一种基于罗汉果渣的固态培养基及其在培养白腐真菌方面的用途

1.本发明涉及微生物领域，特别是涉及一种基于罗汉果渣的固态培养基及其在培养白腐真菌方面的用途。


背景技术：

2.随着科技与工业的发展，有毒物质的产出和排放使得环境污染问题日益见长，如何降解这些有毒物质是生物科学一直研究的问题。在食品工业副产品以及工业废渣中含有大量的木质素。而木质素是一类结构复杂、稳定的生物大分子物质，在自然界中，其含量仅次于纤维素，占植物细胞化学组成的15％～36％。工业上木质素的废弃，不仅对环境造成污染，又浪费了大量可利用资源。迄今为止，木质素的结构还未完全确定，一般认为它是一种复杂的网状酚类非结晶高分子聚合物。在自然界中，木质素是由真菌、细菌、放线菌以及相应的微生物群落共同作用降解的，其中真菌的降解能力最强。
3.其中，白腐真菌是最主要的降解木质素的真菌。白腐真菌因腐生于树木上，使木质腐烂成白色海绵团体而得名。phanerochaete chrysosporium burdsall是其典型种，中文名黄孢原毛平革菌。它有着多核、少隔膜的菌丝体，能解释放出对木质素、纤维素以及半纤维和果胶素等木质组分有降解作用的酶。因它具有的良好的降解特性以及所蕴含的巨大潜力，所以一直都受到科学领域的关注。白腐真菌通过自由基过程进行化学转化，白腐菌降解遵循一级动力学，催化初始氧化反应的酶在底物上没有真正的km值，这有利于氧化产物的形成，还意味着白腐真菌能将污染物降解到几乎为零。白腐真菌的降解作用对于难降解化合物方面来说相比其他微生物有很多优势，比如它对环境条件的要求低、易生长、易培养。白腐真菌中含有丰富的蛋白酶体系，其中对木质素起主要降解作用的主要是：锰过氧化物酶(mnp)、木质素过氧化物酶(lip)和漆酶。木质素过氧化物酶主要催化降解非酚类底物，锰过氧化物酶主要催化降解酚类、胺类等底物，而漆酶则可以催化酚类化合物和芳香胺的氧化。
4.近年来微生物降解工农业废渣，以其成本低、对环境友好的优点成为研究的热点。白腐真菌因其能进行无污染的降解而引起广泛的关注和研究，大多数液态培养的条件已经比较完善，而固态培养的研究却比较少。
5.罗汉果是葫芦科多年生宿根攀援性藤本植物，学名siraitia grosvenorii swingle。罗汉果原产于两广、江西、贵州、湖南等热带和亚热带地区，以广西桂林产的罗汉果最为出名，它具有甜度高、热量低的优点。在中国有着利用植物治疗疾病的悠久历史，罗汉果有提神生津、清热润肺、祛火止咳、滑肠通便等效用，是一种可以治疗百日咳、急性支气管炎、哮喘、高血压及糖尿病等症的日常食用的药果。因为罗汉果具有较强的保健功能，所以被国家卫生部、中医药管理局将其列入第一批“既是食品又是药品”的品种名单。罗汉果作为一种食品，营养相对均衡，特别是蛋白质和氨基酸、微量元素、糖类较为丰富，其涵盖了人体必需的8种氨基酸。近年来因罗汉果独特的药用价值，而受到国内国外的广泛关注和研
究。工业上已经以罗汉果为生产原料进行大规模提取罗汉果甜苷，仅桂林每年剩下的罗汉果干渣约500t，多作燃料或丢弃，造成资源浪费，因此如何将这些废弃的罗汉果渣利用起来具有重大的意义。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种基于罗汉果渣的固态培养基及其在培养白腐真菌方面的用途，以解决上述现有技术存在的问题，通过采用罗汉果渣固体培养基培养白腐真菌，降低白腐真菌的培养成本还能使其能大量应用于工业有毒废弃物排放的降解。
7.为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
8.本发明提供一种基于罗汉果渣的固体培养基，所述固体培养基包括罗汉果渣、水、葡萄糖以及酒石酸铵，ph值6.5-7.5。
9.优选的是，所述罗汉果渣与所述水的质量体积比为1g∶(1-4)ml，所述罗汉果渣与所述葡萄糖的质量比为1∶(0.01-0.06)，所述罗汉果渣与所述酒石酸铵的质量比为1∶(0.001-0.005)。
10.优选的是，所述罗汉果渣与所述水的质量体积比为1∶2，所述罗汉果渣与所述葡萄糖的质量比为1∶0.04，所述罗汉果渣与所述酒石酸铵的质量比为1∶0.002。
11.本发明还提供利用所述的固体培养基培养白腐真菌的方法，包括以下步骤：
12.将白腐真菌菌悬液接种于所述固体培养基中，于25-35℃下培养6天，获取白腐真菌发酵物；其中，按照所述固体培养基中的罗汉果渣计，所述白腐真菌菌悬液与所述罗汉果渣的体积质量比为(0.1-0.4)ml∶1g。
13.优选的是，所述白腐真菌菌悬液与所述罗汉果渣的体积质量比为0.2ml∶1g。
14.优选的是，培养温度为30℃。
15.本发明还提供所述的固体培养基在培养白腐真菌方面的用途。
16.本发明还提供所述的固体培养基在制备木质素过氧化物酶或锰过氧化物酶方面的用途。
17.本发明还提供所述的固体培养基在制备木质素过氧化物酶方面的用途，利用所述固体培养基制备木质素过氧化物酶的最佳条件为：在所述固体培养基中，每5g罗汉果渣含白腐真菌菌悬液1ml、蒸馏水10ml、葡萄糖0.2g以及酒石酸铵0.01g；培养温度为30℃、ph为中性。
18.本发明还提供所述的固体培养基在制备锰过氧化物酶方面的用途，利用所述固体培养基制备锰过氧化物酶的最佳条件为：在所述固体培养基中，每5g罗汉果渣含白腐真菌菌悬液1.5ml、蒸馏水10ml、葡萄糖0.3g以及酒石酸铵0.01g；培养温度为30℃、ph为中性。
19.本发明公开了以下技术效果：
20.本发明以罗汉果渣为固态发酵原料，以白腐真菌为目标生物，以黄孢原毛平革菌产木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶的酶活为检测目标，按照不同的料水比、ph值、温度、接种量、葡萄糖含量、酒石酸的含量等设置菌种的培养条件进行单因素实验，然后在此基础上通过正交试验设计优化培养条件，得到罗汉果渣固态培养黄孢原毛平革菌的最佳培养条件，具体为：最优产木质过氧化物酶的条件为：培养温度30℃、ph中性，每5g罗汉果培养基中含菌悬液1ml，蒸馏水10ml，葡萄糖含量0.2g，酒石酸铵含量0.01g。最优产锰过氧化物酶的
条件：培养温度30℃、ph中性，每5g罗汉果培养基中含菌悬液1.5ml，蒸馏水10ml，葡萄糖含量为0.3g，酒石酸铵含量为0.01g。在这些条件下，达到172.9u/ml的木质素过氧化物酶活和166.2u/ml的锰过氧化物酶酶活。因此，本发明采用罗汉果渣培养白腐真菌，利用得到的菌种来降解生产中产生的罗汉果渣废弃物具有重要的实际应用价值。
附图说明
21.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
22.图1为料水比对白腐真菌菌种生长的影响；
23.图2为温度对白腐真菌菌种生长的影响；
24.图3为ph对白腐真菌菌种生长的影响。
具体实施方式
25.现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
26.应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
27.除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
28.在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
29.关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
30.实施例1
31.1、实验材料
32.(1)菌种
33.白腐真菌(黄孢原毛平革菌bkm-f-1716，购于广东微生物菌种保藏中心)。
34.(2)培养基
35.马铃薯葡萄糖培养基(potato dextroseagar，简称pda)，pda培养基配方(1l)：去皮马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、硫酸锰1.5g、维生素b1 8mg、kh2po
4 3g、蒸馏水1000ml、
ph自然。具体方法为：将马铃薯切成长宽1cm左右的小立方体，在电磁炉上加热至沸腾(煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破马铃薯块即可)，用8层纱布过滤，得到马铃薯浸出液，加入其它组分加热溶解，加入蒸馏水至1l。在0.1mpa灭菌20min。
36.罗汉果固体培养基：将罗汉果渣，烘干粉碎，称取5g加入250ml三角瓶中，加水浸湿，2h后培养基有水渍，但无水滴滴出为宜。在0.1mpa灭菌20min。
37.2、实验方法
38.2.1菌种的活化与扩培
39.将白腐真菌即黄孢原毛平革菌(phanerochaete chrysosporium)bkm-f-1716在超净工作台上进行以下步骤：将pda培养基倒入试管倾斜放置冷却制成pda斜面培养基，往冻干菌试管内注入无菌水，轻微晃动倒入离心管制成菌悬液，然后用移液枪沿试管壁将菌悬液注入pda斜面培基，27℃培养箱中培养7d至表面长满白色粉状孢子，得到第一代黄孢原毛平革菌，再将第一代黄孢原毛平革菌按以上步骤进行扩培直至得到第三代黄孢原毛平革菌，放置4℃冰箱保存菌种。
40.2.2白腐真菌粗酶液的制备
41.白腐真菌于罗汉果固体培养基培养6d后，按发酵底物质量体积1:6加入磷酸缓冲溶液(ph7.5)于三角瓶中，磷酸盐缓冲溶液成分为(1l)：na2hpo4·
12h2o 30.08g，nah2po4·
2h2o 2.49g，edta-na
2 3.72g。然后将加入磷酸缓冲溶液的三角瓶于150r/min放在摇床上振荡1h，滤纸过滤，收集滤液于离心管中，用3000r/min的离心机离心10min，取上清液。将上清液再次用高速冷冻离心机离心(9000r/min，10min，4℃，1次)，取上清液得到粗酶液。粗酶液在冰箱中4℃保存待用。
42.2.3白腐真菌固态培养的影响条件
43.2.3.1料水比对菌种生长的影响
44.将罗汉果渣烘干粉碎，分别称取5g的罗汉果渣粉，加入4个250ml三角瓶中，加水浸湿，分别按料水比1:1、1:2、1:3、1:4加入蒸馏水，2h后培养基有水渍，但无水滴滴出为宜。在0.1mpa灭菌20min。
45.然后，在无菌条件下，将菌悬液均匀喷洒至固体培养基，每个样品设3个平行对照，恒温培养箱中27℃培养，6d后测量其木质素过氧化酶酶活。
46.2.3.2温度对菌种生长的影响
47.将罗汉果渣烘干粉碎，分别称取5g的罗汉果，加入4个250ml三角瓶中，分别按2.3.1得出的最佳料水比加入蒸馏水，2h后培养基有水渍，但无水滴滴出为宜。在0.1mpa灭菌20min。
48.然后，在无菌条件下，将菌悬液均匀喷洒至固体培养基，每个样品设3个平行对照，分别在20℃、25℃、30℃、35℃的恒温培养箱中培养，6d后测量其木质素过氧化酶酶活和锰过氧化物酶酶活。
49.2.3.3培养基酸碱对菌种生长的影响
50.将罗汉果渣烘干粉碎，5g的罗汉果，分别按2.3.1得出的最佳料水比加入蒸馏水，调ph为4.5、5.5、6.5、7.5、8.5，2h后培养基有水渍，但无水滴滴出为宜。在0.1mpa灭菌20min。
51.然后，在无菌条件下，将菌悬液均匀喷洒至固体培养基，每个样品设3个平行对照，
分别在30℃的恒温培养箱中培养，6d后测量其木质素过氧化酶酶活和锰过氧化物酶酶活。
52.2.4粗酶液酶活的测定
53.2.4.1锰过氧化物酶的酶活检测
54.二价锰氧化的分光光度法，mn
3+
是mnp的直接作用产物，在240nm处测mn
3+
的光吸收值是测定mnp活力的一个较为灵敏简便的方法，此法还可用于连续测定。反应体系(4ml)：2.6ml的酒石酸-酒石酸钠缓冲溶液(ph 4.5，0.5mol/l)，0.4ml的mnso4溶液(0.0016mol/l)，粗酶液1ml，预热至37℃后，加入0.1ml的h2o2(0.0016mol/l)溶液启动反应，测反应最初2分钟内用紫外分光光度计在λ＝240nm处记录30s吸光度的变化，1个酶活力单位用每分钟每毫升培养基滤液增加0.1个od值来表示。mn
3+
在240nm处的摩尔消光系数为6.5
×
10-3
l/(μmol
·
cm)。
[0055][0056]
△
a/
△
t为反应混合物240nm吸光度在30s内的变化率(若吸光度非线性变化，可能是因为mnp浓度过高，酶液应适当稀释后检测)，单位为/min；v为反应体系体积之和，4ml；ε为反应产物的吸光系数，6.5
×
10-3
l/(μmol
·
cm)；b为检测光程即比色皿的厚度，1cm；v为体系中加入的酶液体积，单位是毫升。
[0057]
2.4.2木质素过氧化物酶酶活的检测
[0058]
以藜芦醇为底物测lip活力的方法：藜芦醇是白腐真菌的次代谢产物，可以诱导lip合成。藜芦醇原本在310nm处无光吸收，当加入h2o2时，lip可以将藜芦醇氧化成藜芦醛，而藜芦醛在310nm处有强光吸收(e＝9.3
×
103mo1.cm-1
)，因此一般用其光密度增加速率:
△
od/min来表示lip活力。30℃条件下反应体系(4ml)，1ml酒石酸-酒石酸钠缓冲溶液(0.2mol
·
l-1
，ph＝3)、粗酶液1ml，1ml黎芦醇(0.008mol/l)，加入1ml的h2o2(0.0016mol
·
l-1
)启动反应，测定反应最初2min内用紫外分光光度计在λ＝310nm处记录30s吸光度的变化。每1min使1μmol
·
l-1
的黎芦醇转化为黎芦醛所需的酶量为一个酶活单位。藜芦醛在310nm处的摩尔消光系数为9.3
×
10-3
l/(μmol
·
cm)。
[0059][0060]
△
a/
△
t为反应混合物310nm吸光度在0～120s内的变化率(当酶活过高不方便检测时可适当稀释)，单位为/min；v为反应体系体积之和，4ml；ε为反应产物的吸光系数，9.3
×
10-3
l/(μmol
·
cm)；b为检测光程即比色皿的厚度，1cm；v为体系中加入的酶液体积，单位是毫升。
[0061]
3、结果与分析
[0062]
3.1料水比对白腐真菌生长的影响
[0063]
适当的水分可以促进白腐真菌的生长，但当湿度太大会使培养基黏度过大，灭菌时培养基凝结成块，菌种附着在培养基表面生长供氧不足，会不利于菌种的生长，同时降低了物料利用率。表1可以看出，当料水比1:1时由于缺少水分菌丝生长状况不佳，当水分过高时由于供氧不足的因素菌丝生长状况也不理想。当料水比在1:2和1:3时菌丝生长茂盛。由图1可知，罗汉果渣与水的比例为1:2时酶活最高。此时，木质素过氧化物酶酶活为107.5u/ml。因此，料水比为1:2时为罗汉果固态培养的培养基的最优初始含水量。
[0064]
表1不同料水比下的菌种的生长情况
[0065][0066][0067]
注：+表示生长很稀疏、++表示生长稀疏、+++表示生长较茂密、++++表示生长茂密
[0068]
3.2温度对白腐真菌生长的影响
[0069]
微生物的生长受温度影响比较大。由图2木质素过氧化物酶酶的酶活可以看出，在这四个温度下，木质素过氧化物酶的酶活差异都比较大。20℃到30℃木质素过氧化物酶酶活随着温度递增，到30℃达到最大值，35℃酶活开始下降。对于锰过氧化物酶的酶活，由图2可以看出当温度为20℃、25℃、35℃时酶活变化不大，而30℃时的酶活则远大于其他温度下的酶活。由此得出，罗汉果培养白腐真菌的最佳温度为30℃。
[0070]
3.3培养基酸碱度对白腐真菌生长的影响
[0071]
培养基的ph值过高过低都不利于菌种的生长，由图3可以看出当ph值等于6.5时锰过氧化物酶的酶活最高，当ph值等于7.5时木质素过氧化物酶的酶活最高，锰过氧化物酶在ph＝6.5和ph＝7.5时酶活非常相近。由此得出，罗汉果培养基的ph保持在6.5-7.5是有利于菌种的生长的，即培养基的ph处于中性是适合菌种生长的。
[0072]
3.4罗汉果渣固态培养白腐真菌条件的优化
[0073]
根据单因素分析得到的结果，拟定罗汉果渣固态培养白腐真菌的最优料水比为1:2，温度为30℃，ph为中性，以下实验采取此温度和ph，对多因素共同作用的影响进行研究，通过正交试验设计方法得出培养的最佳条件。选取(1)接种菌悬液浓度；(2)料水比；(3)葡萄糖含量；(4)酒石酸铵含量等4个因素4个水平对罗汉果培养白腐真菌进行正交试验(见表2)。通过查阅文献，拟定碳源为葡萄糖，氮源为牛肉膏，但因为牛肉膏浸出液黏度过大并附着在培养上，使得白腐真菌生长情况并不理想，故使用酒石酸铵作为氮源。其中菌悬液是由第三代白腐真菌在无菌操作台上注入适量无菌水，使得菌悬液浓度在625nm处的od值在1.5左右。为了使添加的碳源和氮源能与罗汉果渣充分的混合，将葡萄糖和酒石酸铵分别制成浓度为0.1g/ml与0.01g/ml的添加溶液。
[0074]
表2正交试验因素水平表
[0075][0076]
根据设置的因素、水平，做16组正交试验，得到表3的数据，根据k值与极差r计算，可以知道影响白腐真菌产锰过氧化物酶的因素按主次顺序依次为b》d》c》a，即料水比》酒石
酸铵浓度》葡萄糖浓度》菌悬液含量。罗汉果固态培养白腐真菌产锰过氧化酶的最佳培养条件为a3b2c4d2，即每5g罗汉果培养基含菌悬液接种含量为1.5ml，蒸馏水10ml，葡萄糖含量为0.3g，酒石酸铵含量为0.01g，培养温度为30℃，ph中性。在此条件下进行验证试验，重复3次，测得锰过氧化物酶的酶活为166.2u/ml。在最优条件下产出的酶活要比正交试验的中任意一组都高，表明罗汉果渣固态培养白腐真菌锰产过氧化物酶的最佳培养条件确实是a3b2c4d2。
[0077]
影响白腐真菌产木质素过氧化物酶酶活的因素按主次顺序依次为a》c》b》d，即菌悬液含量》葡萄糖含量》料水比》酒石酸铵浓度。罗汉果固态培养白腐真菌产木质素过氧化酶的最佳培养条件为a2b2c3d2，即每5g罗汉果培养基含菌悬液接种含量为1ml，蒸馏水10ml，葡萄糖含量为0.2g，酒石酸铵含量为0.01g，培养温度为30℃，ph中性。在此条件下进行验证试验，重复3次，测得木质素过氧化物酶的酶活为172.9u/ml。在最优条件下产出的木质素过氧化物酶的酶活要比正交试验的中任意一组都高，表明罗汉果渣固态培养白腐真菌产木质素过氧化物酶的最佳培养条件确实是a2b2c3d2。
[0078]
表3正交试验直观分析
[0079]
[0080][0081]
通过上述实施例可以看出，本发明以罗汉果渣为固体发酵原料，以白腐真菌为目标生物，通过单因素实验，研究了培养温度、料水比、培养基ph等因素对罗汉果渣固态培养白腐真菌生长的影响，以木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶的酶活作为生长状况的评判，得出最优条件为：温度30℃；料水比1:2；培养基ph中性。
[0082]
通过正交试验设计，研究了多因素对罗汉果渣固态培养白腐真菌生长的影响，得到罗汉果渣固态培养白腐真菌的最佳培养条件组合，然后根据此最佳条件执行验证试验，测得木质素过氧化物酶酶活为172.9u/ml、锰过氧化物酶酶活最高为166.2u/ml，所得酶活比正交试验设计中的任意一组都高，表明正交试验得到的最佳培养条件即为罗汉果渣固态培养白腐真菌的最佳培养条件，即为：当5g罗汉果培养基含菌悬液1.5ml，蒸馏水10ml，葡萄糖含量为0.3g，酒石酸铵含量为0.01g，培养温度为30℃，ph中性时锰过氧化物酶酶的酶活最高。当5g罗汉果培养基含菌悬液1ml，蒸馏水10ml，葡萄糖含量为0.2g，酒石酸铵含量为0.01g，培养温度为30℃，ph中性时木质素过氧化物酶酶活最高。
[0083]
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

技术特征：
1.一种基于罗汉果渣的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基包括罗汉果渣、水、葡萄糖以及酒石酸铵，ph值6.5-7.5。2.如权利要求1所述的固体培养基，其特征在于，所述罗汉果渣与所述水的质量体积比为1∶(1-4)，所述罗汉果渣与所述葡萄糖的质量比为1∶(0.01-0.06)，所述罗汉果渣与所述酒石酸铵的质量比为1∶(0.001-0.005)。3.如权利要求2所述的固体培养基，其特征在于，所述罗汉果渣与所述水的质量体积比为1∶2，所述罗汉果渣与所述葡萄糖的质量比为1∶(0.04-0.06)，所述罗汉果渣与所述酒石酸铵的质量比为1∶0.002。4.利用权利要求1-3任一项所述的固体培养基培养白腐真菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：将白腐真菌菌悬液接种于所述固体培养基中，于25-35℃下培养6天，获取白腐真菌发酵物；其中，按照所述固体培养基中的罗汉果渣计，所述白腐真菌菌悬液与所述罗汉果渣的体积质量比为(0.1-0.4)ml∶1g。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述白腐真菌菌悬液与所述罗汉果渣的体积质量比为0.2ml∶1g。6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，培养温度为30℃。7.如权利要求1-3任一项所述的固体培养基在培养白腐真菌方面的用途。8.如权利要求1-3任一项所述的固体培养基在制备木质素过氧化物酶方面的用途，其特征在于，利用所述固体培养基制备木质素过氧化物酶的最佳条件为：在所述固体培养基中，每5g罗汉果渣含白腐真菌菌悬液1ml、蒸馏水10ml、葡萄糖0.2g以及酒石酸铵0.01g；培养温度为30℃、ph为中性。9.如权利要求1-3任一项所述的固体培养基在制备锰过氧化物酶方面的用途，其特征在于，利用所述固体培养基制备锰过氧化物酶的最佳条件为：在所述固体培养基中，每5g罗汉果渣含白腐真菌菌悬液1.5ml、蒸馏水10ml、葡萄糖0.3g以及酒石酸铵0.01g；培养温度为30℃、ph为中性。

技术总结
本发明公开了一种基于罗汉果渣的固态培养基及其在培养白腐真菌方面的用途，属于微生物领域。固体培养基包括罗汉果渣、水、葡萄糖以及酒石酸铵，pH值为6.5-7.5。罗汉果渣与水的料水比为1∶(1-4)，罗汉果渣与葡萄糖的质量比为1∶(0.01-0.06)，罗汉果渣与酒石酸铵的质量比为1∶(0.001-0.005)，培养温度为25-35℃。本发明以罗汉果渣为固态发酵原料，白腐真菌为目标生物，该菌产的木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶的酶活为检测目标，通过单因素实验和正交试验得到罗汉果渣固态培养白腐真菌的最佳培养条件，实验结果说明采用罗汉果渣培养白腐真菌，利用得到的菌种来降解罗汉果渣具有重要的实际应用价值。际应用价值。际应用价值。


技术研发人员：刘红艳 徐敏华 何进锋 李泽萌 李霞 姜铁民
受保护的技术使用者：桂林理工大学
技术研发日：2023.05.24
技术公布日：2023/7/7