一种L858R突变三代TKI耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用

一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用
技术领域
1.本发明涉及肿瘤生物学领域以及生物医学技术领域，尤其涉及一种l858r突变三代tki一线耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用。


背景技术：

2.肺癌是严重危害人类生命和健康的常见恶性肿瘤。肺癌分为小细胞肺癌(small lung cancer，sclc)和非小细胞肺癌(non-small lung cancer，nsclc)，其中非小细胞肺癌占肺癌的70-80％。传统非小细胞肺癌的治疗包括手术、化疗和放疗。随着对肿瘤发病机制及其生物学行为研究的深入，目前人们把焦点聚向了特异性高、不良反应轻的分子靶向治疗。
3.目前发现的非小细胞肺癌的发病机制中，表面生长因子(epidermal growth factor receptor，egfr)突变是亚洲人群最常见的驱动基因，egfr络氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor，egfr-tki)是含有该突变的首要治疗方式。egfr敏感亚型的突变主要包括19号外显子缺失(19del)和21号外显子l858r突变，约占egfr突变的90％。目前临床上应用的第一代egfr-tki有厄洛替尼、吉非替尼和埃克替尼，主要用于egfr 19del和l858r突变。第二代egfr-tki有阿法替尼，适应同一代egfr-tki，但是其为一种不可逆egfr抑制剂，主要针对egfr的g719x、l861q和s768i等罕见突变。第三代包括奥希替尼(azd9291)、co-1686等化合物，不可逆抑制egfr，并且对发生t790m耐药突变的患者仍有效。但无论是一代、二代还是三代egfr-tki抑制剂使用一段时间后皆会出现耐药情况。
4.面对肿瘤耐药这一棘手问题，目前很多科研人员聚焦在egfr-tki耐药机制的研究中，致力于开发能够抑制egfr异常表达的药物。因此，充分掌握药物的耐药机制，并寻找与egfr激酶结合的最佳方式是需要不断探索的。然而，目前对egfr抑制剂耐药的肺癌原代细胞株模型仍很少见。以往是一线用一代，耐药之后用三代，自从2019年第三版nccn指南指出三代tki是非小细胞肺癌egfr突变阳性晚期患者的优先使用推荐后，三代tki可以一线用，因此出现了三代tki一线用的耐药情况，且缺乏更贴近体内实际情况的原代耐药株模型。因此，现有技术还有待于改进。


技术实现要素：

5.鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用，建立了一种azd9291耐药人肺癌细胞株nsclc-001t，该细胞株除携带egfr 21号外显子l858r突变外；同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变。该细胞株对三代tki的ic50是携带同样突变h1975野生细胞株对三代tki ic50的30.29倍。这种一线用第三代egfr-tki耐药人原代肺癌细胞株的建立，可成为研究l858r突变非小细胞肺癌的耐药机制、耐药性逆转、开发和评价新的抗癌药
物和方法等的重要工具。
6.本发明的技术方案如下：
7.一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，命名为细胞株nsclc-001t，保藏编号为gdmcc no:63192。
8.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，其中，所述细胞株nsclc-001t携带egfr 21号外显子l858r突变。
9.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，其中，第三代tki耐药的细胞株，同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变。
10.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在制备三代tki耐药制剂中的应用。
11.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在筛选三代tki耐药逆转剂中的应用。
12.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在在构建人非小细胞肺癌体内外三代tki耐药的肿瘤模型中的应用。
13.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在制备抗肿瘤药物的应用。
14.所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在抗肿瘤药物筛选中的应用。
15.有益效果：本发明提供了一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用。本发明从患者术后组织样本中提取残余获得性第三代egfr-tki耐药细胞株，其原代细胞株nsclc-001t对奥希替尼的ic50是携带同样突变h1975野生细胞株对奥希替尼ic50的30.29倍，该细胞株同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变。该细胞株可用于l858r突变三代tki获得性耐药机制的探讨及其相关信号通路的研究，分析抗肿瘤药物敏感性，筛选抗肿瘤药物或者开发肿瘤耐药逆转药物，以及研究更有效的肿瘤治疗方法等，具有较高的科研和生产应用价值，预期能产生良好的科研、经济和社会效益。
附图说明
16.图1为本发明实施例提供的患者治疗疗程图。
17.图2为本发明实施例提供的原代细胞株str检测结果示意图。
18.图3为本发明实施例提供的原代细胞株nsclc-001t的外显子测序总体变异百分比示意图。
19.图4为本发明实施例提供的原代细胞株nsclc-001t的生长曲线图以及细胞株nsclc-001t和细胞株h1975的药敏性实验结果图。
20.图5为本发明实施例提供的细胞株nsclc-001t的细胞形态示意图。
具体实施方式
21.本发明提供一种l858r突变三代tki一线耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当
理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
22.本发明实施例提供了一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，命名为细胞株nsclc-001t，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏日期为2023年2月24日，保藏编号为gdmcc no:63192。
23.本发明公开的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株nsclc-001t，所述细胞株是从一名59岁男性患者手术切除的癌组织样本中制备获取残余部分获得性奥希替尼耐药株，本患者临床分期为iiia期低分化腺癌，治疗前基因检测egfr_21号外显子l858r突变，患者使用第三代egfr-tki靶向药物奥希替尼(azd9291)进行口服治疗。本发明从治疗后的组织中提取原代细胞株进行wes测序发现，所述细胞株nsclc-001t携带egfr 21号外显子l858r突变；第三代tki耐药的细胞株，同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变：其中，pdgfra(10号外显子第1432号t碱基突变成c碱基，478号氨基酸从丝氨酸突变成脯氨酸)，kit(14号外显子第2134号碱基t突变成c，第712号丝氨酸突变成脯氨酸)，atm(第40号外显子第5948号碱基a突变成g，第1983号天冬酰胺突变成丝氨酸)。
24.l858r突变一线用三代tki耐药原代肿瘤细胞株nscls-001t是携带l858r的患者一代tki敏感，以往是一线用一代，耐药之后用三代，自从2019年第三版nccn指南指出三代tki是非小细胞肺癌egfr突变阳性晚期患者的优先推荐后，三代tki可以一线用，因此出现了三代tki一线用的耐药情况，且缺乏更贴近体内实际情况的原代耐药株模型。患者给与“培美曲塞二钠+卡铂+贝伐珠单抗+奥希替尼口服”方案治疗2次(间隔24天)，随后一直口服奥希替尼至89天进行手术，具体的治疗疗程如图1所示。h1975是携带21号外显子l858r突变的商用细胞株，对一代tki敏感，三代可用。本发明从患者术后组织样本中提取残余部分获得性第三代tki耐药细胞株(原代细胞株nsclc-001t对azd9291的ic50是携带同样突变h1975野生细胞株对奥希替尼ic50的30.29倍)。第三代tki耐药的细胞株，同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变。
25.本发明的l858r突变三代tki耐药原代肿瘤细胞nsclc-001t的建立方法为：
26.(一)提取原代细胞
27.1、准备支持细胞
28.1.1准备好完全培养基，配方为dmem+10％fbs+双抗；
29.1.2将3t3-j2小鼠成纤维细胞从液氮中取出来，马上放入37℃中水浴锅中尽快解冻；
30.1.3将3t3-j2细胞加入5ml完全培养基中1000rpm/min，室温离心5min；
31.1.4去上清，加入1ml完全培养基轻柔吹打均匀；
32.1.5加入t25培养瓶中进行培养
33.1.6细胞培传代培养到拟合度达80-90％丰度后加入含有丝裂霉素c(2-4ug/ml)3ml，2h，使其成为非增殖细胞，可作为支持细胞；
34.1.7去除含有药物的培养基，加入dmem完全培养基进行培养，为下一步的的原代细胞培养作为支持细胞用。
35.2、组织消化成为单个肿瘤细胞进行培养
36.1.1收集非小细胞肺癌患者术后肿瘤组织0.5
×
0.5
×
0.5cm3肿瘤组织；
37.1.2将肿瘤组织过无水乙醇不超过3秒；
38.1.3将肿瘤组织夹入加有双抗的生理盐水中冲洗；
39.1.4在2.0ml离心管中加入1.0ml配好的胶原消化酶；
40.1.5将冲洗好的组织加入胶原酶中用剪刀剪碎并置于37℃水浴锅中进行消化25分钟；
41.1.6往消化好的组织中加入含10％的pbs终止消化；
42.1.7将终止消化的组织过70目筛，用pbs冲洗细胞筛；
43.1.8 1000rpm/min，室温离心5min去除上清，加入5ml红细胞裂解液裂解5-10min；
44.1.9加入10ml pbs终止红细胞裂解，1000rpm/min，室温离心5min，去除上清；
45.1.10加入肿瘤完全培养基轻柔吹打细胞；
46.1.11将细胞吸入已加有支持细胞的t25瓶子置于37℃，5％ co2培养箱中进行培养；
47.1.12 48h内不移动细胞培养瓶，4天换一次支持细胞；
48.1.13 8-16天左右观察是否形成原代肿瘤细胞克隆。
49.(二)原代细胞培养
50.2.1在装有原代肿瘤细胞的培养瓶中吸出培养基，加入3ml pbs洗涤细胞；
51.2.2吸去pbs，加入3ml edta细胞消化液置于37℃，5％ co2培养箱中消化5min；
52.2.3 5min后吸取含10％ fbs的pbs终止消化，去除支持细胞，用pbs洗涤完全去除支持细胞；
53.2.4吸取1ml胰酶加入培养瓶中置于37℃，5％ co2培养箱中消化5min，消化期间注意观察细胞消化情况；
54.2.5加入3ml含有10％fbs的pbs终止胰酶消化反应；
55.2.6吸取细胞置于15ml离心管中以1000rpm/min，室温离心5min，去除上清；
56.2.7细胞按照要求以1:2或1:3传代于t75培养瓶中，或者进行冻存。
57.(三)细胞株str检测
58.str基因位点由长度为3～7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，可作为高度多态性标记，并可通过pcr(聚合酶链式反应)来检测。str基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法，即可根据所得的str分型结果与专业的细胞str数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。
59.样品处理及检验方法：
60.将培养的细胞悬液、细胞沉淀等用基因组提取试剂盒抽提全基因组dna，微量紫外可见分光光度计qc检测dna浓度。使用ige-str20a进行多荧光体系复合扩增，使用abi3730xl遗传分析仪进行毛细管电泳、片段分离并采用id软件进行基因型分析。按照(asn-0002-2011)要求必检的8个核心str位点和1个性别位点的基因分型结果。
61.本发明实施例还提供所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株nsclc-001t在制备三代tki耐药制剂中的应用。
62.本发明实施例还提供所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株nsclc-001t在筛选三代tki耐药逆转剂中的应用。
63.本发明实施例还提供所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株nsclc-001t在构建人非小细胞肺癌体内外三代tki耐药的肿瘤模型中的应用。
64.本发明实施例还提供所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株nsclc-001t在制备抗肿瘤药物的应用。
65.本发明实施例还提供所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株nsclc-001t在抗肿瘤药物筛选中的应用。
66.本发明获得一种人非小细胞肺癌使用奥希替尼后获取的残余部分获得性耐药肿瘤细胞株，本细胞株可用于奥希替尼获得性耐药的机理机制探索研究，研究奥希替尼耐药人非小细胞肺癌细胞形态学及生物学特点、研究肿瘤耐药机制、分析抗肿瘤药物敏感性及筛选和评估抗肿瘤药物、开发肿瘤耐药逆转药物、研究更有效的肿瘤治疗方法等，并可用于非小细胞肺癌耐药机制的探讨及其相关信号通路的研究，具有较高的科研和生产应用价值，预期能产生良好的科研、经济和社会效益。
67.下面通过具体实施例对本发明一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用做进一步的解释说明：
68.实施例1l858r突变三代tki耐药原代肿瘤细胞株的筛选
69.从一名59岁男性患者手术切除的癌组织样本中制备获得获得性奥希替尼耐药株，本患者临床分期为iiia期低分化腺癌，治疗前穿刺组织样本进行基因检测结果是egfr_21号外显子l858r突变，患者给与“培美曲塞二钠+卡铂+贝伐珠单抗+奥希替尼口服”方案治疗2次(间隔24天)，随后一直口服奥希替尼至89天进行手术，具体的治疗疗程如图1所示。最终获得残余部分奥希替尼耐药肿瘤细胞株，命名为细胞株nsclc-001t。其中，wes测序发现所述细胞株nsclc-001t携带egfr 21号外显子l858r突变；同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变：其中，pdgfra(10号外显子第1432号t碱基突变成c碱基，478号氨基酸从丝氨酸突变成脯氨酸)，kit(14号外显子第2134号碱基t突变成c，第712号丝氨酸突变成脯氨酸)，atm(第40号外显子第5948号碱基a突变成g，第1983号天冬酰胺突变成丝氨酸)。
70.(一)提取原代细胞
71.1、准备支持细胞
72.1.1准备好完全培养基，配方为dmem+10％fbs+双抗；
73.1.2将3t3-j2成纤维细胞细胞从液氮中取出来，马上放入37℃中水浴锅中尽快解冻；
74.1.3将3t3-j2细胞加入5ml完全培养基中1000rpm/min，室温离心5min；
75.1.4去上清，加入1ml完全培养基轻柔吹打均匀；
76.1.5加入t25培养瓶中进行培养
77.1.6细胞培传代培养到拟合度达80-90％丰度后加入含有丝裂霉素c(2-4ug/ml)3ml，2h，使其成为非增殖细胞，可作为支持细胞；
78.1.7去除含有药物的培养基，加入dmem完全培养基进行培养，为下一步的的原代细胞培养作为支持细胞用。
79.2、组织消化成为单个肿瘤细胞进行培养
80.1.1收集非小细胞肺癌患者术后肿瘤组织0.5
×
0.5
×
0.5cm3肿瘤组织；
81.1.2将肿瘤组织过无水乙醇不超过3秒；
82.1.3将肿瘤组织夹入加有双抗的生理盐水中冲洗；
83.1.4在2.0ml离心管中加入1.0ml配好的胶原消化酶；
84.1.5将冲洗好的组织加入胶原酶中用剪刀剪碎并置于37℃水浴锅中进行消化25分钟；
85.1.6往消化好的组织中加入含10％的pbs终止消化；
86.1.7将终止消化的组织过70目筛，用pbs冲洗细胞筛；
87.1.8 1000rpm/min，室温离心5min去除上清，加入5ml红细胞裂解液裂解5-10min；
88.1.9加入10ml pbs终止红细胞裂解，1000rpm/min，室温离心5min，去除上清；
89.1.10加入肿瘤完全培养基轻柔吹打细胞；
90.1.11将细胞吸入已加有支持细胞的t25瓶子置于37℃，5％ co2培养箱中进行培养；
91.1.12 24h内不移动细胞培养瓶，3-5天换一次支持细胞；
92.1.13 7-14天左右观察是否形成原代肿瘤细胞克隆。
93.(二)原代细胞培养
94.2.1在装有原代肿瘤细胞的培养瓶中吸出培养基，加入3ml pbs洗涤细胞；
95.2.2吸去pbs，加入3ml edta细胞消化液置于37℃，5％ co2培养箱中消化5min；
96.2.3 5min后吸取含10％ fbs的pbs终止消化，去除支持细胞，用pbs洗涤完全去除支持细胞；
97.2.4吸取1ml胰酶加入培养瓶中置于37℃，5％ co2培养箱中消化5min，消化期间注意观察细胞消化情况；
98.2.5加入3ml含有10％fbs的pbs终止胰酶消化反应；
99.2.6吸取细胞置于15ml离心管中以1000rpm/min，室温离心5min，去除上清；
100.2.7细胞按照要求以1:2或1:3传代于t75培养瓶中，或者进行冻存。
101.(三)细胞株str检测
102.将培养的细胞悬液、细胞沉淀等用基因组提取试剂盒抽提全基因组dna，微量紫外可见分光光度计qc检测dna浓度。使用ige-str20a进行多荧光体系复合扩增，使用abi3730xl遗传分析仪进行毛细管电泳、片段分离并采用id软件进行基因型分析。按照(asn-0002-2011)要求必检的8个核心str位点和1个性别位点的基因分型结果。
103.本发明实施例检测21个基因座，要求必检的8个核心str位点和1个性别位点的基因分型结果以“基因座/等位基因长度”来表示：amelogenin/x/y，vwa/15/18，d7s820/9.2/10，csf1po/12/12，d16s539/9/11，th01/6/7，d13s317/8/12，tpox/8/11，d5s818/10/11。将纯化后的肺癌原代细胞进行str检测，结果如图2所示，证实其为单一人类来源，且无交叉污染的细胞。
104.实施例2细胞株全外显子的检测
105.采用qiagen dneasy blood&tissue kit试剂盒对实施例1得到的细胞株培养的细
胞悬液、细胞沉淀等进行dna提取。使用covaris m220focused-ultrasonicator(covaris)对dna进行打断后构建测序文库。采用安捷伦sureselect human all exon v6 kit对每个样本进行捕获，结果如图3所示：其中indel为插入缺失，外显子(exonic)突变占插入缺失的8.02％(数目为586)，内含子(intronic)突变占插入缺失的65.45％，其他突变占插入缺失的26.53％；snp是单核苷酸多态性(指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的dna序列多态性)，其中外显子(exonic)突变占34.82％(数目为24051)，内含子(intronic)突变占33.46％，同义单核苷酸突变(synonymous_snv)占19.53％，其他突变占12.17％。
106.实施例3细胞株生长曲线测定
107.1、按照实施例1提供的方法对细胞株nsclc-001t进行培养，其形态如图4所示，由图可知，肿瘤细胞成立体形态，细胞状态良好。
108.2、用含有0.25％edta胰酶将培养的细胞株(原代肿瘤细胞)消化成单细胞悬液并计数；
109.3、按照每孔1000个细胞，铺入96孔板中，每组6孔；每隔24小时加入10μl cck8试剂，37℃孵育1小时后，使用酶标仪在λ＝490nm的条件下测出每孔的od值，连续检测5天，得到细胞株的生长曲线，如图5a所示。
110.实施例4细胞株药物敏感性检测
111.将对数期生长的h1975细胞株和nsclc-001t细胞株分别配置成每孔2000细胞；待细胞贴壁后吸去培养基，分别加入100μl含10μm、5μm、2.5μm、1μm、500nm、250nm、50nm、25nm、12.5nm、0nm azd9291完全培养基，同一浓度3个复孔。加药后48小时，每孔加入10μl cck8，2小时后酶标仪检测处吸光值。其中，抑制率(％)＝(对照组od值-试验组od值)/对照组od值
×
100％；耐药指数(ri)＝原代细胞ic50/对照细胞ic50。检测结果如图5b所示，原代细胞株nsclc-001t对azd9291的ic50是携带同样l858r突变h1975野生细胞株对azd9291 ic50的30.29倍，大于10倍以上，所以细胞株nsclc-001t是临床上获取的一线用三代tki获得性耐药细胞株。
112.综上所述，本发明提供了一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用。本发明的一种l858r突变三代tki耐药非小细胞肺癌原代细胞株nscls-001t是携带l858r的患者一代tki敏感，以往是一线用一代，耐药之后用三代，自从2019年第三版nccn指南指出三代tki可作为非小细胞肺癌egfr突变阳性晚期患者的优先推荐使用后，三代tki可以一线用，因此出现了三代tki一线用的耐药情况，且缺乏更贴近体内实际情况的原代耐药株模型。本发明患者给与“培美曲塞二钠+卡铂+贝伐珠单抗+奥希替尼口服”方案治疗2次(间隔24天)，随后一直口服奥希替尼至89天进行手术。本发明从患者术后组织样本中提取获得性第三代egfr-tki耐药细胞株。该细胞株同时携带egfr 21号外显子突变l858r，同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变。该细胞株nsclc-001t对奥希替尼的ic50是携带同样突变h1975野生细胞株对奥希替尼ic50的30.29倍。该细胞株可以用于研究l858r三代tki耐药机制，分析抗肿瘤药物敏感性及筛选抗肿瘤药物、开发肿瘤耐药逆转药物、研究更有效的肿瘤治疗方法等；并可用于l858r突变第三代egfr-tki非小细胞肺癌发病机理的探讨及其相关信号通路的研究，具有较高的科研和生产应用价值，预期能产生良好的科研、经济和社会效益。
113.应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可
以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

技术特征：
1.一种l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，命名为细胞株nsclc-001t，保藏编号为gdmcc no:63192。2.如权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，其特征在于，所述细胞株nsclc-001t携带egfr 21号外显子l858r突变。3.如权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株，其特征在于，第三代tki耐药的细胞株，同时携带pdgfra 10号外显子突变、kit 14号外显子突变、atm 40号外显子突变。4.权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在制备三代tki耐药制剂中的应用。5.权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在筛选三代tki耐药逆转剂中的应用。6.权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在构建人非小细胞肺癌体内外三代tki耐药的肿瘤模型中的应用。7.权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在制备抗肿瘤药物的应用。8.权利要求1所述的l858r突变三代tki耐药的人非小细胞肺癌细胞株在抗肿瘤药物筛选中的应用。

技术总结
本发明提供了一种L858R突变三代TKI耐药的人非小细胞肺癌细胞株及其应用。本发明从患者术后组织样本中提取残余获得性三代TKI一线耐药细胞株，该细胞株除携带EGFR 21号外显子L858R突变外，同时携带PDGFRA 10号外显子突变、KIT 14号外显子突变、ATM 40号外显子突变。L858R突变是一代TKI敏感，三代TKI可用，但该细胞株于临床上一线用三代TKI耐药。该细胞株可用于研究L858R第三代EGFR-TKI获得性耐药机制，研究相关信号通路，开发肿瘤耐药逆转药物，研究更有效的肿瘤治疗方法等，具有较高的科研和生产应用价值。和生产应用价值。和生产应用价值。


技术研发人员：李谨 冯凤兰
受保护的技术使用者：广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心）
技术研发日：2023.03.10
技术公布日：2023/7/20