一种天麻素中杂质元素的检测方法与流程

1.本发明涉及化学检测技术领域，特别是涉及一种天麻素中杂质元素的检测方法。


背景技术：

2.天麻素为白色针状结晶，熔点为154～155℃，易溶于水、甲醇、乙醇，不溶于氯仿和醚，其结构式为
3.天麻素具有较好的镇静和安眠作用，对神经衰弱、失眠、头痛症状有缓解作用，可治疗头痛眩晕、肢体麻木、惊痛抽搐。
4.作为药物使用的天麻素，必须要有足够的纯度。天麻素在合成过程中，难以避免会存在一些杂质，如反应中间体五乙酰天麻素，因此，业界需要对制备的天麻素进行杂质检测。
5.现有天麻素纯度的测试方法，大都采用液相色谱法。现有液相色谱的色谱条件为：色谱柱采用反相色谱柱，流动相采用乙腈-0.1％磷酸(3:97)溶液，在实际测试中发现，该色谱条件难以准确测定天麻素中的杂质，尤其是反应中间体五乙酰天麻素。


技术实现要素：

6.本发明通过提供一种天麻素中杂质元素的检测方法，解决了现有技术中天麻素中的杂质，尤其是五乙酰天麻素不能被有效测出的问题。
7.为解决上述技术问题，本发明提供了一种天麻素中杂质元素的检测方法，包括如下步骤：
8.(1)制备标准液：称取天麻素标准物质和五乙酰天麻素标准物质，加去离子水溶解，然后分别转移至容量瓶中定容至刻度线，得到天麻素标准溶液和五乙酰天麻素标准溶液；
9.(2)制备测试液：将待测试的天麻素加去离子水溶解，并转移至容量瓶中定容至刻度线，得到测试液；
10.(3)测试：采用高效液相色谱仪对步骤(1)中制备的天麻素标准溶液和五乙酰天麻素标准溶液以及步骤(2)中制备的测试液进行测试，测试条件如下：
11.测试波长：220nm；
12.进样量：10μl；
13.流动相：体积比为30～50:50～70的乙腈-0.1％磷酸溶液。
14.在本发明一个较佳实施例中，所述步骤(1)中，所述天麻素标准溶液的浓度为0.502mg/ml。
15.在本发明一个较佳实施例中，所述步骤(1)中，所述五乙酰天麻素标准溶液的浓度为0.103mg/ml。
16.在本发明一个较佳实施例中，所述步骤(3)中，所述高效液相色谱仪的色谱柱的填充剂为十八烷基硅胶键合硅胶。
17.在本发明一个较佳实施例中，所述步骤(3)中，所述流动相是体积比为50:50的乙腈-0.1％磷酸溶液。
18.本发明的有益效果是：本发明一种天麻素中杂质元素的检测方法，采用高效液相色谱法，通过色谱柱、测试条件选择以及流动相中极性较大的乙腈的比例的设计，使极性较小的五乙酰天麻和天麻素在色谱柱中的出峰时间明显间隔开，从而实现了天麻素和杂质元素的有效分离，实现较好分离五乙酰天麻素等非极性或极性较低的杂质，并能定量分析检测天麻素中五乙酰天麻素的含量的目的。
附图说明
19.图1是本发明一种天麻素中杂质元素的检测方法中天麻素标准溶液的检测色谱图；
20.图2是本发明一种天麻素中杂质元素的检测方法中五乙酰天麻素标准溶液的检测色谱图；
21.图3是本发明一种天麻素中杂质元素的检测方法中天麻素反应溶液的检测色谱图；
22.图4是天麻素标准溶液采用体积比为3:97的乙腈-0.1％磷酸溶液作为流动相的检测色谱图。
具体实施方式
23.下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
24.请参阅图1-4，本发明实施例包括：
25.实施例1
26.本发明公开了一种天麻素中杂质元素的检测方法，包括如下步骤：
27.(1)制备标准液：
28.称取天麻素标准物质适量，加去离子水溶解，然后转移至容量瓶中定容至刻度线，稀释成浓度为0.502mg/ml的天麻素标准溶液；
29.称取五乙酰天麻素标准物质适量，加去离子水溶解，然后转移至容量瓶中定容至刻度线，稀释成浓度为0.103mg/ml的五乙酰天麻素标准溶液；
30.(2)制备测试液：将反应10min以后的天麻素反应液转移至容量瓶中定容至刻度线，得到测试液；
31.(3)测试：采用高效液相色谱仪对步骤(1)中制备的天麻素标准溶液和五乙酰天麻素标准溶液以及步骤(2)中的测试液进行测试，测试条件如下：
32.所述高效液相色谱仪的色谱柱的填充剂为十八烷基硅胶键合硅胶；
33.测试波长：220nm；
34.进样量：10μl；
35.流动相：体积比为50:50的乙腈-0.1％磷酸溶液。
36.将10μl浓度为0.502mg/ml的天麻素标准溶液进样，记录色谱图，如图1所示，天麻素的出峰时间为1.171min，峰面积为2821776。峰结果如下表1所示。
37.表1
[0038][0039]
将10μl浓度为0.103mg/ml的五乙酰天麻素标准溶液进样，记录色谱图，如图2所示，五乙酰天麻素的出峰时间为14.711min，峰面积为407883。峰结果如下表2所示。
[0040]
表2
[0041][0042]
将10μl天麻素反应液进样，记录色谱图，如图3所示，天麻素1.217出峰，五乙酰天麻素14.408出峰，中间的四个峰分别为一乙酰天麻素、二乙酰天麻素、三乙酰天麻素和四乙酰天麻素的出峰时间。峰结果如表3所示。
[0043]
表3
[0044][0045][0046]
根据天麻素标准溶液和五乙酰天麻素标准溶液的浓度和峰面积，计算五乙酰天麻素对于天麻素的校正因子为1.42，计算方法为：(2821776/0.502)/(407883/0.103)＝1.35。
[0047]
采用带有校正因子的面积归一化法计算天麻素反应液中五乙酰天麻素的含量。而其他杂质一乙酰、二乙酰、三乙酰、四乙酰天麻素的定量检测使用面积归一化法计算，仅作为参考。
[0048]
计算得到天麻素溶液中五乙酰天麻素的回收率为95.2％。
[0049]
对比例1
[0050]
称取天麻素标准物质适量，加去离子水溶解，然后转移至容量瓶中定容至刻度线，稀释成浓度为0.500mg/ml的天麻素标准溶液。
[0051]
采用高效液相色谱仪对制备的天麻素标准溶液进行测试，测试条件如下：
[0052]
所述高效液相色谱仪的色谱柱的填充剂为十八烷基硅胶键合硅胶；
[0053]
测试波长：220nm；
[0054]
进样量：10μl；
[0055]
流动相：体积比为3:97的乙腈-0.1％磷酸溶液。
[0056]
记录色谱图，如图4所示，天麻素的出峰时间为11.805min。
[0057]
由对比例1的测试结果可知，在该流动相比例下，五乙酰天麻素洗脱不出料，无法出峰，无法检测。
[0058]
本发明一种天麻素中杂质元素的检测方法的测试方法，具有如下特点：
[0059]
专属性：溶剂空白无干扰；样品中的其他杂质峰对五乙酰天麻素的检查无干扰。
[0060]
灵敏度：信噪比为36.8。
[0061]
重复性：五乙酰天麻素标准溶液连续进样6次的峰面积的rsd为1.07％，重复性好。
[0062]
回收率计算准确度高：通过本发明的测试方法，可以计算出天麻素溶液中五乙酰天麻素的回收率为95.2％。
[0063]
本发明的检测方法，通过提高流动相中极性较大的乙腈的比例，使极性较小的五乙酰天麻能够被有效洗脱出来，并显示出峰值，能够被有效检测，从而实现了天麻素和杂质元素的有效分离，实现较好分离五乙酰天麻素等非极性或极性较低的杂质，并能定量分析检测天麻素中五乙酰天麻素的含量的目的。
[0064]
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

技术特征：
1.一种天麻素中杂质元素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备标准液：称取天麻素标准物质和五乙酰天麻素标准物质，加去离子水溶解，然后分别转移至容量瓶中定容至刻度线，得到天麻素标准溶液和五乙酰天麻素标准溶液；(2)制备测试液：将待测试的天麻素加去离子水溶解，并转移至容量瓶中定容至刻度线，得到测试液；(3)测试：采用高效液相色谱仪对步骤(1)中制备的天麻素标准溶液和五乙酰天麻素标准溶液以及步骤(2)中制备的测试液进行测试，测试条件如下：测试波长：220nm；进样量：10μl；流动相：体积比为30～50:50～70的乙腈-0.1％磷酸溶液。2.根据权利要求1所述的一种天麻素中杂质元素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述天麻素标准溶液的浓度为0.502mg/ml。3.根据权利要求1所述的一种天麻素中杂质元素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述五乙酰天麻素标准溶液的浓度为0.103mg/ml。4.根据权利要求1所述的一种天麻素中杂质元素的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述高效液相色谱仪的色谱柱的填充剂为十八烷基硅胶键合硅胶。5.根据权利要求1所述的一种天麻素中杂质元素的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述流动相是体积比为50:50的乙腈-0.1％磷酸溶液。

技术总结
本发明公开了一种天麻素中杂质元素的检测方法，包括如下步骤：(1)制备标准液；(2)制备测试液；(3)测试。本发明一种天麻素中杂质元素的检测方法，采用高效液相色谱法，通过色谱柱、测试条件选择以及流动相中极性较大的乙腈的比例的设计，使极性较小的五乙酰天麻能够被洗脱出来并检测到，从而实现了天麻素和杂质元素的有效分离，实现较好分离五乙酰天麻素等非极性或极性较低的杂质，并能定量分析检测天麻素中五乙酰天麻素的含量的目的。中五乙酰天麻素的含量的目的。中五乙酰天麻素的含量的目的。


技术研发人员：史加桂 孙征宇 卫耿虎
受保护的技术使用者：江苏汉斯通药业有限公司
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2023/7/13