸盐缓冲液，有机相为乙腈。4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：5.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液中含有磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子、磷酸根离子和碱金属离子；进一步地，所述碱金属离子选自钾离子、钠离子中的一种或两种。6.根据权利要求5所述检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液；进一步地，所述磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.013～0.014g/ml,用碱液调节ph至6.0～6.5。7.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测条件还包括以下的i～
ⅴ
中的一项或多项：i色谱柱规格：4.6mm
×
150mm，2～5μm；ii柱温：25～40℃；iii流速：0.8～1.3ml/min；
iv检测波长：205～215nm；
ⅴ
进样体积：10～25μl；进一步地，所述液相色谱检测条件还包括以下的i～
ⅴ
中的一项或多项：i色谱柱规格：4.6mm
×
150mm，5μm；ii柱温：30℃；iii流速：1.1ml/min；iv检测波长：210nm；
ⅴ
进样体积：20μl。8.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述杂质选自杂质a、杂质b、杂质e、杂质f、杂质g、杂质i、杂质j、杂质k、杂质l、亚砜杂质、α-异构体杂质的一种或几种；进一步地，所述杂质的结构如下表：
9.根据权利要求1～8中任一项所述的检测方法，其特征在于，杂质f、杂质e按照已知杂质进行控制，并采用外标法进行定量检测，其它杂质采用自身对照法进行检测。10.根据权利要求1～8中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤包括制备供试品溶液或/和对照品溶液，是将样品用流动相a溶解并稀释到指定浓度即得。

技术总结
本发明公开了克林霉素磷酸酯注射液有关物质检测方法，采用高效液相色谱的方法对克林霉素磷酸酯注射液有关物质进行定性或/和定量检测，液相色谱的检测条件包括：色谱柱固定相为经端基封尾的十八烷基硅烷硅胶色谱柱，采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；流动相A中水相、有机相的体积比为79：21，流动相B中水相、有机相的体积比为40：60；流动相采用梯度洗脱法。采用本发明的方法能够有效检测克林霉素磷酸酯注射液中主药及其他相关杂质，系统适用性好，精密度高，能检出多个现有药典方法中检测不到的杂质。方法中检测不到的杂质。方法中检测不到的杂质。


技术研发人员：王卫国 向雪花 熊全红 张艳
受保护的技术使用者：成都普什制药有限公司
技术研发日：2022.12.26
技术公布日：2023/10/11