白细胞介素1α(IL-1α)特异性的真正人类抗体的制作方法

白细胞介素1α(il-1α)特异性的真正人类抗体1.相关申请的交叉引用2.本技术要求2020年10月7日提交的加拿大专利申请第3,095,679号的优先权，其全部内容特此通过引用并入。3.关于联邦资助研究的声明4.不适用。发明领域5.本发明总体上涉及免疫学和抗体(ab)领域。6.背景7.il-1α是促炎细胞因子，其在包括炎症、免疫应答、肿瘤转移和血细胞发生在内的许多不同的活动中起作用。针对il-1α的igg自身抗体在普通人群中天然存在，并被认为对许多涉及无菌性炎症的不同疾病有益。8.概述9.发现了编码以高亲和力结合人类il-1α的单克隆ab(mab)的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列。因此，本文描述了纯化的人类mab，所述纯化的人类mab包含抗原结合可变区，所述抗原结合可变区(i)对人类il-1α表现出非常高的结合亲和力，并且(ii)包含含有seqidno:1(或其cdr)的氨基酸序列的轻链可变区和含有seqidno:2(或其cdr)的氨基酸序列的重链可变区。10.本文还描述了一组分离的核酸，所述一组分离的核酸包括编码与il-1α特异性结合的人类mab的重链的第一核酸和编码与人类il-1α特异性结合的人类mab的轻链的第二核酸。第一核酸能够编码seqidno:1(或其cdr)的氨基酸序列并且第二核酸能够编码seqidno:2(或其cdr)的氨基酸序列。11.在另一方面，本文描述了表达载体，所述表达载体包含编码seqidno:1(或其cdr)的氨基酸序列的核酸和编码seqidno:2(或其cdr)的氨基酸序列的核酸两者。本文还描述了一组表达载体，所述一组表达载体包括编码seqidno:1(或其cdr)的氨基酸序列的第一表达载体和编码seqidno:2(或其cdr)的氨基酸序列的第二表达载体。12.另外，本文描述了分离的宿主细胞(例如哺乳动物细胞，诸如cho细胞)，所述分离的宿主细胞包含编码seqidno:1(或其cdr)的氨基酸序列的核酸和编码seqidno:2(或其cdr)的氨基酸序列的核酸。13.除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。生物学术语的通常理解的定义可以在以下中找到：rieger等人,glossaryofgenetics:classicalandmolecular,第五版,springer-verlag:newyork,1991；和lewin,genesv,oxforduniversitypress:newyork,1994。14.如本文所用，名词前的词语“一(a)”或“一(an)”表示一个或更多个特定名词。例如，措辞“抗体(anantibody)”代表“一个或更多个抗体”。15.术语“抗体”或“ab”意指与抗原(例如，人类il-1α)特异性结合的任何免疫球蛋白(例如，人类、啮齿动物、软骨鱼或骆驼科动物抗体)或其缀合物。本领域技术人员已知各种各样的ab。ab的非限制性实例包括：单克隆ab(例如，包括全长ab)、多克隆ab、多特异性ab(例如，双特异性ab)、单链ab(例如，单结构域ab、骆驼科动物ab和软骨鱼ab)、嵌合(例如，人源化)ab和完全人类ab(即，真正人类ab(truehumanab)，包括可在人体内发现或诱导的ab)。术语抗体还包括ab缀合物(例如，与稳定化蛋白、标记或治疗剂(例如，本文描述的或本领域已知的治疗剂中的任一种)缀合的ab)。16.术语“抗原结合片段”意指全长ab的包含至少一个能够与抗原特异性结合的可变结构域[例如，哺乳动物(例如，人类、小鼠、大鼠、兔或山羊)重链或轻链免疫球蛋白的可变结构域、骆驼科动物可变抗原结合结构域(vhh)或软骨鱼免疫球蛋白新抗原受体(ig-nar)结构域]的任何部分。例如，本文描述的抗原结合片段可以包括abfc区域中的至少部分，所述部分足以在哺乳动物(例如，人类)中介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)和/或与治疗剂(例如，本文描述的或本领域已知的治疗剂中的任一种)缀合。作为另一实例，本文描述的抗原结合片段可以包括abfc区中的至少部分，所述部分在哺乳动物(例如，人类)中不介导adcc和/或cdc。ab片段的非限制性实例包括fab、fab’、f(ab’)2、fv片段、双抗体(diabodies)、线性抗体和由ab片段形成的多特异性ab。含有至少一个骆驼科动物vhh结构域或至少一个软骨鱼ig-nar结构域的其他ab片段包括微型抗体(mini-bodies)、微抗体(micro-antibodies)、亚纳米抗体(subnano-antibodies)和纳米抗体，以及美国专利申请公布第2010/0092470号中描述的其他形式的ab中的任一种。[0017]术语“人类抗体”意指由存在于人类基因组中的核酸(例如，重排的人类免疫球蛋白重链或轻链基因座)编码的ab。在一些实施方案中，人类ab在哺乳动物(例如，人类)细胞培养物(例如，中国仓鼠卵巢细胞系)中产生。在一些实施方案中，人类ab在非人类细胞(例如，小鼠或仓鼠细胞系)中产生。在一些实施方案中，人类ab在细菌或酵母细胞中产生。[0018]术语“单链抗体”意指包含至少一个能够与抗原特异性结合的可变结合结构域的单个多肽。本文描述了单链抗体的非限制性实例，并且其是本领域已知的(参见例如美国专利公布第2010/0092470号中描述的抗体)。[0019]当ab或其抗原结合片段与特定抗原(例如，人类il-1α)结合，但以较低程度识别并结合(例如，不识别并结合)样品中的其他分子时，ab或其抗原结合片段与该抗原“特异性结合(specificallybinds)”或“特异性结合(bindsspecifically)”(通过本文描述的包含轻链可变区和重链可变区的全长抗体结合的表位)。在一些实施方案中，ab或其抗原结合片段以在磷酸盐缓冲盐水中等于或小于1×10-10m(例如，小于1×10-11m或小于1x10-12m)的亲和力(kd)(例如，通过表面等离子体共振确定)与表位选择性地结合。ab或抗原结合片段特异性结合蛋白表位的能力可以使用本领域已知的方法或本文描述的那些方法中的任一种来确定。[0020]术语“互补决定区”或“cdr”意指ig(重链ig或轻链ig)内形成ab或其抗原结合片段中抗原结合位点的部分的区域。如本领域已知的，重链ig包含三个cdr：分别为cdr1、cdr2和cdr3，并且轻链ig包含三个cdr：cdr1、cdr2和cdr3。在任何ab或其抗原结合片段中，来自重链ig的三个cdr和来自轻链ig的三个cdr一起在ab或其抗原结合片段中形成抗原结合位点。kabat数据库是本领域中用于对轻链ig或重链ig中存在的cdr序列进行编号的一种系统。[0021]尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文描述的方法和材料相似或等同的方法和材料，但下面描述了合适的方法和材料。本文提及的所有申请和出版物通过引用以其整体并入。在有冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，下面讨论的特定实施方案仅是说明性的而不是旨在限制。[0022]附图简述[0023]现在将参考附图仅通过示例的方式描述本公开内容的实施方案。[0024]图1是示出octetred96测定的结果的图，该测定表明xia13对il-1α的结合亲和力(kd)为6.25×10-11。[0025]图2是示出octetred96测定的结果的图，该测定表明xia13对新生儿fc受体(fcrn)的结合亲和力(kd)为2.08×10-7。[0026]详细描述[0027]本文描述了涉及包含对il-1α表现出非常高的结合亲和力的抗原结合可变区的完全人类(真正人类)mab的组合物和方法。下面描述的优选实施方案说明了这些组合物和方法的适应性(adaptation)。尽管如此，根据这些实施方案的描述，可以基于下面提供的描述来制造和/或实践本发明的其他方面。[0028]本文描述了涉及常规免疫学和分子生物学技术的方法。免疫学方法(例如，用于抗原-ab复合物的检测和定位的测定、免疫沉淀、免疫印迹等)在本领域中通常是已知的，并在诸如currentprotocolsinimmunology,coligan等人编著,johnwiley&sons,newyork的方法学文献中描述。分子生物学的技术在诸如molecularcloning:alaboratorymanual,第二版,vol.1-3,sambrook等人编著,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.,2001和currentprotocolsinmolecularbiology,ausubel等人编著,greenepublishingandwiley-interscience,newyork的文献中详细描述。ab方法在handbookoftherapeuticabs,dubel,s编著,wiley-vch,2007中描述。细胞培养技术在本领域中通常是已知的，并在诸如rianfreshney的cultureofanimalcells:amanualofbasictechnique,第四版,,wiley-liss,hoboken,n.j.,2000和maureenaharrison和ianfrae的generaltechniquesofcellculture,cambridgeuniversitypress,cambridge,uk,1994的方法学文献中详细描述。蛋白纯化的方法在guidetoproteinpurification:methodsinenzymology,vol.182,deutschermp编著,academicpress,sandiego,calif.,1990中讨论。[0029]完全人类mab包含抗原结合可变区，所述抗原结合可变区(i)对人类il-1α表现出非常高的结合亲和力，并且(ii)包含含有seqidno:1(或其cdr)的氨基酸序列的轻链可变区和含有seqidno:2(或其cdr)的氨基酸序列的重链可变区。本文描述的轻链可变区和重链可变区(它们一起形成fab)可以使用常规分子生物学技术连接到fc或其部分，以将所需的fc部分融合到fab或抗原结合片段。以这种方式，可以制备包含本文描述的轻链可变区和重链可变区的全长免疫球蛋白，诸如人类igg1(例如，igg1a或igg1b)、igg2(例如，igg2a或igg2b)、igg3(例如，igg3a或igg3b)、igg4(例如，igg4a或igg4b)、igd、iga(例如，iga1和iga2)、ige或igm(例如二聚体、五聚体和六聚体)(以及前述的不同的同种异型)。[0030]可以通过已知的方法使本文描述的mab亲和力成熟以增强或以其他方式改变它们的结合特异性，所述方法诸如vh和vl结构域改组(marks等人bio/technology10:779-783,1992)，高变区(hvr)和/或框架残基的随机诱变(barbas等人procnat.acad.sci.usa91:3809-3813,1994；schier等人gene169:147-155,1995；yelton等人j.immunol.155:1994-2004,1995；jackson等人,j.immunol.154(7):3310-9,1995；和hawkins等人,j.mol.biol.226:889-896,1992)。ab的氨基酸序列变体可以通过在编码ab的核苷酸序列中引入适当的变化来制备。另外，可以改变编码mab的核酸序列的修饰(例如，不改变mab的氨基酸序列)以增强某些表达系统中mab的产生(例如，针对给定表达系统的内含子消除和/或密码子优化)。本文描述的mab也可通过与另一蛋白(例如，另一mab)或非蛋白分子缀合而修饰。例如，mab可以与水溶性聚合物诸如聚乙二醇或碳纳米管缀合(参见例如kam等人,proc.natl.acad.sci.usa102:11600-11605,2005)。参见美国专利申请第11/754,899号。[0031]氨基酸突变可以被引入这些igg子类的恒定区。可以引入的氨基酸突变例如可以是增强与fck受体的结合的氨基酸突变(如在例如proc.natl.acad.sci.u.s.a.103(11):4005-4010,2006；mabs1(6):572-579,2009；us2010/0196362；us2013/0108623；us2014/0171623；us2014/0093496；和us2014/0093959中描述的)，或增强或降低与fcrn的结合的氨基酸突变(如在例如j.biol.chem.276(9):6591-6604,2001；intimmunol.18(12):1759-1769,2006；andj.biol.chem.281(33):23514-23524,2006中描述的)。[0032]两种类型的h链进行异源缔合以产生双特异性ab。knobs-into-holes技术(如例如在j.immunol.methods248(1-2):7-15,2001和j.biol.chem.285(27):20850-20859,2010中描述的)、静电排斥技术(如在例如wo06/106905中描述的)、seedbody技术(如在例如proteineng.des.sel.23(4):195-202,2010中描述的)等可用于经由ch3结构域将两种类型的h链异源缔合。本文描述的ab中的任一种可以是具有修饰的糖链或缺陷的糖链的ab。具有修饰的糖链的ab的实例包括糖基化工程化抗体(如在例如wo99/54342中描述的)、具有去岩藻糖基化糖链的ab(如在例如wo00/61739、wo02/31140、wo06/067847和wo06/067913中描述的)和具有含有平分型glcnac(bisectingglcnac)的糖链的ab(如在例如wo02/79255中描述的)。用于产生糖链缺陷的igg抗体的方法的已知实例包括向重链中的eu编号位置297处的天冬酰胺引入突变的方法(j.clin.pharmacol.50(5):494-506,2010)，以及使用大肠杆菌(e.coli)产生igg的方法(j.immunol.methods263(1-2):133-147,2002；和j.biol.chem.285(27):20850-20859,2010)。此外，伴随igg中c-末端赖氨酸缺失的异质性和伴随igg2铰链区二硫键错配的异质性可以通过引入氨基酸缺失/取代来降低(如在例如wo09/041613中描述的)。本文描述的ab或抗原结合片段中的任一种包含至少一个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或六个)在相应的人类ab中不存在的氨基酸(例如，添加的、插入的或取代的氨基酸，例如，不在cdr内)。本文描述的ab或抗原结合片段中的任一种也可以具有至少一个缺失的氨基酸(例如，与相应的人类ab相比)，例如，从轻链或重链的n末端或c末端的缺失，或从恒定结构域(例如，fc结构域)的氨基酸缺失。[0033]优选地，为了确保高滴度的人类il-1α特异性mab可以以最低程度的不良作用施用至受试者，本发明的mab组合物的纯度(不包括任何赋形剂)为按重量计至少0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或更高百分比。本发明的mab组合物可以仅包括单一类型的mab(即，由单一克隆b淋巴细胞系产生的mab)。除了人类il-1αmab之外，本发明的ab组合物还可以包括特异性结合除了人类il-1α以外的抗原的其他mab。[0034]为了改变或增强mab的功能，mab可以与另一分子诸如细胞毒素或可检测标记缀合。人类il-1α特异性mab可以与一种或更多种细胞毒素缀合，以更有效地杀伤表达il-1α的细胞。用于在本发明中使用的细胞毒素可以是能够与人类il-1α特异性mab缀合的任何细胞毒性剂(例如，在与细胞接触后能够杀伤细胞的分子)。细胞毒素的实例包括但不限于放射性核素(例如，35s、14c、32p、125i、131i、90y、89zr、201tl、186re、188re、57cu、213bi和211at)、缀合的放射性核素以及化疗剂。细胞毒素的另外的实例包括但不限于抗代谢药(例如，5-氟尿嘧啶(5-fu)、甲氨蝶呤(mtx)、氟达拉滨等)、抗微管剂(例如，长春新碱、长春碱、秋水仙碱、紫杉烷类(诸如紫杉醇和多西他赛等)、烷化剂(例如，环磷酰胺、美法仑、双氯乙基亚硝基脲(bcnu)等)、铂类剂(例如，顺铂(也称为cddp)、卡铂、奥沙利铂、jm-216、ci-973等)、蒽环类药物(例如，多柔比星、柔红霉素等)、抗生素剂(例如，丝裂霉素-c)、拓扑异构酶抑制剂(例如，依托泊苷、替尼泊苷和喜树碱)，或其他细胞毒性剂，诸如蓖麻毒素、白喉毒素(dt)、假单胞菌外毒素(pe)a、pe40、相思豆毒素(abrin)、皂草素(saporin)、美洲商陆病毒蛋白(pokeweedviralprotein)、溴化乙锭、糖皮质激素、炭疽毒素等。参见例如美国专利第5,932,188号。[0035]人类il-1α特异性mab也可以与可检测标记缀合。可用于本发明中的可检测标记包括生物素或链霉抗生物素蛋白，磁珠，荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素、德克萨斯红、罗丹明、绿色荧光蛋白等)，放射性标记(例如，3h、125i、35s、14c、32p、111in、97ru、67ga、68ga或72as)，放射性造影物质(radiopaquesubstance)诸如用于放射性成像的金属、用于磁共振成像的顺磁性剂，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和通常用于elisa的其他酶)，以及比色标记诸如胶体金或者有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、胶乳等)珠。检测这样的标记的手段是本领域技术人员熟知的。因此，例如，放射性标记可以使用照相胶片或闪烁计数器来检测。也可以使用荧光标志物，并且荧光标志物可以使用光电探测器检测发射的照度来进行检测。酶标记通常通过向酶提供底物并检测酶对底物作用而产生的反应产物来检测，并且比色标记通过对有色标记简单目视观察来检测。[0036]本发明还包括编码对人类il-1α有特异性的mab的核酸分子。尽管同一核酸分子可以同时编码人类il-1α特异性mab的重链和轻链，但也可以使用一组两种不同的核酸分子，一种编码重链，而另一种编码轻链。也可以使用编码本文描述的mab的氨基酸序列的任何其他合适的核酸。[0037]对于mab的产生，编码重链和轻链的核酸分子可以以如下的方向整合到表达载体中，其中这样的核酸分子可操作地连接到表达控制序列，诸如转录和翻译控制序列。表达载体的实例包括源自质粒的载体和源自病毒(诸如腺病毒、腺相关病毒和逆转录病毒)的载体。编码轻链和重链的核酸分子可以整合到单个载体或不同的载体中。本发明的载体还可以包括调控序列，诸如启动子和/或增强子(参见美国专利第5,168,062号、美国专利第4,510,245号和美国专利第4,968,615号)、选择性标志物(selectablemarkers)或者编码亲和标签(用于促进纯化)或可检测标记的序列。[0038]为了产生mab，可以将本发明的载体引入合适的宿主细胞，例如原核细胞(诸如细菌)或优选地真核细胞(诸如哺乳动物、植物或酵母宿主细胞)。用于将异源多核苷酸引入宿主细胞的方法的实例包括使用病毒载体、电穿孔、将多核苷酸包封在脂质体中、右旋糖酐介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、农杆菌介导的转化、基因枪转化(biolistictransformation)和将dna直接显微注射到核中。对于从载体表达mab，目前优选哺乳动物细胞系。哺乳动物宿主细胞的实例包括中国仓鼠卵巢(cho)细胞(例如，dg44cho细胞系或cho-k1细胞系)、hela细胞、幼仓鼠肾(bhk)细胞、非洲绿猴肾细胞(cos)、人类肝细胞癌细胞(例如，hepg2)、ns0细胞、sp2细胞、hek-293t细胞、293freestyle细胞和nih-3t3细胞。mab也可以在转基因动物或植物中表达。参见例如美国专利第5,827,690号；第5,756,687号；第5,750,172号；第5,741,957号；第6,046,037号；和第5,959,177号。[0039]本文描述的ab和抗原结合片段可以被配制成药物组合物，所述药物组合物包含ab和抗原结合片段以及至少一种药学上可接受的载体(例如，非天然的药学上可接受的载体)。药学上可接受的载体的非限制性实例包括无菌水、生理盐水、稳定剂、赋形剂、抗氧化剂(例如，抗坏血酸)、缓冲剂(例如，磷酸盐、柠檬酸盐、组氨酸和其他有机酸)、防腐剂、表面活性剂(例如，peg和吐温)、螯合剂(例如，edta或egta)和粘合剂。药学上可接受的载体的另外的实例还包括低分子量多肽、蛋白(例如，血清白蛋白和明胶)、氨基酸(例如，甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、精氨酸和赖氨酸)、糖和碳水化合物(例如，多糖和单糖)和糖醇(例如，甘露醇和山梨醇)。当制备用于注射的水性溶液时，可以使用包含葡萄糖和其他辅料(诸如d-山梨醇、d-甘露糖、d-甘露醇和氯化钠)的生理盐水和等渗溶液，并且如果需要，可以与适当的增溶剂(诸如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇和peg))和非离子表面活性剂(诸如，聚山梨酸酯80、聚山梨酸酯20、泊洛沙姆188和hco-50)组合。通过将透明质酸酶混合到制剂中，更大的流体体积可以被皮下施用(参见例如，expert.opin.drug.deliv.4(4):427-440,2007)。[0040]本文提供的ab和抗原结合片段可以例如被包封在微胶囊中(例如，由羟甲基纤维素、明胶和聚(甲基丙烯酸甲酯)制成的微胶囊)，或者作为胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)的组分掺入(参见例如，“remington’spharmaceuticalscience第16版”，oslo编著(1980))。用于将药物组合物制备为控制释放的药剂的方法也是熟知的，并且这样的方法可应用于本发明的ab和抗原结合片段(参见例如，langer等人,j.biomed.mater.res.15:267-277,1981；langer,chemtech.12:98-105,1982,；美国专利第3,773,919号；欧洲专利申请公布第ep58,481号；sidman等人,biopolymers22:547-556,1983；和ep133,988)。[0041]本文提供的药物组合物可以被配制用于静脉内、动脉内、皮内、皮下、肌肉内、腹膜内或口服施用。实施例[0042]实施例1-抗人类il-1αab的重链可变区序列和轻链可变区序列的发现[0043]从健康人类供体分离血浆和外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，pbmc)。通过基于珠的流式细胞术分析，使用与生物素化的重组人类il-1α缀合的链霉抗生物蛋白磁珠，确认血浆中抗il-1α抗体的存在。使用histopaquetm1077和accuspintm管从供体的血液分离pbmc，并从pbmc的一部分分离细胞。使用常规方法从pbmc以及b细胞提取rna，并从rna制备cdna。使用美国专利第9,453,217中描述的程序和引物对cdna进行pcr。选择所用的反向引物来特异性扩增igg4和igg1，因为血浆中的反应性被同种型分型(isotyped)为主要是igg4子类，并有一些信号来自igg1子类。制备了κ和λ轻链文库两者。从igg4-κ重叠产生噬菌体文库，并进行三轮淘选(panning)而不在轮之间进行任何噬菌体扩增。发现输入文库多样性为0.65e12。第二轮后，一半的克隆在板上计数，并且其余的进行另一轮淘选。在三轮淘选之后，保留38个克隆。在用重组人类il-1α包被的elisa板上用噬菌体上清液进行基于elisa的筛选，用抗flag抗体检测结合的噬菌体，并鉴定出阳性克隆。其中一个(指定为xia13)被选择并测序。指定的xia13的人类单克隆抗体的轻链和重链的可变区的氨基酸序列如下，其中cdr(通过imgt/domaingapalign确定；ehrenmann,f.,lefranc,m.-p.coldspringharbprotoc.,2011(6):737-749(2011).doi:10.1101/pdb.prot5636.pmid:21632775)以粗体和下划线示出：[0044]》xia13_轻链[0045][0046]》xia13_重链[0047][0048]xia13轻链因此具有以下：具有氨基酸序列qsvlyssnnkny[seqidno:3]的cdr1、具有氨基酸序列was[seqidno:4]的cdr2和具有氨基酸序列qqyystpst[seqidno:5]的cdr3。类似地，xia13重链因此具有以下：具有氨基酸序列ggrftnya[seqidno:6]的cdr1、具有氨基酸序列iipifdet[seqidno:7]的cdr2和具有氨基酸序列atgsnsyygly[seqidno:8]的cdr3。[0049]实施例2-xia13的表征[0050]octetred96测定的结果表明xia13对il-1α的结合亲和力(kd)为6.25×10-11(参见图1)。octetred96测定的结果表明xia13对新生儿fc受体(fcrn)的结合亲和力(kd)为2.08×10-7(参见图2)。[0051]基于huvec的效力测定表明xia13ic50为3.7ng/ml。简而言之，将0.2×106个huvec细胞(corningtm354151)/ml接种于96孔平底板中。将xia13分子稀释至610pg/ml至100μg/ml的浓度。将稀释的xia13以范围为61pg/ml至10μg/ml的最终浓度给药至96孔板中的huvec细胞。将0.5ng/mlhil-1α应用于96孔板中的每个孔，并将测定板在37℃/5％co2孵育18hr。用抗icam-1抗体(ebioscience12-0549，克隆ha58)对huvec细胞进行染色，并使用流式细胞术确定icam-1的表达水平。用flowjo进行数据分析，并用kaleidagraph计算ic50。[0052]其他实施方案[0053]应当理解，尽管已经结合本发明的详细描述描述了本发明，但是前述描述旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其他方面、优点和修改在所附权利要求书的范围内。当前第1页12当前第1页12
技术特征：
1.一种药物组合物，所述药物组合物包含纯化的人类单克隆抗体，所述纯化的人类单克隆抗体与白细胞介素1α(il-1α)特异性结合并且包含轻链可变区氨基酸序列和重链可变区氨基酸序列，所述轻链可变区氨基酸序列包含seq id no:3、seq id no:4和seq id no:5的cdr，所述重链可变区氨基酸序列包含seq id no:6、seq id no:7和seq id no:8的cdr。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述轻链可变区具有seq id no:1的氨基酸序列，并且所述重链可变区具有seq id no:2的氨基酸序列。

技术总结
完全人类单克隆Ab包含：(i)抗原结合可变区，其对IL-1α表现出非常高的结合亲和力；和(ii)恒定区，其在通过C1q结合来活化补体系统和与几种不同的Fc受体结合两方面是有效的。和与几种不同的Fc受体结合两方面是有效的。和与几种不同的Fc受体结合两方面是有效的。


技术研发人员：J
受保护的技术使用者：埃克斯生物科技公司
技术研发日：2021.10.04
技术公布日：2023/7/12