一种精华油组方及其制备方法与流程

1.本发明涉及护肤领域，具体涉及一种兼具抗氧化功效、抗皱及紧致肌肤功效的精华油及其制备方法


背景技术：

2.人体皮肤正常新陈代谢过程中细胞内的活性氧(ros)的产生和清除保持相对平衡，但是随着年龄的增长，ros清除能力减弱，导致ros的堆积；ros的堆积会加速人体蛋白质、核酸，脂质及其他分子被氧化而失活，令皮肤出现松弛、皱纹、色斑等衰老症状。
3.胶原蛋白是一个庞大的家族，种类繁多，结构高度复杂，从分子结构、超分子结构，再到组织分布和功能等，具有显著的多样性；它们存在于人体的各种组织中，如，皮肤、骨、角膜、肌腱、软骨、玻璃体、子宫壁、血管壁、基底膜、胎盘、内皮细胞等等。胶原蛋白主要分为五个类型，其中：i型胶原蛋白较多地存在于人体的皮肤、骨骼、血管等多种人体组织中。但是，随着年龄的增加以及其它很多因素均会造成人体组织各种营养组分的流失，而胶原蛋白的流失会导致支撑皮肤的胶原肽键和弹力网断裂，其螺旋网状结构随即被破坏，使皮肤组织被氧化、萎缩、塌陷，由此肌肤出现干燥、皱纹、松弛无弹性等衰老现等症状。
4.此外，人体皮肤中的弹性蛋白是一种让体内许多组织在拉伸和收缩后维持原有形状，并让皮肤在被挤压后恢复到本来形状的蛋白质。但是，随着年龄增长，皮肤中的弹性蛋白纤维会逐渐断裂、流失，而令皮肤产生皱纹且失去弹性。


技术实现要素：

5.本发明所要解决的技术问题是提供一种能够兼具活性氧(ros)清除能力、促i型胶原蛋白再生及促弹性蛋白再生功效的精华油组方。
6.本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种精华油组方，包括以下质量百分含量的各组份：榛果油：20～40％，仙人掌籽油：20～40％，gtcc：10～20％，葡萄籽油：5～20％，橄榄油：1～6％；山茶籽油：1％～4％；维生素e：0.1～2％；榆树提取物：0.001～0.5％；南瓜籽油：0.05～0.5％；木瓜籽油：0.05～0.5％，迷迭香精华油0.05～0.5％；各组分质量百分比之和为百分之百。
7.作为优选，各组份质量百分含量如下：榛果油：30％，仙人掌籽油：30％，gtcc：15.3％，葡萄籽油：17.6％，橄榄油：3％；山茶籽油：2.2％；维生素e：1％；榆树提取物：0.3％；南瓜籽油：0.2％；木瓜籽油：0.2％，迷迭香精华油0.2％。
8.作为优选，所述榆树提取物的提取方法如下：
9.将榆树的组织材料进行浸提，获得滤液后经过浓缩、干燥和粉碎，最终获得粉末状提取物。
10.作为优选，本发明所述的精华油组方可作为面部护理精油或可应用于制备面部护肤品中。
11.此外，本发明所述精华油还可应用它护肤品的制备中，例如：抗皱眼霜、身体乳等。
12.本发明还提供了一种利用上述精华油组方的精华油制备方法，具体包括步骤如下：
13.s1，将上述配方中的所有原料从冷库中取出，置于室温条件下，待所有原料温度升至室温；
14.s2，在制备容器中按比例加入榛果油、仙人掌籽油及葡萄籽油，用磁力搅拌棒搅拌30分钟；再依次按比例加入gtcc、橄榄油及山茶籽油，搅拌20分钟，然后静置30分钟；
15.s3，按比例顺次加入南瓜籽油、木瓜籽油及迷迭香精华油，搅拌20分钟，静置30分钟；
16.s4，按比例加入维生素e，搅拌10分钟，静置20分钟；
17.s5，按比例加入榆树提取物，搅拌30分钟，静置30分钟后置于4℃冷库储存。
18.具体地，本发明所述精华油中，各组分的主要成分及功效如下：
19.榛果油，来源：榛子核仁；萃取方法：冷压；成分：油酸(78-90％)、亚麻油酸(3-14％)、饱和脂肪酸(3-8％)、人体所需的多种氨基酸、各种微量元素如钙、磷、铁含量等；功效：(1)适合各种肤质，具有收敛、减缓皮肤出油速度、净化肌肤的作用；(2)具有很好的抗炎作用，有助于肌肤再生，防止皮肤老化；(3)能调和及绷紧皮肤，能帮助皮肤保持稳定和弹性；(4)拥有优异的保湿能力，能迅速渗透皮肤，防止水份流失；(5)能够强化微血管，具有对抗thread veins的作用。
20.仙人掌籽油，又称仙人掌果籽油，含有丰富的维生素e、甾醇以及大量必须的脂肪酸；功效：能够有效保护肌肤防止自由基的侵害；促进肌肤细胞的重组再生，修复胶原蛋白和弹性纤维；能有效防止皱纹过早形成，对抗肌肤老化；具有淡化细纹、色斑、粉刺、妊娠纹、颈纹、黑眼圈和眼袋等方面的作用。
21.gtcc，中文：辛酸/癸酸甘油三酯，是由辛酸/癸酸和甘油酯化而成的高纯度油脂；它是一种优秀的滋润油脂，具有良好的铺展性，使皮肤具有滑而不腻的感觉，容易被皮肤吸收；对化妆品的均匀细腻起到很好的作用，使皮肤润滑有光泽；可作为保湿因子的基料，化妆品的稳定剂，防冻剂，均质剂。
22.葡萄籽油，含有两种非常重要的元素，亚麻油酸和原花色素；亚麻油酸可以抵抗自由基，抗老化，帮助吸收维生素c和e，强化循环系统的弹性，降低紫外线的伤害，保护肌肤中的胶原蛋白，预防黑色素沉淀；原花色素有保护血管弹性，保护肌肤免于紫外线的荼毒，预防胶原纤维和弹性纤维的破坏，使肌肤保持应有的弹性及张力，避免皮肤下垂及皱纹产生。
23.橄榄油，由新鲜的油橄榄果实直接冷榨而成的，富含丰富的单不饱和脂肪酸、维生素a、维生素b、维生素d、维生素e、维生素k、胡萝卜素和叶绿素及抗氧化物等；具有促进细胞生长，加速伤口愈合，还有助于美化人的外表，减少皱纹的产生；实验表明,橄榄油含有的抗氧化剂可以消除体内自由基,对抗肌肤老化的作用。
24.山茶籽油，由山茶科植物油茶树的成熟种子经过压榨得到；茶油能抗紫外线，防止晒斑及减少皱纹，对黄褐斑、晒斑很有效果。经专家研究，山茶油中不饱和脂肪酸含量高达93％。不饱和脂肪酸，又叫美容酸，长期食用能使人的皮肤光滑、润泽。
25.维生素e，亦称维他命e，又名生育酚，是最主要的抗氧化剂之一，能加快皮肤的柔嫩与光泽，增进皮肤的弹性，对消除面部皱纹和色素沉着斑、延缓皮肤的衰老具有良好作用。
26.南瓜籽油，富含ω-6脂肪酸、植物甾醇、生育酚、维生素k、植物雌激素等营养；具有保湿、抗氧化、增进皮肤的弹性、抗皱纹、淡化色斑、延缓皮肤衰老的功效。
27.木瓜籽油，来源于木瓜果实的种子；富含脂肪酸、抗氧化剂、维生素a、c和e；具有减少皱纹、细纹，延缓肌肤衰老的功效。
28.迷迭香精华油；来源于植物迷迭香，迷迭香是一种公认的高抗氧化植物；提取得到的精油，具有紧实肌肤、抗皱的功效。
29.本发明同现有技术相比具有以下优点及效果：
30.1、本技术中，由榛子油、仙人掌籽油、gtcc、葡萄籽油及其它抗氧化组分经特定配比混合得到的精华油，在自由基清除试验中，具有协同增加的效果，经测试ros清除率最高达31％，抗氧化能力极其显著，可以有效避免皮肤过早老化、避免色斑形成、抗皱、减皱，并呈现提亮肤色、紧实肌肤、美白肌肤的功效。
31.2、本技术中，由榛子油、仙人掌籽油、gtcc、葡萄籽油及其它抗氧化组分经特定配比混合得到的精华油，经测试具有促进i型胶原蛋白再生的功效(参照：对斑马鱼col1a1a，col1a1b和col1a2基因表达的促进率分别为589％(p＝0.0000014)，152％(p＝0.000038)，594％(p＝0.000020))，将其应用于人体肌肤时能够避免由于胶原蛋白流失，而导致的肌肤干燥、皱纹、松弛无弹性等衰老现象，并达到修护肌肤，重建胶原蛋白层，改善皮肤的弹性、水分；美白肌肤、保湿抗衰的效果。
32.3、本技术中，由榛子油、仙人掌籽油、gtcc、葡萄籽油及其它抗氧化组分经特定配比混合得到的精华油，经测试具有促进弹性蛋白再生的功效(参照：对斑马鱼eln1基因表达的促进率为245％(p＝0.00075))，而弹性蛋白再生能够有效提高皮肤弹性，赋予肌肤紧致或光泽，预防或改善肌肤老化松弛，达到减皱、抗皱、紧致肌肤的功效。
33.4、综上，本发明所提供的精华油同时具有对人体肌肤中活性氧(ros)清除能力，促i型胶原蛋白再生及促弹性蛋白再生的能力；应用于人体肌肤时，具有显著的抗皱、紧致肌肤的功效。
附图说明
34.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
35.图1为本发明验证例一中测试方法流程图。
36.图2为本发明验证例一中，抗氧化测试结果荧光对比图；图2(a)为空白对照组-斑马鱼胚胎ros荧光标记图；图2(b)为阳性对照组-斑马鱼胚胎ros荧光标记图；图2(c)为受试物-配方2作用下，斑马鱼胚胎ros荧光标记图。
37.图3为本发明验证例二中，斑马鱼i型胶原蛋白基因相对表达量柱状图。
38.图4为本发明验证例三中，斑马鱼弹性蛋白基因相对表达量柱状图。
具体实施方式
39.下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而
本发明并不局限于以下实施例。
40.实施例1：一种精华油组方，含有如下质量百分含量的组份：榛果油：20～40％，仙人掌籽油：20～40％，gtcc：10～20％，葡萄籽油：5～20％，橄榄油：1～6％；山茶籽油：1％～4％；维生素e：0.1～2％；榆树提取物：0.001～0.5％；南瓜籽油：0.05～0.5％；木瓜籽油：0.05～0.5％，迷迭香精华油0.05～0.5％；各组分质量百分比之和为百分之百。
41.其中：榛果油、仙人掌籽油、葡萄籽油、橄榄油、山茶籽油、南瓜籽油以及木瓜籽油为相应果实的种子油；榆树提取物是从榆树植物组织中提取并制备得的粉末状物质；迷迭香精华油为油提物，从相应植物的根茎叶花中提取得到。
42.本实施例1所述的精华油组方，通过各组分按百分含量配比，按照精华油的工艺方法制备得到，具体步骤如下：
43.s1，将上述配方中的所有原料从冷库中取出，置于室温条件下5小时，待所有原料温度升至室温；
44.s2，在制备容器中按比例加入榛果油、仙人掌籽油及葡萄籽油，用磁力搅拌棒搅拌30分钟；再依次按比例加入gtcc、橄榄油及山茶籽油，搅拌20分钟，然后静置30分钟；
45.s3，按比例顺次加入南瓜籽油、木瓜籽油及迷迭香精华油，搅拌20分钟，静置30分钟；
46.s4，按比例加入维生素e，搅拌10分钟，静置20分钟；
47.s5，按比例加入榆树提取物，搅拌30分钟，静置30分钟后置于4℃冷库储存。
48.上述制备方法中，根据各组分性质不同及含量比例的不同，按照步骤s2至s5的添加顺序依次加入榛果油、仙人掌籽油、葡萄籽油、gtcc、橄榄油、山茶籽油、南瓜籽油、木瓜籽油、迷迭香精华油、维生素e以及榆树提取物，可以有效保证各组分能够充分融合，继而提高制备所得精华油的质量均匀性及性质稳定性。
49.具体地，本实施例所述精华油中，各组分质量百分含量设置如下：
50.配方1：榛果油：26％，仙人掌籽油：40％，gtcc：10％，葡萄籽油：17％，橄榄油：4％；山茶籽油：1.4％；维生素e：0.5％；榆树提取物：0.3％；南瓜籽油：0.4％；木瓜籽油：0.1％，迷迭香精华油0.3％。
51.配方2：榛果油：30％，仙人掌籽油：30％，gtcc：15.30％，葡萄籽油：17.6％，橄榄油：3％；山茶籽油：2.2％；维生素e：1％；榆树提取物：0.3％；南瓜籽油：0.2％；木瓜籽油：0.2％，迷迭香精华油0.2％。
52.配方3：榛果油：40％，仙人掌籽油：20％，gtcc：20％，葡萄籽油：14％，橄榄油：1％；山茶籽油：2.5％；维生素e：1.8％；榆树提取物：0.5％；南瓜籽油：0.1％；木瓜籽油：0.05％，迷迭香精华油0.05％。
53.配方4：榛果油：27％，仙人掌籽油：30％，gtcc：14.7％，葡萄籽油：16.5％，橄榄油：6％；山茶籽油：4％；维生素e：0.2％；榆树提取物：0.1％；南瓜籽油：0.5％；木瓜籽油：0.5％，迷迭香精华油0.5％。
54.配方5：榛果油：30％，仙人掌籽油：24％，gtcc：15.8％，葡萄籽油：20％，橄榄油：5％；山茶籽油：3％；维生素e：0.8％；榆树提取物：0.4％；南瓜籽油：0.5％；木瓜籽油：0.3％，迷迭香精华油0.2％。
55.本发明实施例配方1至5所述的精华油组方中，将组分限定为：榛果油、仙人掌籽
油、gtcc、葡萄籽油、橄榄油、山茶籽油、维生素e、榆树提取物、南瓜籽油、木瓜籽油和迷迭香精华油时，各抗衰老组合物相互之间协调作用明显，作为护肤精华油使用时，主要功效如下：
56.(1)清除人体活性氧自由基(ros)，抗氧化作用显著；应用于皮肤尤其是面部肌肤时，可以呈现抗衰老，抗皱，避免色斑形成；提亮肤色，美白肌肤的功效；
57.(2)能显著促进i型胶原蛋白再生效果，应用于皮肤尤其是面部肌肤时，可以呈现抗皱、紧致肌肤、增加皮肤弹性、水分，令皮肤变得膨润饱满，提升皮肤年轻度的功效；
58.(3)能够促进人体肌肤弹性蛋白再生的功效，呈现保持肌肤弹性、抗皱，紧实肌肤的功能。
59.以下本发明主要通过下述试验例验证上述功效
60.验证例一：ros清除率
61.测试项目：本技术实施例配方1至5所述精华油的抗氧化、抗衰老功效；检测参数：ros(活性氧自由基)清除率；
62.测试原理：人体皮肤正常新陈代谢过程中细胞内的活性氧(ros)的产生和清除保持相对平衡，但是随着年龄的增长，ros清除能力减弱，导致ros的堆积；ros的堆积会加速人体蛋白质、核酸，脂质及其他分子被氧化而失活，令皮肤出现松弛、皱纹、色斑等衰老症状。
63.斑马鱼体内的ros调控机制与人体相同，而且某些荧光探针，例如：h2dcfda，可通过活体染色监测斑马鱼胚胎中的ros。同时，斑马鱼胚胎个体小，方便于显微镜下拍照，并应用软件分析定量读取斑马鱼胚胎中随着ros增加而增强的绿色荧光信号，测试比较样品处理组及空白对照组的斑马鱼胚胎ros水平变化，计算ros清除率以评价本技术配方1至5所述精华油的抗氧化、抗衰老功效。
64.测试方法：将五组24尾48h大斑马鱼胚胎分别暴露于1g/l本技术配方1至5所述的精华油组方形成的样品溶液中，同时设置空白对照组，暴露24h后，对鱼胚胎进行h2dcfda染色，荧光拍照测量ros信号强度并进行统计分析；具体操作流程如图1所示。
65.测试实验：
66.(1)受试物准备
67.配方1至5中的原料
68.水溶性原料：可用鱼胚胎培养液直接将受试物溶解配制成测试溶液；
69.非水溶性原料：可选常用溶剂如甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶。如将受试物和有机溶剂按1：1(重量g：体积ml)混匀，超声处理10min，然后加入鱼胚胎培养液配制成所需浓度，震荡30s后于6500
×
g离心10min。取上清液进行测试。
70.化妆品产品(阳性对照)
71.水溶性产品：可用鱼胚胎培养液直接将受试物溶解配制成测试溶液。
72.非水溶性产品：可选常用溶剂如甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶。如将受试物和有机溶剂按1：1(重量g：体积ml)混匀，超声处理10min，然后加入鱼胚胎培养液配制成所需浓度，震荡30s后于6500
×
g离心10min。取上清液进行测试。
73.注意事项
74.受试物测试溶液浓度需保证对斑马鱼胚胎的死亡率≤10％(没有心跳特征的胚胎界定为死亡)；测试时可根据需要设置多个浓度组；本试验中，筛选得到最佳受试物浓度为
1g/l；
75.(2)测试步骤
76.以下测试步骤是96-孔板测试指引。测试流程可参考图1。如应用更大的测试容器(如培养皿)，测试指引需做相应调整。
77.首先，在显微镜下，挑选健康的受精后3天大的斑马鱼胚胎；
78.其次，进行测试分组：
79.设置空白对照组(鱼胚胎培养液)；随机挑选24尾鱼胚胎，转移至96-孔板中，每孔含一尾鱼胚胎和0.2ml鱼胚胎培养液。
80.阳性对照组(烟酰胺工作液)；随机挑选24尾鱼胚胎，转移至96-孔板中，每孔含一尾鱼胚胎和0.2ml烟酰胺工作液；
81.受试物组(受试物；配方1至5中的精华油)；随机挑选5组24尾鱼胚胎，分别转移至96-孔板中，每孔含一尾鱼胚胎和0.2ml相应的受试物溶液；
82.将上述加样分组的96-孔板放置于28
±
1℃的恒温箱中培养至受精后72
±
1h。转移至24-孔板中，每孔含12尾鱼胚胎和2ml活性氧(ros)测试液，再放置于28
±
1℃的恒温箱中2
±
1h；
83.最后，进行样本分析的显微分析及数据处理计算；
84.将鱼胚胎侧身摆放。于荧光立体显微镜下对鱼胚胎按统一的拍照参数进行拍照。用分析软件如image j打开照片，对每尾鱼胚胎的卵黄区域进行标记，然后选择“测量”栏里的“测量平均强度”，选取测试结果中的“平均信号强度”作为ros信号强度，计算活性氧清除率，如表1所示；上述测试方法中，各测试组暴露完成后至少90％鱼胚胎存活，否则对应测试组结果无效。
85.表1
[0086][0087][0088]
抗氧化测试结果荧光对比图，如图2所示；其中：图2(a)为空白对照组-斑马鱼胚胎ros荧光标记图；图2(b)为阳性对照组-斑马鱼胚胎ros荧光标记图；
[0089]
图2(c)为受试物-配方2作用下，斑马鱼胚胎ros荧光标记图；从图2(a)至2(c)可以看出，绿色荧光信号逐渐减弱，ros清除率逐渐增强，受试物-配方2作用下，ros清除率高达
31％。
[0090]
本实施例中，上述测试结果可作为受试物配方1至5所述精华油具有抗氧化功效的支持证据，进而支撑抗衰老，抗皱、紧致肌肤、避免色斑形成；提亮肤色，美白肌肤的功效的宣传。
[0091]
本技术精华油后续功效验证，均以配方2为例。
[0092]
验证例二：以配方2为例，验证本技术所述精华油具有促i型胶原蛋白再生的功能；
[0093]
测试项目：斑马鱼i型胶原蛋白基因表达促进测试；检测参数：col1a1a，col1a1b和col1a2基因表达的促进率；
[0094]
测试原理：
[0095]
胶原蛋白是人体的细胞外基质蛋白中含量最高的，其中i型胶原蛋白是皮肤中最丰富的蛋白质。斑马鱼的i型胶原蛋白分布与人体相同，且显示出与人类的高度保守性，它们的先天表达在受精后6天大时显著下降，并在受精后10到12天之间变得非常低。测试斑马鱼i型胶原蛋白基因(col1a1a，col1a1b和col1a2)表达，比较处理组和空白对照组斑马鱼i型胶原蛋白基因相对表达量变化，计算i型胶原蛋白基因表达促进率可以评价原料或产品的抗皱、紧致肌肤、使肌肤具有张力与弹性的功效。
[0096]
测试方法：将36尾6天大斑马鱼分3组暴露于1g/l受试物-配方2所述精华油样品溶液中，同时设置空白对照组，暴露24h后，对斑马鱼进行rna提取，cdna合成，实时pcr扩增，以β-actin作为管家基因，ct作为扩增结果，计算col1a1a,col1a1b和col1a2的相对表达量并进行统计分析。
[0097]
测试实验：
[0098]
(1)受试生物：应用可靠来源的野生型ab品系斑马鱼产卵测试；亲鱼应具有较好的繁殖能力，鱼龄以6-12月最佳，纯品系亲鱼繁殖5代后需要更换新一批亲鱼，亲鱼不应该有明显可见的感染和疾病特征，且在2个月内没有经历药物治疗。
[0099]
受试物：受试物为配方2所述的精油，配制方法同验证例一，最佳受试物浓度为1g/l；
[0100]
(2)测试步骤
[0101]
s1，首先，在显微镜下挑选健康的受精后6天大斑马鱼；
[0102]
s2，其次，进行测试分组：
[0103]
设置空白对照组(鱼胚胎培养液)：随机挑选36尾斑马鱼，转移至24-孔板中，每孔含12尾斑马鱼和2.5ml鱼胚胎培养液。
[0104]
设置受试物组(配方2所述精华油)：随机挑选36尾斑马鱼，转移至24-孔板中，分3组，每孔含12尾斑马鱼和2.5ml受试物溶液，受试物浓度为；1g/l；
[0105]
将上述加样分组的96-孔板放置于28
±
1℃的恒温箱中培养24
±
1h；收集每孔中的12尾斑马鱼于1.5ml管中，除去溶液，加入0.5mlrnalater溶液，冰冻储存；
[0106]
s3，进行rna提取
[0107]
除去rnalater溶液，用pbs溶液冲洗3次。置于冰浴，除去pbs溶液，加入500μl trizol试剂。用颗粒杵对胚胎进行均质化，置于冰浴10min。加入100μl三氯甲烷，涡旋1min，置于冰浴5min。离心样本20min，转移上层溶液至1.5ml离心管，加入250μl异丙醇，涡旋1min，置于冰浴10min，离心样本20min。除去所有上清液，加入500μl乙醇，涡旋1min，离心样
本5min，置于冰浴10min。重复此步骤3次。除去乙醇，离心样本5min，在通风橱中打开盖子风干样品10min。加入10μl无dnase/rnase超纯蒸馏水，55℃加热15min。
[0108]
s4，进行cdna合成
[0109]
用无dnase/rnase超纯蒸馏水将rna样本稀释至1000ng/7μl。用含gdna eraser的primerscript rt试剂盒(takara；cat no.rr047a)将rna合成为cdna，冰冻储存。
[0110]
s5，进行实时rt-pcr
[0111]
为每个引物准备引物混合物及实时pcr主混合物。用无dnase/rnase超纯蒸馏水将cdna样本稀释10倍。每孔pcr用96孔板加入9μl pcr主混合物及1μl稀释cdna样本。用光学胶膜密封pcr用96孔板，离心孔板5min，进行实时pcr扩增。
[0112]
基因引物如表2所示
[0113]
表2
[0114][0115]
s6，收集实时pcr数据。ct作为扩增结果，以β-actin基因扩增量作为管家基因，计算每个基因(col1a1a,col1a1b和col1a2)的相对表达量，作为测试结果，计算公式如下：
[0116][0117]
(i)式中：t—受试物处理组斑马鱼胶原蛋白基因相对表达量；
[0118]
c—空白对照组斑马鱼胶原蛋白基因相对表达量；对受试物处理组斑马鱼胶原蛋白基因相对表达量和空白对照组斑马鱼胶原蛋白基因相对表达量进行双尾t检验，取得p值。
[0119]
其中：各测试组暴露完成后至少90％鱼胚胎存活，否则对应测试组结果无效；在胶原蛋白基因表达促进率为正数且具有统计学差异(p《0.05)情况下，测试结果可作为受试物具有促进胶原蛋白再生的支持证据；
[0120]
具体数据对应如下：
[0121]
样品(配方2所述精油)浓度为1g/l时，对斑马鱼col1a1a，col1a1b和col1a2基因表达的促进率分别为589％(p＝0.0000014)，152％(p＝0.000038)，594％
[0122]
(p＝0.000020)；斑马鱼i型胶原蛋白基因相对表达量柱状图，如图3所示。由图3可知，本技术所述精华油具有明显的促进i型胶原蛋白再生的功效，而i型胶原蛋白再生能够修复皮肤组织中断裂、老化的弹力纤维网，从而增加皮肤紧密度，减少深皱纹、平复细纹，使皮肤紧致而富有弹性；将其应用于面部肌肤时，能够实现帮助修护肌肤，重建胶原蛋白层改善皮肤的弹性、水分，进而美白肌肤，起到保湿抗衰的功效。
[0123]
验证例三：以配方2为例，验证本技术所述精华油是否具有促进弹性蛋白再生的功能；
[0124]
测试项目：斑马鱼弹性蛋白基因(eln1)表达促进测试，检测参数：eln1基因表达的促进率；
[0125]
测试原理：
[0126]
人体皮肤中弹性蛋白是一种让体内许多组织在拉伸和收缩后维持原有形状，让皮肤在被挤压后恢复到本来形状的蛋白质。随着年龄增长，皮肤中的弹性蛋白纤维会逐渐断裂流失而令皮肤产生皱纹且失去弹性。斑马鱼皮肤和人体皮肤相比，除表皮为分化了的表皮细胞和黏液层而非角质层外，其余结构和人体皮肤高度相似。弹性蛋白基因高度保守，人体内的弹性蛋白由eln基因合成，该基因在斑马鱼体内的对应基因为eln1。通过测试本技术配方2所述精华油是否可以促进斑马鱼体内eln1基因的表达，可以评判样本是否有促进弹性蛋白再生，帮忙皮肤抗皱，实现皮肤紧致的功效。
[0127]
测试方法：将36尾6天大斑马鱼分3组暴露于1g/l配方2所述精华油样品溶液中，同时设置空白对照组，暴露24h后，对斑马鱼进行rna提取，cdna合成，实时pcr扩增，以β-actin作为管家基因，ct作为扩增结果，计算eln1的相对表达量并进行统计分析。
[0128]
测试实验：
[0129]
具体操作步骤同验证例二；其中：弹性蛋白i型基因引物如表3所示，
[0130]
表3
[0131][0132]
测试结果：
[0133]
样品(配方2所述精油)浓度为1g/l时，对斑马鱼eln1基因表达的促进率为245％(p＝0.00075)；与空白对照组进行对比，斑马鱼弹性蛋白基因相对表达量柱状图，如图4所示。
[0134]
由上述结论可知，本技术所述精华油能显著促进斑马鱼eln1基因表达，具有促进弹性蛋白再生的功效，而弹性蛋白再生能够有效提高皮肤弹性，赋予肌肤紧致或光泽，预防
或改善肌肤老化松弛，达到减皱、抗皱、紧致肌肤的功效。
[0135]
本发明上述配方所述的精华油组方形成的精华油可直接作为面部护理精华油使用，也可以应用于其它面部护理产品的制备中。
[0136]
此外，本发明上述配方所述的精华油组方还可应用它护肤品的制备中，例如：抗皱眼霜、身体乳等。
[0137]
进一步地，为了验证本发明上述配方所述精华油作为面部护理精华油使用时所具有的功效，本发明还做了如下验证例。
[0138]
验证例四：选择18名试用人员试用5周后评价护肤效果
[0139]
试用者年龄：32-51岁，18人；
[0140]
面部皮肤情况：干性皮肤4人；干油混合皮肤3人，干油混合偏干5人，甘油混合编油6人，敏感皮肤4人，长痘皮肤1人；面部长斑16人；有皱纹16人；皮肤松弛13人；
[0141]
试用该产品5周后，面部皮肤斑点淡化评价结果是：
[0142]
在皮肤长斑的16人中，其中面部斑获得中部淡化及明显淡化的人数有12人，占比75％；轻微淡化或者无变化的有4人；
[0143]
减少眼部皱纹评价结果是：在有皱纹的16人中，眼部皱纹明显以及中度变浅或者减少的试用者有13人，占比81％；轻微变浅或者无变化的试用者有3人；
[0144]
提升皮肤光泽度评价结果是：明显提高及中度提高的试用人数有17人，占比94％；轻微或者无变化者1人；
[0145]
提升皮肤细腻度评价结果是：明显提高及中度提高试用者有16人，占比89％；轻微或者无变化人数为2人；
[0146]
提升皮肤质感(紧致)评价结果是：明显提高及中度提高被试者有13人，占比72％；轻微或者无变化者有5人；
[0147]
提升皮肤湿润度评价结果是：明显提升及中度提升被试者有14人，占比78％；轻微或者无变化人数为4人；
[0148]
皮肤整体状态改善评价结果是：明显改善及逐步改善被试人数是17人，占比94％；轻微或者无变化者1人；
[0149]
因此，根据该项人体试用评价实验，该产品对人面部皮肤的改善效果是提升皮肤光泽度＞提升皮肤细腻度＞减少眼部皱纹＞提升皮肤湿润度＞面部皮肤斑点淡化＞提升皮肤质感(紧致)。单项测试结果获得明显及中度改善、提高的人数均在72％以上，获得皮肤整体状态改善明显改善及逐步改善的被试人数达到了总测试人数的94％，说明该款产品对于使用者的皮肤保护、修复和改善效果显著，具体数据如表格4所示。
[0150]
表4
[0151][0152]
此外，需要说明的是，本说明书中所描述的具体实施例，其零、部件的形状、所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化，均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种精华油组方，其特征在于，包括以下质量百分含量的各组份：榛果油：20～40％，仙人掌籽油：20～40％，gtcc：10～20％，葡萄籽油：5～20％，橄榄油：1～6％；山茶籽油：1％～4％；维生素e：0.1～2％；榆树提取物：0.001～0.5％；南瓜籽油：0.05～0.5％；木瓜籽油：0.05～0.5％，迷迭香精华油0.05～0.5％；各组分质量百分比之和为百分之百。2.根据权利要求1所述的精华油组方，其特征在于，各组份质量百分含量如下：榛果油：30％，仙人掌籽油：30％，gtcc：15.3％，葡萄籽油：17.6％，橄榄油：3％；山茶籽油：2.2％；维生素e：1％；榆树提取物：0.3％；南瓜籽油：0.2％；木瓜籽油：0.2％，迷迭香精华油0.2％。3.根据权利要求2所述的精华油组方，其特征在于，所述精华油为人体肌肤护理精华油。4.根据权利要求3所述的精华油组方，其特征在于，所述精华油为面部护理精油或可应用于制备面部护肤品中。5.一种利用权利要求1或2所述的精华油组方的精华油制备方法，其特征在于，包括步骤如下：s1，将权利要求1或2所述的原料从冷库中取出，置于室温条件下，待所有原料温度升至室温；s2，在制备容器中按比例先加入榛果油、仙人掌籽油、葡萄籽油，并搅拌30分钟后；再依次按比例加入gtcc、橄榄油以及山茶籽油，再次搅拌20分钟；s3，按比例依次加入南瓜籽油、木瓜籽油以及迷迭香精华油，搅拌20分钟，并静置30分钟；s4，按比例加入维生素e，搅拌10分钟，静置20分钟；s5，按比例加入榆树提取物，搅拌30分钟，静置30分钟。

技术总结
本发明涉及一种精华油组方及其制备方法，所述精华油包括：榛果油：20～40％，仙人掌籽油：20～40％，GTCC：10～20％，葡萄籽油：5～20％，橄榄油：1～6％；山茶籽油：1％～4％；维生素E：0.1～2％；榆树提取物：0.001～0.5％；南瓜籽油：0.05～0.5％；木瓜籽油：0.05～0.5％及迷迭香精华油0.05～0.5％，各组分质量百分比之和为百分之百。本发明所提供的精华油兼具对人体肌肤中活性氧(ROS)清除能力，促I型胶原蛋白再生及促弹性蛋白再生的能力，应用于人体肌肤时，具有显著的提升皮肤光泽和细腻度、保湿、淡斑、抗皱、紧致肌肤的功效。紧致肌肤的功效。紧致肌肤的功效。


技术研发人员：张萍 二山
受保护的技术使用者：北京天然风尚健康科技有限公司
技术研发日：2023.03.20
技术公布日：2023/7/18