一种延缓血管衰老的药物的制作方法

1.本发明属于心脑血管技术领域，尤其涉及一种延缓血管衰老的药物。


背景技术：

2.衰老是生理器官功能不可避免的进行性衰退，会增加疾病和死亡的几率。其中，血管衰老是导致人体器官和组织衰老的重要病理和生理基础，也是众多老年病如动脉粥样硬化、心力衰竭和高血压的主要发病机制。血管衰老产生的原因是血管壁细胞和细胞外基质在组织和细胞水平上发生临床和亚临床结果及功能的改变。
3.血管紧张素ii(ang ii)是一种炎症触发器，其激活血管壁的炎症因子如nf-kb、tgf-β1等从而促进血管发生炎症反应，并且可以刺激细胞产生自由基，导致血管内皮细胞发生衰老，进而导致动脉粥样硬化的发生和发展。因此，通过调控血管紧张素ii来减少血管内皮细胞衰老将有助于降低血管衰老。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种通过降低血管紧张素导致的内皮细胞衰老来延缓血管衰老的药物。
5.为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
6.本发明提供了一种延缓血管衰老的药物，所述药物为液体药物，所述药物包括龙胆苦甘，灵芝多糖和药学上可接受的载体。
7.优选地，所述药物中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l，所述药物中灵芝多糖的浓度为100mg/l。
8.优选地，所述药物用于血管紧张素ii所引起的内皮细胞衰老。
9.其次，本发明提供了一种降低血管内皮细胞衰老的药物，所述药物为液体药物，所述药物包括龙胆苦甘，灵芝多糖和药学上可接受的载体。
10.优选地，所述药物中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l，所述药物中灵芝多糖的浓度为100mg/l。
11.其次，本发明提供了一种降低血管内皮细胞衰老的培养基，所述培养基中含有龙胆苦苷和灵芝多糖。
12.优选地，所述培养基中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l，所述培养基中灵芝多糖的浓度为100mg/l。
13.其次，本发明提供了龙胆苦甘在制备延缓血管衰老药物中的应用。
14.优选地，所述药物为液体药物，所述药物中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l。
15.除此之外，本发明提供了龙胆苦苷在制备降低血管内皮细胞衰老的培养基中的应用，所述培养基中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l。
16.本发明的有益效果在于：
17.首先，本发明发现龙胆苦甘可以降低血管紧张素ii导致的血管内皮细胞衰老，并
且降低血管紧张素ii导致的cav-1蛋白表达升高；
18.其次，本发明发现龙胆苦苷可以和灵芝多糖产生协同作用来大幅降低血管紧张素ii导致的血管内皮细胞衰老，从而可以将两者联合使用来制备高效的延缓血管衰老的药物。
附图说明
19.图1为龙胆苦甘对于血管紧张素ii导致的cav-1蛋白(小凹蛋白)上调的影响。
具体实施方式
20.为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
21.龙胆苦苷是一种天然的环烯醚萜苷，其是龙胆属植物的主要药效成分之一，广泛存在于龙胆草等植物的干燥根及根茎，其结构如下：
[0022][0023]
本发明主要探讨龙胆苦苷是否能够在血管内皮细胞衰老中发挥作用。
[0024]
实施例1：龙胆苦苷对于人静脉内皮细胞(huvec)活性的影响将对数生长期的huvec细胞按照3
×
103/孔接种在96孔板中，培养12h；
[0025]
设置对照组和龙胆苦甘组(10,20,40μmol/l)，龙胆苦甘组按照药物浓度加入药物，对照组加入不含药物的培养基，每个分组设置有3个重复孔；
[0026]
培养24h后，每孔中加入10μl cck-8工作液，孵育后，使用酶标仪检测450nm吸光值。
[0027]
实施例2：龙胆苦甘对于血管紧张素ii导致的细胞衰老的影响
[0028]
将huvec细胞接种于6孔板中，按照如下实验分组处理细胞；
[0029]
实验分组：
[0030]
对照组：使用含10％血清的培养液培养，不添加药物；
[0031]
血管紧张素ii组：添加10-6
mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0032]
龙胆苦苷组：添加20μmol/l 1h后，加入10-6
mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0033]
处理结束后，去除细胞培养液，使用pbs清洗细胞后，使用戊二醛固定细胞10min；
[0034]
pbs清洗3次后，吸除pbs，每孔加入1ml x-gal染液，37℃孵育12h后，各组在荧光显微镜下随机选取5个视野，计算阳性细胞的百分比。
[0035]
实施例3：龙胆苦甘对于血管紧张素ii导致的cav-1蛋白(小凹蛋白)上调的影响
[0036]
血管紧张素ii会导致cav-1蛋白表达升高，而cav-1蛋白的高表达会激活细胞衰老
信号导致细胞发生衰老，因此本发明对龙胆苦甘对于血管紧张素ii导致的cav-1蛋白上调的影响进行研究。
[0037]
对照组：使用含10％血清的培养液培养，不添加药物；
[0038]
血管紧张素ii组：添加10-6mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0039]
龙胆苦苷组：添加20μmol/l 1h后，加入10-6mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0040]
处理结束后，去除细胞培养液，使用pbs清洗细胞后，加入蛋白裂解液，提取蛋白样品；
[0041]
参照bca蛋白检测试剂盒检测各组蛋白样品的浓度；
[0042]
加入上样缓冲液后，沸水加热变性5min，置于-20℃备用；
[0043]
制备12％蛋白电泳胶，按照每孔20μg的上样量进行上样，蛋白样品经12％凝胶蛋白电泳胶电泳后，电转至pvdf膜上；
[0044]
使用含有5％脱脂奶粉的tbst室温下缓慢摇动封闭pvdf膜1h；
[0045]
使用cav-1一抗和gapdh一抗在4℃孵育过夜；
[0046]
tbst洗涤后，使用二抗在室温下孵育1h，洗膜后，使用化学发光液进行显色。
[0047]
实施例4：龙胆苦甘联合灵芝多糖对于血管紧张素ii导致的细胞衰老的影响
[0048]
对照组：使用含10％血清的培养液培养，不添加药物；
[0049]
血管紧张素ii组：添加10-6mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0050]
龙胆苦苷组：添加20μmol/l 1h后，加入10-6
mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0051]
灵芝多糖组：添加100mg/l 1h后，加入10-6
mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0052]
龙胆苦甘联合灵芝多糖组：添加20μmol/l龙胆苦甘+100mg/l灵芝多糖1h后，加入10-6mol/l血管紧张素ii，处理24h后更换一次，共处理48h；
[0053]
处理结束后，去除细胞培养液，使用pbs清洗细胞后，使用戊二醛固定细胞10min；
[0054]
pbs清洗3次后，吸除pbs，每孔加入1ml x-gal染液，37℃孵育12h后，各组在荧光显微镜下随机选取5个视野，计算阳性细胞的百分比。
[0055]
实施例1的实验结果如表1：
[0056]
表1龙胆苦甘对于huvec细胞活性的影响
[0057]
注释：*表示p＜0.05
[0058]
从表1可以看出，当龙胆苦苷的浓度为10和20μmol/l时，对于huvec细胞活性无明显影响，而当龙胆苦苷的浓度为40μmol/l时，对于huvec细胞活性产生了一定程度的抑制作
用，因此，本发明选择龙胆苦甘的浓度为20μmol/l来继续进行后续实验。
[0059]
实施例2的实验结果如表2：
[0060]
表2龙胆苦甘对于血管紧张素ii导致的细胞衰老的影响
[0061]
注释：***表示p＜0.001，表示p＜0.001
[0062]
从表2可以看出，对照组基本没有细胞发生衰老，而血管紧张素ii组，阳性细胞的比例显著升高，而相较于血管紧张素ii组，龙胆苦甘组阳性细胞的比例出现一定程度的下降。说明龙胆苦甘可以一定程度降低血管紧张素ii导致的huvec细胞衰老。
[0063]
实施例3的结果如图1所示：
[0064]
从图1中可以看出，血管紧张素ii组的cav-1的蛋白表达升高，而龙胆苦甘组相较于血管紧张素ii组，cav-1的蛋白表达呈现一定程度下降，但是仍然高于对照组，与实施例2的结果一致，说明龙胆苦甘可以一定程度的降低血管紧张素ii导致的cav-1蛋白表达升高。
[0065]
实施例4的结果如表3：
[0066]
注释：***表示p＜0.001，表示p＜0.01，表示p＜0.001
[0067]
从表3中可以看出，相较于单独的龙胆苦甘组和灵芝多糖组，两种药物的联合可以有效的产生协同的效果，从而大幅的降低血管紧张素ii所导致的血管内皮细胞衰老。

技术特征：
1.一种延缓血管衰老的药物，其特征在于，所述药物为液体药物，所述药物包括龙胆苦甘，灵芝多糖和药学上可接受的载体。2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l，所述药物中灵芝多糖的浓度为100mg/l。3.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物用于血管紧张素ii所引起的内皮细胞衰老。4.一种降低血管内皮细胞衰老的药物，其特征在于，所述药物为液体药物，所述药物包括龙胆苦甘，灵芝多糖和药学上可接受的载体。5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述药物中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l，所述药物中灵芝多糖的浓度为100mg/l。6.一种降低血管内皮细胞衰老的培养基，其特征在于，所述培养基中含有龙胆苦苷和灵芝多糖。7.根据权利要求6所述的培养基，其特征在于，所述培养基中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l，所述培养基中灵芝多糖的浓度为100mg/l。8.龙胆苦甘在制备延缓血管衰老药物中的应用。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物为液体药物，所述药物中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l。10.龙胆苦苷在制备降低血管内皮细胞衰老的培养基中的应用，其特征在于，所述培养基中龙胆苦甘的浓度为20μmol/l。

技术总结
本发明提供了一种延缓血管衰老的药物，属于心脑血管技术领域。本发明发现使用龙胆苦苷可以一定程度的降低血管紧张素II导致的血管内皮细胞衰老，因此可以将其用于制备延缓血管衰老的药物。其次，本发明发现龙胆苦苷和灵芝多糖联用可以产生协同作用，从而可以大幅降低血管紧张素II导致的血管内皮细胞衰老，高效的延缓血管衰老。延缓血管衰老。延缓血管衰老。


技术研发人员：范广慈 李宁
受保护的技术使用者：青岛市中医医院(青岛市海慈医院、青岛市康复医学研究所)
技术研发日：2023.03.23
技术公布日：2023/7/12