一种N-烷基酰胺类化合物制备方法及其在抗炎药物中的应用

一种n-烷基酰胺类化合物制备方法及其在抗炎药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及一种n-烷基酰胺类化合物制备方法及其在抗炎药物中的应用，属于药物技术领域。


背景技术：

2.炎症（inflammation）是具有血管系统的活体组织对各种损伤因子的刺激所产生的防御反应，典型的反应是出现红、肿、热、痛等临床症状，是机体对内外环境中有害刺激所产生的一种复杂的生理和病理反应。炎症就像机体的一把双刃剑，适当的炎症反应会帮助机体清除损伤，抵御外来感染，促进伤口愈合；而过度的炎症反应则会反过来促使多种炎症疾病的发生和发展，影响人们的健康。炎症反应是一种保护性防御反应，又是引起人类多种重大疾病的共同通路，参与人体感染、肿瘤、心脑血管病、老年痴呆和神经退行性疾病、变态反应疾病、精神病等许多重大疾病的发生和发展过程。临床上，抗炎药物是仅次于抗感染药物的第二大类药物。现有的合成化学抗炎药包括非甾体抗炎药（non-steroid anti-inflammatory drugs，nsaids）和甾体抗炎药 （steroid anti-inf lammatory drugs，saids，）具有明显的不良反应，而中草药和各种天然产物中含有大量的各种活性成分，其结构类型独特多样，是抗炎新药研究的宝贵资源。中草药因其资源丰富、疗效确切、多靶点、副作用小等优点，从天然药物中开发新型抗炎药物逐渐成为研究热点。
3.n
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烷基酰胺类化合物是一类广泛分布在微生物、动物和植物中的重要天然产物，多为一端较长不饱和酸和另一端有较少取代基的胺构成的酰胺结构。在植物中存在于马兜铃科、菊科、十字花科、旋花科、大戟科、防己科、胡椒科、禾本科、芸香科和茄科等。n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物具有简单的碳骨架结构，但显示了丰富的结构多样性和生理活性的多样性，如抗炎、免疫调节、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、杀虫和抗氧化等多种药理活性。近年来，由于显著的药理作用和易于进行结构修饰的特性，对植物衍生的n-烷基酰胺类化合物的兴趣急剧增长，受到了药学工作者的青睐。
4.木姜子属植物litsea lam，是我国樟科中种类较多、分布较广的属之一。全世界约200-400余种，我国约有72种，分布较广，主产南方和西南温暖地区。木姜子属植物有多种可入药，多数植物的果实和枝叶都有祛风行气、止痛的功效。近年来，该属植物显著的生理活性引起了国内外学者的关注，新结构骨架和生物活性显著的分子不断被发现。在众多的木姜子属植物中，山鸡椒litsea cubeba是传统药用于治疗各种病症包括抗炎的重要木姜子属药用植物，自古是药食同源的重要植物。它的根、茎、叶和果实均可入药，以干燥果实入药最为常见。果实味辛性温，能温中散寒、行气止痛、解毒消肿、燥湿健脾消食，常用于胃寒呕逆、脘腹冷痛、寒疝腹痛、寒湿郁滞、食滞饱胀、疮疡肿痛等病症。此外还广泛应用于日用、食用、化工和绿化等领域。其花叶和果实可提取柠檬醛，可作为医药制品、食用香精和化妆香精的原料。山鸡椒含有精油、生物碱、黄酮、萜类、木脂素、酰胺类等化学成分，其中酰胺是其重要的活性成分，也是该种植物的药效物质基础之一。山鸡椒具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、神经保护活性等多种生理活性，显示了其药学潜力。因此，从天然产物中发现抗炎抑制剂，找
寻高活性、低毒性的活性化合物，研发针对多个信号通路或靶标的多靶点抗炎化合物具有重大意义。


技术实现要素：

5.针对现有技术中抗炎药物的毒副作用问题，提供一种n-烷基酰胺类化合物和制备方法及其在抗炎药物中的应用，n-烷基酰胺类化合物cubebamide从山鸡椒litsea cubeba中提取分离，能显著抑制lps诱导的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮（no）生成，其ic
50
为 18.45 μm，可用于制备抗炎药物组合物。
6.一种n-烷基酰胺类化合物，具有以下化学结构式
7.一种抗炎药物组合物，含有药用载体和/或赋形剂，以及所述n
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烷基酰胺类化合物。所述抗炎药物组合物的剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂或乳剂。
8.所述n
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烷基酰胺类化合物的提取方法，具体步骤如下：1、采用乙醇渗漉提取山鸡椒litsea cubeba枝叶干粉得到提取液，减压浓缩得到粗浸膏；2、将步骤1的粗浸膏混悬于水中得到混悬液，采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相，石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏，再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；3、将步骤2乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析，依次采用石油醚/乙酸乙酯混合液体系进行梯度洗脱，根据薄层色谱法检识合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d、e；4、将步骤3中b组分进行柱层析, 采用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，根据薄层色谱法检识合并相同流份，得到3个组分即a、b、c;5、将步骤4中b组分采用sephadex lh-20凝胶柱层析洗脱，根据薄层色谱法检识合并相同流份，纯化得到n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物cubebamide；6、根据权利要求1所述n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于：步骤3梯度洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为4:1、2:1、1:1、1:4和0:1，b组分为石油醚与乙酸乙酯的体积比2:1的洗脱部分；7、根据权利要求1所述n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于：步骤4柱层析洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚/乙酸乙酯的体积比为4:1；8、根据权利要求1所述n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于：步骤5凝胶柱层析洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷/甲醇体积比为1:1。其中凝胶柱的直径为3cm，长度为150cm，sephadex lh-20凝胶干重为100g。
9.进一步地，所述n
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烷基酰胺类cubebamide在山鸡椒提取物中的质量百分含量为0.01
‰
；药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒，并且为惰性；药用载体为固体稀释剂、半固体稀释剂、液体稀释剂、填料、药物制品辅剂的一种或多种；药物组合物以单位体重服用量的形式使用；药物可经口服、注射(静注、肌注)、或皮肤给药。
10.本发明的有益效果：(1) 本发明n-烷基酰胺类cubebamide对lps诱导的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成具有抑制活性，ic
50 值为18.45 μm。n
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烷基酰胺类cubebamide与药用载体和/或赋形剂可制成抗炎药物组合物；(2) 本发明n-烷基酰胺类cubebamide来自于可以食用的天然植物成分，其制成的抗炎药物组合物无毒或低毒。
实施方式
11.下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。
12.实施例1：n
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烷基酰胺类化合物的提取方法，具体步骤如下：1、采用乙醇渗漉提取山鸡椒litsea cubeba枝叶干粉得到提取液，减压浓缩得到粗浸膏；2、将步骤1的粗浸膏混悬于水中得到混悬液，采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相，石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏，再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；3、将步骤2乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析，依次采用石油醚/乙酸乙酯混合液体系进行梯度洗脱，根据薄层色谱法检识合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d、e；4、将步骤3中b组分进行柱层析, 采用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，根据薄层色谱法检识合并相同流份，得到3个组分即a、b、c；5、将步骤4中b组分采用sephadex lh-20凝胶柱层析洗脱，根据薄层色谱法检识合并相同流份，纯化得到n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物cubebamide；6、根据权利要求1所述n
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烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于：步骤3梯度洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为4:1、2:1、1:1、1:4和0:1，b组分为石油醚与乙酸乙酯的体积比2:1的洗脱部分；7、根据权利要求1所述n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于：步骤4柱层析洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中的石油醚/乙酸乙酯的体积比为4:1；8、根据权利要求1所述n
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烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于：步骤5凝胶柱层析洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷/甲醇体积比为1:1；本实施例的n
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烷基酰胺类化合物，具有以下化学结构式:
，命名为cubebamide。
13.本实施例n
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烷基酰胺类化合物的1h-nmr数据(400mhz) ( d in ppm, j in hz)和
13
c nmr数据( d in ppm, j in hz)见表1.表1 n
ꢀ‑
烷基酰胺类化合物的1h-nmr数据和
13
c nmr数据（cd3od）
14.n-烷基酰胺类cubebamide为白色固体，分子式为c
21h25
no6，高分辨质谱hresims m/
z 410.1570 [m+na]+(calcd 410.1574)。
[0015]
实施例2：实施例1的n-烷基酰胺类cubebamide的体外抗炎活性实验；一氧化氮（no）具有重要的生物学调控功能，在炎症、肿瘤及心血管系统等均有重要作用。当免疫细胞遭受微生物内毒素、炎症介质等刺激时，会生成大量的诱导型一氧化氮合成酶（induced no synthase，inos），产生no进行免疫应答，因此抑制no生成是化合物抗炎活性的直接指标。将小鼠单核巨噬细胞raw264.7用lps脂多糖诱导一氧化氮合成酶的生成，同时加入待测化合物处理，吸取培养基通过griess法在570nm波长测吸光值来检测亚硝酸盐(no
2-)。将raw264.7细胞接种至96孔板，用1μg/ml lps进行诱导刺激，同时加入待测化合物（终浓度50μm）处理，设置不含药物组和l-nmma阳性药物组做对照。细胞过夜培养后取培养基检测no生成，在570 nm处测定吸光值。在剩余培养基中加入mts进行细胞存活率检测，排除化合物对细胞的毒性影响；no生成抑制率（%）=（非药物处理组od
570 nm-样品组od
570 nm
）/非药物处理组od
570 nm
×ꢀ
100%抑制活性测试结果为：ic
50 值为18.45 μm；通过活性测试试验，可以看出n
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烷基酰胺类cubebamide显示了抗炎活性，因此，n
ꢀ‑
烷基酰胺类cubebamide可用于制备抗炎药物，可与其他药物制成抗炎药物组合物；以n-烷基酰胺类cubebamide为原料，加入药用载体和/或赋形剂即可得到含n
ꢀ‑
烷基酰胺类cubebamide的药物组合物；本发明n-烷基酰胺类cubebamide来自于可以食用的天然植物成分，其制成的抗炎药物组合物无毒或低毒；药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒，并且为惰性；药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒，并且为惰性；药用载体为固体稀释剂、半固体稀释剂、液体稀释剂、填料、药物制品辅剂的一种或多种；药物组合物以单位体重服用量的形式使用；药物可经注射(静注、肌注)、口服或皮肤给药。
[0016]
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种n-烷基酰胺类化合物的提取方法，其特征在于，n-烷基酰胺类化合物具有以下化学结构式，命名为cubebamide；所述提取方法的具体步骤如下：（1）采用乙醇渗漉提取山鸡椒litsea cubeba枝叶干粉得到提取液，减压浓缩得到粗浸膏；（2）将步骤（1）的粗浸膏混悬于水中得到混悬液，采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相，石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏，再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；（3）将步骤（2）乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析，依次采用石油醚/乙酸乙酯混合液体系进行梯度洗脱，根据薄层色谱法检识合并相似流份得到5个组分即a、b、c、d、e；其中梯度洗脱用石油醚/乙酸乙酯合液中的石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为4:1、2:1、1:1、1:4和0:1，b组分为石油醚与乙酸乙酯的体积比2:1的洗脱部分；（4）步骤（3）中b组分进行柱层析, 采用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，根据薄层色谱法检识合并相同流份，得到3个组分即a、b、c；其中洗脱用石油醚/乙酸乙酯混合液中石油醚与乙酸乙酯的体积比依次为2:1；（5）步骤（4）中b组分采用sephadex lh-20凝胶柱层析洗脱，根据薄层色谱法检识合并相同流份，纯化得到n-烷基酰胺类化合物cubebamide；其中凝胶柱层析洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷/甲醇体积比为1:1。2.一种抗炎药物组合物，其特征在于：含有药用载体和/或赋形剂，以及权利要求1所述提取方法所提取的n-烷基酰胺类化合物。3.权利要求2所述抗炎药物组合物的剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂或乳剂。

技术总结
本发明涉及一种N-烷基酰胺类化合物制备方法及其在抗炎药物中的应用。针对现有技术中抗炎药物的毒副作用问题，提供一种N-烷基酰胺类化合物和制备方法及其在抗炎药物中的应用，N-烷基酰胺类化合物cubebamide从山鸡椒Litsea cubeba中提取分离，能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成，可用于制备抗炎药物组合物。抗炎药物组合物。


技术研发人员：杨靖华 汪云松
受保护的技术使用者：云南大学
技术研发日：2023.04.10
技术公布日：2023/7/18