EP3受体拮抗剂L-798106在制备预防心肌缺血再灌注损伤药物中的应用

ep3受体拮抗剂l-798106在制备预防心肌缺血再灌注损伤药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医药领域，具体涉及ep3受体拮抗剂l-798106((2e)-n-[(5-bromo-2-methoxyphenyl)sulfonyl]-3-[2-(2-naphthalenylmet-hyl)pheny l]-2-propenamide；cas号：244101-02-8)在改善心肌缺血再灌注损伤相关疾病中的应用。


背景技术：

[0002]
心血管疾病(cardiovascular disease,cvd)是导致人类死亡的首要原因。最新发布的《中国心血管健康与疾病报告》显示cvd患者达3.3亿，农村和城市cvd分别占死因的46.74％和44.26％。其中，缺血性心脏病(ischemic heart disease,ihd)尤其是冠心病(coronary heart disease,chd)的发病率和死亡率最高。而急性心肌梗死(acute myocardial infarction,ami)则是导致chd患者死亡的首要原因。因此，有效治疗chd对于减少cvd引起的死亡至关重要。
[0003]
近年来，静脉溶栓、经皮冠状动脉介入治疗和冠状动脉搭桥术等治疗措施已在临床上得到广泛应用，在一定程度上降低了超急性期和急性期ami的死亡率。然而，血流的快速恢复常常导致急性和慢性心肌损伤，使患者出现心肌无复流、心肌顿抑、心律失常等不良事件，从而掩盖了再灌注本身带来的益处，这被称为心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,miri)。miri的细胞机制复杂，涉及多种信号通路和分子机制，包括氧化应激、细胞内钙超载、扩大的炎症、再灌注时ph值的快速恢复和线粒体损伤等。miri的发生严重影响了患者的长期预后，而目前缺乏能够有效减轻miri的干预策略和治疗药物。
[0004]
ep3是一种在全身各个组织和脏器中有广泛且稳定表达的前列腺素受体，而l-798106是一种高选择性ep3受体拮抗剂。有研究显示l-798106具有在脑组织氧化应激、神经元凋亡和前列腺癌细胞增殖等方面的效应，并为某些疾病的防治提供了新思路。但是目前尚未有研究或者专利报道l-798106在防治miri方面的应用。


技术实现要素：

[0005]
本发明要解决的技术问题是提供ep3受体拮抗剂l-798106在制备防治miri的药物中的应用，为新药研发和创新疗法提供思路。
[0006]
为解决上述技术问题，本发明提供一种ep3受体拮抗剂在制备防治miri的药物中的应用，该拮抗剂为l-798106。
[0007]
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
[0008]
一种ep3受体拮抗剂在制备预防心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。
[0009]
优选的，所述ep3受体拮抗剂在制备缩小心肌缺血再灌注手术后的心肌梗死面积药物中的应用。
[0010]
优选的，所述ep3受体拮抗剂在制备降低心肌缺血再灌注手术后的血清心肌酶谱
水平药物中的应用。
[0011]
优选的，所述酶包括乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶及其同工酶中的一种或多种。
[0012]
优选的，所述ep3受体拮抗剂在制备改善心肌缺血再灌注手术后的心脏收缩功能药物中的应用。
[0013]
优选的，所述ep3受体拮抗剂包括l-798106。
[0014]
优选的，所述药物包括口服剂、注射剂中的一种或多种。
[0015]
优选的，所述药物包括口服剂，所述l-798106的浓度为14mg/kg/day。
[0016]
优选的，所述l-798106以10mg/ml溶于dmso中，获得l-798106溶液，再将所述l-798106溶液溶于饮用水中。
[0017]
优选的，按所述l-798106溶液体积比小于0.75％溶于所述饮用水中。
[0018]
l-798106溶于dmso中，工作液溶于饮用水中。
[0019]
与现有技术相比较，实施本发明，具有如下有益效果：
[0020]
在发明过程中，经过长期的研究意外发现，l-798106能够显著缩小mir手术后小鼠的心肌梗死面积和降低血清心肌酶谱水平，改善心脏收缩功能，减轻miri。本发明的结果为l-798106改善miri提供了理论依据，特别是对相关药物研发提供了基础。
[0021]
综上所述，本发明发现了ep3受体拮抗剂l-798106可用于防治miri相关疾病，在临床上具有研发价值。
附图说明
[0022]
图1为l-798106缩小mir后小鼠的梗死面积。
[0023]
图2为l-798106降低mir后小鼠血清的乳酸脱氢酶(ldh)、肌酸激酶(ck)和肌酸激酶及其同工酶(ck-mb)水平。
[0024]
图3为l-798106改善mir后小鼠的心功能。
具体实施方式
[0025]
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例对本发明作进一步地详细描述，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0026]
实施例1
[0027]
1、材料和方法
[0028]
1.1实验动物
[0029]
c57bl/6n野生型雄鼠(8-12周)购自北京维通利华实验动物技术有限公司，spf级环境饲养，动物房室温控制在24
±
1℃，湿度50-60％，采用自由采食及饮水、12小时照明/12小时黑暗的管理方式。
[0030]
1.2药物及处理
[0031]
化合物l-798106购自cayman公司，首先以10mg/ml溶解于dmso中，然后按小于
0.75％的比例溶于小鼠的饮用水中。以14mg/kg/d的剂量在造模前24小时开始喂药，直至术后取材。
[0032]
1.3小鼠心肌缺血再灌注模型的建立
[0033]
小鼠用1％戊巴比妥钠(70mg/kg)腹腔注射进行麻醉后，以仰卧位固定于可控温度的小动物实验台上，维持小鼠体温在37℃左右，同时在小鼠胸前涂抹脱毛膏脱毛。使用压舌板抬高小鼠下颌部，行气管插管。将呼吸机的参数调节为潮气量150ul，频率150次/分。连接呼吸机后，观察到小鼠胸廓的起伏与呼吸机节律保持一致即可。实验过程中应随时观察小鼠的呼吸变化，根据个体状况随时做出调整。
[0034]
小鼠采用右侧卧位，络合碘消毒后沿胸骨左缘3-4肋间行横向切口暴露胸大肌，逐层钝性分离胸部肌肉。在第三或第四肋间隙钝性分离肋间肌，进而用自制拉钩拉开上下肋骨，进入胸腔并充分暴露心脏后，剥离心包膜并找到左心耳和肺动脉圆锥。将带缝线的小圆针(8-0)自左心耳下方1mm处穿入(可通过伴行的心大静脉找到通向心尖的冠状动脉左前降支)，穿过约1/3层心肌后从肺动脉圆锥侧穿出。待小鼠适应1-2min后，将2mm长的小塑料软管垫在结扎动脉上方辅助结扎和打活结，结扎力度以看到软管有塌陷为准。结扎后可观察到左心室前壁发绀，表明结扎成功。最后将纱布用生理盐水打湿后覆盖在切口上，使切口闭合并保持湿润。
[0035]
缺血30分钟后，松开结扎于冠状动脉左前降支上方的活结，取出小塑料软管使血管再通，左心室前壁相应区域由苍白变为鲜红色表明复灌成功。使用5-0带线缝合针逐层缝合肋间隙、肌肉层和皮肤层。将脱离呼吸机的小鼠置于pvc笼子中普通喂养，待复灌24小时后，可进行采血、evan’s blue-ttc双染色和小动物超声实验。
[0036]
说明：假手术组除了不结扎，其它操作和缺血再灌注组一致；假手术组的饮用水中用等量的dmso代替l-798106，并作相同实验处理。
[0037]
1.4心肌梗死面积的测量
[0038]
复灌24小时后，小鼠用1％戊巴比妥钠(70mg/kg)腹腔注射进行麻醉和固定，气管插管并连上呼吸机后，再次打开小鼠的胸腔和暴露心脏，沿原结扎位置穿线不结扎。打开腹腔，从下腔静脉注射1％ttc染液0.3ml，待血液循环10s后，结扎冠状动脉左前降支，再次从下腔静脉慢慢注入2％ evan’s blue 0.4ml，待心脏的一半变深蓝色即停止灌注。迅速处死小鼠并剪下心脏，放到预冷的pbs溶液中洗净。充分吸干心脏表明的液体后放到ep管中，连同心脏切片模具置于-20℃冰箱中冷冻30分钟。待心脏冷冻固定结束后，将心脏置于模具中，用刀片沿心脏长轴将心脏从结扎处连续切成5片，厚度约2mm。最后将心脏切片置于4％多聚甲醛中固定6小时后，对每片心脏组织进行称重和拍照。采用photoshop对切片进行分析，染色后梗死区为白色，危险区为红色，非危险区为蓝色。以危险区域/左心室区域百分比表示危险面积，以梗死区域/危险区域百分比表示梗死面积。
[0039]
说明：对缺血再灌注组和缺血再灌注+l-798106组进行染色，假手术组因无缺血和梗死故而不进行染色与测量。
[0040]
1.5血清心肌酶谱变化的检测
[0041]
从小鼠下腔静脉采血,在室温放置2小时后，置于4℃离心机中，转速3000rpm离心10分钟以收集血清。采用贝克曼库尔特生化分析系统检测血清中ldh、ck和ck-mb含量。
[0042]
1.6超声心动图检测小鼠心脏功能
[0043]
用lazr小动物活体多模成像系统采集小鼠超声心动图。先将小鼠置于3％异氟烷气体的麻醉盒中使其快速进入麻醉状态，随后将小鼠固定于37℃恒温操作台上，以0.5％-1％的异氟烷维持其麻醉。在小鼠胸部涂抹超声传导耦合剂，使用ms-400超声探头采集小鼠心脏长轴和短轴切面下m-mode模式及b-mode模式下连续五个心动周期的心脏动态视频。使用vevo lab 3.0.0软件处理数据，用左心室射血分数(lvef％)和左心室缩短分数(lvfs％)评价小鼠的心脏收缩功能，其中：lvef％＝(左室舒张末期容积-左室收缩末期容积)/左室舒张末期容积；lvfs％＝(左室舒张末期内径-左室收缩末期内径)/左室舒张末期内径)。
[0044]
1.7统计学方法
[0045]
实验数据以均值
±
标准差(mean
±
sd)表示。两组间单因素的实验数据采用两独立样品t检验，三组间单因素的实验数据采用单因素方差分析(one-way anova)。本研究采用graphpad prism 6(san diego，ca，usa)统计软件进行数据统计分析。p《0.05表示有统计学差异，*p《0.05，**p《0.01；ns表示无显著性差异。
[0046]
实施例2
[0047]
实验结果
[0048]
1、心肌缺血再灌注后心肌组织的梗死面积，如图1所示。
[0049]
从图1可以看出，在对照组和实验组心肌危险面积均在45％左右，表明结扎位置和结扎手法基本一致的基础上，实验组的心肌梗死面积明显缩小。说明l-798106可以有效减轻心脏因miri导致的心肌梗死。
[0050]
2.心肌缺血再灌注后血清心肌酶谱的变化，如图2所示：
[0051]
从图2可以看出，假手术组因没有进行结扎，其血清ldh、ck和ck-mb均在生理水平，而对照组在缺血复灌后三项指标都显著升高，实验组则有效抑制被缺血复灌上调的心肌酶谱。说明l-798106可以有效降低复灌所致的心肌组织损伤。
[0052]
3.心肌缺血再灌注后心功能的改变，如图3所示：
[0053]
从图3可以看出，假手术组的lvef％和lvfs％均稳定维持在生理水平，缺血复灌24小时后，小鼠的两项心功能指标均明显降低，而实验组的lvef％和lvfs％则在此基础上显著回升。说明l-798106可改善缺血复灌后的心脏收缩功能。
[0054]
基于上述实验，应用l-798106抑制ep3受体是防治心肌缺血再灌注损伤的新型疗法。
[0055]
以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

技术特征：
1.一种ep3受体拮抗剂在制备预防心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述ep3受体拮抗剂在制备缩小心肌缺血再灌注手术后的心肌梗死面积药物中的应用。3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述ep3受体拮抗剂在制备降低心肌缺血再灌注手术后的血清心肌酶谱水平药物中的应用。4.如权利要求3所述应用，其特征在于，所述酶包括乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶及其同工酶中的一种或多种。5.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述ep3受体拮抗剂在制备改善心肌缺血再灌注手术后的心脏收缩功能药物中的应用。6.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述ep3受体拮抗剂包括l-798106。7.如权利要求6所述应用，其特征在于，所述药物包括口服剂、注射剂中的一种或多种。8.如权利要求6所述应用，其特征在于，所述药物包括口服剂，所述l-798106的剂量为14mg/kg/day。9.如权利要求6所述应用，其特征在于，所述l-798106以10mg/ml溶于dmso中，获得l-798106溶液，再将所述l-798106溶液溶于饮用水中。10.如权利要求9所述应用，其特征在于，按所述l-798106溶液体积比小于0.75％溶于所述饮用水中。

技术总结
本发明涉及生物医药领域，提供一种EP3受体拮抗剂L-798106在制备预防心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。本发明经过长期的研究意外发现，L-798106能够显著缩小心肌缺血再灌注手术后小鼠的心肌梗死面积和降低血清心肌酶谱水平，改善心脏收缩功能，减轻心肌缺血再灌注损伤。本发明的结果为L-798106改善心肌缺血再灌注损伤提供了理论依据，特别是对相关药物研发提供了基础。综上所述，本发明发现了EP3受体拮抗剂L-798106可用于防治心肌缺血再灌注损伤相关疾病，在临床上具有研发价值。在临床上具有研发价值。在临床上具有研发价值。


技术研发人员：刘斌 何东 葛佳辉 余钢 凌思镱 周应毕
受保护的技术使用者：汕头大学医学院
技术研发日：2023.06.09
技术公布日：2023/9/23