柚皮素在制备治疗和/或预防眼部疾病的药物中的用途

1.本发明属于医药技术领域，尤其涉及柚皮素在制备治疗和/或预防眼部疾病的药物中的用途。


背景技术：

2.青光眼(glaucoma)是一组以视乳头萎缩及凹陷、视野缺损及视力下降为共同特征的疾病，病理性眼内压(intraocular pressure，iop)升高是其发病的主要危险因素，是全球范围内导致不可逆失明的主要原因。全球40-80岁人群的青光眼患病率估计为3.5％。随着老年人在人口中的数量和比例的增加，预计2040年将有1.118亿人患有青光眼。iop的降低是唯一被证实，能有效阻止或减缓青光眼进展的方法。临床上通常可以通过口服药物和(或)手术治疗来实现iop的降低。神经元丢失是青光眼视力丧失的主要原因，视神经为特殊的躯体感觉神经，由视网膜神经节细胞(retinal ganglial cells，rgcs)的轴突聚集而成。研究者们一直聚焦于探索rgcs以及视网膜的易感性和变性的机制，以寻找预防和治疗青光眼的新药物。
3.柚皮素是一种具有多种生物活性的柑橘类类黄酮，已成为治疗多种疾病的潜在治疗药物，具有调节脂蛋白代谢、抗炎、抗氧化、抗衰老、以及神经保护作用。目前，尚未有研究表明，柚皮素通过口服灌胃的方式给药后可以起到降iop和视神经保护的作用。


技术实现要素：

4.基于此，本发明的目的在于提供柚皮素在制备治疗和/或预防眼部疾病的药物中的用途。
5.进一步，所述眼部疾病为青光眼、病理性眼内压升高、视神经受损中的至少一种。
6.柚皮素在制备降低iop、保护视神经的药物中的应用，是将有效剂量的柚皮素与溶剂混合制成柚皮素悬浊液，作为所述降低iop、保护视神经的给药药物中的有效成分。
7.发明人发现，在安全有效剂量范围内的较低浓度和较高浓度的柚皮素悬浊液都具有不同程度降低iop的效果，且高浓度的柚皮素显著降低了累积的iop水平。
8.发明人同时发现，在安全有效剂量范围内的较高浓度的柚皮素悬浊液在微珠诱导的慢性高眼压(ocular hypertension，oht)模型中表现出保护rgcs存活的效果。
9.进一步，所述药物含有治疗有效量的柚皮素和药学上可接受的载体。
10.进一步，所述药物被制成药学上允许的剂型。
11.进一步，所述柚皮素的制备方法包括如下步骤：0.1g羧甲基纤维素钠与10ml的超轻水在37℃水浴下溶解，冷却后再加入10ml超轻水混合，过夜。第二天，取5ml 0.5％羧甲基纤维素钠溶液分别加入0.1g和0.3g柚皮素，溶解，用羧甲基纤维素钠定容至10ml，获得10mg/ml和30mg/ml的柚皮素悬浊液。
12.柚皮素悬浊液在临用前需摇匀。柚皮素可通过普通商业途径购买获得。
13.进一步，所述药物与其他用于治疗和/预防或眼部疾病的药物联合使用。
14.进一步，所述药物与其他用于治疗和/预防或眼部疾病的药物制成药物组合物。
15.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
16.本发明提供了柚皮素在制备治疗和/预防或眼部疾病的药物中的用途，所述眼部疾病为青光眼、病理性眼内压升高或视神经受损。柚皮素悬浊液可以通过口服灌胃给药的方式到达眼内，达到降低iop、保护视神经的作用；通过监测iop实验发现，本发明所述的柚皮素悬浊液具有降低iop的作用，此外通过视网膜铺片进行rgcs特异性染色并且计数后发现，本发明所述的柚皮素还具有保护视神经的功能，为预防和治疗青光眼提供了一个新的医药选择途径。
附图说明
17.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
18.图1为0、100、300mg/kg的柚皮素悬浊液对c57小鼠iop的影响示意图；其中图1a为六组每隔3天所测得的iop值变化图，图1b为实验期间小鼠累积的iop值。
19.图2为0、100、300mg/kg的柚皮素悬浊液对c57小鼠rgcs存活的影响示意图，其中图2a为视网膜的近端、中央和外周图像；图2b为整体视网膜、近端视网膜、中间视网膜和外周视网膜中rbpms标记的rgcs密度的定量分析图。
具体实施方式
20.下面将结合实施例和附图对本发明的技术方案进行清楚、详细地描述，显然，所描述的实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，而不是全部的实施例。本发明的保护范围不限于下述的实施例，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的实施例，仍属于本发明的保护范畴。
21.下述实施例中的实验方法，除非另有指明均为常规方法，本发明所涉及试剂或仪器未注明生产厂商者，均为普通市售品，皆可通过市场购买获得。
22.下面结合附图(图1-2)和具体实施方式对本发明技术方案做进一步详细的描述。
23.实施例1：配制柚皮素悬浊液
24.0.1g羧甲基纤维素钠与10ml的超轻水在37℃水浴下溶解，冷却后再加入10ml超轻水混合，过夜。第二天，取5ml 0.5％羧甲基纤维素钠溶液分别加入0.1g和0.3g柚皮素，溶解，用羧甲基纤维素钠定容至10ml，获得10mg/ml和30mg/ml的柚皮素悬浊液。
25.试验例1：
26.1.1动物和分组：
27.本研究严格遵守arvo眼科和视力研究动物使用声明，并由苏州西山生物技术有限公司批准和监督(许可证号：scxk(京)2019-0010)。雄性c57bl/6j(5-6w，20-25g)获自斯贝福(北京)生物技术有限公司。将动物饲养在标准条件下，并在温度和湿度受控的室内保持12小时光照/黑暗循环，自由获取食物和水。
28.将42只5-6周雄性c57小鼠适应性饲养7天后开始实验，随机分为三组。在第0天和
第14天分别在小鼠右眼前房注射微珠构建慢性高iop模型，左眼作为自身对照。每天上午8点给小鼠定点灌胃，三组小鼠分别使用实施例1制备得到的10mg/ml和30mg/ml的柚皮素悬浊液进行灌胃治疗，以0.5％的羧甲基纤维素钠溶液作为空白对照组，每天1次。根据小鼠的体重，三组老鼠给药的剂量为0，100和300mg/kg/day的柚皮素。
29.根据有无造模和给药的不同，将小鼠分为六组，分别为，对照组：溶剂对照组(con+vehicle)、较低剂量柚皮素对照组(con+100nar)、较高剂量柚皮素对照组(con+300nar)，实验组：溶剂实验组(oht+vehicle)、较低剂量柚皮素实验组(oht+100nar)、较高剂量柚皮素实验组(oht+300nar)。总共处理28天。
30.1.2iop测量
31.通过吸入异氟烷(2％-5％；深圳市瑞沃德生命科技有限公司，中国)麻醉小鼠，用精密蒸发器在95％氧气中递送，在动物失去脚趾反射和眨眼反射后2至3分钟内开始iop测量。每三天测一次iop，每天固定上午9点开始用icare回弹式眼内压计测量iop，在消除最高值和最低值后，记录5次平均iop，数据采用anova和dunnett's多重比较检验进行分析，以均值
±
标准误差(s.e.m.)的方式呈现，结果如图1所示，图1a为六组每隔3天所测得的iop值变化图，关于较高剂量柚皮素实验组(oht+300nar)相对于溶剂实验组(oht+vehicle)的iop变化的显著性水平以*：p《0.05、**：p《0.01、***：p《0.001来表示；关于较低剂量柚皮素实验组(oht+100nar)相对于溶剂实验组(oht+vehicle)的iop变化的显著性水平以p《0.05、p《0.01、p《0.001来表示。
32.从图1a可以看出，在整个实验期间，实验眼保持高iop状态，而对照眼iop保持在正常iop状态(9.96
±
0.20mm hg)。从第18天开始，相对于溶剂实验组，较低剂量柚皮素实验组的iop显著降低(p《0.05)。尤其是在造模后的第27天，较低剂量柚皮素实验组的iop比溶剂实验组的iop减少6.02
±
1.88mmhg。较高剂量柚皮素实验组虽然在第21天才表现出明显的降iop效果(p《0.05)，但在造模后第27天的iop测量中，较高剂量柚皮素实验组的iop也比溶剂实验组的iop减少了6.55
±
3.11mmhg(p《0.001)。
33.为了进一步评估柚皮素对降低iop的影响，我们对比了实验期间小鼠累积的iop，具体见图1b。我们发现在溶剂实验组中，iop显著升高(p《0.001)。与溶剂实验组相比，较高剂量柚皮素实验组显著降低了累积的iop水平(p《0.05)。
34.1.3rgcs计数
35.造模28天后采用过量麻醉处死小鼠，取出小鼠眼球，放置在眼球固定液(fas)中15分钟后，在显微镜下沿角巩缘剪除角膜，随后将巩膜和晶状体剥离，处理掉各种杂质，剩下乳白色的杯状视网膜，以视神经为中心将视网膜剪切成四叶草形状备用。用rgcs特异性标记抗体rbpms进行免疫荧光染色后在荧光倒置显微镜下观察，以视神经为中心，每片视网膜取近端、中央和外周的视网膜部位进行拍摄，每个视网膜一共获得12个hpf下的视网膜图像，结果见图2a。
36.在图2a左侧，是一个完整的视网膜平铺示意图，显示了每个视网膜的所有分析区域。沿着以视神经头为中心的四个象限，在近端、中部和外周视网膜上共获得了12张视网膜图像。比例尺是100μm。放大倍数为400x。
37.在oht损伤模型中，对整体视网膜、近端视网膜、中间视网膜和外周视网膜中rbpms
标记的rgcs密度(细胞个数/mm2)进行定量分析，数据采用anova和dunnett's多重比较检验进行分析，以均值
±
标准误差(s.e.m.)的方式呈现，结果见图2b-2e，*表示p《0.05，**表示p《0.01，***表示p《0.001。
38.从图2b-2e可以看出，与溶剂对照组相比，溶剂实验组中的rgcs存活明显降低，但在较高剂量柚皮素实验组中，整体视网膜和外周视网膜中rgcs的存活数量比溶剂实验组多(p＜0.01，图2b、2e)。可以看出，在微珠诱导的oht模型中，较高剂量柚皮素给药保护了rgcs的存活。
39.综上所述，柚皮素可以通过口服灌胃给药的方式到达眼内，通过监测iop和rgcs计数分析发现，该柚皮素悬浊液具有降iop、保护视神经的作用。
40.上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

技术特征：
1.柚皮素在制备治疗和/预防或眼部疾病的药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述眼部疾病为青光眼、病理性眼内压升高、视神经受损中的至少一种。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物含有治疗有效量的柚皮素和药学上可接受的载体。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物被制成药学上允许的剂型。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述柚皮素的制备方法包括如下步骤：0.1g羧甲基纤维素钠与10ml的超轻水在37℃水浴下溶解，冷却后再加入10ml超轻水混合，过夜。第二天，取5ml 0.5％羧甲基纤维素钠溶液分别加入0.1g和0.3g柚皮素，溶解，用羧甲基纤维素钠定容至10ml，获得10mg/ml和30mg/ml的柚皮素悬浊液。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物与其他用于治疗和/预防或眼部疾病的药物联合使用。7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物与其他用于治疗和/预防或眼部疾病的药物制成药物组合物。

技术总结
本发明属于医药技术领域，尤其涉及柚皮素在制备治疗和/或预防眼部疾病的药物中的用途。柚皮素悬浊液可以通过口服灌胃给药的方式到达眼内，达到降低IOP、保护视神经的作用；通过监测IOP实验发现，本发明所述的柚皮素悬浊液具有降低IOP的作用，此外通过视网膜铺片进行RGCs特异性染色并且计数后发现，本发明所述的柚皮素还具有保护视神经的功能，为预防和治疗青光眼提供了一个新的医药选择途径。疗青光眼提供了一个新的医药选择途径。疗青光眼提供了一个新的医药选择途径。


技术研发人员：张旭 曾玲 应倩 罗红豆
受保护的技术使用者：南昌大学
技术研发日：2023.06.06
技术公布日：2023/10/15