一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法

1.本发明属于检测方法领域，具体是一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法。


背景技术：

2.汞是一种具有严重生理毒性的化学物质，在自然界中主要以无机汞和有机汞等形式存在，有机汞的毒性强于无机汞,其中甲基汞是毒性最强的有机汞。甲基汞和乙基汞均具有亲脂性、生物累积性和生物放大效应，可在鱼、贝等水生动物体内富集，并通过食物链迁移转化危害人体健康，在微生物的作用下，环境中的无机汞会转化成毒性更强的有机汞，有机汞主要以甲基汞和乙基汞的形态存在。在所有的汞形态中，甲基汞的毒性最强，人体血液中甲基汞的含量若超过0.2μg/g时就会出现明显中毒症状。有机汞作为一种亲脂性高毒物，进入人体以后，主要是侵入神经系统尤其是中枢神经系统，从而对人体造成不可逆转的损害。由汞及有机汞造成的环境和食品污染问题，已经成为危害人类生存的重要公害之一。
3.例如中国专利公告号为cn 103335990 b的专利公开了一种测定动物肉体中甲基汞和乙基汞的方法，其特征在于步骤：动物肉体样品预处理；微波辅助萃取；液相色谱-原子荧光联用仪进行分析；最后用数据处理器进行数据收集处理，测出鱼肉中的甲基汞和乙基汞的含量。本发明将微波辅助萃取和hplc-afs联用的方法同时应用于动物肉体中甲基汞和乙基汞的检测，并对萃取工艺进行优化，通过对色谱分析中流动相的选择和浓度控制，以及对原子荧光分析中盐酸的浓度、还原剂的选择和灯电流等工艺的合理控制，简化了工艺流程，能快速简便地测定动物肉体中甲基汞和乙基汞的含量，本发明的检测方法不仅测定简单快速，而且稳定性好，同时具有测定灵敏度高、准确度好、抗干扰能力强的特点。
4.但是，该方法适用于检测动物肉体中甲基汞和乙基汞，不适用于含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测。研究表明汞化合物毒性取决于其化学形态及浓度，有机汞的毒性比无机汞大，甲基汞是毒性最强的汞化合物。含朱砂中成药的总汞含量极高，但几乎都是极不活泼的硫化汞，若以总汞含量来评价其毒性显然是不合理的。要客观评价含朱砂中成药的汞毒性就不能回避对毒性较强的有机汞的测定，因而建立灵敏高效的检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞的方法是非常必要的。因此，有必要设置一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法。


技术实现要素：

5.为了解决上述问题，本发明提供一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，以检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量。
6.为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
7.一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，包括如下步骤：步骤一，提取：称取1.0g样品放置于50ml塑料离心管中，加入10ml盐酸，于室温下超声提取2h；再进行离心提取上清液，收集上清液至50ml圆底塑料超速离心管中；
8.步骤二，一次萃取：向盛有上清液的离心管中加人5ml二氯甲烷。再将液体温度调至4℃后进行离心作用，移取二氯甲烷层至25ml吹氮管中，完成一次萃取；
9.步骤三，二次萃取：在经过一次萃取的液体中再次加入5ml二氯甲烷，再将液体温度调至4℃后进行离心作用，进行二次萃取；
10.步骤四，过滤：在经过二次萃取的溶液中加入1ml二氯甲烷，常温下吹干二氯甲烷，将液体通过滤膜进行过滤；
11.步骤五，检测：使用高效液相色谱仪进行高效液相色谱分离，再使用电感耦合等离子体质谱仪检测试样溶液。
12.采用上述方案的有益效果：使用非氧化性强酸的盐酸作为提取剂，有利于避免在提取过程中因氧化作用改变样品中汞的形态。并且本实验利用无机汞在二氯甲烷中溶解度极低的特点，有效地除去了盐酸提取步骤带出的高含量无机汞。本方法采用盐酸提取，二氯甲烷萃取，过滤等处理，利用高效液相色分离，最后由电感耦合等离子体质谱仪检测甲基汞含量，本方法对样品的处理简单高效、线性范围宽、精密度较好、准确性较高，适用于检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量。
13.进一步，步骤一中，称取样品前，将含朱砂中成药磨成细粉，使用40目筛对含朱砂中成药粉进行过筛。
14.有益效果：将样品磨成细粉并过筛，使样品能够更好地与盐酸混合反应，加快提取速度，一定程度上可以减少提取时间，从而减少含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量检测时间。
15.进一步，步骤一中，提取上清液时，使用离心机在4500r/min下离心5min。
16.进一步，步骤一中，加入盐酸后将塑料离心管放入旋涡混匀器中，开启旋涡混匀器，将塑料离心管内的样品与盐酸漩涡混匀。
17.有益效果：旋涡混匀器结构简单可靠，仪器体积小，使用方便，使用旋涡混匀器可以快速将样品与盐酸混合均匀，加快样品与盐酸的反应速率，进一步减少了提取时间，从而减少含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量检测时间。
18.进一步，步骤二中，进行离心时，使用离心机18000r/min离心10min。
19.进一步，步骤四中，通过0.45pm滤膜进行过滤。
20.进一步，步骤五中，高效液相色谱仪的色谱柱为c18柱；流动相为5％甲醇、甲醇0.06mol/l乙酸铵和0.1％半胱氨酸；泵流速为0.4ml/min，进样量为100μl。
21.有益效果：高效液相色谱仪分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，可以方便实验人员进行操作。
22.进一步，步骤五中，电感耦合等离子体质谱仪的功率为1500w；气流量为15l/min；辅助气流量为0.26l/min；载气流量为0.80l/min；蠕动泵转速为0.30r/s；雾室温度为2℃；采样深度为8.0mm；数据采集模式为time resolved analysis mode；积分时间为0.3s。
23.有益效果：电感耦合等离子体质谱仪能够多元素快速分析、动态线形范围宽、检测限低、电感耦合等离子体质谱仪能够在大气压下进样，便于与其他进样技术连用、电感耦合等离子体质谱仪可进行同位素分析、单元素和多元素分析，以及有机物中金属元素的分析，适用于含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测。
附图说明
24.图1为本发明实施例的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法流程图。
具体实施方式
25.下面通过具体实施方式进一步详细说明：
26.实施例基本如附图1所示：
27.一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，包括如下步骤：
28.步骤一，提取：将含朱砂中成药磨成细粉，再使用40目筛对含朱砂中成药粉进行过筛。将样品磨成细粉并过筛，使样品能够更好地与盐酸混合反应，加快提取速度，一定程度上可以减少提取时间，从而减少含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量检测时间。
29.称取1.0g样品放置于50ml塑料离心管中，加入10ml盐酸，加入盐酸后将塑料离心管放入旋涡混匀器中，开启旋涡混匀器，将塑料离心管内的样品与盐酸漩涡混匀。旋涡混匀器结构简单可靠，仪器体积小，使用方便，使用旋涡混匀器可以快速将样品与盐酸混合均匀，加快样品与盐酸的反应速率，进一步减少了提取时间，从而减少含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量检测时间。使用非氧化性强酸的盐酸作为提取剂，有利于避免在提取过程中因氧化作用改变样品中汞的形态。将溶液于室温下超声提取2h，再使用离心机在4500r/min下离心5min提取上清液，收集上清液至50ml圆底塑料超速离心管中。
30.步骤二，一次萃取：向盛有上清液的离心管中加人5ml二氯甲烷。再将液体温度调至4℃后使用离心机18000r/min离心10min，移取二氯甲烷层至25ml吹氮管中，完成一次萃取。
31.步骤三，二次萃取：在经过一次萃取的液体中再次加入5ml二氯甲烷，再将液体温度调至4℃后进行离心作用，进行二次萃取。
32.步骤四，过滤：在经过二次萃取的溶液中加入1ml二氯甲烷，常温下吹干二氯甲烷，将液体通过0.45pm滤膜进行过滤。其中，利用无机汞在二氯甲烷中溶解度极低的特点，有效地除去了盐酸提取步骤带出的高含量无机汞。
33.步骤五，检测：使用高效液相色谱仪进行高效液相色谱分离，高效液相色谱仪分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，可以方便实验人员进行操作，其中高效液相色谱仪的色谱柱为c18柱；流动相为5％甲醇、甲醇0.06mol/l乙酸铵和0.1％半胱氨酸；泵流速为0.4ml/min，进样量为100μl。
34.最后，使用电感耦合等离子体质谱仪检测试样溶液，电感耦合等离子体质谱仪能够多元素快速分析、动态线形范围宽、检测限低、电感耦合等离子体质谱仪能够在大气压下进样，便于与其他进样技术连用、电感耦合等离子体质谱仪可进行同位素分析、单元素和多元素分析，以及有机物中金属元素的分析，适用于含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测，其中电感耦合等离子体质谱仪的功率为1500w；气流量为15l/min；辅助气流量为0.26l/min；载气流量为0.80l/min；蠕动泵转速为0.30r/s；雾室温度为2℃；采样深度为8.0mm；数据采集模式为time resolved analysis mode；积分时间为0.3s。
35.本方法采用盐酸提取，二氯甲烷萃取，过滤等处理，利用高效液相色分离，最后由电感耦合等离子体质谱仪检测甲基汞含量，本方法对样品的处理简单高效、线性范围宽、精密度较好、准确性较高，适用于检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量。
36.检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量，有关实验资料如下：
37.取牛黄清心丸、牛黄千金散、天王补心丹和柏子养心丸4种含朱砂中成药，分别按照本方法进行检测，检测数据如表一所示：
38.表一牛黄清心丸、牛黄千金散、天王补心丹和柏子养心丸的甲基汞和乙基汞含量
39.名称甲基汞含量(mg/kg)乙基汞含量(mg/kg)安宫牛黄丸00牛黄千金散0.00660天王补心丹00柏子养心丸00
40.结论：发现仅牛黄千金散中检出0.0066mg/kg的甲基汞，其它均未检出，说明含朱砂中成药还是以稳定的、不活泼的硫化汞形式存在。本方法对样品的处理简单高效、线性范围宽、精密度较好、准确性较高，适用于检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量。
41.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
42.以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述，所属领域普通技术人员知晓申请日或者优先权日之前发明所属技术领域所有的普通技术知识，能够获知该领域中所有的现有技术，并且具有应用该日期之前常规实验手段的能力，所属领域普通技术人员可以在本技术给出的启示下，结合自身能力完善并实施本方案，一些典型的公知结构或者公知方法不应当成为所属领域普通技术人员实施本技术的障碍。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

技术特征：
1.一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一，提取：称取1.0g样品放置于50ml塑料离心管中，加入10ml盐酸，于室温下超声提取2h；再进行离心提取上清液，收集上清液至50ml圆底塑料超速离心管中；步骤二，一次萃取：向盛有上清液的离心管中加人5ml二氯甲烷。再将液体温度调至4℃后进行离心作用，移取二氯甲烷层至25ml吹氮管中，完成一次萃取；步骤三，二次萃取：在经过一次萃取的液体中再次加入5ml二氯甲烷，再将液体温度调至4℃后进行离心作用，进行二次萃取；步骤四，过滤：在经过二次萃取的溶液中加入1ml二氯甲烷，常温下吹干二氯甲烷，将液体通过滤膜进行过滤；步骤五，检测：使用高效液相色谱仪进行高效液相色谱分离，再使用电感耦合等离子体质谱仪检测试样溶液。2.根据权利要求1所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤一中，称取样品前，将含朱砂中成药磨成细粉，使用40目筛对含朱砂中成药粉进行过筛。3.根据权利要求2所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤一中，提取上清液时，使用离心机在4500r/min下离心5min。4.根据权利要求3所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤一中，加入盐酸后将塑料离心管放入旋涡混匀器中，开启旋涡混匀器，将塑料离心管内的样品与盐酸漩涡混匀。5.根据权利要求4所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤二中，进行离心时，使用离心机18000r/min离心10min。6.根据权利要求5所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤四中，通过0.45pm滤膜进行过滤。7.根据权利要求6所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤五中，高效液相色谱仪的色谱柱为c18柱；流动相为5％甲醇、甲醇0.06mol/l乙酸铵和0.1％半胱氨酸；泵流速为0.4ml/min，进样量为100μl。8.根据权利要求7所述的含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，其特征在于：步骤五中，电感耦合等离子体质谱仪的功率为1500w；气流量为15l/min；辅助气流量为0.26l/min；载气流量为0.80l/min；蠕动泵转速为0.30r/s；雾室温度为2℃；采样深度为8.0mm；数据采集模式为time resolved analysis mode；积分时间为0.3s。

技术总结
本发明公开了检测方法领域的一种含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量的检测方法，包括如下步骤：将样品加入盐酸并进行离心作用提取上清液；向液体中加入二氯甲烷进行离心作用对其进行两次萃取；在溶液中再加入二氯甲烷后吹干二氯甲烷，将液体通过滤膜进行过滤；进行高效液相色谱分离，再使用电感耦合等离子体质谱仪检测试样溶液。非氧化性强酸的盐酸作为提取剂有利于避免在提取过程中因氧化作用改变样品中汞的形态。二氯甲烷有效地除去了盐酸提取步骤带出的高含量无机汞。最后利用高效液相色谱分离，电感耦合等离子体质谱仪检测甲基汞含量，处理简单高效、线性范围宽、精密度较好、准确性较高，适用于检测含朱砂中成药中甲基汞和乙基汞含量。乙基汞含量。乙基汞含量。


技术研发人员：梁晓艳 梁旭霞
受保护的技术使用者：广西中医药大学附属瑞康医院
技术研发日：2023.06.07
技术公布日：2023/10/15