一种作为PI3Kα激酶抑制剂的苯并杂环类化合物及其制备方法与应用

一种作为pi3k
α
激酶抑制剂的苯并杂环类化合物及其制备方法与应用
技术领域
1.本发明涉及医药化工技术领域，具体涉及一种作为pi3kα激酶抑制剂的苯并杂环类化合物及其制备方法与应用。


背景技术：

2.据世卫组织统计，2020年确诊的癌症患者数量达到1930万，而死于癌症的人数增加到1000万。研究表明，恶性肿瘤与激酶系统的关系密切，各种激酶的过度激活能够导致其下游信号转导发生异常，从而对肿瘤的发生、发展、转移和预后产生重要的影响。pi3k通路是人类癌症中激活最频繁的通路之一，影响了近50％的恶性肿瘤，并且pi3k信号通路还会影响恶性肿瘤细胞的增殖、存活、转录、翻译和代谢等过程，因此针对该通路中的pi3k等激酶的有机小分子激酶抑制剂已成为分子靶向抗肿瘤药物研发的热点。
3.磷脂酰肌醇3-激酶(pi3ks)是丝氨酸/苏氨酸脂质激酶家族，是pi3k/akt/mtor信号转导通路的关键信号元件，在调节细胞生长、增殖、运动和存活中发挥重要作用。pi3k通路的主要机制为：在信号刺激细胞膜表面受体后，pi3k主要通过两种不同方式被活化，一种是通过p110和ras的相结合；另一种是与rtks或gpcrs发生相互作用，改变二聚体空间构象，形成活性形式。活化的pi3k能够使特异性磷酸化pip2，生成pip3。pip3作为第二信使与下游akt的ph结构域结合，使胞浆中的akt向细胞膜转位，使细胞膜上的pdk1催化akt的thr308和ser473位点发生磷酸化，导致akt被激活。活化的akt脱离细胞膜进入胞浆或细胞核内，激活或抑制下游多种蛋白，如mtor、bad、gsk-3、foxo、caspase及parp等，调节细胞的生长、分化、凋亡和血管生成等各个生理环节。pi3k根据其激活机制的差异、结构特征和底物的选择可分为i、ii和iii类。i类pi3k激酶包括pi3kα、pi3kβ、pi3kγ和pi3kδ亚型。这四种亚型都与肿瘤的发生发展有关，尤其是pi3kα与肿瘤密切相关。pi3kα是含有催化亚基p110α和调节亚基p85/55/50的二聚体，由pik3ca基因编码。根据作用靶点，pi3k抑制剂大致可分为3种：pi3k-mtor双重靶向抑制剂、泛pi3k抑制剂和pi3k选择性抑制剂，pi3k选择性抑制剂在实体瘤中pik3ca基因的重要性大及其突变率高,使得pi3kα抑制剂成为研究的热点。
4.pi3k抑制剂的研究已经有20年的历史，已有近30余种候选药物进入临床试验，其中有一半已经进入ii期临床试验，鉴于pi3k抑制剂与恶性肿瘤和激酶系统的关系非常密切，其抑制剂已成为潜在的抗癌药物，并且现已有以下6种pi3k抑制剂获美国食品药物监督管理局(fda)的批准上市：
[0005][0006]
目前，在四种i类pi3k亚型(α、β、δ和γ)中，pi3kα通过pik3ca基因扩增或突变，引起多种恶性肿瘤的发生与发展。据统计，29％的乳腺癌和大约40％的hr+/her2-乳腺癌携带异常的pi3kα信号。因泛pi3k抑制剂缺乏亚型选择性而产生非靶点相关副作用，如骨髓抑制等；而pi3k/mtor双靶点抑制剂同样因副作用大迄今未有药物上市。因此，亚型选择性pi3kα抑制剂的研发是当前研究的重要方向，寻找一种具有更高的激酶抑制与细胞抗增殖活性的亚型选择性pi3kα抑制剂，是目前研究的重点。


技术实现要素：

[0007]
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种作为pi3kα激酶抑制剂的苯并杂环类化合物及其制备方法与应用，具体是通过以下技术方案得以实现的：
[0008]
一种作为pi3kα激酶抑制剂的苯并杂环类化合物，其含有如下通式(i)表示的结构：
[0009][0010]
进一步的，所述通式(ⅰ)中，a是如下结构中的一种：
[0011]
进一步的，所述r1，是如下结构中的一种：
[0012]
(1)所述r1为r2nh-，其中r2为1-6个直链或支链烷基；
[0013]
(2)所述r1为r2nh-，其中r2为三元至八元含氮杂环化合物、含氮螺环化合物或桥环化合物；
[0014]
(3)所述r1为r2nhco-，其中r2为1-6个直链或支链烷基；
[0015]
(4)所述r1为r2nhco-，其中r2为三元至八元含氮杂环化合物、含氮螺环化合物或桥环化合物。
[0016]
进一步的，所述r1为如下结构中的一种：
[0017][0018]
进一步的，所述通式(ⅰ)中与碳相连的氢可以被替换为氢的同位素氘。例如烷基可被氘代烷基替代，烷氧基可被氘代环氧基替代，苯环被氘代苯环替代，芳环可被氘代芳环替代。
[0019]
进一步的，所述的苯并杂环类化合物，包含以下其中之一的结构：
[0020]
(1)(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0021]
(2)2-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺基)丁酸甲酯；
[0022]
(3)n-(1-氨基-1-氧代丁-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0023]
(4)2-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺基)-2-甲基丙酸甲酯；
[0024]
(5)n-(1-氨基-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0025]
(6)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-l-丙氨酸甲酯；
[0026]
(7)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-l-丙氨酸；
[0027]
(8)(s)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0028]
(9)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)甲酮；
[0029]
(10)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)((4ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)甲酮；
[0030]
(11)n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0031]
(12)(s)-n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0032]
(13)(r)-n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0033]
(14)(s)-n-(1-氨基-3-(4-氟苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0034]
(15)(s,e)-n-(2-氨基-1-(4-羟基苯基)-2-氧乙基)-1-(2-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)丙-1-烯-1-基)-1h-咪唑-5-甲酰胺；
[0035]
(16)n-(1-氨基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0036]
(17)(s)-n-(1-氨基-3-(4-羟基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；
[0037]
(18)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-6-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(2-(羟甲基)吗啉代)甲酮；
[0038]
(19)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)甲酮；
[0039]
(20)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮；
[0040]
(21)1-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)吡咯烷-2-甲酰胺；
[0041]
(22)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲酮；
[0042]
(23)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲酮；
[0043]
(24)5-(2-((4ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；
[0044]
(25)5-(2-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；
[0045]
(26)5-(3-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；
[0046]
(27)5-(4-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹唑啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；
[0047]
(28)(s)-2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹唑啉-4-基)氨基)丙酰胺；
[0048]
(29)(s)-2-((7-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)丙酰胺；
[0049]
(30)2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹唑啉-4-基)氨基)乙酰胺；
[0050]
(31)2-((7-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)乙酰胺；
[0051]
(32)2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)乙酰胺。
[0052]
所述的苯并杂环类化合物的制备方法，以2-氨基-4-溴苯酚(a)为原料，原料(a)和溴化氰环合反应得到中间体(b)，中间体(b)与双联频哪醇基二硼发生suzuki偶联反应，得到中间体(c)，中间体(c)的硼酯与不同的含溴取代基片段通过suzuki偶联反应连接，得到具有通式(ⅰ)结构的目标化合物(d)。
[0053]
进一步的，具体反应式如下：
[0054][0055]
进一步的，具体反应式中d中取代基r1、a的定义与通式(ⅰ)中的取代基r1、a相同。
[0056]
一种具有选择性的pi3kα激酶抑制剂，包括权利要求1中的苯并杂环类化合物或其立体异构体、水合物或药学上可接受的盐。
[0057]
药学上可接受的盐是指把母体化合物中的碱性基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱性基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本发明药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。本发明中化合物碱性基团可与酸成盐，这些酸成盐的例子包括但不限于：与无机酸，尤其氢卤酸(如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸)、硝酸、硫酸、磷酸、碳酸等形成的盐；低级烷基磺酸，如甲磺酸，三氟甲磺酸形成的盐；与芳基磺酸，如苯磺酸或对甲苯磺酸形成的盐；与有机酸，如乙酸、富马酸、酒石酸、草酸、柠檬酸、马来酸、苹果酸或琥珀酸形成的盐；与氨基酸，如天冬氨酸或谷氨酸形成的盐。
[0058]
本发明的pi3kα激酶抑制剂还包括溶剂化物或水合物的形式，一般来说，溶剂化物或水合物的形式与非溶剂化的或非水合的形式等同，并涵盖在本发明的范围内。本发明中的某些化合物有可能存在多晶体或无定形的形式。总的来说，所有的物理形式具有同等的用途，并且应当涵盖在本发明的范围内。
[0059]
另外，除非其它方面表明，本发明所描述的选择性pi3kα激酶抑制剂中取代苯并恶唑化合物的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的(z)、(e)异构体，和(z)、(e)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。本发明选择性pi3kα激酶抑制剂中嘧啶化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。
[0060]
另外，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。
[0061]
一种药物组合物，含有如前所述的苯并杂环类化合物或其立体异构体、水合物或药学上可接受的盐。
[0062]
如前所述的苯并杂环类化合物、具有选择性的pi3kα激酶抑制剂、药物组合物，在
制备用于预防和/或治疗和/或辅助治疗pi3kα激酶过度活化引起的增殖性疾病、代谢性疾病、神经系统性疾病及恶性肿瘤的相关疾病的药物方面的应用。
[0063]
进一步的，所述代谢性疾病为糖尿病。
[0064]
进一步的，所述增殖性疾病包括结直肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、脑瘤、颈癌、cns的癌症、恶性胶质瘤、骨髓增生病、白血病或淋巴癌。
[0065]
进一步的，所述在制备用于预防和/或治疗和/或辅助治疗pi3kα激酶过度活化引起的增殖性疾病、代谢性疾病、神经系统性疾病及恶性肿瘤的相关疾病的药物方面的应用，具体是制备用于体外抑制癌症细胞生长的药物方面的应用。
[0066]
本发明人所在团队长期致力于pi3k-akt-mtor信号通路抑制剂的研究，取得了系列创新性成果(journal of medicinal chemistry,2016,59,7268-7274；european journal of medicinal chemistry,2020,204,112637；european journal of medicinal chemistry,2022,229,114055.)。本发明在前期工作基础上，公布一类苯并噁唑类pi3kα选择性抑制剂，相对于苯并噁唑类临床候选药物tak-117，本发明优选化合物具有更高的激酶抑制与细胞抗增殖活性，且亚型选择性更好。
[0067]
本文所使用的术语具有下述含义：
[0068]
术语“烷基”为包括1-20个碳原子饱和直链或支链的单价烃基，其中烷基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。其可以是：烷基基团含有1-10个碳原子；烷基基团含有1-8个碳原子；烷基基团含有1-6个碳原子；烷基基团含有1-4个碳原子。烷基基团更进一步的包括但并不限于：甲基(me，-ch3)、乙基(et，-ch2ch3)、正丙基(n-pr，-ch2ch2ch3)、异丙基(i-pr，-ch(ch3)2)、正丁基(n-bu，-ch2ch2ch2ch3)、异丁基(i-bu，-ch2ch(ch3)2)、仲丁基(s-bu，-ch(ch3)ch2ch3)、叔丁基(t-bu，-c(ch3)3)等等。术语“烷基”和其前缀“烷”在此处使用，都包含直链和支链的饱和碳链。
[0069]
术语“烷氧基”涉及到烷基的部分与前述“烷基”的定义相同，其是通过氧原子连接到“烷基”主要的碳链上形成的。
[0070]
术语“卤代烷基”或“卤代烷氧基”是表示“烷基”或“烷氧基”可以被一个或多个相同或不同卤素原子所取代的情况。其中烷基和烷氧基基团具有如本发明前述的含义，这样的例子包括但并不限于三氟甲基、三氟甲氧基等。
[0071]
术语“羟基烷基”或“羟基烷氧基”是表示“烷基”或“烷氧基”可以被一个或多个羟基所取代的情况。其中“烷基”和“烷氧基”基团具有如本发明前述的含义，这样的例子包括但并不限于羟甲基、1-羟乙基、羟丙基、1,2-二羟基丙基、羟甲氧基、1-羟乙氧基等。
[0072]
术语“卤素”、“卤原子”或“卤素原子”包括氟、氯、溴、碘。
[0073]
术语“杂环基”可以是碳基或杂原子基。“杂环基”同样也包括杂环基团与饱和或部分不饱和环或杂环并合所形成的基团。杂环包括但并不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、噻噁烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、哌啶基、高哌啶基、环氧丙基、氮杂环庚基、氧杂环庚基、硫杂环庚基、n-吗啉基、2-吗啉基、3-吗啉基、硫代吗啉基、n-哌嗪基、2-哌嗪基、3-哌嗪基、高哌嗪基、4-甲氧基-哌啶-1-基、1,2,3,6-四氢吡啶-1-基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂卓基、吡咯啉-1-基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二氧杂环己基、
1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氢噻吩基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、1,2,6-噻二嗪烷、1,1-二氧-2-基、喹嗪基和n-吡啶基尿素。并且所述杂环基可以是取代或非取代的，其中取代基可以是但并不限于氧代(＝o)、羟基、氨基、卤素、氰基、杂芳基、烷氧基、烷氨基、烷基、烯基、炔基、杂环基、巯基、硝基、芳氧基、羟基取代的烷氧基、羟基取代的烷基-c(＝o)、烷基-c(＝o)、羧基烷氧基等。
[0074]
术语“稠合双环”、“稠环”、“稠合双环基”或“稠环基”表示饱和或不饱和的稠环体系，涉及到非芳香族的双环体系。这样的体系可以包含独立的或共轭的不饱和状态，但其核心结构不包含芳香环或芳杂环(但是芳香族可以作为其上的取代基)。稠合双环中的每一个环或者是碳环或者是杂脂环族，这样的例子包括但并不限于2,3,3a,4,7,7a-六氢-1h-茚基、7-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、稠合双环[3.3.0]辛烷基、稠合双环[3.1.0]己烷基、1,2,3,4,4a,5,8,8a-八氢萘基，这些都包含在稠合双环的体系之内。并且所述稠合双环基可以是取代或非取代的，其中取代基可以是但并不限于卤素、羟基、氨基、氰基、芳基、杂芳基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、杂环基、巯基、硝基、芳氧基等。
[0075]
术语“稠合杂双环基”表示饱和或不饱和的稠环体系，涉及到非芳香族的双环体系。这样的体系可以包含独立的或共轭的不饱和状态，但其核心结构不包含芳香环或芳杂环(但是芳香族可以作为其上的取代基)。且至少一个环体系包含一个或多个杂原子，其中每一个环体系包含3-7元环，即包含1-6个碳原子和选自n、o、p、s的1-3个杂原子，在此s或p任选地被一个或多个氧原子所取代得到像so、so2、po、po2的基团，这样的例子包括但并不限于六氢-2h-[1,4]二氧噁[2,3-c]吡咯基等。并且所述稠合杂双环基可以是取代或非取代的，其中取代基可以是但并不限于卤素、羟基、氨基、氰基、芳基、杂芳基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、杂环基、巯基、硝基、芳氧基等。
[0076]
与现有技术相比，本发明创造的技术效果体现在：
[0077]
(1)本发明得到了一种全新的苯并噁唑类pi3kα选择性抑制剂化合物。
[0078]
(2)本发明所述化合物均可有效抑制pi3kα激酶，多个化合物具有优于阳性对照tak-117的pi3kα抑制活性。
[0079]
(3)本发明该类化合物结构新颖、分子量相比较小，符合类药物规则、抗肿瘤活性显著，可潜在用于相关肿瘤的治疗。
[0080]
(4)本发明所述化合物具有积极且可预见的抗增殖性疾病，尤其是抗肿瘤的临床应用价值，并具有很好的开发前景。
[0081]
(5)本发明所述化合物具有成本低、疗效佳、毒性小的特点。本发明的化合物在合成过程中的中间产物收率高，降低了资源浪费，进而有利于降低成本。
具体实施方式
[0082]
下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
[0083]
下面所描述的实施例中除非其他方面表明所有的温度定为摄氏度。试剂购买于商品供应商如alfa aesar chemical company、百灵威科技有限公司、阿拉丁试剂有限公司、北京偶合科技有限公司等，使用时都没有经过进一步纯化，除非其他方面表明。一般的试剂从汕头西陇化工厂、广州化学试剂厂、天津致远化学试剂有限公司和青岛海洋化工厂等购
买得到。
[0084]
下面所描述的实施例中色谱柱使用硅胶柱，硅胶(200-300目)购于青岛海洋化工厂。核磁共振光谱以cdc13或dmso-d6为溶剂(以ppm为单位)，用tms(0ppm)或氯仿(7.26ppm)作为参照标准。当出现多重峰的时候，将使用下面的缩写：s(singlet，单峰)，d(doublet，双峰)，t(triplet，三重峰)，m(multiplet，多重峰)，br(broadened，宽峰)，dd(doublet of doublets，四重峰)，dt(doublet of triplets，双三重峰)。偶合常数，用赫兹(hz)表示。
[0085]
下面所描述的实施例中低分辨率质谱(ms)数据通过配备g1311b四元泵和g1316btcc(柱温保持在30℃)的agilent6120系列lc-ms的光谱仪来测定的，g1329b自动采样器和g1315cdad检测器应用于分析，esi源应用于lc-ms光谱仪。
[0086]
下面所描述的实施例中注射体积是通过样品浓度来确定；流速为0.5ml/min；hplc的峰值是通过在210nm和254nm处的uv-vis波长来记录读取的。流动相为异丙醇/正己烷(40：60)。
[0087]
下面描述的实施例为了便于表述，部分原料会以其简称进行描述，这些简称与其全称对照说明如下：dcm为ch2cl2，即二氯甲烷；cdc13为氘代氯仿；pe为石油醚；etoac与ea均为乙酸乙酯；meoh与ch3oh均为甲醇；pd(pph3)4为四三苯基膦钯；dipea为n,n-二异丙基乙胺；dmso-d6为六氘代二甲亚砜；dme为乙二醇二甲醚；na2so4为硫酸钠。
[0088]
实施例1：(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0089][0090]
合成方法包括以下步骤：
[0091]
步骤1：5-溴苯并[d]恶唑-2-胺的合成
[0092]
5-溴苯并[d]恶唑-2-胺的结构式：
[0093][0094]
称取原料2-氨基-4-溴苯酚(16.04mmol)放入250ml茄形瓶中，加入meoh溶解，在搅拌的条件下加入溴化氰(19.25mmol)，室温下搅拌反应，tlc监测反应完毕，反应液在减压下真空浓缩，加入nahco3水溶液淬灭，用水和ea(3
×
100ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到深黄色固体，用ea多次洗涤即可得到产物。黄色固体，收率：88.13％。hrms(esi)calcd.for c7h6brn2o[m+h]+:212.9585,found:212.9588；
[0095]
步骤2：5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-胺的合成
[0096]
5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-胺的结构式：
[0097]
[0098]
于100ml茄形瓶中依次加入5-溴苯并[d]恶唑-2-胺(10.37mmol)、双联频哪醇基二硼(12.45mmol)、醋酸钾(31.14mmol)、pd(dppf)cl2(1.03mmol)，用1,4-二氧六环溶解，将反应置换上氮气，在100℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，移去氮气，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色固体，用ea多次洗涤即可得到产物。黄色固体，收率：78.63％。hrms(esi)calcd.for c
13h18
bn2o3[m+h]+:261.1332,found:261.1456；
[0099]
步骤3：6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯的合成
[0100]
6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯的结构式：
[0101][0102]
称取原料2-氨基-5-溴吡啶(6.66mmol)和2-氯-3-氧代丙酸乙酯(6.66mmol)放入100ml茄形瓶中，加入乙腈溶解，将反应置换上氮气，移至80℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，移去氮气，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析(pe:ea＝10:1)纯化，得到白色固体，收率：89.14％。hrms(esi)calcd.for c
10h10
brn2o2[m+h]+:268.9847,found:268.9854。
[0103]
步骤4：6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸的合成
[0104]
6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸的结构式：
[0105][0106]
于100ml茄形瓶中依次加入6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酸乙酯(4.47mmol)和氢氧化锂水合物(13.43mmol)，用meoh/thf/h2o(4:1:1)溶解，在室温下搅拌反应1h即可，tlc监测原料反应毕，减压下真空浓缩，加入1nhcl调节ph至1-2，析出大量固体，减压下抽滤，取滤饼即可得到产物。白色固体，收率：88.65％。hrms(esi)calcd.for c8h4brn2o2[m+h]-:238.9534,found:238.9532。
[0107]
步骤5：(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基-6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺的合成
[0108]
(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基-6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺的结构式：
[0109][0110]
于100ml茄形瓶中依次加入6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羧酸(2.08mmol)、d-丙氨酰胺(3.12mmol)、tcfh(2.5mmol)、nmi(7.28mmol)，用乙腈溶解，将反应置换上氮气，在室温下搅拌反应过夜，tlc监测原料反应毕，减压下真空浓缩，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到白色絮状物，减压下抽滤，用dcm多次洗涤
得到产物。白色固体，收率：88.08％。hrms(esi)calcd.for c
11h12
brn4o2[m+h]+:311.0065,found:311.0078。
[0111]
步骤6：(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺的合成
[0112]
(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺的结构式：
[0113][0114]
于100ml茄形瓶中依次加入(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基-6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺(0.48mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-胺(0.48mmol)、碳酸钠(1.45mmol)、四三苯基膦钯(0.048mmol)，用1,4-二氧六环溶解，将反应置换上氮气，在100℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，移去氮气，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析(dcm:meoh＝10:1)纯化，得到白色固体，收率：69.14％。hrms(esi)calcd.for c
18h17
n6o3[m+h]+:365.1284,found:365.1288。
[0115]
实施例2：2-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺基)丁酸甲酯，结构式如下：
[0116][0117]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为2-氨基丁酸甲酯，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：49.84％。hrms(esi)calcd.for c
20h20
n5o4[m+h]+:394.1437,found:394.1456。
[0118]
实施例3：n-(1-氨基-1-氧代丁-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0119][0120]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为2-氨基丁酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：38.84％。hrms(esi)calcd.for c
19h19
n6o3[m+h]+:379.1440,found:379.1444。
[0121]
实施例4：2-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺基)-2-甲基丙酸甲酯，结构式如下：
[0122][0123]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为2-氨基-2-甲基丙酸甲酯，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：45.84％。hrms(esi)calcd.for c
20h20
n5o4[m+h]+:394.1437,found:394.1456。
[0124]
实施例5：n-(1-氨基-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0125][0126]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为2-氨基-2-甲基丙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：48.84％。hrms(esi)calcd.for c
19h19
n6o3[m+h]+:379.1440,found:379.1444。
[0127]
实施例6：(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-l-丙氨酸甲酯，结构式如下：
[0128][0129]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为l-丙氨酸甲酯，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：48.84％。hrms(esi)calcd.for c
19h18
n5o4[m+h]+:379.1281,found:379.1444。
[0130]
实施例7：(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-l-丙氨酸，结构式如下：
[0131][0132]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为l-丙氨酸，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：48.84％。hrms(esi)calcd.for c
18h16
n5o4[m+h]-:364.1124,found:364.1444。
[0133]
实施例8：(s)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0134][0135]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段改为l-丙氨酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：45.84％。hrms(esi)calcd.for c
18h17
n6o3[m+h]+:365.1284,found:365.1288。
[0136]
实施例9：(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)甲酮，结构式如下：
[0137][0138]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为(4ar,7as)-六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：45.84％。hrms(esi)calcd.for c
21h20
n5o4[m+h]+:406.1437,found:406.1445。
[0139]
实施例10：(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)((4ar,7ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)甲酮，结构式如下：
[0140][0141]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为(4ar,7ar)-六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：45.84％。hrms(esi)calcd.for c
21h20
n5o4[m+h]+:406.1437,found:406.1445。
[0142]
实施例11：n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0143][0144]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为2-氨基-2-苯乙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：55.84％。hrms(esi)calcd.for c
23h19
n6o3[m+h]+:427.1440,found:427.1445。
[0145]
实施例12：(s)n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0146][0147]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为(s)2-氨基-2-苯乙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：55.84％。hrms(esi)calcd.for c
23h19
n6o3[m+h]+:427.1440,found:427.1445。
[0148]
实施例13：(r)n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0149][0150]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为(r)2-氨基-2-苯乙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：55.84％。hrms(esi)calcd.for c
23h19
n6o3[m+h]+:427.1440,found:427.1445。
[0151]
实施例14：(s)-n-(1-氨基-3-(4-氟苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0152][0153]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为(s)-2-氨基-3-(4-氟苯基)丙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：34.67％。hrms(esi)calcd.for c
24h20
fn6o3[m+h]+:459.1503,found:459.1445。
[0154]
实施例15：(s,e)-n-(2-氨基-1-(4-羟基苯基)-2-氧乙基)-1-(2-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)丙-1-烯-1-基)-1h-咪唑-5-甲酰胺，结构式如下：
[0155][0156]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为(s)2-氨基-3-(4-羟基苯基)乙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：52.84％。hrms(esi)
calcd.for c
23h19
n6o4[m+h]+:443.1390,found:443.1445。
[0157]
实施例16：n-(1-氨基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0158][0159]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为2-氨基-3-苯乙基-丙酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：23.76％。hrms(esi)calcd.for c
24h21
n6o3[m+h]+:441.1597,found:441.1445。
[0160]
实施例17：(s)-n-(1-氨基-3-(4-羟基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺，结构式如下：
[0161][0162]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为l-酪胺酰胺，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：53.84％。hrms(esi)calcd.for c
24h21
n6o4[m+h]+:457.1546,found:457.1445。
[0163]
实施例18：(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-6-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(2-(羟甲基)吗啉代)甲酮，结构式如下：
[0164][0165]
合成方法：将实施例1中步骤6中取代杂环片段换为羟甲基吗啉，其他步骤及操作同实施例1；步骤6得到产物为白色固体，收率：41.12％。hrms(esi)calcd.for c
20h20
n5o4[m+h]+:394.1437,found:394.1445。
[0166]
实施例19：(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)甲酮，结构式如下：
[0167]c21h23
n6o2[m+h]+:391.1804,found:391.1845。
[0181]
实施例24：5-(2-((4ar,7ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺，结构式如下：
[0182][0183]
合成方法包括以下步骤：
[0184]
步骤1：6-溴喹喔啉-2-醇的合成
[0185]
6-溴喹喔啉-2-醇的结构式：
[0186][0187]
于100ml茄形瓶中依次加入喹喔啉-2-醇(13.7mmol)、浓硫酸(14ml)、ag2so4(6.8mmol)和br2(13.6mmol)在室温下搅拌15h，tlc监测原料反应毕，过滤混合物以除去agbr，用硫酸清洗固体，将合并的滤液倒在冰上，过滤收集白色固体，用水、乙醇和乙醚洗涤，然后干燥，得到产物。白色固体，收率：80.13％。hrms(esi)calcd.for c8h6brn2o[m+h]+:224.9585,found:224.9556；
[0188]
步骤2：6-溴-2-氯喹喔啉的合成
[0189]
6-溴-2-氯喹喔啉的结构式：
[0190][0191]
向充分搅拌的6-溴-喹喔啉-2-醇(5.28mmol)在三氯氧化磷(4.5ml)中的悬浮液中加入dmf(3ml)。将温度缓慢升至80℃并剧烈放出hcl，将温度缓慢升高至120℃持续1.5小时。将深色残余物倒在含有nahco3的冰上并保持温度低于15℃来中和，过滤固体，用水洗涤并将固体溶解在二氯甲烷中。用无水na2so4将其干燥，并通过硅藻土过滤。真空除去溶剂，得到6-溴-2-氯-喹喔啉。白色固体，收率：58.71％。hrms(esi)calcd.for c8h5brcln2[m+h]+:242.9246,found:242.9556；
[0192]
步骤3：(4ar，7ar)-6-(6-溴喹喔啉-2-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯的合成
[0193]
(4ar)-6-(6-溴喹喔啉-2-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯的结构式：
[0194][0195]
于100ml茄形瓶中依次加入6-溴-2-氯-喹喔啉(3.3mmol)、(4ar，7ar)-六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯(9.9mmol)，用dmso溶解，置换氮气保护，在80℃下搅拌15h，tlc监
测原料反应毕，移去氮气，用水和ea(3
×
100ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到深黄色固体，硅胶柱层析(pe:ea＝2:1)得到产物。白色固体，收率：60.13％。hrms(esi)calcd.for c
14h15
brn3o2[m+h]+:336.0269,found:336.0278；
[0196]
步骤4：5-(2-((4ar，7ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺的合成
[0197]
5-(2-((4ar，7ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺的结构式：
[0198][0199]
于100ml茄形瓶中依次加入(4ar)-6-(6-溴喹喔啉-2-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯(8.3mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-胺(8.3mmol)、碳酸钠(24.9mmol)、四三苯基膦钯(0.83mmol)，用1,4-二氧六环溶解，将反应置换上氮气，在100℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，移去氮气，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析(dcm:meoh＝10:1)纯化，得到白色固体，收率：41.09％。hrms(esi)calcd.for c
21h20
n5o3[m+h]+:390.1488,found:390.1489；
[0200]
实施例25：5-(2-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺，结构式如下：
[0201][0202]
合成方法：将实施例24中步骤3中取代杂环片段换为(4ar,7as)-六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯，其他步骤及操作同实施例24；步骤4得到产物为黄色固体，收率：32.26％。hrms(esi)calcd.for c
21h20
n5o3[m+h]+:390.1488,found:390.1489；
[0203]
实施例26：5-(3-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺，结构式如下：
[0204][0205]
合成方法包括以下步骤：
[0206]
步骤1：7-溴喹喔啉-2-醇的合成
[0207]
7-溴喹喔啉-2-醇的结构式：
[0208][0209]
称取原料4-溴苯-1,2-二胺(10.7mmol)放入250ml茄形瓶中，加入乙腈溶解，在搅拌的条件下加入乙醛酸-2-乙酯(10.7mmol)，在80℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色固体，用ea多次洗涤即可得到产物。白色固体，收率：88.63％。hrms(esi)calcd.for c8h6brn2o[m+h]+:224.9585,found:224.9556；
[0210]
步骤2：7-溴-2-氯喹喔啉的合成
[0211]
7-溴-2-氯喹喔啉的结构式：
[0212][0213]
称取7-溴喹喔啉-2-醇(5.3mmol)放入100ml茄形瓶中，用乙腈溶解，在0℃下加入三氯氧磷(6.9mmol)，dipea(10.6mmol)和nmm(4.24mmol)，冰浴下反应10min，后移至80℃下反应过夜，tlc监测原料反应毕，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析可得到产物。白色固体，收率：81.13％。hrms(esi)calcd.for c8h5brcln2[m+h]+:242.9246,found:242.9556；
[0214]
步骤3：6-(4ar,7as)-(7-溴喹喔啉-2-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯的合成
[0215]
6-(4ar,7as)-(7-溴喹喔啉-2-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯的结构式：
[0216][0217]
于100ml茄形瓶中依次加入6-溴-2-氯-喹喔啉(3.3mmol)、(4ar,7as)-六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯(9.9mmol)、tea(19.8mmol)，用dmf溶解，在100℃下反应过夜，tlc监测原料反应毕，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析可得到产物。黄色固体，收率：71.36％。hrms(esi)calcd.for c
14h15
brn3o2[m+h]+:336.0269,found:336.0278；
[0218]
步骤4：5-(3-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺的合成
[0219]
5-(3-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺的结构式：
[0220][0221]
于100ml茄形瓶中依次加入6-(4ar,7as)-(7-溴喹喔啉-2-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯(8.3mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]恶
唑-2-胺(8.3mmol)、碳酸钠(24.9mmol)、四三苯基膦钯(0.83mmol)，用1,4-二氧六环溶解，将反应置换上氮气，在100℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，移去氮气，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析(dcm:meoh＝10:1)纯化，得到黄色固体，收率：37.29％。hrms(esi)calcd.for c
21h20
n5o3[m+h]+:390.1488,found:390.1489；
[0222]
实施例27：5-(4-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹唑啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺，结构式如下：
[0223][0224]
合成方法包括以下步骤：
[0225]
步骤1：6-溴喹唑啉-4-醇的合成
[0226]
6-溴喹唑啉-4-醇的结构式：
[0227][0228]
称取原料2-氨基-5-溴苯甲酸(10.0mmol)放入250ml茄形瓶中，加入乙酸溶解，在搅拌的条件下加入盐酸甲脒(10.0mmol)，120℃下搅拌反应，tlc监测反应完毕，加入nahco3水溶液淬灭，用水和ea(3
×
100ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到深黄色固体，用ea多次洗涤即可得到产物。黄色固体，收率：68.13％。hrms(esi)calcd.for c7h6brn2o[m+h]+:224.9585,found:224.9588；
[0229]
步骤2：6-溴-4-氯喹唑啉的合成
[0230]
6-溴-4-氯喹唑啉的结构式：
[0231][0232]
称取6-溴喹唑啉-4-醇(5.3mmol)放入100ml茄形瓶中，用乙腈溶解，在0℃下加入三氯氧磷(6.9mmol)，dipea(10.6mmol)和nmm(4.24mmol)，冰浴下反应10min，后移至80℃下反应过夜，tlc监测原料反应毕，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析可得到产物。白色固体，收率：75.68％。hrms(esi)calcd.for c8h5brcln2[m+h]+:242.9246,found:242.9556；
[0233]
步骤3：(4ar,7as)-6-(6-溴喹唑啉-4-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯的合成
[0234]
(4ar,7as)-6-(6-溴喹唑啉-4-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯的结构式：
[0235][0236]
于100ml茄形瓶中依次加入6-溴-4-氯-喹唑啉(3.3mmol)、(4ar,7as)-六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯(9.9mmol)、tea(19.8mmol)，用dmf溶解，在100℃下反应过夜，tlc监测原料反应毕，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析可得到产物。白色固体，收率：80.62％。hrms(esi)calcd.for c
14h15
brn3o2[m+h]+:336.0269,found:336.0278；
[0237]
步骤4：5-(4-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹唑啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺的合成
[0238]
5-(4-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹唑啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺的结构式：
[0239][0240]
于100ml茄形瓶中依次加入(4ar,7as)-6-(6-溴喹唑啉-4-基)六氢-5h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯(8.3mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-胺(8.3mmol)、碳酸钠(24.9mmol)、四三苯基膦钯(0.83mmol)，用1,4-二氧六环溶解，将反应置换上氮气，在100℃下回流反应过夜，tlc监测原料反应毕，移去氮气，向反应混合物加入水和ea(3
×
50ml)萃取，无水na2so4干燥，减压下真空浓缩得到黄色油状物，硅胶柱层析(dcm:meoh＝10:1)纯化，得到黄色固体，收率：41.04％。hrms(esi)calcd.for c
21h20
n5o3[m+h]+:390.1488,found:390.1489；
[0241]
实施例28：(s)-2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹唑啉-4-基)氨基)丙酰胺，结构式如下：
[0242][0243]
合成方法：将实施例27中步骤3中取代杂环片段换为l-丙氨酰胺，其他步骤及操作同实施例27；步骤4得到中间体为黄色固体，收率：46.47％。hrms(esi)calcd.for c
18h17
n6o2[m+h]+:349.1350,found:349.1378；
[0244]
实施例29：(s)-2-((7-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)丙酰胺，结构式如下：
[0245][0246]
合成方法：将实施例26中步骤3中取代杂环片段换为l-丙氨酰胺，其他步骤及操作同实施例26；步骤4得到产物为黄色固体，收率：45.47％。hrms(esi)calcd.for c
18h17
n6o2[m+h]+:349.1350,found:349.1398；
[0247]
实施例30：2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹唑啉-4-基)氨基)乙酰胺，结构式如下：
[0248][0249]
合成方法：将实施例27中步骤3中取代杂环片段换为甘氨酰胺，其他步骤及操作同实施例27；步骤4得到中间体为黄色固体，收率：45.47％。hrms(esi)calcd.for c
17h15
n6o2[m+h]+:335.1178,found:335.1178；
[0250]
实施例31：2-((7-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)乙酰胺，结构式如下：
[0251][0252]
合成方法：将实施例26中步骤3中取代杂环片段换为甘氨酰胺，其他步骤及操作同实施例26；步骤4得到产物为黄色固体，收率：42.40％。hrms(esi)calcd.for c
17h15
n6o2[m+h]+:335.1178,found:335.1178；
[0253]
实施例32：2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)乙酰胺，结构式如下：
[0254][0255]
合成方法：将实施例24中步骤3中取代杂环片段换为甘氨酰胺，其他步骤及操作同实施例24；步骤4得到中间体为黄色固体，收率：45.90％。hrms(esi)calcd.for c
17h15
n6o2[m+h]+:335.1178,found:335.1178.
[0256]
通过以下实验来说明本发明通式(i)代表的化合物所具有的有益效果和应用。
[0257]
体外pi3kα激酶抑制测试：
[0258]
本发明化合物抑制pi3kα激酶活性，由此抑制细胞信号通路的转导，从而影响细胞周期和细胞增殖。此类化合物对pi3kα激酶的抑制作用通过下述lance ultra荧光试验方法评价。
[0259]
检测原理：lance ultra荧光试验是一种均质的非放射性的检测方法，它是通过检
测激酶反应后体系中atp的含量来定量测定纯化激酶的活性。atp含量的测定是通过由mg
2+
、atp和氧催化萤火虫荧光素(beetle luciferin)发生氧化后产生的光强度来定量的。在反应体系中加入一定量的atp，激酶反应需要消耗atp，剩余的atp可以与kinase glo试剂中的萤火虫荧光素酶发生反应后发光，从而可以定量检测剩余的atp的量，间接测定反应激酶的活性。
[0260]
检测方法：首先准备好1
×
kinase buffer,其中含有50mm hepes，ph 7.5，1mm egta，0.01％tween-20；用100％dmso对化合物溶解并进行梯度稀释，转移10nl稀释后的化合物到检测板中，同时配制不含化合物的control组和不含激酶的空白对照组。1
×
kinase buffer加入pi3kα配制激酶溶液，取5μl加入到检测板中涡旋混匀。另外准备1
×
kinase reaction buffer含有4e-bp1(thr 37/46,pe)多肽以及atp底物，取5μl加入到孔板启动来反应，在室温条件下反应1h后，将含edta和eu-anti-p-4e-bp1(thr 37/46,pe)抗体pbs缓冲液，取10μl加入到孔板中，室温条件下孵育60min，对孔板进行读数并统计数据计算化合物对pi3kα激酶的抑制率。将抑制率和相对应的浓度代入
[0261]
graphpad prism软件进行曲线拟合，计算出ic
50
值。
[0262]
细胞活性实验：
[0263]
cell counting kit(cck-8)法评价化合物对细胞的增殖抑制活性，通过单浓度活性初筛和多浓度测定半数抑制浓度ic
50
值。
[0264]
细胞毒性(cck-8法)检测原理：cck-8试剂中含有wst
–
8，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-methoxypms)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
[0265]
实验方法：
[0266]
(1)接种细胞：用含10％胎牛血清的培养液将细胞配成单个细胞悬液，96孔板每孔接种90μl5
×
104/ml的贴壁细胞和9
×
104/ml的悬浮细胞，在5％co2，37℃的条件下预培养24h。
[0267]
(2)加入待测样品溶液：每孔加入10μl样品溶液，活性初筛每个样品设置1个浓度，设3个复孔；ic50测定8个浓度(含0浓度)，每种浓度均设3个复孔；置于培养箱培养48h。实验设置空白组(blank)、对照组(control)和药物组(drug)。
[0268]
(3)显色：贴壁细胞吸出旧培养基和药物溶液(悬浮细胞直接加入10μlcck-8溶液原液)，每孔加入稀释十倍的100μlcck-8溶液，在37℃，5％co2继续培养1-4h(避光操作，实时观察)。
[0269]
(4)检测：用酶标仪测定450nm处吸光度，记录原始数据结果。
[0270]
(5)应用excel软件进行原始数据标准化处理，初筛通过每孔od值计算细胞增殖抑制率(公式＝(odcontrol-oddrug)/(odcontrol-odblank)
×
100％)，统计抑制率。ic
50
通过graphpadprism8(版本8.0.2,graphpadsoftwareinc)计算，实验结果用
±
sd表示。
[0271]
(6)阳性对照：盐酸阿霉素doxorubicin(dox)。
[0272]
激酶试验结果见表1，从下表1中活性数据可知，本发明所述化合物均可有效抑制pi3kα激酶，对其具有较好的抑制活性，即大多化合物pi3kα激酶的抑制活性(ic
50
)均在纳摩尔水平(1-999nm)，且与ⅱ期临床候选药物tak-117相比，本发明中多个化合物具有优于阳性对照tak-117的pi3kα抑制活性，如实施例1、实施例2、实施例4、实施例5、实施例8、实施例
11、实施例13、实施例14、实施例18、实施例20、实施例21、实施例26和实施例27，尤其是实施例9、实施例26、实施例27其ic50值分别高达7.0nm、2.5nm和5.5nm。为了进一步验证化合物对pi3kα的选择性，挑选激酶活性优良的化合物实施例9、实施例26和实施例27进行pi3k各亚型激酶抑制活性测试，结果见表2所示，与tak-117相比，实施例9、实施例26和实施例27均对pi3kα具有较好的选择性，其中实施例9的pi3kα选择性相比其他亚型高达100倍左右，尤其是对pi3kβ的选择性极佳，实施例26的pi3kα选择性相比其他亚型高达200倍左右，并且对其他三个亚型均有pi3kα选择性，实施例27具有一般选择性，四个亚型的活性相当。进一步挑选激酶活性优良的化合物实施例9和实施例26测试细胞活性，其抗增殖活性结果如表3所示，明显表现出化合物26对多株癌细胞均显示出优于tak-117的高抗癌活性,而化合物9仅显示出和tak-117相当的抗癌活性。值得注意的是，对pi3kα激酶具有高抑制活性的化合物对多株癌细胞也显示出高抗癌活性，特别是在这些细胞中，如mkn-45、hct116、hela、k-562、5637、gbc-sd、mcf-7、hepg2、cal-62、a-375及293，其抗癌细胞增殖活性均优于tak-117，尤其是针对hepg2人肝癌细胞具有极优的活性结果，其抗增殖活性高达80.32％，优于阳性药tak-117的增殖活性约5倍。以上结果表明，本发明所述化合物具有积极且可预见的抗增殖性疾病，尤其是抗肿瘤的临床应用价值，并具有很好的开发前景。
[0273]
表1目标化合物pi3kα激酶体外抑制活性
[0274][0275]
表2所选化合物对i类pi3ks的活性
[0276][0277]
表3目标化合物对各种癌细胞的抗增殖活性
[0278][0279]
最后，应当指出，以上实施例仅是本发明较有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种作为pi3kα激酶抑制剂的苯并杂环类化合物，其特征在于，其含有如下通式(i)表示的结构：2.如权利要求1所述的苯并杂环类化合物，其特征在于，所述通式(ⅰ)中，a是如下结构中的一种：3.如权利要求1所述的苯并杂环类化合物，其特征在于，所述r1，是如下结构中的一种：(1)所述r1为r2nh-，其中r2为1-6个直链或支链烷基；(2)所述r1为r2nh-，其中r2为三元至八元含氮杂环化合物、含氮螺环化合物或桥环化合物；(3)所述r1为r2nhco-，其中r2为为1-6个直链或支链烷基；(4)所述r1为r2nhco-，其中r2为三元至八元含氮杂环化合物、含氮螺环化合物或桥环化合物。4.如权利要求3所述的苯并杂环类化合物，其特征在于，所述r1为如下结构中的一种：
5.如权利要求1所述的苯并杂环类化合物，其特征在于，所述通式(ⅰ)中与碳相连的氢可以被替换为氢的同位素氘。6.如权利要求1所述的苯并杂环类化合物，其特征在于，包含以下其中之一的结构：(1)(r)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(2)2-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺基)丁酸甲酯；(3)n-(1-氨基-1-氧代丁-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1，2-a]吡啶-3-甲酰胺；(4)2-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺基)-2-甲基丙酸甲酯；(5)n-(1-氨基-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(6)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-l-丙氨酸甲酯；(7)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)-l-丙氨酸；(8)(s)-n-(1-氨基-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(9)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)甲酮；
(10)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)((4ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)甲酮；(11)n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(12)(s)-n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(13)(r)-n-(2-氨基-2-氧代-1-苯乙基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(14)(s)-n-(1-氨基-3-(4-氟苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(15)(s,e)-n-(2-氨基-1-(4-羟基苯基)-2-氧乙基)-1-(2-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)丙-1-烯-1-基)-1h-咪唑-5-甲酰胺；(16)n-(1-氨基-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(17)(s)-n-(1-氨基-3-(4-羟基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑[1,2-a]吡啶-3-甲酰胺；(18)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-6-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(2-(羟甲基)吗啉代)甲酮；(19)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)甲酮；(20)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(哌嗪-1-基)甲酮；(21)1-(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-羰基)吡咯烷-2-甲酰胺；(22)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3-甲氧基吡咯烷-1-基)甲酮；(23)(6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)甲酮；(24)5-(2-((4ar)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；(25)5-(2-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二恶英[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；(26)5-(3-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹喔啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；(27)5-(4-((4ar,7as)-六氢-6h-[1,4]二氧基[2,3-c]吡咯-6-基)喹唑啉-6-基)苯并[d]恶唑-2-胺；(28)(s)-2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹唑啉-4-基)氨基)丙酰胺；(29)(s)-2-((7-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)丙酰胺；(30)2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹唑啉-4-基)氨基)乙酰胺；(31)2-((7-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)乙酰胺；
(32)2-((6-(2-氨基苯并[d]恶唑-5-基)喹喔啉-2-基)氨基)乙酰胺。7.权利要求1-6任一项所述的苯并杂环类化合物的制备方法，其特征在于，以2-氨基-4-溴苯酚(a)为原料，原料(a)和溴化氰环合反应得到中间体(b)，中间体(b)与双联频哪醇基二硼发生suzuki偶联反应，得到中间体(c)，中间体(c)的硼酯与不同的含溴取代基片段通过suzuki偶联反应连接，得到具有通式(ⅰ)结构的目标化合物(d)。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，具体反应式如下：9.一种具有选择性的pi3kα激酶抑制剂，其特征在于，包括权利要求1中的苯并杂环类化合物或其立体异构体、水合物或药学上可接受的盐。10.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1中的苯并杂环类化合物或其立体异构体、水合物或药学上可接受的盐。11.权利要求1所述的苯并杂环类化合物、权利要求9所述的具有选择性的pi3kα激酶抑制剂、权利要求10所述的药物组合物，在制备用于预防和/或治疗和/或辅助治疗pi3kα激酶过度活化引起的增殖性疾病、代谢性疾病、神经系统性疾病及恶性肿瘤的相关疾病的药物方面的应用。

技术总结
本发明涉及医药化工技术领域，具体涉及一种作为PI3Kα激酶抑制剂的苯并杂环类化合物及其制备方法与应用。本发明得到了一种全新的苯并噁唑类PI3Kα选择性抑制剂化合物。本发明所述化合物均可有效抑制PI3Kα激酶，多个化合物具有优于阳性对照TAK-117的PI3Kα抑制活性。本发明该类化合物结构新颖、分子量相比较小，符合类药物规则、抗肿瘤活性显著，可潜在用于相关肿瘤的治疗。本发明所述化合物具有积极且可预见的抗增殖性疾病，尤其是抗肿瘤的临床应用价值，并具有很好的开发前景。本发明所述化合物具有成本低、疗效佳、毒性小的特点。本发明的化合物在合成过程中的中间产物收率高，降低了资源浪费，进而有利于降低成本。进而有利于降低成本。


技术研发人员：张吉泉 郑雪梅 王丽丽 陈瑞 班玉娟 李宏亮
受保护的技术使用者：贵州医科大学
技术研发日：2022.12.30
技术公布日：2023/7/19