EGFR蛋白磷酸化的抑制试剂及抑制方法和用途

egfr蛋白磷酸化的抑制试剂及抑制方法和用途
技术领域
1.本发明涉及生物分析及医学领域，具体涉及一种针对egfr蛋白磷酸化的特异性抑制试剂及抑制方法和用途。


背景技术：

2.表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，egfr)是一类具有酪氨酸激酶活性的细胞膜表面受体，egfr是肿瘤细胞促有丝分裂和转化的一个重要靶点，在许多肿瘤细胞中过度表达，其介导的信号转导与肿瘤细胞的生长、增殖、转移等过程密切相关。
3.egfr在细胞增殖、存活、迁移、粘附和分化方面发挥着重要作用，具有酪氨酸激酶活性。egfr自磷酸化后可与生长因子受体结合蛋白的复合物结合，从而激活ras蛋白。活化的ras激活下游丝/苏氨酸蛋白激酶raf，从而使erk(细胞外调节蛋白激酶)磷酸化，将信号传至细胞核内，导致核内转录因子的磷酸化，从而启动靶基因的转录，最终导致细胞增殖、扩散等生物学效应。
4.通过抑制egfr可有效抑制肿瘤的生长，因此有一些研究针对egfr为靶点开发药物，靶向抑制egfr酪氨酸激酶。可见，寻找egfr抑制剂，阻断egfr的信号转导，对于肿瘤的治疗至关重要。


技术实现要素：

5.本发明首次发现，当细胞的碘钠转运体(nis)表达高时，碘化钠可以显著抑制egfr蛋白磷酸化；当细胞的nis表达低时，可通过辅助剂kt5823提高细胞nis摄碘功能，从而碘化钠可以正常进入细胞并显著抑制egfr蛋白磷酸化。基于此，碘化钠处理可作为egfr蛋白磷酸化抑制剂，为egfr的磷酸化抑制和疾病的治疗提供新的手段。
6.具体地，本发明采用的技术方案如下：
7.第一方面，本发明提供一种egfr蛋白磷酸化的抑制试剂，其包含碘化钠。
8.进一步地，所述egfr蛋白磷酸化的抑制试剂还包含辅助剂kt5823。
9.第二方面，本发明提供一种egfr蛋白磷酸化的抑制试剂的制备方法，其步骤包括：
10.将碘化钠溶解于超纯水，制得碘化钠母液，作为egfr蛋白磷酸化的抑制试剂；
11.将kt5823溶解于dmso，制得kt5823母液，作为egfr蛋白磷酸化的抑制试剂的辅助剂。
12.进一步地，准确称取纯度大于99.9％的碘化钠，将其溶解于超纯水，制得浓度为200mm的碘化钠母液，作为egfr蛋白磷酸化的抑制试剂；准确称取纯度大于98％的kt5823，将其溶解于dmso，制得浓度为2mm的kt5823母液，作为egfr蛋白磷酸化的抑制试剂的辅助剂。
13.第三方面，本发明提供一种egfr蛋白磷酸化的抑制方法，包括以下步骤：
14.将碘化钠溶解于超纯水，制得碘化钠母液；
15.将碘化钠母液加入细胞培养基中，配制成egfr磷酸化抑制培养基；
16.对于nis高表达细胞，直接利用含有碘化钠的egfr磷酸化抑制培养基抑制egfr蛋白的磷酸化；
17.对于nis低表达细胞，将egfr蛋白的磷酸化抑制试剂辅助剂加入含有碘化钠的egfr磷酸化抑制培养基，再用其抑制egfr蛋白的磷酸化。
18.其中，nis表达的“高”与“低”，可以通过现有技术或本领域公知常识来确定，例如甲状腺细胞中nis表达量高，其他类型细胞中nis的表达量低；可以设定一个阈值，大于等于该阈值的认为是nis高活性细胞，小于该阈值的认为是nis低活性细胞。
19.进一步地，nis高表达细胞的egfr蛋白的磷酸化抑制方法的具体步骤为：
20.1)以b-cpap、hth-7、sw579和nthy-ori-3-1的nis高表达细胞为例，首先对以上细胞进行传代培养，将培养好的细胞种板至96孔板，每孔2
×
104个细胞，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱过夜培养；
21.2)配制egfr磷酸化抑制培养基：向各细胞培养基中加入适量200mm的碘化钠母液，配制成egfr磷酸化抑制培养基；
22.3)细胞种板过夜培养后，小心将细胞培养基吸出，并加入egfr磷酸化抑制培养基，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱继续培养24小时。
23.更为优选地，所述egfr磷酸化抑制培养基是碘化钠浓度为100μm的细胞培养基。
24.进一步地，上述nis高表达细胞的egfr蛋白的磷酸化抑制方法还包括对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测的步骤。在对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测前还包括：
25.将egfr磷酸化抑制培养基培养好的细胞用磷酸缓冲液pbs进行清洗2-3次；加入适量固定-破膜液，常温避光固定30分钟或37℃避光固定10分钟；
26.再将固定后的细胞加入1
×
破膜液进行清洗2-3次；向清洗后的细胞中加入适量egfr一抗溶液，室温避光孵育30分钟；
27.一抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；向清洗后的细胞中加入适量的荧光二抗溶液，室温避光孵育60分钟；
28.荧光二抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；加入200μl的加有细胞核染色液horchest的flurbrite dmem，避光，立即进行高内涵细胞成像分析系统检测。
29.优选地，所述固定-破膜液采用新鲜配置的ebioscience
tm foxp3试剂盒中的固定-破膜试剂200μl。
30.优选地，所述1
×
破膜液采用新鲜配置的ebioscience
tm foxp3试剂盒中的破膜液。
31.优选地，所述egfr一抗溶液采用cell signaling technology公司phospho-egf receptor(tyr1068)(d7a5)rabbit mab(#3777)一抗或phospho-egf receptor(tyr845)(d63b4)rabbit mab(#6963)一抗溶液，并用1
×
破膜液进行1:500稀释。
32.优选地，所述荧光二抗溶液采用cell signaling technology公司anti-rabbit igg(h+l)(#4412)二抗，并用1
×
破膜液进行1:1000稀释。
33.进一步地，nis低表达细胞的egfr蛋白的磷酸化抑制方法的具体步骤为：
34.1)以bewo、te-1和mkn-45低nis表达细胞为例，首先对以上细胞进行传代培养，将培养好的细胞种板至96孔板，每孔2
×
104个细胞，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱过夜培养；
35.2)配制含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基：向各细胞培养基中加入适量2mm的kt5823和200mm的碘化钠母液，配制成含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基；
36.3)细胞种板过夜培养后，小心将细胞培养基吸出，加入含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱继续培养24小时。
37.更为优选地，所述含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基是kt5823浓度为2μm，碘化钠浓度为10μm的细胞培养基。
38.进一步地，上述nis低表达细胞的egfr蛋白的磷酸化抑制方法还包括对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测的步骤。在对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测前还包括：
39.将含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基培养好的细胞用磷酸缓冲液pbs进行清洗2-3次；加入适量固定-破膜液，常温避光固定30分钟或37℃避光固定10分钟；
40.再将固定后的细胞加入1
×
破膜液进行清洗2-3次；向清洗后的细胞中加入适量egfr一抗溶液，室温避光孵育30分钟；
41.一抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；向清洗后的细胞中加入适量的荧光二抗溶液，室温避光孵育60分钟；
42.荧光二抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；加入200μl的加有细胞核染色液horchest的flurbrite dmem，避光，立即进行高内涵细胞成像分析系统检测。
43.优选地，所述固定-破膜液采用新鲜配置的ebioscience
tm foxp3试剂盒中的固定-破膜试剂200μl。
44.优选地，所述1
×
破膜液采用新鲜配置的ebioscience
tm foxp3试剂盒中的破膜液。
45.优选地，所述egfr一抗溶液采用cell signaling technology公司phospho-egf receptor(tyr1068)(d7a5)rabbit mab(#3777)一抗或phospho-egf receptor(tyr845)(d63b4)rabbit mab(#6963)一抗溶液，并用1
×
破膜液进行1:500稀释；
46.优选地，所述荧光二抗溶液采用cell signaling technology公司anti-rabbit igg(h+l)f(ab')2fragment(alexa488conjugate)(#4412)二抗，并用1
×
破膜液进行1:1000稀释。
47.进一步地，对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测的具体方法包括：
48.高内涵细胞成像分析系统选择dapi和fitc两个通道进行检测，其中dapi通道的曝光时间为5ms，fitc通道的曝光时间为100ms。采用20x的镜头，每孔9个视野进行采集。并通过系统自带的分析软件对egfr表达水平进行分析。
49.第四方面，本发明提供上述egfr蛋白的磷酸化抑制试剂即碘化钠在抗肿瘤药物中的用途。
50.本发明的有益效果如下：
51.本发明首次发现，碘化钠可以显著抑制egfr蛋白的磷酸化，其磷酸化位点845和1068均可显著地被碘化钠抑制，因此碘化钠可作为egfr的抑制剂。即加入碘化钠能够对酪氨酸进行碘化修饰，形成空间位阻，从而抑制酪氨酸的磷酸化。
52.本发明中的egfr磷酸化抑制方法，可潜在地应用于抗肿瘤药物的研发。egfr是肿瘤细胞促有丝分裂和转化的一个重要靶点，在许多肿瘤细胞中过度表达，与肿瘤的发生发展及转移密切相关。抑制egfr磷酸化激活可抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移和血管再生，诱导肿瘤细胞凋亡。
附图说明
53.图1为b-cpap细胞磷酸化抑制剂100μm处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图；
54.图2为hth-7细胞磷酸化抑制剂100μm处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图；
55.图3为sw579细胞磷酸化抑制剂100μm处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图；
56.图4为nthy-ori-3-1细胞磷酸化100μm抑制剂处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图。
57.图5为bewo细胞2μm kt5823和磷酸化抑制剂10μm处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图；
58.图6为te-1细胞2μm kt5823和磷酸化抑制剂100μm处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图；
59.图7为mkn-45细胞2μm kt5823和磷酸化抑制剂10μm处理后磷酸化位点845和1068磷酸化结果图；
60.图1～图7中，横坐标处的con表示经碘化钠处理前各细胞的egfr磷酸化845和1068位点，nai表示经碘化钠处理后各细胞的egfr磷酸化845和1068位点，纵坐标处的positive表示细胞中egfr蛋白磷酸化的阳性率。
具体实施方式
61.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
62.实施例1：甲状腺癌细胞b-cpap的磷酸化抑制效果测定
63.1、仪器与试剂：
64.高内涵细胞成像分析系统(molecular devices公司)；碘化钠；超纯水；ebioscience
tm foxp3试剂盒；抗体phospho-egf receptor(tyr1068)(d7a5)rabbit mab(#3777)；抗体phospho-egf receptor(tyr845)(d63b4)rabbit mab(#6963)；抗体anti-rabbit igg(h+l)(#4412)。
65.2、b-cpap细胞的培养和磷酸化抑制处理
66.(1)b-cpap细胞复苏-传代：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml的培养基(rpmi-1640+10％fbs+1％penicillin-streptomycin solution)混合均匀。在500rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
67.细胞密度达80％-90％，即可进行传代培养。将0.25％胰酶-0.53mm edta消化液置于37
°
预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5ml pbs，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2ml预热好的胰酶，置于37
°
孵育消化，消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
68.(2)待细胞长至足够量，收集细胞，并测定细胞密度，细胞种板至96孔板，每孔2
×
104个细胞，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱过夜培养。
69.(3)磷酸化抑制剂处理：配制egfr磷酸化抑制培养基，向各细胞培养基中加入适量200mm的碘化钠母液，配制成碘化钠浓度为100μm的细胞培养基。细胞种板过夜培养后，小心将细胞培养基吸出，并加入egfr磷酸化抑制培养基，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱继续培养24小时。
70.(4)细胞固定：将egfr磷酸化抑制培养基培养好的细胞用磷酸缓冲液pbs进行清洗2-3次；加适量入固定-破膜液，常温避光固定30分钟或37℃避光固定10分钟。
71.(5)细胞染色：固定后的细胞加入1
×
破膜液进行清洗2-3次；向清洗后的细胞中加入50μl的1：500稀释的egfr一抗溶液(抗体phospho-egf receptor(tyr1068)(d7a5)rabbit mab(#3777)和抗体phospho-egf receptor(tyr845)(d63b4)rabbit mab(#6963)分为加入不同的空位)，室温避光孵育30分钟；
72.(6)荧光二抗孵育：一抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；向清洗后的细胞中加入适量的荧光二抗1:1000稀释的anti-rabbit igg(h+l)(#4412)溶液，室温避光孵育60分钟；
73.(7)高内涵检测：荧光二抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；加入200μl的加有细胞核染色液horchest的flurbrite dmem，避光，立即进行高内涵细胞成像分析系统检测。高内涵细胞成像分析系统选择dapi和fitc两个通道进行检测，其中dapi通道的曝光时间为5ms，fitc通道的曝光时间为100ms。采用20x的镜头，每孔9个视野进行采集。并通过系统自带的分析软件对egfr表达水平进行分析。
74.实施例2：甲状腺癌细胞hth-7的磷酸化抑制效果测定
75.1、仪器与试剂：
76.同实施例1。
77.2、hth-7细胞的培养和磷酸化抑制处理
78.(1)hth-7细胞复苏-传代：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml的培养基(dmem+10％fbs+1％penicillin-streptomycin solution)混合均匀。在500rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
79.其他步骤同实施例1。
80.实施例3：甲状腺癌细胞sw579的磷酸化抑制效果测定
81.1、仪器与试剂：
82.同实施例1。
83.2、sw579细胞的培养和磷酸化抑制处理
84.(1)sw579细胞复苏-传代：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml的培养基(dmem+10％fbs+1％penicillin-streptomycin solution)混合均匀。在500rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
85.其他步骤同实施例1。
86.实施例4：永生化甲状腺细胞nthy-ori-3-1的磷酸化抑制效果测定
87.1、仪器与试剂：
88.同实施例1。
89.2、nthy-ori-3-1细胞的培养和磷酸化抑制处理
90.同实施例1。
91.实施例5：人胎盘绒毛癌细胞bewo的磷酸化抑制效果测定
92.1、仪器与试剂：
93.高内涵细胞成像分析系统(molecular devices公司)；碘化钠；超纯水；kt5823；dmso；ebioscience
tm foxp3试剂盒；抗体phospho-egf receptor(tyr1068)(d7a5)rabbit mab(#3777)；抗体phospho-egf receptor(tyr845)(d63b4)rabbit mab(#6963)；抗体anti-rabbit igg(h+l)(#4412)。
94.2、bewo细胞的培养和磷酸化抑制处理
95.(1)bewo细胞复苏-传代：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml的培养基(dmem+10％fbs+1％penicillin-streptomycin solution)混合均匀。在500rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
96.(2)待细胞长至足够量，收集细胞，并测定细胞密度，细胞种板至96孔板，每孔2
×
104个细胞，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱过夜培养。
97.(3)磷酸化抑制剂处理：配制含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基，向各细胞培养基中加入适量200mm的碘化钠母液和适量2mm的kt5823母液，配制成kt5823浓度为2μm碘化钠浓度为100μm的细胞培养基。细胞种板过夜培养后，小心将细胞培养基吸出，并加入含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱继续培养24小时。
98.其他步骤同实施例1。
99.实施例6：人食管癌细胞te-1的磷酸化抑制效果测定
100.1、仪器与试剂：
101.同实施例5。
102.2、te-1细胞的培养和磷酸化抑制处理
103.(1)te-1细胞复苏-传代：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5ml的培养基(rpmi-1640+10％fbs+1％penicillin-streptomycin solution)混合均匀。在500rpm条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6ml完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中)，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
104.其他步骤同实施例5。
105.实施例7：人胃癌细胞mkn-45的磷酸化抑制效果测定
106.1、仪器与试剂：
107.同实施例6。
108.2、mkn-45细胞的培养和磷酸化抑制处理
109.同实施例6。
110.综合实施例1和实施例7中的检测结果即图1～图7，可以看出，经碘化钠处理后b-cpap、hth-7、sw579、nthy-ori-3-1、bewo、te-1和mkn-45细胞的egfr磷酸化845和1068位点均显著受到抑制。因此，本发明中的egfr蛋白磷酸化抑制方法可为癌症药物的研发提供依据。
111.以上公开的本发明的具体实施例，其目的在于帮助理解本发明的内容并据以实施，本领域的普通技术人员可以理解，在不脱离本发明的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的。本发明不应局限于本说明书的实施例所公开的内容，本发明的保护范围以权利要求书界定的范围为准。

技术特征：
1.一种egfr蛋白磷酸化的抑制试剂，其特征在于，所述egfr蛋白磷酸化的抑制试剂包含碘化钠。2.根据权利要求1所述的egfr蛋白磷酸化的抑制试剂，其特征在于，所述egfr蛋白磷酸化的抑制试剂还包含辅助剂kt5823。3.一种egfr蛋白磷酸化的抑制试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将碘化钠溶解于超纯水，制得碘化钠母液，作为egfr蛋白磷酸化的抑制试剂；将kt5823溶解于dmso，制得kt5823母液，作为egfr蛋白磷酸化的抑制试剂的辅助剂。4.一种egfr蛋白磷酸化的抑制方法，其特征在于，包括以下步骤：将碘化钠溶解于超纯水，制得碘化钠母液；将碘化钠母液加入细胞培养基中，配制成egfr磷酸化抑制培养基；对于nis高表达细胞，直接利用含有碘化钠的egfr磷酸化抑制培养基抑制egfr蛋白的磷酸化；对于nis低表达细胞，将egfr蛋白的磷酸化抑制试剂辅助剂kt5823加入含有碘化钠的egfr磷酸化抑制培养基，再用其抑制egfr蛋白的磷酸化。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述对于nis高表达细胞，直接利用含有碘化钠的egfr磷酸化抑制培养基抑制egfr蛋白的磷酸化，包括：对nis高表达细胞进行传代培养，将培养好的细胞种板至96孔板，每孔2
×
104个细胞，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱过夜培养；向各细胞培养基中加入适量200mm的碘化钠母液，配制成egfr磷酸化抑制培养基；细胞种板过夜培养后，小心将细胞培养基吸出，并加入egfr磷酸化抑制培养基，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱继续培养24小时。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，对所述nis高表达细胞的egfr蛋白的磷酸化抑制过程还包括对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测的步骤；在对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测之前，还包括：将egfr磷酸化抑制培养基培养好的细胞用磷酸缓冲液pbs进行清洗2-3次；加入适量固定-破膜液，常温避光固定30分钟或37℃避光固定10分钟；将固定后的细胞加入1
×
破膜液进行清洗2-3次；向清洗后的细胞中加入适量egfr一抗溶液，室温避光孵育30分钟；一抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；向清洗后的细胞中加入适量的荧光二抗溶液，室温避光孵育60分钟；荧光二抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；加入200μl的加有细胞核染色液horchest的flurbrite dmem，避光，立即进行高内涵细胞成像分析系统检测。7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述对于nis低表达细胞，将egfr蛋白的磷酸化抑制试剂辅助剂加入含有碘化钠的egfr磷酸化抑制培养基，再用其抑制egfr蛋白的磷酸化，包括：对nis低表达细胞进行传代培养，将培养好的细胞种板至96孔板，每孔2
×
104个细胞，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱过夜培养；向各细胞培养基中加入适量2mm的kt5823和200mm的碘化钠母液，配制成含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基；
细胞种板过夜培养后，小心将细胞培养基吸出，加入含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基，置于37℃、5％二氧化碳细胞培养箱继续培养24小时。8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，对所述nis低表达细胞的egfr蛋白的磷酸化抑制过程还包括对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测的步骤；在对egfr蛋白的磷酸化程度进行检测之前，还包括：将含有辅助剂kt5823的egfr磷酸化抑制培养基培养好的细胞用磷酸缓冲液pbs进行清洗2-3次；加入适量固定-破膜液，常温避光固定30分钟或37℃避光固定10分钟；将固定后的细胞加入1
×
破膜液进行清洗2-3次；向清洗后的细胞中加入适量egfr一抗溶液，室温避光孵育30分钟；一抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；向清洗后的细胞中加入适量的荧光二抗溶液，室温避光孵育60分钟；荧光二抗孵育后，加入1
×
破膜液进行清洗3次；加入200μl的加有细胞核染色液horchest的flurbrite dmem，避光，立即进行高内涵细胞成像分析系统检测。9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述nis高表达细胞为下列中的一种：甲状腺癌细胞b-cpap、甲状腺癌细胞hth-7、甲状腺癌细胞sw579、永生化甲状腺细胞nthy-ori-3-1；所述nis低表达细胞为下列中的一种：人胎盘绒毛癌细胞bewo、人食管癌细胞te-1、人胃癌细胞mkn-45。10.权利要求1或2所述的egfr蛋白的磷酸化抑制试剂在抗肿瘤药物中的用途。

技术总结
本发明涉及一种EGFR蛋白磷酸化的抑制试剂及抑制方法和用途。所述EGFR蛋白磷酸化的抑制试剂包含碘化钠。EGFR蛋白磷酸化的抑制方法包括：将碘化钠溶解于超纯水，制得碘化钠母液，作为EGFR蛋白磷酸化的抑制试剂；将碘化钠母液加入细胞培养基中，配制成EGFR磷酸化抑制培养基；对于NIS高表达细胞，直接利用含有碘化钠的EGFR磷酸化抑制培养基抑制EGFR蛋白的磷酸化；对于NIS低表达细胞，将NIS的激动试剂加入含有碘化钠的EGFR磷酸化抑制培养基，再用其抑制EGFR蛋白的磷酸化。本发明可应用于抗肿瘤药物的研发，抑制EGFR磷酸化激活可抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移和血管再生，诱导肿瘤细胞凋亡。亡。亡。


技术研发人员：万祎 杨辉 崔洪洋 张倩男
受保护的技术使用者：北京大学
技术研发日：2023.01.18
技术公布日：2023/7/13