一种化妆品中卡那霉素的检测方法与流程

1.本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种化妆品中卡那霉素的检测方法。


背景技术：

2.抗生素是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质，主要用于杀灭细菌。卡那霉素是一种治疗敏感肠杆菌科细菌感染的氨基糖苷类抗生素，如果在环境中存在较多或者生活中经常接触，环境中和人体内的细菌可对其产生耐药性，这将使针对人体内该耐药菌感染的治疗比较困难。
3.化妆品卫生规范中明确规定严禁在化妆品中添加抗生素，但经罗晓燕等，化妆品中抗生素和防腐剂含量的研究[j]，环境与健康杂志.2007,24(6)中的调查发现，市售化妆品中添加抗生素的情况较严重，存在多种抗生素混合添加的情况，个别样品的抗生素含量较高。由于其只涉及到较便宜的土霉素、四环素金霉素、氯霉素的检测，对其他抗生素，特别是卡那霉素的检测方法目前还未有涉及。《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章2.35抗感染类药物的检测方法也未涉及卡那霉素，导致化妆品中卡那霉素的监测处于空白状态，使化妆品消费存在安全隐患。


技术实现要素：

[0004]
为解决上述问题，本发明提供了一种化妆品中卡那霉素的检测方法，它是采用超高液相色谱-三重四极杆质谱联用仪检测，包括以下步骤：
[0005]
(1)制备对照品溶液：取卡那霉素对照品，加水溶解，溶解液加三氟醋酸水溶液和水稀释，作为对照品溶液；
[0006]
(2)制备供试品溶液：取待测化妆品，分别加三氟醋酸水溶液和正己烷混匀，离心，取下层溶液作为供试品溶液；
[0007]
(3)分别将对照品溶液和供试品溶液注入液质联用仪检测：
[0008]
色谱条件如下：
[0009]
色谱柱：c18色谱柱；
[0010]
流动相：流动相a为0.1％三氟醋酸水溶液，流动相b为乙腈；
[0011]
梯度洗脱条件为：
[0012]
0～5min，5％乙腈；5～5.01min，5％～50％乙腈；5.1～5.9min，50％乙腈；5.9～6min，50％～5％乙腈；6～10min，5％乙腈；
[0013]
质谱条件如下：离子源：esi+；检测方式：mrm；
[0014]
(4)定性定量分析。
[0015]
进一步地，步骤(1)所述卡那霉素对照品每10mg加25～100ml水溶解；所述溶解液加三氟醋酸水溶液稀释至20～2000ng/ml，再加水稀释至10～1000ng/ml。
[0016]
进一步地，步骤(2)所述待测化妆品、三氟醋酸水溶液和正己烷的体积比为1：1：1。
[0017]
更进一步地，所述三氟醋酸水溶液的浓度为5％，ml/ml。
[0018]
进一步地，步骤(2)所述混匀是涡旋混匀；所述离心的转速为8000转/分钟，时间5分钟。
[0019]
进一步地，所述色谱条件中，色谱柱为ace excel 3c18-ar，4.6mm
×
150mm，3μm。
[0020]
进一步地，所述色谱条件中，柱温30℃，流速0.5ml/min，进样体积5μl。
[0021]
进一步地，所述质谱条件中，毛细管电压为3.00kv，离子源温度150℃，脱溶剂气温度550℃，脱溶剂气流速700l/hr，锥孔气流150l/hr，碰撞气流速0.15ml/min，脱溶剂气：氮气，碰撞气：氩气，尾吹气流速7.0bar。
[0022]
更进一步地，所述质谱条件中，定量监测离子对485.14》163.00，锥孔电压30.0v，碰撞能量22.0ev；定性监测离子对1：485.14》324.14，锥孔电压30.0v，碰撞能量16.0ev；定性监测离子对2：485.14》205.06，锥孔电压30.0v，碰撞能量26.0ev。
[0023]
进一步地，所述定性定量分析的方法为：通过定性监测离子对1、2进行定性；采用外标法以定量离子对峰面积进行定量计算。
[0024]
进一步地，所述外标法包括基质匹配标准曲线法。
[0025]
进一步地，所述化妆品包括液态水基类、膏霜乳液类化妆品。
[0026]
本发明一种化妆品中卡那霉素的检测方法，通过特定的色谱质谱条件，使卡那霉素与化妆品中其他成分在色谱图中有效分离，避免了化妆品中复杂成分的干扰，最终实现了卡那霉素的有效监测。本发明方法准确性高、灵敏度强，稳定性好，可用于化妆品中卡那霉素的检测，保障了化妆品的使用安全，具备实际推广应用价值。
[0027]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0028]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
[0029]
图1卡那霉素标准色谱图(50ng/ml)
[0030]
图2卡那霉素全质谱扫描图
[0031]
图3空白溶液色谱图
[0032]
图4阴性供试品色谱图
[0033]
图5检出限色谱图(2ng/ml)
[0034]
图6定量下限色谱图(5ng/ml)
具体实施方式
[0035]
本发明具体实施方式中使用的试剂、试药、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0036]
实施例1本发明化妆品中卡那霉素定性定量检测
[0037]
(1)制备对照品溶液：精密称取卡那霉素对照品10mg，置50ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加5％三氟醋酸水溶液稀释至刻度，摇
匀，即得浓度为10μg/ml贮备溶液；
[0038]
精密量取贮备溶液20、50、100、200、500、1000、2000μl，分别置10ml量瓶中，加5％三氟醋酸水溶液稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取各500μl与水500μl，混匀，作为系列浓度的对照品溶液。
[0039]
(2)制备供试品溶液：精密量取待测膏霜乳液类化妆品500μl，置2ml离心管中，精密加入5％三氟醋酸水溶液500μl，涡旋30秒，再精密加入正己烷500μl，涡旋30秒，以8000转/分钟，离心5分钟，取下层液过0.22μm微孔滤膜，作为供试品溶液；
[0040]
(3)分别将对照品溶液和供试品溶液注入液质联用仪检测：
[0041]
色谱条件如下：
[0042]
色谱柱：ace excel 3c18-ar，4.6mm
×
150mm，3μm；
[0043]
流动相：流动相a为0.1％三氟醋酸水溶液，流动相b为乙腈；
[0044]
梯度洗脱条件为：
[0045]
0～5min，5％乙腈；5～5.01min，5％～50％乙腈；5.1～5.9min，50％乙腈；5.9～6min，50％～5％乙腈；6～10min，5％乙腈；
[0046]
柱温30℃，流速0.5ml/min，进样体积5μl；
[0047]
质谱条件如下：离子源：esi+；检测方式：mrm；毛细管电压为3.00kv，离子源温度150℃，脱溶剂气温度550℃，脱溶剂气流速700l/hr，锥孔气流150l/hr，碰撞气流速0.15ml/min，脱溶剂气：氮气，碰撞气：氩气，尾吹气流速7.0bar；定量监测离子对485.14》163.00，锥孔电压30.0v，碰撞能量22.0ev；定性监测离子对1：485.14》324.14，锥孔电压30.0v，碰撞能量16.0ev；定性监测离子对2：485.14》205.06，锥孔电压30.0v，碰撞能量26.0ev；
[0048]
(4)定性定量：通过定性监测离子对1、2进行定性；通过定量离子对峰面积外标法进行定量。
[0049]
实施例2本发明化妆品中卡那霉素定性定量检测
[0050]
(1)制备基质匹配标准曲线溶液：精密称取卡那霉素对照品10mg，置50ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加5％三氟醋酸水溶液稀释至刻度，摇匀，即得浓度为10μg/ml贮备溶液；
[0051]
精密量取贮备溶液20、50、100、200、500、1000、2000μl，分别置10ml量瓶中，加5％三氟醋酸水溶液稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取各500μl与水500μl，混匀，作为系列浓度的对照品溶液；
[0052]
取卡那霉素阴性的液态水基类化妆品500μl，分别加系列浓度的对照品溶液500μl，涡旋30秒，再精密加入正己烷500μl，涡旋30秒，以8000转/分钟，离心5分钟，取下层液过0.22μm微孔滤膜，作为基质匹配标准曲线溶液；
[0053]
(2)制备供试品溶液：精密量取待测液态水基类化妆品500μl，置2ml离心管中，精密加入5％三氟醋酸水溶液500μl，涡旋30秒，再精密加入正己烷500μl，涡旋30秒，以8000转/分钟，离心5分钟，取下层液过0.22μm微孔滤膜，作为供试品溶液；
[0054]
(3)分别将基质匹配标准曲线溶液和供试品溶液注入液质联用仪检测：
[0055]
色谱条件如下：
[0056]
色谱柱：ace excel 3c18-ar，4.6mm
×
150mm，3μm；
[0057]
流动相：流动相a为0.1％三氟醋酸水溶液，流动相b为乙腈；
[0058]
梯度洗脱条件为：
[0059]
0～5min，5％乙腈；5～5.01min，5％～50％乙腈；5.1～5.9min，50％乙腈；5.9～6min，50％～5％乙腈；6～10min，5％乙腈；
[0060]
柱温30℃，流速0.5ml/min，进样体积5μl；
[0061]
质谱条件如下：离子源：esi+；检测方式：mrm；毛细管电压为3.00kv，离子源温度150℃，脱溶剂气温度550℃，脱溶剂气流速700l/hr，锥孔气流150l/hr，碰撞气流速0.15ml/min，脱溶剂气：氮气，碰撞气：氩气，尾吹气流速7.0bar；定量监测离子对485.14》163.00，锥孔电压30.0v，碰撞能量22.0ev；定性监测离子对1：485.14》324.14，锥孔电压30.0v，碰撞能量16.0ev；定性监测离子对2：485.14》205.06，锥孔电压30.0v，碰撞能量26.0ev；
[0062]
(4)定性定量：通过定性监测离子对1、2进行定性；以基质匹配标准曲线溶液中卡那霉素浓度为横坐标，卡那霉素定量离子峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程。根据线性回归方程计算待测化妆品中卡那霉素的含量。
[0063]
以下通过实验例来说明本发明的有益效果：
[0064]
试验例1化妆品中卡那霉素测定的方法学研究
[0065]
1、测定条件
[0066]
[0067][0068]
[0069]
2、方法和结果
[0070]
2.1专属性
[0071]
溶剂空白、阴性供试品均未检出卡那霉素，空白无干扰。卡那霉素特征离子峰(485.14》163.00、485.14》324.14、485.14》205.06)保留时间为4.26
±
0.11min(
±
2.5％)，定性离子对(485.14》324.14)相对定量离子对(485.14》163.00)的丰度比为0.44
±
0.11(
±
25％)。具体见图1～4。
[0072]
2.2溶液标准曲线
[0073]
以系列溶液标准曲线进样，在10～1000ng/ml范围内，线性良好，线性回归方程y＝310.598x-173.631(权重系数1/x)，相关系数r＝0.9971。
[0074]
2.3检出限(lod)与定量下限(loq)
[0075]
以2ng/ml为检出限(lod，s/n＝115)，以5ng/ml为定量下限(loq，s/n＝171)，按取样量500μl计算，检出浓度为4ng/ml，最低定量浓度为10ng/ml。具体见图5～6。
[0076]
2.4精密度
[0077]
取溶液标准曲线std3溶液(50ng/ml)，连续进样6针，峰面积的相对平均偏差≤1.5％(n＝6)，精密称良好。
[0078]
表1精密度结果表
[0079]
编号1#2#3#4#5#6#meansdrsd峰面积127041255412576126191258812972126691571.2％
[0080]
2.5基质标准曲线
[0081]
以系列基质标准曲线溶液进样，在10～1000ng/ml范围内，线性良好，线性回归方程y＝282.828x-581.149(权重系数1/x)，相关系数r＝0.9986。
[0082]
2.6重复性
[0083]
取重复性供试品(加样水平100ng/ml)进样，计算浓度的相对平均偏差，结果≤1.5％(n＝6)，重复性良好。
[0084]
表2重复性结果(浓度单位ng/ml)
[0085][0086][0087]
2.7绝对回收率
[0088]
取回收率供试品进样，以溶液标准曲线计算低、中、高三个水平(加样水平25ng/ml、100ng/ml、500ng/ml)的加样回收率(n＝3)为84％～95％，平均回收率为90％。
[0089]
表3绝对回收率结果(浓度单位ng/ml)
[0090][0091]
2.8相对回收率
[0092]
取回收率供试品进样，以基质标准曲线计算低、中、高三个水平(加样水平25ng/ml、100ng/ml、500ng/ml)的加样回收率(n＝3)为101％～108％，平均回收率为104％。
[0093]
表4绝对回收率结果(浓度单位ng/ml)
[0094][0095]
2.9.基质效应本方法的基质效应me＝(基质标准曲线的斜率
÷
溶液标准曲线的斜率-1)
×
100％＝-9％，为基质抑制效应。
[0096]
2.10样品测定结果
[0097]
本方法的基质效应me≤
±
30％，基质效应不明显。为了消除基质效应的影响，提高分析结果的准确性，可采用基质匹配标准曲线法计算供试品中卡那霉素的含量。

技术特征：
1.一种化妆品中卡那霉素的检测方法，其特征在于：它是采用超高液相色谱-三重四极杆质谱联用仪检测，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液：取卡那霉素对照品，加水溶解，溶解液加三氟醋酸水溶液和水稀释，作为对照品溶液；(2)制备供试品溶液：取待测化妆品，加三氟醋酸水溶液和正己烷混匀，离心，取下层溶液作为供试品溶液；(3)分别将对照品溶液和供试品溶液注入液质联用仪检测：色谱条件如下：色谱柱：c18色谱柱；流动相：流动相a为0.1％三氟醋酸水溶液，流动相b为乙腈；梯度洗脱条件为：0～5min，5％乙腈；5～5.01min，5％～50％乙腈；5.1～5.9min，50％乙腈；5.9～6min，50％～5％乙腈；6～10min，5％乙腈；质谱条件如下：离子源：esi+；检测方式：mrm；(4)定性定量分析。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)所述卡那霉素对照品每10mg加25～100ml水溶解；所述溶解液加三氟醋酸水溶液稀释至20～2000ng/ml，再加水稀释至10～1000ng/ml。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述待测化妆品、三氟醋酸水溶液和正己烷的体积比为1：1：1。4.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于：所述三氟醋酸水溶液的浓度为5％，ml/ml。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述混匀是涡旋混匀；所述离心的转速为8000转/分钟，时间5分钟。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，色谱柱为ace excel 3c18-ar，4.6mm
×
150mm，3μm，柱温30℃，流速0.5ml/min，进样体积5μl。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述质谱条件中，毛细管电压为3.00kv，离子源温度150℃，脱溶剂气温度550℃，脱溶剂气流速700l/hr，锥孔气流150l/hr，碰撞气流速0.15ml/min，脱溶剂气：氮气，碰撞气：氩气，尾吹气流速7.0bar。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述质谱条件中，定量监测离子对485.14>163.00，锥孔电压30.0v，碰撞能量22.0ev；定性监测离子对1：485.14>324.14，锥孔电压30.0v，碰撞能量22.0ev；定性监测离子对2：485.14>205.06，锥孔电压30.0v，碰撞能量26.0ev。9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述定性定量分析的方法为：通过定性监测离子对1、2进行定性；采用外标法以定量离子对峰面积进行定量计算；所述外标法包括基质匹配标准曲线法。10.根据权利要求1～8任一项所述的检测方法，其特征在于：所述化妆品包括液态水基类、膏霜乳液类化妆品。

技术总结
本发明一种化妆品中卡那霉素的检测方法，它是采用超高液相色谱-三重四极杆质谱联用仪检测，包括以下步骤：(1)制备对照品溶液；(2)制备供试品溶液：取待测化妆品，加三氟醋酸水溶液和正己烷混匀，离心，取下层溶液作为供试品溶液；(3)分别将对照品溶液和供试品溶液注入液质联用仪检测。本发明通过特定的色谱质谱条件，使卡那霉素与化妆品中其他成分在色谱图中有效分离，避免了化妆品中复杂成分的干扰，最终实现了卡那霉素的有效监测。本发明方法准确性高、灵敏度强，稳定性好，可用于化妆品中卡那霉素的检测，保障了化妆品的使用安全，具备实际推广应用价值。际推广应用价值。际推广应用价值。


技术研发人员：杨梅 李欣 曹俊涵 张蓉琴 陈红 谢莉 粟立
受保护的技术使用者：成都市药品检验研究院
技术研发日：2023.03.15
技术公布日：2023/7/12