一种嗜酸乳杆菌（Lactobacillusacidophilus）HCLA01及其在制备具有增强免疫力的产品中的应用的制作方法

一种嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01及其在制备具有增强免疫力的产品中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01及其在制备具有增强免疫力的产品中的应用。


背景技术：

2.大量研究表明，肠道益生菌也可通过直接刺激免疫细胞、调节机体免疫信号通路调节机体免疫，而益生菌发酵产生的短链脂肪酸与人体健康、人体免疫力密切相关。γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid)是一种重要的功能性非蛋白质氨基酸，具有多种生理功能，如食用含有γ-氨基丁酸的食品可改善睡眠、提高免疫力、降血压、增加脑部蛋白分泌等。γ-氨基丁酸因其良好的生物活性，在食品、化妆品领域均有大量应用。但目前，γ-氨基丁酸的生产多以化学合成为主，产量低、纯度低以及副产物污染等极大的限制了其应用。
3.益生菌发酵用于γ-氨基丁酸的制备生产具有多种优势，如污染少，对生产条件要求低等。此外，γ-氨基丁酸及益生菌均报道具有增强机体免疫力的活性，但将益生菌与外加γ-氨基丁酸联合使用是否具有更优秀的增强机体免疫力的活性却鲜有研究及报道。


技术实现要素：

4.为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01。
5.本发明提供的一种嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01，其保藏编号为gdmcc no：63137。
6.该菌株已于2023年1月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(地址是广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所)。
7.所述的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01形态呈细长杆状；经分析其16s rdna序列(如seq id no:1所示)，利用测序结果在ncbi数据库中进行比对，与genbank中嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)的同源性为97％。
8.发明人在大量的实验中筛选得到了一种全新的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01，发明人在进一步研究中惊奇的发现，其具有增强免疫力作用；并且其增强免疫力作用要显著好于现有的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)。
9.本发明还提供了一种组合物，其包含嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01和γ-氨基丁酸。
10.发明人在进一步研究中惊奇的发现，将嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01与γ-氨基丁酸组合后得到的组合物，其增强免疫力作用相比于单独的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01或单独的γ-氨基丁酸，得到了大幅的提高；具有更加显著的增强免疫力作用。这可能是由于将嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01与γ-氨基丁酸组合后产生协同增效的结果。
1ml/l、醋酸钠4.0g/l，磷酸氢二钾2.0g/l、硫酸镁0.4g/l、硫酸锰0.2g/l，琼脂15.0g/l)，37℃培养48h，挑取若干有溶钙圈的疑似嗜酸乳杆菌的菌落，接种至含谷氨酸的培养基中，37℃，静止48h，定性检测并比较γ-氨基丁酸产量大小；挑选出γ-氨基丁酸产量较高的菌株，即得所述的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01(以下简写为嗜酸乳杆菌hcla01)；
26.其中，所述的嗜酸乳杆菌hcla01形态呈细长杆状；经分析其16s rdna序列(如seq id no:1所示)，利用测序结果在ncbi数据库中进行比对，与genbank中嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)的同源性为97％。
27.实施例2嗜酸乳杆菌hcla01冻干粉的制备
28.(1)嗜酸乳杆菌hcla01种子液制备：将嗜酸乳杆菌hcla01菌种接入培养基(培养基成分为：蛋白胨8.0g/l、酵母粉8.0g/l、谷氨酸钠8.0g/l、葡萄糖8.0g/l、吐温80 1ml/l、醋酸钠4.0g/l，磷酸氢二钾2.0g/l、硫酸镁0.4g/l、硫酸锰0.2g/l)，摇瓶发酵12h，获得od 600＞1.5的嗜酸乳杆菌hcla01种子液。
29.(2)扩大培养：将步骤(1)所得的嗜酸乳杆菌hcla01种子液接入20l发酵罐中的液体培养基(20l，培养基成分为：蛋白胨8.0g/l、酵母粉8.0g/l、谷氨酸钠8.0g/l、葡萄糖8.0g/l、吐温80 1ml/l、醋酸钠4.0g/l，磷酸氢二钾2.0g/l、硫酸镁0.4g/l、硫酸锰0.2g/l)；在ph值为6；培养温度为37℃条件下搅拌培养48h；结束发酵得发酵液；
30.(3)将步骤(2)所得发酵液离心收集菌体，然后添加水以及冻干保护剂脱脂乳粉混合均匀后经冷冻干燥后制得活菌数为100亿cfu/g的嗜酸乳杆菌hcla01冻干粉。
31.实施例3组合物的制备
32.将1.0g按实施例2方法制备得到的嗜酸乳杆菌hcla01冻干粉(活菌数为100亿cfu/g)和10gγ-氨基丁酸混合均匀，即得所述的组合物(为了进行区分，以下写为γ-氨基丁酸hcla01组合物)。
33.对比例1组合物的制备
34.将1.0g嗜酸乳杆菌lgg冻干粉(购买得到，活菌数为100亿cfu/g)和10gγ-氨基丁酸混合均匀，即得所述的组合物(为了进行区分，以下写为γ-氨基丁酸lgg组合物)。
35.效果实施例
36.按《保健食品功能评价方法(2020年版)(征求意见稿)》进行增强免疫功能实验，经口给予小鼠适当剂量的干预品(分别为按实施例2方法制备得到的嗜酸乳杆菌hcla01冻干粉(100亿cfu/g)、嗜酸乳杆菌lgg冻干粉(100亿cfu/g)、γ-氨基丁酸、γ-氨基丁酸hcla01组合物以及γ-氨基丁酸lgg组合物；给药剂量为40mg/kg)，不同剂量干预品用适量的0.5％ cmc-na稀释到一定体积后按20ml/kg体重灌胃给药，每日一次，30d后，进行小鼠脾淋巴细胞转化试验及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验，以评价各实施例对小鼠免疫功能的影响；实验结果见表1；
37.实施结果：各实施结果均与阴性对照组(阴性对照组动物灌胃给予1％cmc-na，1次/天，连续30天)相比，有显著差异的结果如下，*表示与阴性对照组相比，p《0.05；**表示与阴性对照组相比，p《0.01。
38.表1.小鼠免疫功能实验结果
[0039][0040]
从表1实验结果可以看出，本发明嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01，其对小鼠脾淋巴细胞的增殖能力以及巨噬细胞吞噬百分率显著高于已知的嗜酸乳杆菌lgg冻干粉。这说明：本发明提供的全新的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01，具有增强免疫力作用；并且其增强免疫力作用要显著好于已知的嗜酸乳杆菌lgg。
[0041]
从表1实验结果可以看出，γ-氨基丁酸hcla01组合物，其对小鼠脾淋巴细胞的增殖能力以及巨噬细胞吞噬百分率进一步大幅高于单独的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01；同时也大幅高于γ-氨基丁酸；这说明：将嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01与γ-氨基丁酸组合后得到的组合物；其增强免疫力作用相比于单独的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01或单独的γ-氨基丁酸，得到了大幅的提高；具有更加显著的增强免疫力作用。
[0042]
从表1实验结果可以看出，γ-氨基丁酸lgg组合物，其对小鼠脾淋巴细胞的增殖能力以及巨噬细胞吞噬百分率相对于单独的嗜酸乳杆菌lgg冻干粉并未得到提高，同时也大幅小于γ-氨基丁酸hcla01组合物；这说明：只有将本发明嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01与γ-氨基丁酸组合后得到的组合物，其增强免疫力作用相比于单独的嗜酸乳杆菌或单独的γ-氨基丁酸，才能得到大幅的提高；而采用其它嗜酸乳杆菌与γ-氨基丁酸组合物得到的组合物，其增强免疫力作用相比于单独的嗜酸乳杆菌或单独的γ-氨基丁酸，并不能够得到大幅的提高。

技术特征：
1.一种嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01，其保藏编号为gdmcc no：63137。2.一种组合物，其特征在于，包含嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01和γ-氨基丁酸。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01为嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01冻干粉。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01冻干粉和γ-氨基丁酸的质量比为1:(1-100)。5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01冻干粉和γ-氨基丁酸的质量比为1:(1-100)。6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01冻干粉和γ-氨基丁酸的质量比为1:10。7.权利要求1所述的嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)hcla01在制备具有增强免疫力的产品中的应用。8.权利要求2～6任一项所述的组合物在制备具有增强免疫力的产品中的应用。9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述产品为食品、膳食补充剂、功能性食品、保健品或药物。10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述产品的剂型为丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂或粉剂。

技术总结
本发明涉及医学技术领域，具体公开了一种嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)HCLA01及其在制备具有增强免疫力的产品中的应用。所述的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)HCLA01，其保藏编号为GDMCC No：63137。所述的组合物，其包含嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)HCLA01和γ-氨基丁酸。研究表明，本发明所述的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)HCLA01具有增强免疫力作用；并且其增强免疫力作用要显著优于已知的嗜酸乳杆菌。已知的嗜酸乳杆菌。


技术研发人员：刘晓宇 刘杰 王怀玲 郭奕彤 林沛纯 单紫庆 张渐麒 林燕玲 吴嘉顺儿
受保护的技术使用者：深圳海创生物科技有限公司
技术研发日：2023.04.27
技术公布日：2023/7/12