一种视黄醇乙酸酯的用途和含视黄醇乙酸酯的抑制剂的制作方法

1.本技术涉及皮肤抗炎领域，具体而言，涉及一种视黄醇乙酸酯的用途和含视黄醇乙酸酯的抑制剂。


背景技术：

2.维生素a最早由美国科学家margaret davis在鲟鱼肝脏中提取。由于脂溶性的特点，这种黄色粘稠状液体首先被命名为“脂溶性a”，后来随着研究的深入，于1920正式命名为“维生素a”。视黄醇是维生素a的一种形式，之所以被称为视黄醇，是因为它和视力的关系非常密切。研究已证实类视黄醇家族在抗衰老、祛痘、美白、抗氧化等方面有显著功效。其中抗皮肤衰老为视黄醇及其衍生物的主要活性，尤其是对于皮肤光老化、皱纹等形成衰老的有良好作用。
3.据信，视黄醇能够降低肿瘤坏死因子α的表达(a fg,viegas jsr,peh hy,garbin tn,medina wsg,bentley mvlb.microemulsion co-delivering vitamin a and vitamin e as a new platform for topical treatment of acute skin inflammation.mater sci eng c mater biol appl.2020may；110:110639.doi:10.1016/j.msec.2020.110639.epub 2020jan7.pmid:32204073.)。在该文献中，以使用tpa(佛波醇-12-十四烷酰-13-棕榈酸酯)作为损伤模型所进行的动物实验结果显示，视黄醇能够显著降低肿瘤坏死因子α的表达。
4.另外，paul at等的研究(paul at,gohil vm,bhutani kk.modulating tnf-alpha signaling with natural products.drug discov today.2006aug；11(15-16):725-32.doi:10.1016/j.drudis.2006.06.002.pmid:16846800.)中提到：视黄醇不仅能够抑制肿瘤坏死因子α的表达，还能够减少其释放。


技术实现要素：

5.总体来说，视黄醇能起到很好地抑制肿瘤坏死因子α(tnf-α)的表达的作用，但是对于视黄醇衍生物在抑制肿瘤坏死因子α方面的研究较少。
6.本技术的发明人经过大量研究发现，在使用uvb(ultraviolet radiation b)照射后，3t3细胞中tnf-α的表达量显著提升。在分别使用不同浓度的视黄醇、羟基频哪酮视黄酸酯(hpr)、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯对3t3细胞进行处理后发现，视黄醇、羟基频哪酮视黄酸酯(hpr)、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯在使用浓度较高时，均呈现出增加3t3细胞中tnf-α表达的效果。然而，在视黄醇乙酸酯的使用浓度较低(约25ug/ml)时，会对tnf-α起到显著抑制的效果。
7.本技术的一个方面，提供了一种视黄醇乙酸酯的用途，所述视黄醇乙酸酯用于抑制3t3细胞中tnf-α的表达；其中，所述视黄醇乙酸酯的浓度为15～35ug/ml。
8.本技术的另一方面，提供了一种tnf-α表达的抑制剂，所述抑制剂中至少包括浓度为15～35ug/ml的视黄醇乙酸酯。
9.有益效果：
10.通过以低浓度(15～35ug/ml)的方式使用视黄醇乙酸酯，能够抑制tnf-α的表达，减少3t3细胞中的炎症因子。
附图说明
11.本技术还提供了与所提供的技术方案有关的附图来说明本技术的技术方案。附图及说明的目的仅为更清楚地描述本技术，不应被看作是对本技术要求保护的范围的限定。
12.图1示出本技术中类视黄醇物质在经uvb处理后的tnf-α的表达量的elisa检测结果。
具体实施方式
13.为使本技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例不是全部的实施例。
14.本技术的一种实施方式中描述的元素和特征可以与一个或更多个其它实施方式中示出的元素和特征相结合。应当注意，为了清楚的目的，说明中省略了与本技术无关的、本领域普通技术人员已知的部件和处理的表示和描述。
15.定义
16.在本文中，限定的所有范围是指：包括给定范围内的每个特定范围以及给定范围之间的子范围的组合。例如，1～5的范围具体包括1、2、3、4和5，也包括如2～5、3～5、2～3、2～4、1～4等子范围。
17.在本文中，“视黄醇乙酸酯”是指式(i)中示出的物质。其cas号为。
18.式(i)
19.在本文中，“tnf-α”是指：α肿瘤坏死因子。
20.在本文中，“抑制tnf-α的表达”是指：降低或者减少tnf-α的从cdna到mrna的转录水平。
21.在本文中，“3t3细胞”是指：来源为nih瑞士小鼠(nih swiss mice)的胚胎成纤维细胞。
22.在本文中，“uvb”是指：ultraviolet radiation b。uvb的波长为280～320nm。
23.本技术
24.本技术提供了一种视黄醇乙酸酯的用途，所述视黄醇视黄醇乙酸酯用于抑制3t3细胞中tnf-α的表达；其中，所述视黄醇乙酸酯的浓度为15～35ug/ml。
25.可选地，所述视黄醇乙酸酯用于抑制强度为80mj/cm2的uvb照射下3t3细胞中tnf-α的表达。
26.可选地，所述视黄醇乙酸酯的浓度为20～30ug/ml。
27.可选地，所述视黄醇乙酸酯的浓度为22～28ug/ml。
28.本技术还提供了一种tnf-α的抑制剂，所述抑制剂中至少包括浓度为15～35ug/ml的视黄醇乙酸酯。
29.可选地，所述抑制剂中所述视黄醇乙酸酯的浓度为20～30ug/ml。
30.可选地，所述抑制剂中所述视黄醇乙酸酯的浓度为22～28ug/ml。
31.实验部分
32.样品及制备
33.视黄醇、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、羟基频哪酮视黄酸酯(hpr)；
34.使用时用dmso配置成15mg/ml的母液备用。
35.实验步骤
36.设置空白组、模型组、药物组(每个浓度设置6个重复孔)；
37.(1)3t3细胞铺板：每孔(96孔板)加入100μl细胞悬液，置于co2培养箱中，于37℃，5％co2条件下培养20～24小时。
38.(2)配液：配制受试物。
39.(3)造模：培养24h后，扣掉培养基，加入100μl的pbs溶液，洗出加入的pbs溶液，再使用紫外交联仪对细胞进行uvb处理(80mj/cm2)。
40.(4)给药：uvb处理后，将配制好的样品分别加入96孔板对应位置进行给药，将培养板置于37℃、5％co2条件下继续培养24h。
41.(5)细胞上清收集：孵育培养结束后，每孔收集100μl细胞培养上清液于1.5ml无菌离心管中，置于-80℃超低温冰箱冷冻保存。
42.(6)细胞沉淀收集：加入胰酶消化合适时间，用ep管收集细胞沉淀，1000rpm离心5min，去除上清液后加入pbs离心两次，1000rpm离心5min后弃去上清，置于-80℃超低温冰箱冷冻保存。
43.(7)胞内蛋白收集：将细胞加预冷至4℃的pbs洗涤细胞两次，吸掉上清。加入200μl ripa裂解液，超声破碎1.5min；用干净的刮棒快速将细胞刮于培养瓶的一侧，裂解10min后收集于ep管中；在4℃下，12000rpm离心5min，将离心后的上清转运至离心管中，置于-80℃超低温冰箱冷冻保存。
44.根据免疫试剂盒的使用说明书进行elisa检测，elisa实验结果如表1和图1所示。
45.表1
46.分组体积浓度tnf-α含量control/0.197
±
0.002model/0.247
±
0.002视黄醇5ug/ml0.251
±
0.003视黄醇25ug/ml0.276
±
0.012视黄醇50ug/ml0.239
±
0.027视黄醇乙酸酯5ug/ml0.241
±
0.02视黄醇乙酸酯25ug/ml0.208
±
0.017*视黄醇乙酸酯50ug/ml0.287
±
0.007视黄醇丙酸酯5ug/ml0.213
±
0.009视黄醇丙酸酯25ug/ml0.226
±
0.014视黄醇丙酸酯50ug/ml0.242
±
0.003视黄醇丙酸酯150ug/ml0.277
±
0.019hpr5ug/ml0.229
±
0.002hpr25ug/ml0.234
±
0.015
hpr50ug/ml0.302
±
0.025
47.根据检测结果可知，在3t3细胞中，不同类型的类视黄醇(视黄醇、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、hpr)随着使用浓度的增加，不仅没有抑制炎症因子tnf-α的效果，相反还会大量增加tnf-α的表达，产生内分泌效应，对细胞的正常功能造成影响。而唯有视黄醇乙酸酯在使用浓度为25ug/ml左右时，3t3细胞中的tnf-α表达明显下降而且具有显著性。
48.基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
49.本领域的普通技术人员，可以对上述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本技术各实施例技术方案的保护范围。

技术特征：
1.一种视黄醇乙酸酯的用途，其特征在于，所述视黄醇乙酸酯用于抑制3t3细胞中tnf-α的表达；其中，所述视黄醇乙酸酯的浓度为15～35ug/ml。2.如权利要求1所述用途，其特征在于，所述视黄醇乙酸酯用于抑制强度为80mj/cm2的uvb照射下3t3细胞中tnf-α的表达。3.如权利要求2所述用途，其特征在于，所述视黄醇乙酸酯的浓度为20～30ug/ml。4.如权利要求3所述用途，其特征在于，所述视黄醇乙酸酯的浓度为22～28ug/ml。5.一种α肿瘤坏死因子的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂中至少包括浓度为15～35ug/ml的视黄醇乙酸酯。6.如权利要求5所述抑制剂，其特征在于，所述抑制剂中所述视黄醇乙酸酯的浓度为20～30ug/ml。7.如权利要求6所述抑制剂，其特征在于，所述抑制剂中所述视黄醇乙酸酯的浓度为22～28ug/ml。

技术总结
本申请提供了一种视黄醇乙酸酯的用途和含视黄醇乙酸酯的抑制剂，其中，所述视黄醇乙酸酯用于抑制3T3细胞中TNF-α的表达；其中，所述视黄醇视黄醇乙酸酯的浓度为15～35ug/ml。通过以低浓度(15～35ug/ml)的方式使用视黄醇乙酸酯能够抑制3T3细胞中TNF-α的表达，减少3T3细胞中的炎症因子。3T3细胞中的炎症因子。


技术研发人员：李孟庚 舒鹏
受保护的技术使用者：深圳市护家科技有限公司
技术研发日：2023.04.11
技术公布日：2023/7/20