一种抑制NEK7表达的miRNA的应用

一种抑制nek7表达的mirna的应用
技术领域
1.本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种抑制nek7表达的mirna的应用。


背景技术：

2.mirna是一类高度保守的单链非编码小rna，由约20-22个单核苷酸组成，广泛存在于真核生物中，参与转录后调控。
3.脑白质损伤(wmi)是早产儿的主要病理特征之一。脑白质损伤主要表现为少突胶质细胞谱系障碍和脱髓鞘，这可能导致进一步的神经发育缺陷和神经功能障碍。在大脑发育过程中，经常发现小胶质细胞围绕在白质区域，作为存在于中枢神经系统中的免疫细胞，小胶质细胞通过产生促炎性细胞因子，与脑白质损伤的进展密切相关。尽管在脑白质损伤患者和实验动物模型中发现了小胶质细胞的激活和增殖，但具体的调控机制仍未知。


技术实现要素：

4.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出靶向上调mir-214表达量的物质的应用，该mirna能够有效抑制nek7的转录、抑制caspase-1的切割活化、抑制细胞炎症因子的表达、分泌、抑制细胞焦亡、改善早产儿脑白质损伤。
5.本发明还提供mir-214相关生物材料的应用。
6.本发明还提供抑制mir-214或mir-214前体表达的物质的应用。
7.本发明还提供一种改变细胞中nek7基因转录的方法。
8.本发明还提供mir-214作为靶点或工具的应用。
9.本发明还提供一种用于防治早产儿脑白质损伤的药物组合物。
10.根据本发明的第一方面实施例的靶向上调mir-214表达量的物质在非疾病治疗用途的如下a1至a4中至少一种或制备具有a1至a5中至少一种功能的产品中的应用，
11.a1、抑制nek7表达；
12.a2、抑制caspase-1活化；
13.a3、抑制细胞炎症因子的表达和/或分泌；
14.a4、抑制细胞焦亡；
15.a5、改善早产儿脑损伤。
16.靶向上调mir-214表达量的物质可用于在非疾病治疗用途地调控nek7的表达、caspase-1的切割活化、细胞炎症因子的表达和/或分泌或细胞焦亡。
17.根据本发明的一些实施例，所述靶向上调mir-214表达量的物质包括b1至b5中的至少一种，
18.b1、mir-214；
19.b2、mir-214前体；
20.b3、mir-214模拟物；
21.b4、mir-214修饰物；
22.b5、编码所述mir-214或所述mir-214前体的核酸分子。
23.根据本发明的一些实施例，所述a1包括抑制nek7的转录。
24.根据本发明的一些实施例，a3中，所述细胞炎症因子包括il-1β和il-18中的至少一种。
25.根据本发明的一些实施例，a5中，所述早产儿脑损伤包括早产儿脑白质损伤。
26.根据本发明的一些实施例，所述改善早产儿脑损伤包括减少脑白质病变区域、提高脑室周围白质中髓鞘的长度和密度中的至少一种。
27.根据本发明的第二方面实施例的一种生物材料在非疾病治疗用途的如下a1至a4中至少一种或在制备具有a1至a5中至少一种功能的产品中的应用，
28.a1、抑制nek7表达；
29.a2、抑制caspase-1的切割活化；
30.a3、抑制细胞炎症因子的表达和/或分泌；
31.a4、抑制细胞焦亡；
32.a5、改善早产儿脑白质损伤；
33.所述生物材料包括c1至c5中的任一种，
34.c1、编码所述mir-214或所述mir-214前体的核酸分子；
35.c2、含有c1所述核酸分子的表达盒；
36.c3、含有c1所述核酸分子或c2所述表达盒的重组载体；
37.c4、含有c1所述核酸分子或c2所述表达盒或c3所述重组载体的重组细胞；
38.c5、表达mir-214或所述mir-214前体的重组病毒。
39.上述生物材料还可用于在非疾病治疗用途地调控nek7的表达、caspase-1的切割活化、细胞炎症因子的表达和/或分泌或细胞焦亡。
40.根据本发明的一些实施例，所述核酸分子可以是dna，如cdna、基因组dna或重组dna等。
41.根据本发明的一些实施例，所述表达盒指能够在宿主细胞中转录加工后形成mir-214的dna，该dna不但可包括启动mir-214基因转录的启动子，还可包括终止mir-214基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。
42.根据本发明的一些实施例，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。
43.根据本发明的一些实施例，所述重组细胞可为原核细胞或真核细胞。所述重组细胞可为微生物细胞，例如：细菌细胞、酵母细胞、藻类细胞或真菌细胞。所述重组细胞可为哺乳动物细胞或昆虫细胞。所述重组细胞不包括繁殖材料。
44.根据本发明的一些实施例，所述重组病毒可以为腺病毒、慢病毒或噬菌体。
45.根据本发明的第三方面实施例的抑制mir-214或mir-214前体表达的物质在非疾病治疗用途的如下d1至d6中至少一种或在制备具有d1至d6中至少一种功能的产品中的应用，d1、促进nek7表达；
46.d2、促进caspase-1的切割活化；
47.d3、促进细胞炎症因子的表达和/或分泌；
48.d4、促进细胞焦亡；
49.d5、增加脑白质病变区域；
50.d6、降低脑室周围白质中髓鞘的长度和密度。
51.根据本发明的一些实施例，所述抑制mir-214或mir-214前体表达的物质包括mir-214或mir-214前体的抑制剂或抑制寡核酸。
52.根据本发明的一些实施例，d3中，所述细胞炎症因子包括il-1β和il-18中的至少一种。
53.根据本发明的第四方面实施例的一种改变细胞中nek7基因转录的方法，包括以下步骤：
54.提高所述细胞内mir-214的水平，实现抑制所述细胞中nek7基因的转录；或
55.降低所述细胞内mir-214的水平，实现提高所述细胞中nek7基因的转录。
56.根据本发明的第五方面实施例的mir-214作为靶点或工具在筛选具有a1至a5中至少一种功能的产品中的应用，
57.a1、抑制nek7表达；
58.a2、抑制caspase-1的切割活化；
59.a3、抑制细胞炎症因子的表达和/或分泌；
60.a4、抑制细胞焦亡；
61.a5、改善早产儿脑损伤。
62.根据本发明的第六方面实施例的一种用于防治早产儿脑白质损伤的药物组合物，包括靶向上调mir-214表达量的物质。
63.根据本发明的一些实施例，所述物质包括b1至b5中的至少一种和/或，
64.b1、mir-214；
65.b2、mir-214前体；
66.b3、mir-214模拟物；
67.b4、mir-214修饰物；
68.b5、编码所述mir-214或所述mir-214前体的核酸分子。
69.根据本发明的一些实施例，所述药物为片剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、糖衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小水针、注射用冻干粉针、大输液或小输液。
70.根据本发明的一些实施例，所述药物还包括药学上可接受的载体。所述载体可以包括脂质体、纳米颗粒。
71.根据本发明的一些实施例，所述药物的给药方式包括口服或静脉注射。
72.本发明至少具有以下有益效果：
73.mir-214能够通过降低nek7蛋白的表达量，抑制炎性小体nlrp3激活，抑制caspase-1激活，从而减轻bv-2小胶质细胞焦亡对早产儿脑白质损伤的程度。可作为一种减轻早产儿脑白质损伤的靶点，以实现深入探究早产儿脑白质损伤的发病机制，寻找干预治疗的新靶点，用于防治早产儿脑白质损伤，改善患者生活质量。
74.caspase-1的失活可减少小胶质细胞焦亡，并抑制炎症因子ll-1β和ll-18产生和分泌，减轻早产儿脑白质损伤。
75.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
附图说明
76.图1是本发明一实施例的ctrl、agomir组和antagomir组中nek7、nlrp3和asc的nek7检测结果；其中，a为mrna相对表达水平，b为免疫印迹检测结果，c为β-actin归一化nek7蛋白质相对表达水平；*表示有显著性差异，p《0.05；
77.图2是本发明一实施例的ctrl组、agomir组和antagomir组细胞各指标比较结果；其中，a、b分别为caspase-1的flica染色的代表性点图和定量结果，c为pro-casp1(前caspase-1)和caspase1-p20的免疫印迹检测结果，d为β-actin归一化的pro-casp1和caspase1-p20的蛋白相对表达水平，e为体外培养24小时后小胶质细胞释放ldh检测结果，f、g分别为小胶质细胞释放的il-1β和il-18细胞因子水平检测结果；*表示有显著性差异，p《0.05；**表示有显著性差异，p《0.01；***表示有显著性差异，p《0.001；
78.图3是本发明一实施例的对照组和whi组小鼠脑组织的h&e染色；
79.图4是本发明一实施例的对照组和whi组小鼠脑组织的mbp染色；
80.图5是本发明一实施例的在体外培养24h的对照组和whi组小鼠小胶质细胞释放的ldh量；其中，***表示有显著性差异，p《0.001；
81.图6是本发明一实施例的对照组和whi组小鼠小胶质细胞中活化的caspase-1(casp1)、caspase-3(casp3)、caspase-6(casp6)和caspase-8(casp8)的检测结果；其中，***表示有显著性差异，p《0.001；
82.图7是本发明一实施例的对照组和whi组小鼠小胶质细胞中的pro-casp1和p20的累积量检测结果；a为免疫印迹检测结果、b为β-actin归一化的蛋白相对表达水平；其中，*表示有显著性差异，p《0.05；
83.图8是本发明一实施例的对照组和whi组小鼠小胶质细胞的细胞因子il-1β和il-18分泌情况；其中，**表示有显著性差异，p《0.01；***表示有显著性差异，p《0.001；
84.图9是本发明一实施例的对照组和whi组小鼠脑白质中lba1
+
和caspase-1
+
的水平检测结果；
85.图10是本发明一实施例的ctrl组和wmi组小鼠小胶质细胞的nek7、nlrp3和asc的mrna以及nek7蛋白质水平检测结果；其中，a为mrna相对表达水平，b为免疫印迹检测结果，c为β-actin归一化的蛋白质相对表达水平；*表示有显著性差异，p《0.05，**表示有显著性差异，p《0.01；*表示有显著性差异，p《0.05；**表示有显著性差异，p《0.01；
86.图11是本发明一实施例的gse49330数据库选取出的mir-214的表达水平；其中，a为mirna表达谱差异分析结果(重叠的mirna数用红色字体表示)，b为来自gse49330数据库的mir-214相对值；c为mir-214在ctrl组和whi组小鼠小胶质细胞中的mrna相对表达水平；**表示有显著性差异，p《0.01；
87.图12是本发明一实施例的whi组和agomir-214组小鼠脑组织的h&e(a)和mbp(b)染色结果；
88.图13是本发明一实施例的wmi组和agomir-214组小鼠各指标比较；其中，a为小鼠脑白质中lba1
+
和caspase-1
+
的水平检测结果，b、c分别为pro-casp1和p20的免疫印迹检测结果和β-actin归一化的蛋白相对表达水平，d、e为caspase-1的flica染色的代表性点图和定量结果，f、g分别为小胶质细胞释放的il-1β和il-18细胞因子水平检测结果；*表示有显著性差异，p《0.05；**表示有显著性差异，p《0.01；***表示有显著性差异，p《0.001；
89.图14是本发明一实施例的whi组和vx-765组小鼠各指标比较；其中，a、b分别为caspase-1的flica染色的代表性点图和定量结果，c、d分别为pro-casp1和p20的免疫印迹检测结果和β-actin归一化的蛋白相对表达水平，e、f分别为小胶质细胞释放的il-1β和il-18细胞因子水平检测结果，g为小鼠脑白质中lba1
+
和caspase-1
+
的水平检测结果，h为ldh检测结果，i为h&e染色结果，j为mbp染色结果；*表示有显著性差异，p《0.05；**表示有显著性差异，p《0.01；***表示有显著性差异，p《0.001。
具体实施方式
90.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
91.实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
92.在本发明的描述中，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
93.若无特殊说明，本发明中“约”表示允许误差在
±
2％之内。
94.本发明的实施例中，mir-214模拟物agomir-214(氨基酸序列为agcugauauugauggacag)、mir-214抑制物antagomir-214(氨基酸序列为cuguccaucaauaucagcu)由广州市锐博生物科技有限公司供应；caspase-1抑制剂vx-765由sigma-aldrich供应。
95.本发明的实施例中，小胶质细胞系bv-2购于accegen biotechnology。培养基为含10％胎牛血清、100iu/ml青霉素和100mg/ml链霉素的dmem高葡萄糖培养基。
96.本发明的实施例中，小胶质细胞的分离采用cd11b磁性阳性选择试剂盒(miltenyibiotec)，具体操作依照制造商说明书进行。
97.caspase-1在炎性小体nlrp3复合物组装时被激活。nlrp3复合物涉及nek7、nlrp3和asc蛋白的表达和结合，每种蛋白都与nlrp3的激活密切相关。
98.本发明的实施例中，rt-pcr的实验步骤如下：
99.按trizolrna分离试剂盒(beyptime)说明书提取总rna。使用cdna合成试剂盒进行逆转录。使用sybr green qpcr master mix(bimake)进行qrt-pcr，操作按试剂盒说明书进行(以beta-actin作为内参)。
100.反应程序为：stage 1：95℃2min；stage 2(cycle：40)：95℃15s，60℃1min；stage 3：95℃15s，60℃1min，95℃15s。
101.mir-214上游引物序列：5
’‑
gacagcaggcacagaca-3’，
102.mir-214下游引物序列：5
’‑
gtgcagggtccgaggt-3’；
103.beta-actin上游引物序列：aacagtccgcctagaagcac，
104.beta-actin下游引物序列：cgttgacatccgtaaagacc；
105.nek7上游引物序列：gccttacgaccggatatggg，
106.nek7下游引物序列：gccttacgaccggatatggg；
107.nlrp3上游引物序列：gatcttcgctgcgatcaacag，
108.nlrp3下游引物序列：cgtgcattatctgaaccccac；
109.asc上游引物序列：tggatgctctgtacgggaag；
110.asc下游引物序列：ccaggctggtgtgaaactgaa。
111.其中，用于提取rna前，小鼠脑组织的前处理方法为：将小鼠脑组织用组织匀浆器在冰上低速解离30s，将匀浆后的组织用1.5mg/ml胶原酶iv(worthington)在无血清培养基中于37℃溶解45min。
112.本发明的实施例中，采用h&e染色试剂盒(beyotime)进行h&e染色，具体操作依照制造商说明书进行。
113.本发明的实施例中，mbp染色是一种检测大脑髓鞘形成的敏感方法。mbp染色通过常规方法进行。具体地，一抗使用一抗mbp(1:300)，二抗使用alexa flour 488标记山羊抗兔igg(1:500)。
114.本发明的实施例中，小胶质细胞ldh的产生量用ldh细胞毒性测定试剂盒(thermo fisher)进行测定，具体操作依照制造商说明书进行。通过测量细胞上清液中的ldh含量，将总ldh活性除以自发ldh释放来计算ldh释放细胞的比例，以此判断bv-2小胶质细胞受损的比例。
115.mir-214对小胶质细胞系bv-2的影响
116.待小胶质细胞系bv-2生长到70％～80％汇合度时，接种至12孔细胞培养板，按照操作说明，用lipofectamine
tm
3000转染试剂(thermo fisher)分别将50nm agomir-214(agomir组)和50nm antagomir-214(antagomir组)转染小胶质细胞系bv-2，培养24h。以不做任何处理的小胶质细胞系bv-2作为对照组(ctrl组)。
117.1、mir-214对小胶质细胞系bv-2的nek7的影响
118.通过rt-pcr测量agomir组、antagomir组和ctrl组nek7的转录情况及免疫印迹测定nek7蛋白的表达。
119.结果如图1所示。
120.mir-214的升高导致nek7转录物的表达下调，而mir-214的阻断导致nek7转录物的表达上调。antagomir-214增加了nek7的蛋白质水平，而nek7的蛋白质水平因agomir-214的处理而降低。
121.进一步通过starbase数据库(http://starbase.sysu.edu.cn/)预测mir-214可能与nek7的mrna结合。
122.综上，mir-214能够抑制nek7基因mrna的表达。
123.2、mir-214对小胶质细胞系bv-2的caspase-1的影响
124.通过flica探针染色检测agomir组、antagomir组和ctrl组小胶质细胞中caspase-1活性；用免疫印迹测定agomir组、antagomir组和ctrl组p20和pro-casp1的累积量；并测定agomir组、antagomir组和ctrl组的小胶质细胞ldh的产生量；用elisa测量了小胶质细胞释放的il-1β和il-18细胞因子水平。
125.结果如图2所示。
126.antagomir-214增加了caspase-1的活性，而agomir-214减少caspase-1炎性体的切割和活化。免疫印迹结果进一步证明当mir-214被阻断时caspase-1p20在小胶质细胞中的积累以及在agomir-214转染下p20片段的减少。ldh测定结果表明agomir214能够保护小胶质细胞免于细胞死亡，同时antagomir-214能够导致小胶质细胞死亡显着增加。elisa测定结果表明agomir-214能够阻止小胶质细胞产生il-1β和il-18，而antagomir-214促进小胶质细胞分泌il-1β和il-18。
127.综上可知，mir-214能在体外减少caspase-1炎症体诱导的小胶质细胞焦亡。
128.脑白质损伤小鼠模型的构建
129.(1)向出生8天的spf级别的野生型wt c57bl/6小鼠腹膜内注射300μg/kg脂多糖(lps，sigma-aldrich)，作为whi组。以腹膜内注射无菌pbs作为对照组。14h后，将小鼠用co2麻醉后，采集大脑进行he以及mbp染色。
130.结果如图3和4所示。
131.若小鼠脑室中发生白质束脱髓鞘，则认为脑白质损伤小鼠模型形成。h&e染色结果表明，与对照组相比，whi组病变白质中的区域扩大。mbp染色结果表明，与对照组相比，whi组的脑室周围白质中发生大量髓磷脂密度和辅助纤维过程的降低。这表明经腹膜内注射300μg/kg lps处理14h后，脑白质损伤小鼠模型构建成功。
132.(2)用cd11b
+
磁珠将对照组和wmi组小鼠的小胶质细胞分离并培养24小时，通过量化乳酸脱氢酶(ldh，细胞死亡指示剂)的释放来确定小胶质细胞死亡率。并通过caspase-flica探针染色检测小胶质细胞中caspase-1、caspase-3、caspase-6和caspase-8的激活情况，用免疫印迹测定小胶质细胞中p20和pro-casp1的累积量，通过elisa检测培养基中小胶质细胞释放的细胞因子il-1β和il-18的水平。用双色免疫荧光染色检测对照组和wmi组小鼠脑白质中lba1
+
caspase-1
+
小胶质细胞的水平。
133.结果如图5、6、7、8、9所示。
134.wmi组有40％的小胶质细胞释放ldh，而在对照组只有约10％的小胶质细胞释放ldh。如图5所示。
135.不同炎症小体的激活会导致不同类型的程序性细胞死亡。经lps诱导后，caspase-1激活的小胶质细胞数量增加了一倍，而对照组和whi组的其他炎症小体(包括caspase-3、caspase-6和caspase-8)的激活水平相近，无显著性差异。如图6所示。
136.caspase-1的激活涉及将前caspase-1切割成活性异二聚体p20和p10。与对照组相比，wmi组小胶质细胞中caspase-1p20的积累增强。如图7所示。
137.caspase-1介导的细胞焦亡与il-1β和il-18的产生和分泌有关。小胶质细胞培养24小时后，对照组的小胶质细胞释放约200pg/ml的il-1β和100pg/ml的il-18，wmi组的小胶质细胞分泌的il-1β和il-18水平大大增加，约释放380pg/ml il-1β和180pg/ml il-18。如图8所示。
138.在组织水平上，与对照组相比，lps诱导损伤后，白质中的lba1
+
caspase-1
+
小胶质细胞水平显著增加。如图9所示。
139.综上可知，脑白质损伤中会出现由caspase-1炎症小体诱导的小胶质细胞焦亡。
140.(3)用rt-pcr和wb分别测量了对照组和wmi组小鼠小胶质细胞中nlrp3炎性体成分(nek7、nlrp3和asc)的mrna和蛋白质水平。
141.结果如图10所示。
142.与对照组相比，wmi组小鼠小胶质细胞中的nek7 mrna水平显著增加，而nlrp3和asc的mrna水平没有显著性差异。在蛋白质水平上，wmi组小鼠小胶质细胞中nek7蛋白的表达量明显高于对照组。
143.(4)通过对geo数据库中gse49330数据库进行分析，比较了分别用lps和pbs处理小胶质细胞的mirna表达谱，有78种mirna出现显著差异表达；还比较了分别用lps和il-4刺激小胶质细胞mirna表达谱，有85种mirna出现显著差异表达。两组显著差异表达的mirna有31个mirna重叠，其中只有一个mirna(mir-214)在两组中表现出超过2倍的变化。即与pbs或il-4处理相比，lps处理显着降低了小胶质细胞mir-214的表达。且whi组小鼠小胶质细胞中mir-214的mrna相对表达水平也显著低于ctrl组。
144.分析结果如图11所示。
145.vx-765和agomir-214对脑白质损伤小鼠模型的治疗作用
146.将24只成年(8～10周)的spf级别的野生型wt c57bl/6小鼠随机分为正常组、模型对照组、vx-765组、agomir-214组，每组6只。正常组每日尾静脉注射无菌pbs；其余组构建为脑白质损伤小鼠模型后，模型对照组每日尾静脉注射无菌pbs，vx-765组每日灌胃25mg/kg
·
day的vx-765，agomir-214组每日尾静脉注射40mg/kg
·
day的agomir-214。
147.1、agomir-214对脑白质损伤小鼠模型的治疗作用
148.通过he及mbp染色观察模型对照组和agomir-214组小鼠脑组织切片。
149.用双色免疫荧光染色检测wmi组和agomir-214组小鼠脑白质中lba1
+
caspase-1
+
小胶质细胞的水平；通过免疫印迹测定wmi组和agomir-214组小胶质细胞中p20和pro-casp1的累积量；通过flica探针染色检测wmi组和agomir-214组小胶质细胞中caspase-1的激活数量；用elisa测定wmi组和agomir-214组小胶质细胞释放的il-1β和il-18细胞因子水平。
150.结果如图12、13所示。
151.h&e染色结果表明，agomir-214减少了脑白质损伤小鼠模型中的白质病变区域。mbp染色结果表明，agomir-214恢复了脑室周围白质中髓鞘的长度和密度。
152.agomir-214会抑制agomir-214组小鼠脑白质中lba1
+
caspase-1
+
小胶质细胞的数量，减少caspase-1的积累和小胶质细胞中的p20蛋白的切割，阻断caspase-1的激活，抑制小胶质细胞产生il-1β和il-18。
153.综上可知，mir-214能够改善脑白质损伤小鼠模型的症状，减少caspase-1导致的小胶质细胞的焦亡。
154.2、vx-765对脑白质损伤小鼠模型的治疗作用
155.通过flica探针染色检测wmi组和vx-765组小胶质细胞中caspase-1的激活数量；通过免疫印迹测定wmi组和vx-765组小胶质细胞中p20和pro-casp1的累积量；用elisa测定wmi组和vx-765组的小胶质细胞释放的il-1β和il-18细胞因子水平；用双色免疫荧光染色检测wmi组和vx-765组小鼠脑白质中lba1
+
caspase-1
+
小胶质细胞的水平；并检测了wmi组和vx-765组的小胶质细胞ldh的产生量；通过he及mbp染色观察wmi组和vx-765组小鼠的脑组织切片。
156.检测结果如图14所示。
157.vx-765降低了小胶质细胞中caspase-1的活化，caspase-1p20切割的减少，wmi后
小胶质细胞分泌的il-1β和il-18减少，白质中iba-1
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caspase-1-小胶质细胞增加，ldh水平降低，小胶质细胞的寿命延长。脑切片的he结果显示，vx-765治疗可显着减少lps注射后白质中的病变面积；mbp结果显示，vx-765治疗后，脑室周围白质区域的纤维密度和髓鞘形成增加。
158.综上可知，小胶质细胞焦亡高度参与了脑白质损伤的发病过程。抑制caspase-1活化可减轻lps给药后白质的损伤。
159.上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

技术特征：
1.靶向上调mir-214表达量的物质在非疾病治疗用途的如下a1至a4中至少一种或制备具有a1至a5中至少一种功能的产品中的应用，其特征在于，a1、抑制nek7表达；a2、抑制caspase-1的切割活化；a3、抑制细胞炎症因子的表达和/或分泌；a4、抑制细胞焦亡；a5、改善早产儿脑损伤。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述靶向上调mir-214表达量的物质包括b1至b5中的至少一种，b1、mir-214；b2、mir-214前体；b3、mir-214模拟物；b4、mir-214修饰物；b5、编码所述mir-214或所述mir-214前体的核酸分子。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，a5中，所述早产儿脑损伤包括早产儿脑白质损伤；优选地，所述改善早产儿脑损伤包括减少脑白质病变区域、提高脑室周围白质中髓鞘的长度和密度中的至少一种。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，a3中，所述细胞炎症因子包括il-1β和il-18中的至少一种。5.一种生物材料在非疾病治疗用途的如下a1至a4中至少一种或在制备具有a1至a5中至少一种功能的产品中的应用，其特征在于，a1、抑制nek7表达；a2、抑制caspase-1的切割活化；a3、抑制细胞炎症因子的表达和/或分泌；a4、抑制细胞焦亡；a5、改善早产儿脑损伤；所述生物材料包括c1至c5中的任一种，c1、编码所述mir-214或所述mir-214前体的核酸分子；c2、含有c1所述核酸分子的表达盒；c3、含有c1所述核酸分子或c2所述表达盒的重组载体；c4、含有c1所述核酸分子或c2所述表达盒或c3所述重组载体的重组细胞；c5、表达mir-214或所述mir-214前体的重组病毒。6.抑制mir-214或mir-214前体表达的物质在非疾病治疗用途的如下d1至d6中至少一种或在制备具有d1至d6中至少一种功能的产品中的应用，其特征在于，d1、促进nek7表达；d2、促进caspase-1的切割活化；d3、促进细胞炎症因子的表达和/或分泌；d4、促进细胞焦亡；
d5、增加脑白质病变区域；d6、降低脑室周围白质中髓鞘的长度和密度。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑制mir-214或mir-214前体表达的物质包括mir-214或mir-214前体的抑制剂或抑制寡核酸；优选地，d3中，所述细胞炎症因子包括il-1β和il-18中的至少一种。8.一种改变细胞中nek7基因转录的方法，其特征在于，包括以下步骤：提高所述细胞内mir-214的水平，实现抑制所述细胞中nek7基因的转录；或降低所述细胞内mir-214的水平，实现提高所述细胞中nek7基因的转录。9.mir-214作为靶点或工具在筛选具有a1至a5中至少一种功能的产品中的应用，其特征在于，a1、抑制nek7表达；a2、抑制caspase-1的切割活化；a3、抑制细胞炎症因子的表达和/或分泌；a4、抑制细胞焦亡；a5、改善早产儿脑损伤。10.一种用于防治早产儿脑白质损伤的药物组合物，其特征在于，包括靶向上调mir-214表达量的物质。

技术总结
本发明公开了一种抑制NEK7表达的miRNA的应用，涉及生物技术领域。miR-214或其模拟物能够抑制NEK7的转录、抑制Caspase-1的切割活化、抑制细胞炎症因子的表达、分泌、抑制细胞焦亡，并能够有效改善早产儿脑白质损伤，减少脑白质病变区域，提高脑室周围白质中髓鞘的长度和密度。度。


技术研发人员：何柳芳 谭震 韦婷艳 郑树芳 何君礼
受保护的技术使用者：深圳大学总医院
技术研发日：2023.02.22
技术公布日：2023/7/19