硫辛酸在治疗产气荚膜梭菌Epsilon毒素引起的疾病中的应用

硫辛酸在治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病中的应用
技术领域
1.本发明属于生物技术领域，具体涉及硫辛酸在治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病中的应用。


背景技术：

2.产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)旧称魏氏梭菌，可产生如α、β、γ、ε、θ、δ、η、ι、κ、λ、μ、ν等多种外毒素。根据产生的6种主要外毒素α、β、ε、ι、cpe(肠毒素)和netb(孔形成毒素)，可将其分为a、b、c、d、e、f和g七个型。其中，epsilon毒素(epsilon toxin，ε毒素，etx)是由b型和d型产气荚膜梭菌产生并分泌至宿主动物体内，可引起反刍动物患致死性肠毒血症，该病发病急、病程快、死亡率高，每年给畜牧业造成巨大的经济损失。epsilon毒素属于以七聚体形式存在的β-样成孔毒素，它能够形成由14个β折叠片组成的“β-桶状”结构，这个“β-桶状”结构可以插入真核细胞的质膜形成穿孔。在细胞水平，epsilon毒素能够迅速使细胞膜肿胀、多种细胞器破坏，最终导致靶细胞的坏死。在哺乳动物体内，epsilon毒素能够使哺乳动物血管产生水肿，从而穿透血脑屏障而聚积在动物肾和脑中，导致机体随着谷氨酸盐的释放而产生过度兴奋，这一系列反应的发生可引起机体出现脑水肿和肾衰竭，最终导致动物的死亡。此外，epsilon毒素不仅能够引起人患多发性硬化症，还可以特异性导致人的红细胞溶血。研究发现，epsilon毒素的毒性仅次于肉毒毒素和破伤风毒素，美国疾病预防与控制中心(cdc)将其列为b类生物恐怖剂，对人类健康和安全具有潜在威胁。
3.动物肾脏和大脑是epsilon毒素主要的靶器官。当epsilon毒素进入动物体内，可在肾脏和大脑中大量积聚，发生充血和水肿，破坏血脑屏障，引起动物死亡。然而，对epsilon毒素敏感的细胞不多，主要有鼠肾皮质集合管(mpkccdcl4)细胞、人肾平滑肌瘤(g-402)细胞、费舍尔鼠甲状腺(frt)细胞和人肾颗粒细胞癌(achn)细胞，其中最敏感的细胞是犬肾上皮(mdck)细胞。epsilon毒素攻击细胞时，首先与细胞表面的特定受体结合，在脂筏上形成七聚体复合物，并在细胞膜表面形成一个大的孔隙，导致细胞膜通透性改变，大量有毒的物质进入细胞，最终引起细胞死亡。
4.目前针对epsilon毒素中毒救治主要是利用抗体中和epsilon毒素，且大多处于研究阶段，临床上仍非常缺乏有效的治疗药物，因此，研究和开发安全有效的新型epsilon毒素中毒救治药物和治疗方法十分必要，对产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病的预防和治疗具有广泛的临床应用价值和重要的意义。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是现有技术中针对epsilon毒素中毒非常缺乏有效的治疗药物，提供一种硫辛酸或其衍生物在制备治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病的药物中的应用。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
6.为解决上述技术问题，本发明首先提供硫辛酸或其衍生物在制备预防、改善或治疗由产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)感染引起的疾病的产品中的应用。
7.所述硫辛酸(thioctic acid，cas号1077-28-7)的分子结构式如图2所示。
8.上述应用中，所述产气荚膜梭菌可为b型和/或d型产气荚膜梭菌。
9.上述应用中，所述产气荚膜梭菌感染引起的疾病可为产气荚膜梭菌epsilon毒素(也称为ε毒素、epsilon toxin、etx)引起的疾病。
10.所述epsilon毒素的氨基酸序列可为seq id no.2的第228-488位，所述epsilon毒素的编码基因的核苷酸序列可为seq id no.1。
11.上述应用中，所述产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病包括但不限于产气荚膜梭菌epsilon毒素中毒、肠毒血症、坏死性肠炎、肾病、肠道疾病、脑部疾病(如脑炎或脑膜炎)或多发性硬化症。
12.所述产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病的症状可包括肾脏和大脑主要靶器官的水肿以及血管内皮细胞的损伤。
13.上述应用中，所述产品可具有下述至少任一种功能：
14.a1)预防、改善或治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病；
15.a2)预防、改善或治疗b型和/或d型产气荚膜梭菌感染引起的疾病；
16.a3)预防、改善或治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病；
17.a4)中和产气荚膜梭菌epsilon毒素；
18.a5)降低或抑制产气荚膜梭菌epsilon毒素的毒性作用；
19.a6)提高动物抵抗产气荚膜梭菌epsilon毒素攻击的能力；
20.a7)提高产气荚膜梭菌epsilon毒素中毒动物的生存率；
21.a8)作为产气荚膜梭菌epsilon毒素抑制剂；
22.a9)作为抗产气荚膜梭菌制剂。
23.本发明还提供了以硫辛酸和/或其衍生物为活性成分的物质的下述任一种应用：
24.b1)在制备用于预防、改善或治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病的产品中的应用；
25.b2)在制备用于预防、改善或治疗b型和/或d型产气荚膜梭菌感染引起的疾病的产品中的应用；
26.b3)在制备用于预防、改善或治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病的产品中的应用；
27.b4)在制备用于中和产气荚膜梭菌epsilon毒素的产品中的应用；
28.b5)在制备用于降低或抑制产气荚膜梭菌epsilon毒素的毒性作用的产品中的应用；
29.b6)在制备用于提高动物抵抗产气荚膜梭菌epsilon毒素攻击的能力的产品中的应用；
30.b7)在制备用于提高产气荚膜梭菌epsilon毒素中毒动物的生存率的产品中的应用；
31.b8)在制备产气荚膜梭菌epsilon毒素抑制剂中的应用；
32.b9)在制备抗产气荚膜梭菌制剂中的应用。
33.本文所述动物包括人和非人动物。
34.本文所述产品可为药物或试剂。
35.上述应用中，所述物质可为药物组合物、饲料或饲料添加剂。
36.上述应用中，所述饲料或饲料添加剂可用于反刍动物、家禽、猪、马、兔子或鼠。
37.进一步地，所述反刍动物可包括牛(如黄牛、牦牛、奶牛或小牛等)或羊(如绵羊、山羊或羔羊等)，所述家禽可包括鸡、鸭或鹅。
38.进一步地，所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的载体。
39.所述药学上可接受的载体可为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂但不限于此。
40.本发明主要有两个方面：一方面是在细胞水平验证硫辛酸对epsilon毒素的抑制作用。发明人基于前期工作积累，在mdck细胞中验证硫辛酸对epsilon毒素毒性的抑制作用。结果表明：硫辛酸能有效抑制epsilon毒素对mdck细胞的毒性作用，且呈浓度依赖性。因此，本发明表明硫辛酸在epsilon毒素中毒救治中有重要应用前景。
41.本发明的另一方面是通过动物实验，验证硫辛酸对epsilon毒素引起的动物中毒救治效果。实施硫辛酸能有效减弱epsilon毒素的毒性，并提高epsilon毒素中毒动物的存活率，具有保护动物抵御epsilon毒素感染的用途。因此，硫辛酸可在制备预防或者治疗动物的epsilon毒素中毒的相关药物或试剂中应用。
42.本发明涉及到的硫辛酸分子结构清晰，获取简单。本发明中涉及到的epsilon毒素的制备方法较为成熟，主要通过重组表达的方式获取。epsilon毒素对mdck细胞最敏感，因此用于本发明中硫辛酸中毒救治的研究。该验证方法符合毒素研究领域的经典方法范畴。
43.硫辛酸在mdck细胞毒性实验、小鼠攻毒实验中均显示出对epsilon毒素毒性的抑制作用，表现为mdck细胞存活率提高、被完全致死剂量的epsilon毒素攻毒的小鼠经硫辛酸处理后，其存活率显著提高。揭示本发明中，硫辛酸对epsilon毒素的中毒有很好的治疗效果，在畜牧业有很好的应用前景，对人类社会生物安全具有十分重要的意义。
44.本发明的有益效果在于：
45.1、本发明涉及到的硫辛酸对epsilon毒素毒性中和效果很好。在细胞水平，硫辛酸对epsilon毒素的毒性有较好的抑制效果。在动物实验中，硫辛酸显示出对epsilon毒素攻毒后动物的有一定的保护效果。因此，硫辛酸有望成为预防和治疗由epsilon毒素引起感染的重要试剂和药物。
46.2、本发明设计的硫辛酸分子结构简单、市面上容易获取，在畜牧业有很好的应用前景，对人类社会安全具有十分重要的意义。
47.发明人长期从事epsilon毒素相关研究工作，发现硫辛酸(thioctic acid，cas号1077-28-7)可以减弱epsilon毒素对细胞的毒性作用，并能在一定程度上保护小鼠抵抗致死剂量epsilon毒素的攻击，提高存活率。
附图说明
48.图1为epsilon毒素纯化后sds-page结果图。
49.图2为硫辛酸的分子结构图。
50.图3为不同浓度epsilon毒素对mdck细胞毒性结果图。
51.图4为硫辛酸对抑制epsilon毒素对mdck细胞毒性结果图。
52.图5为不同浓度epsilon毒素攻毒小鼠后小鼠的生存曲线图。
53.图6为硫辛酸对epsilon毒素攻毒小鼠后小鼠的生存曲线图。
具体实施方式
54.下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
55.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
56.下述实施例中的硫辛酸(thioctic acid，cas号1077-28-7)的分子结构式如图2所示。
57.下述实施例中的pgex-4t-1载体为cytiva公司产品，产品目录号为：28954549。
58.下述实施例中的mdck细胞为武汉普诺赛生命科技有限公司产品，产品目录号为：cl-0154。
59.实施例1、硫辛酸在抑制epsilon毒素中的应用
60.一、epsilon毒素的表达与纯化
61.1、构建epsilon毒素重组菌株bl21(de3)
62.本发明利用本实验室保存的epsilon毒素重组菌株bl21(de3)，纯化得到纯度较高的epsilon毒素，用于后续研究。epsilon毒素重组菌株bl21(de3)为将重组载体pgex-4t-1-epsilon导入大肠杆菌bl21(de3)得到的重组菌。epsilon毒素重组菌株bl21(de3)的构建方法如下：
63.1.1、构建重组载体pgex-4t-1-epsilon
64.重组载体pgex-4t-1-epsilon是将pgex-4t-1载体的bamhi和xhoi识别位点间的片段(小片段)替换为序列表中seq id no.1的dna片段(即epsilon毒素基因)，保持pgex-4t-1载体的其他核苷酸序列不变，得到的重组表达载体。epsilon毒素基因和载体上的gst标签融合表达，得到融合了gst标签的epsilon毒素，该融合了gst标签的epsilon毒素的氨基酸序列为seq id no.2，其中，seq id no.2的第228-488位为epsilon毒素(由seq id no.1所示的epsilon毒素基因编码)，第1-226位为gst标签。
65.1.2、构建epsilon毒素重组菌株bl21(de3)
66.将上述步骤1.1中构建的质粒(重组载体pgex-4t-1-epsilon)转化大肠杆菌bl21(de3)感受态细胞，对转化菌落进行筛选鉴定，得到正确插入质粒的重组菌即为epsilon毒素重组菌株bl21(de3)，-80℃保存备用。
67.2、epsilon毒素的表达与纯化
68.2.1、epsilon毒素重组菌株bl21(de3)的培养与诱导
69.从-80℃冰箱中取出保存的epsilon毒素重组菌株bl21(de3)，按照1:100的比例转接入5ml含100μg/ml氨苄青霉素的lb液体培养基(500ml培养基中需加入5g蛋白胨、2.5g酵母提取物和5g nacl，余量为水)中，37℃180r/min培养6h后，按照1:100的比例转接入500ml含100μg/ml氨苄青霉素的lb液体培养基中，37℃180r/min震荡培养至od
600
值在0.6-0.8之
间，加入iptg至终浓度为1mm进行外源基因的诱导表达，16℃180r/min过夜培养，得到培养液。
70.2.2、蛋白混合液的制备
71.将上述步骤2.1得到的培养液在4℃条件下，8000r/min离心15min收集菌体后，弃上清，用pbs将菌体重悬，8000r/min离心15min后，弃上清，用80ml a液(1la液中需加入8.18g nacl，0.2g kcl，3.58g na2hpo4，0.25g kh2po4，0.62g dtt，ph 7.3，余量为水)重悬菌体，超声破碎(功率75％，破碎3s，暂停2s)。4℃条件下，将破碎的菌液以12000r/min离心15min，用045μm滤器过滤上清液，备用，得到蛋白混合液。
72.2.3、利用纯化仪纯化epsilon毒素
73.(1)用无菌水以3ml/min流速冲洗纯化仪a、b泵；
74.(2)用b液(1l b液中需加入7.88g tris-hcl，3.07g 10mm还原性谷胱甘肽，0.62g dtt，ph 8.0，余量为水)以3ml/min流速冲洗b泵；
75.(3)将gstrap
tm hp层析柱(cytiva公司，目录号：17528201)安装至纯化仪上，用a液以3ml/min流速冲洗a泵和gstrap
tm hp层析柱；
76.(4)将步骤2.2中制备的蛋白混合液通过(3)处理后的gstrap
tm hp层析柱进行上样，流速为1ml/min；
77.(5)用a液冲洗gstrap
tm hp层析柱，流速为1ml/min；
78.(6)用b液以梯度方式洗脱与gstrap
tm hp层析柱结合的蛋白，流速为1ml/min，并收集洗脱峰的流出液，进行sds-page分析。
79.结果如图1所示，穿透液为上述步骤(4)收集的产物；a液为上述步骤(5)收集的产物，b液为上述步骤(6)收集的产物；可以看出，经纯化获得了纯度较高的融合了gst标签的epsilon毒素(命名为gst-epsilon)，大小为56kda，氨基酸序列为seq id no.2，浓度为4mg/ml，可用于后续实验。
80.下述实验采用的epsilon毒素均为gst-epsilon。
81.二、硫辛酸抑制epsilon毒素对mdck细胞毒性能力的验证
82.1、mdck细胞制备96孔细胞板
83.本发明采用mts测定法，验证硫辛酸对epsilon毒素引起的mdck细胞死亡的抑制，作为验证硫辛酸对epsilon毒素毒性抑制效果的评价指标。mdck细胞使用前用含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基稀释成105个/ml，铺于96孔板内，每孔内含有104个细胞，细胞培养箱中培养24h备用。
84.2、epsilon毒素对mdck细胞半数致死剂量的确定
85.采用mts测定法，用mts测试试剂盒(aqueous one solution cell proliferation assay kit，promega公司产品，产品目录号：g3581)测定细胞存活率，以确定epsilon毒素对mdck细胞半数致死剂量，步骤如下：
86.实验组：用含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基将上述一中制备的epsilon毒素(gst-epsilon)稀释至终浓度分别为16000、8000、4000、2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.096、1.95、0.97、0.488、0.244、0.122ng/ml共18个梯度，按照100μl/孔体积将其加入96孔板内。
87.空白对照组：只加入100μl/孔含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基作为对照
组。
88.上述各组在细胞培养箱中孵育1h后，弃去培养基，pbs洗3次，再加入100μl/孔含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基和20μl/孔mts，细胞培养箱中孵育3h后，检测492nm处吸光值，并根据如下公式计算mdck细胞的存活率。
89.细胞存活率(％)＝实验组492nm处吸光值/对照组492nm处吸光值
×
100
90.进一步通过epsilon浓度-细胞存活率曲线确定epsilon毒素对mdck细胞的半数致死剂量，结果如图3所示，经计算，epsilon毒素对mdck细胞毒性的半数致死剂量约为100ng/ml。
91.3、不同浓度的硫辛酸与epsilon毒素孵育
92.使用150μl dmso溶解150mg硫辛酸(selleck，美国，货号s3996)，随后用含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基将其分别稀释为66、33、16.5、8.3、4.1、2、0mg/ml共7个梯度，分别与等体积的含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基稀释的终浓度为100ng/ml epsilon毒素混匀，置于37℃水浴锅中孵育30min，得到epsilon毒素与硫辛酸的混合液。
93.4、epsilon毒素攻击细胞
94.实验组：将上述步骤3制备的epsilon毒素与硫辛酸的混合液按照100μl/孔体积分别加入上述步骤1制备的mdck细胞96孔细胞版内；
95.对照组：将上述一制备的epsilon毒素用含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基稀释至终浓度为100ng/ml，按照100μl/孔体积加入仅添加mdck细胞的96孔板。
96.细胞培养箱中孵育1h后，弃去培养基，pbs洗3次，再加入100μl/孔含10％(体积百分含量)fbs的dmem培养基和20μl/孔mts，细胞培养箱中孵育3h后，检测492nm处吸光值，并根据上述步骤2中的公式计算细胞存活率。
97.硫辛酸抑制epsilon毒素对mdck细胞毒性能力变化如图4所示，结果表明，硫辛酸对epsilon毒素引起的mdck细胞毒性作用有显著的抑制效果，有效提高epsilon毒素引起的mdck细胞的存活率。
98.三、硫辛酸对epsilon毒素攻毒小鼠的保护作用
99.前面步骤二的体外实验中，硫辛酸能有效抑制epsilon毒素对mdck细胞的毒性作用，推测其有望成为良好的epsilon毒素中毒救治药物。
100.为了验证这一推测，拟在动物体内进行硫辛酸对epsilon毒素攻毒动物的保护作用研究，具体实验设计如下：
101.1、epsilon毒素对小鼠的致死率
102.实验选取6周龄balb/c雄性小鼠(购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，中国)，将其随机分为5组，每组5只，分别腹腔注射不同浓度(12800、6400、3200、1600、0ng/kg)的上述步骤一制备的0.1ml/只epsilon毒素，连续三天观察小鼠状态，并记录其存活率。其中epsilon毒素为0ng/kg时表示只注射等体积的pbs，作为空白对照。
103.结果如图5所示，12800ng/kg组小鼠在3h内全部死亡，6400ng/kg组小鼠在8h内全部死亡，3200ng/kg组小鼠在72h内3只死亡，其余各组在72h内均存活。因此，选择6400ng/kg的epsilon毒素进行后续实验。
104.2、硫辛酸抑制epsilon毒素对小鼠的致死率
105.实验选取6周龄balb/c雄性小鼠，将其随机分为3组，每组10只，分别是：
106.400mg/kg硫辛酸+6400ng/kg epsilon毒素组：腹腔注射硫辛酸(400mg/kg)，0.1ml/只，30min后，腹腔注射epsilon毒素(6400ng/kg)，0.1ml/只；
107.6400ng/kg epsilon毒素+400mg/kg硫辛酸组：腹腔注射epsilon毒素(6400ng/kg)，0.1ml/只，30min后，腹腔注射硫辛酸(400mg/kg)，0.1ml/只；
108.6400ng/kg epsilon毒素组：腹腔注射etx毒素(6400ng/kg)，0.1ml/只，30min后，腹腔注射pbs，0.1ml/只。
109.随后，连续三天观察小鼠状态，并记录其存活率。
110.实验结果如图6所示，与epsilon毒素组(8h生存率即降为0)相比，硫辛酸+epsilon毒素组加入硫辛酸可以有效延缓epsilon毒素攻毒后小鼠的死亡时间，并能提高epsilon毒素攻毒小鼠的存活率。同时也进一步表明硫辛酸在动物体内同样具有一定的治疗作用。
111.综上，无论是体外细胞实验，还是体内小鼠实验，实验结果均表明，硫辛酸能够有效降低或抑制epsilon毒素的毒性，提高动物抵抗epsilon毒素攻击的能力，可作为一种理想的epsilon毒素抑制剂用于预防或治疗由epsilon毒素引起的疾病。因此，硫辛酸有望成为epsilon毒素中毒相关疾病预防和治疗的有效药物，具有良好的临床应用前景，同时为epsilon毒素研究开拓新的思路。
112.以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本技术欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本技术中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

技术特征：
1.硫辛酸或其衍生物在制备预防、改善或治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌为b型和/或d型产气荚膜梭菌。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌感染引起的疾病为产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病包括但不限于产气荚膜梭菌epsilon毒素中毒、肠毒血症、坏死性肠炎、肾病、肠道疾病、脑部疾病或多发性硬化症。5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于，所述产品具有下述至少任一种功能：a1)预防、改善或治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病；a2)预防、改善或治疗b型和/或d型产气荚膜梭菌感染引起的疾病；a3)预防、改善或治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病；a4)中和产气荚膜梭菌epsilon毒素；a5)降低或抑制产气荚膜梭菌epsilon毒素的毒性作用；a6)提高动物抵抗产气荚膜梭菌epsilon毒素攻击的能力；a7)提高产气荚膜梭菌epsilon毒素中毒动物的生存率；a8)作为产气荚膜梭菌epsilon毒素抑制剂；a9)作为抗产气荚膜梭菌制剂。6.以硫辛酸和/或其衍生物为活性成分的物质的下述任一种应用：b1)在制备用于预防、改善或治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病的产品中的应用；b2)在制备用于预防、改善或治疗b型和/或d型产气荚膜梭菌感染引起的疾病的产品中的应用；b3)在制备用于预防、改善或治疗产气荚膜梭菌epsilon毒素引起的疾病的产品中的应用；b4)在制备用于中和产气荚膜梭菌epsilon毒素的产品中的应用；b5)在制备用于降低或抑制产气荚膜梭菌epsilon毒素的毒性作用的产品中的应用；b6)在制备用于提高动物抵抗产气荚膜梭菌epsilon毒素攻击的能力的产品中的应用；b7)在制备用于提高产气荚膜梭菌epsilon毒素中毒动物的生存率的产品中的应用；b8)在制备产气荚膜梭菌epsilon毒素抑制剂中的应用；b9)在制备抗产气荚膜梭菌制剂中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述物质为药物组合物、饲料或饲料添加剂。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述饲料或饲料添加剂用于反刍动物、家禽、猪、马、兔子或鼠。

技术总结
本发明公开了硫辛酸在治疗产气荚膜梭菌Epsilon毒素引起的疾病中的应用。具体地公开了硫辛酸或其衍生物在制备预防、改善或治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病的产品中的应用。本发明通过细胞水平实验验证了硫辛酸对Epsilon毒素的抑制作用，通过动物实验验证了硫辛酸对Epsilon毒素中毒的救治效果，结果表明硫辛酸能有效减弱Epsilon毒素的毒性，延缓Epsilon毒素中毒动物的死亡时间，提高Epsilon毒素中毒动物的生存率，具有保护动物抵御Epsilon毒素感染的用途。可见硫辛酸对Epsilon毒素中毒具有很好的治疗作用，可作为理想的Epsilon毒素抑制剂用于预防或治疗Epsilon引起的疾病。抑制剂用于预防或治疗Epsilon引起的疾病。


技术研发人员：康琳 李佳欣 辛文文 黄静 王景林 高姗 李岩伟 王菁 袁兵
受保护的技术使用者：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
技术研发日：2023.01.17
技术公布日：2023/7/13