赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法与流程

1.本发明涉及植物种植技术领域，尤其赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法。


背景技术：

2.七叶一枝花是百合科重楼属多年生草本植物，主要分布在广西、湖南、贵州等地。其具有抗肿瘤、止血、抗菌、消炎、镇痛、镇静、抑制血管生成、保护肝脏与肾脏等作用。市场上重楼药材主要以野生资源为主，随着市场需求逐步加大，重楼药材价格的飙升更使其遭到过度采集，严重威胁该资源的正常生存和可持续利用。近年来，重楼的市场需求量以每年20％的幅度递增，但野生重楼药材的供应量却不断减少，而正常七叶一枝花种子需要经过“两冬一夏”才能出苗，严重拖慢其成材速度，进而制约着相关产业的运转。
3.关于七叶一枝花的育苗国内学者进行过相关研究。蒙爱东等将七叶一枝花种子沙藏处理，播种至出苗需要1年时间(参考文献1)。龚范武等采用冷藏沙藏后控温催芽法，七叶一枝花种子90～100天发芽率达80％，而采用室内常温保存的对照组1年后发芽率仅为53.6％(参考文献2)。
4.外源激素赤霉素(ga3)作为一种生长调节剂，也应用于种子萌发试验上，提高发芽率。翁琳琳等采用激素互作的方法，在6-ba20mg
·
l-1
+ga
3 300mg
·
l-1
+浸泡36h下，210天萌发率可达85.75％，且发芽初始时间最短(参考文献3)。王建中研究发现200mg
·
l-1
ga3浸种12h后七叶一枝花的120天内发芽率最高，达82.5％，且该处理下平均发芽时间为83.08天，较蒸馏水浸泡组提前8.69天(参考文献4)。姜武等研究发现500mg
·
l-1
ga3可有效促进七叶一枝花种子萌发，第120天萌发率达85.7％(参考文献5)。上述方法，七叶一枝花的萌发时间较长，可能延误农时。
5.cn103609223b公开了赤霉素与湿沙层积使七叶一枝花种子快速萌发繁育的方法，该方法用赤霉素溶液处理种子灭菌后，将种子埋藏于湿沙中，并顺次置于0～4℃、18～22
°
c、0～4℃、18～22℃条件下分别各培养45～60天，湿沙变温层积总时间达到180～240天，再直接将湿沙变温层积处理后的种子种在土里使其萌发繁育，或者将湿沙变温层积处理后的种子留在湿沙中，在18～22℃条件下继续恒温培养90～120天，种子的胚根木质化发育成主根，然后将萌发的种子种植到田间繁育，该方法萌发率很高，最高可达98.51％，但该方法工艺较复杂，且萌发时间很长，最长接近1年。
6.参考文献
7.1.蒙爱东，闫志刚，余丽莹等七叶一枝花种子无菌培养萌发观察[j].江苏农业科学，2012(11)：258-260.
[0008]
2.龚范武，罗先权，王萍等七叶一枝花种子育苗技术研究[j].湖南林业科技，2014(01)：50-53.
[0009]
3.翁琳琳，钟爱清，范晓晖等外源激素互作对七叶一枝花种子萌发的影响[j].时珍国医国药，2021(07)：1733-1735.
[0010]
4.王建中不同试剂对七叶一枝花种子萌发的影响[j].耕作与栽培，2022(04)：42-44,54
[0011]
5.姜武，詹建勇，商建宏等赤霉素对浙产华重楼种子萌发的影响[j].浙江农业科学，2022(07)：1348-1350.


技术实现要素：

[0012]
针对现有技术存在的问题，本发明提供了赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，种子萌发时间短、发芽率高，具有操作简单、萌发整齐、不误农时的优点。
[0013]
为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
[0014]
赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，包括如下步骤：
[0015]
s1预处理：将采集的成熟七叶一枝花种子去除种皮，冲洗干净，阴干，20℃条件下干燥保存，完成种子后熟过程；
[0016]
s2灭菌：先用水浸泡种子24小时，再对种子灭菌；
[0017]
s3赤霉素处理：在20℃条件下，用200-500mg/l赤霉素浸泡种子24小时；
[0018]
s4培养萌发：将赤霉素处理后的种子放置于泥炭培养基中，20℃和55％-65％湿度条件下，培养至萌发。
[0019]
进一步地，在步骤s1中，所述去除种皮方法具体为，将成熟的七叶一枝花种子置于两片洗碗巾之间，进行揉搓去除种皮。
[0020]
进一步地，在步骤s2中，所述灭菌方法具体为，用75％酒精浸泡种子5分钟。
[0021]
进一步地，在步骤s3中，所述赤霉素浓度为400mg/l。
[0022]
上与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0023]
1、本发明提供的方法，种子萌发时间短、发芽率高，具有操作简单、萌发整齐、不误农时的优点。
附图说明
[0024]
图1为本发明实施例赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发繁育方法流程示意图。
[0025]
图2为本发明实施例种子揉搓去除种皮后种子形态图。
[0026]
图3为本发明实施例育苗示意图。
[0027]
图4为本发明实施例1种子萌发情况。
[0028]
图5为本发明实施例2种子萌发情况。
[0029]
图6为本发明实施例3种子萌发情况。
[0030]
图7为本发明实施例4种子萌发情况。
[0031]
图8为本发明实施例5种子萌发情况。
具体实施方式
[0032]
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0033]
本发明赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法流程图如图1所示，为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施例予以说明。
[0034]
实施例1
[0035]
赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发的方法，包括如下步骤：
[0036]
s1、预处理：将采集的成熟七叶一枝花种子去除种皮，冲洗干净，阴干，20℃条件下干燥保存，完成种子后熟过程；
[0037]
成熟的七叶一枝花种子种皮汁液饱满，为方便操作，将成熟的七叶一枝花种子置于两片洗碗巾之间，揉搓去除种皮，用流动水将揉搓掉的果肉彻底清洗掉，此时的七叶一枝花种子呈现乳白色，如图2所示。将种子置于干燥阴凉房间4～7天，阴干种子表面水分，再将种子置于玻璃瓶中，放于20℃恒温培养箱中，完成种子后熟过程，备用。
[0038]
s2、灭菌：先用水浸泡种子24小时，再对种子灭菌；
[0039]
将备用的种子取出，用清水浸泡24小时，后用75％酒精浸泡5分钟，进行灭菌。
[0040]
s3、赤霉素处理：在20℃条件下，用200mg/l赤霉素浸泡种子24小时；
[0041]
s4、培养萌发：将赤霉素处理后的种子放置于泥炭培养基中，在20℃和55％－65％湿度条件下，培养至萌发。
[0042]
将赤霉素处理后的七叶一枝花种子放置于育苗盒中，育苗盒每个格子放置一粒种子，穴内填充泥炭土，种子平铺在泥炭土表面，如图3所示，盖上育苗盒盖(育苗盒盖上事先钻有若干小孔，用于通气)，置于20℃的人工培养箱中萌发培养。每三天用喷壶补充水分一次，以保持培养湿度在55％－65％。本实施例所用泥炭为纯水苔泥炭作主要基质，添加蛭石及珍珠岩，纯水苔泥炭：珍珠岩：蛭石比例为6:2:2，混合基质ph:5.5-7.0，有机质≥20％，经121℃湿热灭菌后，按泥炭与灭菌水2:1制成含水泥炭。
[0043]
本实施例进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；在20℃的人工培养箱中培养60天后，统计发芽率。
[0044]
实施例2―5
[0045]
赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，包括如实施例1大部分操作步骤，其不同之处在于：
[0046]
采用表1中实施例2－5中所示的赤霉素(ga3)浓度。
[0047]
发芽率＝(发芽种子数/总种子数)*100％
[0048]
表1七叶一枝花种子不同ga3浓度处理下的萌发率(％)n＝5
[0049][0050]
注：注：表中数值为平均值
±
标准误差；同列不同小写字母表示在p＝0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p＝0.05水平上差异不显著。标准误差
xi表示各重复发芽率，表示发芽率平均值，n表示生物学重复数。
[0051]
上述实施例各进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；在人工培养箱中培养60天后，分别统计各实施例发芽率。实施例1至实施例5七叶一枝花部分种子萌发情况如图4至图8所示，由于试验样本数较大，图中仅展示部分种子萌发情况。
[0052]
从表1可以看出，采用赤霉素与泥炭培养基结合，可大大缩短七叶一枝花种子的萌发时间，其中，200-500mg/l ga3时，60天发芽率在80％以上，标准误差也较小，试验重复性较好，萌发整齐。其中，400mg/lga3处理下七叶一枝花种子发芽率达95％以上，且该浓度处理下标准误差仅1.69，试验重复性好，萌发整齐。本发明提供的方法，种子萌发时间短、发芽率高，具有操作简单、萌发整齐、不误农时的优点。
[0053]
对比实施例1七叶一枝花种子灭菌方式
[0054]
将实施例1s1预处理获得的种子，先用水浸泡种子24小时，分别进行如下灭菌实验：
[0055]
对照组：无菌去离子水浸泡2小时；
[0056]
沸水烫种：沸水烫种10秒后，无菌水冲洗3次；
[0057]
强光照射：正午12时阳光直射30分钟，后无菌水浸泡；
[0058]
75％酒精：75％酒精浸泡5分钟后，无菌水冲洗3次；
[0059]
5％次氯酸钠：5％次氯酸钠浸泡30分钟后，无菌水冲洗3次；
[0060]
0.1％升汞：0.1％升汞浸泡10分钟后，无菌水冲洗3次；
[0061]
10％过氧化氢：10％过氧化氢浸泡30分钟后，无菌水冲洗3次。
[0062]
上述灭菌方式各进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；在20℃恒温培养箱中培养7天和14天后，分别统计各组污染率。
[0063]
污染率＝(污染种子数/总种子数)*100％，不同灭菌方式的污染结果如表2所示。
[0064]
表2：七叶一枝花种子不同灭菌方式的污染率(％)n＝5
[0065][0066]
注：表中数值为平均值
±
标准误差；同列不同小写字母表示在p＝0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p＝0.05水平上差异不显著。
[0067]
从表2可以看出，14天内的污染率，75％酒精组为17.20％，灭菌效果显著高于对照组、强光照射组、0.1％升汞组、10％过氧化氢组等其他组。
[0068]
对比实施例2七叶一枝花种子育苗基质对比实验
[0069]
将实施例1将s1和s2灭菌获得的种子，分别进行如下发芽基质筛选试验：
[0070]
河沙组：将过60目河沙经121℃干热烘干后，河沙与灭菌水按10:1的比例制成含水河沙；
[0071]
珍珠岩组：1-3mm孔径珍珠岩经121℃湿热灭菌后，按珍珠岩与无菌水1:1制成含水珍珠岩；
[0072]
蛭石组：1-3mm孔径蛭石经121℃干热烘干后，按蛭石与灭菌水1.5:1制成含水蛭石；
[0073]
泥炭组：纯水苔泥炭作主要基质，添加蛭石及珍珠岩，纯水苔泥炭：珍珠岩：蛭石比例为6:2:2，混合基质ph:5.5-7.0，有机质≥20％，经121℃湿热灭菌后，按泥炭与灭菌水2:1制成含水泥炭。
[0074]
在发芽盒底部垫一层1cm左右厚度的棉花，将上述的发芽基质与水混合后平铺至育苗穴盆中，将种子平放于各基质之上，育苗穴盆再放置于育苗盒中，盖上育苗盒盖。育苗盒盖上事先钻有若干小孔，用于通气。
[0075]
上述基质方式各进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；在20℃恒温培养箱中培养45天和60天后，统计各组发芽率。
[0076]
不同育苗基质的发芽率结果如表2所示。
[0077]
表3：七叶一枝花在20℃条件下不同育苗基质的发芽率(％)n＝5
[0078][0079]
注：表中数值为平均值
±
标准误差；同列不同小写字母表示在p＝0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p＝0.05水平上差异不显著。
[0080]
从表3可以看出，七叶一枝花种子在泥炭下45天和60天萌发率略高于其它基质组。
[0081]
对比实施例3赤霉素与不同育苗基质结合使七叶一枝花种子快速萌发方法
[0082]
包括如实施例1大部分操作步骤，其不同之处在于：
[0083]
采用表4中所示的育苗基质和赤霉素(ga3)浓度组合。各育苗基质与对比实施例2相同，如下：
[0084]
河沙组：将过60目河沙经121℃干热烘干后，河沙与灭菌水按10:1的比例制成含水河沙；
[0085]
珍珠岩组：1-3mm孔径珍珠岩经121℃湿热灭菌后，按珍珠岩与无菌水1:1制成含水珍珠岩；
[0086]
蛭石组：1-3mm孔径蛭石经121℃干热烘干后，按蛭石与灭菌水1.5:1制成含水蛭石；
[0087]
泥炭组：纯水苔泥炭作主要基质，添加蛭石及珍珠岩，纯水苔泥炭：珍珠岩：蛭石比例为6:2:2，混合基质ph:5.5-7.0，有机质≥20％，经121℃湿热灭菌后，按泥炭与灭菌水2:1制成含水泥炭。
[0088]
本实施例，每组基质+ga3进行5个生物学重复，每个重复100粒种子；同时放置在20℃的人工培养箱中培养45天和60天后，分别统计各组基质+ga3的发芽率。
[0089]
表4：七叶一枝花在20℃条件下不同育苗基质+浓度400mg
·
l-1赤霉素(ga3)的发芽率(％)n＝5
[0090][0091]
注：表中数值为平均值
±
标准误差；同列不同小写字母表示在p＝0.05水平上差异显著；同列相同小写字母表示在p＝0.05水平上差异不显著。
[0092]
从表4可以看出，七叶一枝花种子在泥炭组+ga3下45天和60天萌发率明显高于其它基质+ga3组合。
[0093]
结合表3和表4，可以看出，河沙组、珍珠岩组、蛭石组和泥炭组4种发芽基质分别与ga3组合，能明显缩短七叶一枝花种子的萌发时间，但泥炭组与ga3组合对缩短七叶一枝花种子萌发时间的效果更加显著，泥炭组+ga3组合对七叶一枝花种子萌发具有显著的促进作用，可以在较短时间内提高七叶一枝花种子的发芽率。
[0094]
虽然，上文中已经用具体实施方式，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

技术特征：
1.赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，其特征在于，包括如下步骤：s1预处理：将采集的成熟七叶一枝花种子去除种皮，冲洗干净，阴干，20℃条件下干燥保存，完成种子后熟过程；s2灭菌：先用水浸泡种子24小时，再对种子灭菌；s3赤霉素处理：在20℃条件下，用200-500mg/l赤霉素浸泡种子24小时；s4培养萌发：将赤霉素处理后的种子放置于泥炭培养基中，20℃和55％-65％湿度条件下，培养至萌发。2.根据权利要求1所述的赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，其特征在于，在步骤s1中，所述去除种皮方法具体为，将成熟的七叶一枝花种子置于两片洗碗巾之间，进行揉搓去除种皮。3.根据权利要求1所述的赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，其特征在于，在步骤s2中，所述灭菌方法具体为，用75％酒精浸泡种子5分钟。4.根据权利要求1所述的赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，其特征在于，在步骤s3中，所述赤霉素浓度为400mg/l。

技术总结
本发明公开赤霉素与泥炭培养基结合使七叶一枝花种子快速萌发方法，涉及植物种植技术领域，包括如下步骤：预处理：将采集的成熟七叶一枝花种子去除种皮，冲洗干净，阴干，20℃条件下干燥保存，完成种子后熟过程；灭菌：先用水浸泡种子24小时，再对种子灭菌；赤霉素处理：在20℃条件下，用200-500mg/L赤霉素浸泡种子24小时；培养萌发：将赤霉素处理后的种子放置于泥炭培养基中，20℃和55％-65％湿度条件下，培养至萌发。本发明提供的方法，种子萌发时间短、发芽率高，具有操作简单、萌发整齐、不误农时的优点。点。点。


技术研发人员：郭宏伟 康亮 王德宝 卢覃培 朱丹
受保护的技术使用者：广西柏朗健康产业发展有限公司
技术研发日：2023.03.14
技术公布日：2023/7/19