铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法与流程

1.本发明涉及抗原解离方法领域，特别是铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法。


背景技术：

2.氢氧化铝佐剂以铝羟基形式存在的，是一种纤维状粒子，等电点一般在10.0-11.0左右，在中性ph的溶液中以带正电荷微米颗粒存在，可较好的吸附带负电的抗原；
3.为使接种者更有效的获得免疫，需要加入氢氧化铝佐剂制备成吸附型疫苗，诱导机体对病毒抗原产生更强的免疫反应，尽管使用佐剂能够显著提高疫苗免疫原性，但佐剂-抗原吸附物屏蔽了抗原表面的特异性结合位点，从而导致抗原无法检出。为了能够鉴别出吸附疫苗中的抗原，需要首先解离抗原与铝盐佐剂之间的相互作用力，使抗原先从佐剂中解离下来，暴露出抗原相应的抗原决定簇，用酶联免疫吸附法进行检验。高盐破坏蛋白质带电层，而蛋白与氢氧化铝结合主要靠的就是静电引力，从而达到解吸附的目的；
4.hpv属人乳头瘤病毒科乳头瘤病毒，是一类无包膜的双链环状dna病毒，包括早期区域、晚期区域、上游调控区域；早期区域编码与病毒基因组复制、病毒颗粒合成及释放周期相关的非结构蛋白；晚期区域主要编码衣壳蛋白；
5.hpv成熟的vlp是直径为50～55nm，5个衣壳蛋白(l1)首先形成五聚体，72个五聚体通过相互作用组成t＝7的正二十面体结构，其超微结构和免疫原性与天然hpv病毒类似；
6.使用现有的文献和专利中的解吸附液，无法使人乳头瘤病毒抗原与佐剂的解离；因此需要利用hpv疫苗与铝佐剂之间的吸附特点，开发一种新型解吸附剂，使其可以破坏抗原与佐剂之间较强的静电引力，同时保持抗原结构的完整性；解吸附剂为氯化钠溶液和磷酸盐溶液。


技术实现要素：

7.本发明的目的在于提供铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，解决以上问题。
8.为达到以上目的，提供以下技术方案：
9.铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，向人乳头瘤病毒吸附型疫苗中加入等体积的不同浓度的氯化钠与20mmo l/l磷酸盐，于一定温度下放置24小时，进而促使吸附型疫苗的铝佐剂被解离下来。
10.优选地，所述磷酸盐ph为7.5。
11.优选地，所述氯化钠浓度范围为1-2mo l/l。
12.优选地，所述解离温度为4℃、25℃、37℃中的任意一种。
13.本发明的有益效果为：
14.(1)成本低，节省试液，只用氯化钠和磷酸盐；
15.(2)形成稳定溶液体系、保护抗原免疫活性、破坏铝佐剂吸附力。
具体实施方式
16.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
17.实施例1:
18.选用hpv16抗原20ug/剂，氢氧化铝1.5mg/剂，采用酶联免疫吸附法检测抗原含量和吸附后的抗原含量，检测结果为阴性，证明所有抗原被氢氧化铝吸附完全，参考hpv16抗原检测试剂盒(elisa)说明书(京天成生物技术有限公司)；
19.选用hpv18抗原40ug/剂，氢氧化铝1.5mg/剂，采用酶联免疫吸附法检测抗原含量和吸附后的抗原含量，检测结果为阴性，证明所有抗原被氢氧化铝吸附完全，参考hpv18抗原检测试剂盒(elisa)说明书(京天成生物技术有限公司)；
20.实验结果如下表所示：
21.表1：hpv16吸附氢氧化铝佐剂前、后抗原检测结果
[0022][0023]
表2：hpv18吸附氢氧化铝佐剂前、后抗原检测结果
[0024][0025]
采用不同浓度氯化钠与20mmo l/l磷酸盐(ph7.5)对hpv16、hpv18于37℃放置24小时，实验结果如下表所示：
[0026]
表3：不同盐浓度对hpv16解吸附效果的影响
[0027][0028]
表4：不同盐浓度对hpv18解吸附效果的影响
[0029][0030]
采用不同温度下1mo l/l氯化钠+20mmo l/l磷酸盐(ph7.5)对hpv16、hpv18处理24小时，实验结果如下表所示：
[0031]
表5：不同温度对hpv16解吸附效果的影响
[0032][0033]
表6：不同温度对hpv18解吸附效果的影响
[0034]


技术特征：
1.铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，其特征在于：向人乳头瘤病毒吸附型疫苗中加入等体积的不同浓度的氯化钠与20mmol/l磷酸盐，于一定温度下放置24小时，进而促使吸附型疫苗的铝佐剂被解离下来。2.根据权利要求1所述的铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，其特征在于：所述磷酸盐ph为7.5。3.根据权利要求2所述的铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，其特征在于：所述氯化钠浓度范围为1-2mol/l。4.根据权利要求3所述的铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，其特征在于：所述解离温度为4℃、25℃、37℃中的任意一种。

技术总结
本发明涉及抗原解离方法领域，特别是铝佐剂吸附人乳头瘤病毒疫苗中抗原的解离方法，向人乳头瘤病毒吸附型疫苗中加入等体积的不同浓度的氯化钠与20mmol/L磷酸盐，于一定温度下放置24小时，进而促使吸附型疫苗的铝佐剂被解离下来；本发明成本低，节省试液，只用氯化钠和磷酸盐；本发明能形成稳定溶液体系、保护抗原免疫活性、破坏铝佐剂吸附力。破坏铝佐剂吸附力。


技术研发人员：林美玉 郭海凤 丰强强 张扬 赵佳 郭晶 张浩
受保护的技术使用者：长春卓谊生物股份有限公司
技术研发日：2023.07.03
技术公布日：2023/10/15