一种细胞色素P450氧化酶及其编码基因和应用

一种细胞色素p450氧化酶及其编码基因和应用
技术领域
1.本发明涉及一种细胞色素p450氧化酶，以及编码所述酶的基因，所述酶涉及雷公藤重要活性成分雷公藤福定和/或新雷公藤福定生物合成的最终关键步骤，属于药用植物基因工程领域。


背景技术：

2.雷公藤(tripterygium wilfordii.hook.f.)是传统中药雷公藤的植物来源，被广泛用于类风湿性关节炎和炎症的治疗。二萜类成分为雷公藤的主要活性成分，包括雷公藤甲素(triptolide)、雷公藤福定(tripterifordin)等。上世纪90年代，chen等发现雷公藤根的醇提物表现出显著的抗hiv活性，经过进一步的化学分离和结构鉴定，发现其中的贝壳杉烷型二萜内酯化合物——雷公藤福定和新雷公藤福定，具有显著的抗hiv-1活性，极具开发成抗艾滋病药品的潜力。目前这两种化合物的获取主要依赖于从原植物中提取分离，但是二萜类次生代谢产物在雷公藤中含量极低，大大限制了它们的应用与发展。通过挖掘途径基因，阐明萜类成分在雷公藤中的生物合成途径，利用合成生物学策略实现目标成分的高效异源生产已经成为一种环境友好且高效安全的天然资源获取方式。
3.植物中的二萜类化合物通过胞浆的甲羟戊酸(mva)途径和质体的2-甲基赤藓糖醇-4-磷酸(mep)途径生成萜类物质的通用底物异戊烯焦磷酸(ipp)及其异构体二甲丙烯焦磷酸(dmapp)；在ggpps作用下，3个ipp分子与1个dmapp分子首尾相连生成ggpp；再通过特定二萜合酶的催化形成贝壳杉烷型的二萜骨架。目前已证实twcps3和twksl2可催化雷公藤福定二萜骨架的形成(hansen nl,heskes am,hamberger b,et al.the terpene synthase gene family in tripterygium wilfordii harbors a labdane-type diterpene synthase among the monoterpene synthase tps-b subfamily[j].the plant journal,2016,89(3))。苏平等人发现twko可以催化16-羟基-对映-贝壳杉烷的c-19位氧化生成16-羟基-对映-贝壳杉烯醇，进一步还可以氧化成16-羟基-对映-贝壳杉烯酸。现亟待研究16-羟基-对映-贝壳杉烯酸的c-20位氧化与内酯环形成的生物过程，如图1所示。
[0004]
萜类化合物的氧化后修饰大部分由细胞色素p450依赖的单加氧酶(cytochrome p450 enzymes，cyp450s)完成。cyp450s是自然界中一个超大家族蛋白，能在温和的条件下催化底物发生各类反应，包括c-h键的羟基化、c＝c双键的环氧化或者甲基的羧基化，重排闭环等。它们如同“多才多艺的舞者”，还可以识别各种类型的底物，不仅包括萜类化合物，还包括脂肪酸、甾醇、黄酮、生物碱等，此外cyp450催化的反应类型也很多样，但cyp450的研究进展一直较为缓慢，其中一个重要原因就是由于cyp450的序列与功能之间缺乏相关性，甚至在氨基酸序列上的细微差别，其催化活性也完全不同，这使得cyp450的功能非常难以预测，极大地限制了植物cyp450基因资源的开发应用。
[0005]
然而，现有技术中，还没发现有任何公开或报道直接参与雷公藤福定生物合成的cyp450氧化酶，其可以实现16-羟基-对映-贝壳杉烯酸的c-20位氧化与内酯环化。


技术实现要素：

[0006]
本发明通过测定雷公藤福定在植物不同组织部位的分布差异结合候选基因的组织转录组数据，成功得到一种新型的cyp450氧化酶，并克隆得到相应cyp450氧化酶基因，实验证实其为雷公藤福定何/或新雷公藤福定生物合成的最终关键酶。
[0007]
因此，本发明的第一方面，提供了一种分离的蛋白，所述分离的蛋白，是一种细胞色素p450氧化酶(以下用tw19g00978表示)，为参与雷公藤福定和/或新雷公藤福定生物合成的关键酶，所述酶具有seq id no：2所示的氨基酸序列，或seq id no：2所示氨基酸序列经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸其功能相同的肽。
[0008]
本发明的第二方面，提供了一种编码本发明所述酶的多核苷酸(或称编码基因，以下用tw19g00978表示)，所述多核苷酸为具有seq id no：1所示核苷酸序列。
[0009]
本发明的第三方面，提供了一种包含本发明第二方面所述多核苷酸的表达载体，所述的表达载体，如可以是选自pesc系列的表达载体。
[0010]
本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，包括质粒、粘粒等。在生产本发明细胞色素p450氧化酶tw19g00978时，可以将tw19g00978编码基因的核苷酸序列可操作地连接于表达调控序列，从而形成合成雷公藤福定和/或新雷公藤福定的表达载体。所述“可操作地连接”当指dna区段时表示这些区段按照一定方式排列以致它们可以协调地为其预期的目的发挥作用，例如在启动子中起始转录并前行通过编码区段到达终止子。也指这样一种状况：即线性dna序列的某些部分能够影响同一线性dna序列其它部分活性，例如，如果信号肽dna作为前提表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)dna就是可操作地连接接于多肽dna；如果启动子控制序列转录，那么它是可操作地连接于编码序列；如果核糖体结合位点被置于能使其翻译的位置时，那么它是可操作地连于编码序列。一般，“可操作地连接”意味着相邻，而对于分泌前导序列则意味着在阅读框中相邻。
[0011]
本发明第四方面，提供了一种包含本发明第二方面所述多核苷酸、或本发明第三方面所述表达载体的重组宿主菌，所述宿主菌为酵母菌，如by系酵母菌，wat系酵母菌。
[0012]
本发明述宿主菌，包含编码本发明所述细胞色素p450氧化酶tw19g00978或其变体的多核苷酸分子，或在严谨条件下可与所述多核苷酸分子进行杂交的核苷酸分子，或包含本发明上述描述的表达载体。所述的宿主细胞选自：细菌、原核细胞(如大肠杆菌、)真菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞或植物细胞，优选地，为酵母细胞或植物细胞。
[0013]
特别有意义的酵母包括酿酒酵母、巴斯德毕赤酵母和pichia methanolica。用外源dna转化酿酒酵母细胞和从其中制备重组多肽的方法公开在例如kawassaki，美国专利us4599311，us4931373、us4870008、us5037743、us4845075等中。通过选择标记所确定的表型，通常是药物抗性或在缺少特定养分(例如亮氨酸)时的生长能力，选择转化细胞。用于酿酒酵母的优选载体系统如可以是pesc系列表达载体。用于酵母的适宜启动子和终止子包括来自糖酵解基因(us4599311、us4615974和us4977092)和醇脱氢酶的那些。用于其它酵母，包括多形汉逊氏酵母、乳克鲁维氏酵母、脆壁克鲁维氏酵母、巴斯德毕赤酵母、pichia methanolica、季也蒙氏毕赤酵母和麦芽糖假丝酵母的转化系统也是本领域已知的。
[0014]
根据常规方法在含有养分和其它对于所选宿主细胞的生长必须的成分的培养基中培养转化的或转染的宿主细胞。多种适宜的培养基，包括已知成分培养基和复杂培养基，是本领域已知的，一般包括碳源、氮源、必需氨基酸、维生素和矿物质。如果需要，培养基还
可以含有诸如生长因子或血清这样的成分。生长培养基一般通过例如药物筛选或缺少可由表达载体携带的或共转染至宿主细胞中的选择标记补充的必需养分来选择含有外源添加dna的细胞。通过常规方式，如振摇小三角瓶或发酵罐喷气给液体培养物提供充足的空气。
[0015]
本发明中，编码所述细胞色素p450氧化酶tw19g00978的多核苷酸全长序列或其片段通常可以用pcr扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于pcr扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cdna库或按本领域技术人员已知的常规方法制备cdna库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次pcr扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可通过化学合成将突变体引入本发明蛋白序列中。除了用重组法产生之外，本发明蛋白的片段还可用固相技术，通过直接合成肽而加以生产(stewart等，solid-phase pedtide synthesis,j.am.chem.soc.85:2149-2154,1963)。在体外合成蛋白质可以用手工或自动进行。例如，可以用applied biosystems的431a型肽合成仪(foster city，ca)来自动合成肽。可以分别化学合成本发明蛋白的各片段，然后用化学方法加以连接以产生全长的分子。
[0016]
本发明将克隆得到的tw19g00978基因构建表达载体，经催化实验证实其具有催化16-羟基-对映-贝壳杉烯酸发生c-20发生羟化，其并进一步与c-19位羧基发生内酯化环合生成雷公藤福定的生物学功能。
[0017]
将tw19g00978基因利用合成生物学技术整合至酿酒酵母染色体，再将tw19g00978的表达质粒导入其中，结果发现其发酵液中不仅检测到了雷公藤福定，还检测到了其同分异构体新雷公藤福定，首次在酿酒酵母中实现了二者的异源生物生产，具有极其重要的应用价值。该基因是首次从雷公藤中克隆得到的，且其涉及雷公藤福定和/或新雷公藤福定生物合成的最终关键步骤。
[0018]
因此，本发明的第五方面，提供了细胞色素p450氧化酶tw19g00978，或细胞色素p450氧化酶tw19g00978编码基因tw19g00978、或包含所述编码基因tw19g00978的表达载体、以及包含所述表达载体的宿主菌，在调节和/或合成雷公藤福定和/或新雷公藤福定中的应用。
[0019]
可以通过如下方式制备本发明所述雷公藤福定和/或新雷公藤福定，即采用生物合成方法，所述方法包括：将细胞色素p450氧化酶tw19g00978的编码基因tw19g00978导入酿酒酵母得到重组酿酒酵母，发酵重组酿酒酵母，得到雷公藤福定和/或新雷公藤福定，所述酿酒酵母如为by4741酵母系。
[0020]
本发明提供的雷公藤福定和/或新雷公藤福定的生物合成方法：如可以是利用“模块化酵母染色体整合技术”(li s,et al.development of a modularized two-step(m2s)chromosome integration technique for integration of multiple transcription units in saccharomyces cerevisiae[j].biotechnol biofuels,2016,9:232.)将细胞色素p450氧化酶tw19g00978编码基因tw19g00978表达盒整合到酵母菌中，通过酵母发酵生产雷公藤福定和/或新雷公藤福定。本发明对于培育高品质的药用植物品种特别是培育具有高雷公藤福定或新雷公藤福定含量的雷公藤品种具有重要的理论及实际意义。
附图说明
[0021]
图1为雷公藤福定生物合成途径。
[0022]
图2为雷公藤福定在雷公藤职务不同组织部位中的分布，**表示p《0.01，*表示p《0.05。
[0023]
图3为细胞色素p450氧化酶编码基因tw19g00978基因片段示意图，左边条带为dnamarker，右边条带为细胞色素p450氧化酶编码基因tw19g00978。
[0024]
图4为细胞色素p450氧化酶tw19g0097微粒体酶促uplc/q-tof ms图，ck表示空载对照组，tw19g00978表示含编码基因tw19g00978组。
[0025]
图5为产雷公藤福定和新雷公藤福定的工程酵母菌mw-1发酵检测图，ck表示空载对照组tw19g00978表示含编码基因tw19g00978组。(peak a,b,c,d为含tw19g00978基因的酵母发酵液中检测到的新产物，其中peak a,b在正离子模式下母离子峰为301.2，peak c，d在负离子模式下母离子峰为335.2。)
具体实施方式
[0026]
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0027]
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028]
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0029]
下述实施例中的雷公藤(tripterygium wilfordii hook.f.)悬浮细胞可从首都医科大学分子生药与中药资源实验室获得(王家典,赵瑜君,张逸风等.twhmgr过表达对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响.药学学报，2018,53(8):1225-1232)，雷公藤植株由福建省三明市永安市的大田桃源国有林场提供，16α-羟基-ent-贝壳杉烯酸制备于西南大学药化实验室(su p,guan hy,zhangyf,et al.probing the single key amino acid responsible for the novel catalytic function of ent-kaurene oxidase supported by nadph-cytochrome p450 reductases in tripterygium wilfordii[j].frontiers in plant science,2017,8:1756-1766.)。
[0030]
实施例1、雷公藤福定在雷公藤植株中的组织分布规律
[0031]
1.雷公藤根、茎、叶的采集与分拣
[0032]
将从福建省三明市采集得到新鲜的3株雷公藤植株，分为根、茎、叶分成3组，每组设置3个生物学重复，放入液氮中速冻2min；使用球磨机低温粉碎样品至样品成为均匀粉末，冷冻干燥48h。
[0033]
2.雷公藤福定的含量测定
[0034]
精密称定200mg干燥后的样品粉末，加入1ml 80％色谱级甲醇(v/v)，将样品浸提过夜；以功率100w，频率40khz超声提取样品1h；12000
×
g离心10min，将上清液过0.22μm ptfe微孔滤膜(津腾)，即得样品溶液，使用uplc/qqq ms进行样品溶液中雷公藤福定的含量测定。
[0035]
uplc/qqq ms液相条件：
[0036]
使用watersacquity uplc hss t3分析色谱柱，流动相为0.1％甲酸水(a)，乙腈(b)，流速0.4ml/min。0min-50％b，2min-50％b，4min-95％b，6.5min-95％b，7.5min-50％b,9min-50％b。进样量2μl。uplc/qqq ms质谱条件：正离子模式，高能扫描时，母离子设置为
kit试剂盒，按照说明书，回收目的条带。
[0054]
引物序列如下：
[0055][0056]
(3)线性化载体与带同源臂基因片段无缝拼接
[0057]
将带有同源臂的tw19g00978片段(0.01pmols)与线性化载体pesc-leu::twcpr3(noti切，0.02pmols)轻轻混合，50℃，反应25min。
[0058]
(4)连接产物转化克隆感受态细胞
[0059]
将连接产物加入到50μltrans1-t1感受态细胞中并进行测序验证验证，将测序结果使用seqman软件与原序列比对，测序正确的表达载体命名为“pesc-leu::(twcpr3+tw19g00978)”，质粒存于-20℃冰箱，备用。
[0060]
2.tw19g00978体外微粒体酶促实验
[0061]
(1)by4741酵母感受态细胞制备及酵母表达载体转化
[0062]
使用zymo research frozen-ez酵母转化试剂盒ii制作by4741酵母感受态细胞，取1μg表达载体质粒pesc-leu::(twcpr3+tw19g00978)转化入酵母感受态细胞,不含目的基因的空载体pesc-leu::twcpr3转化的酵母菌作为对照，按同样方法处理，涂sd-leu平板，30℃培养2-3d，等待单菌落长出。
[0063]
(2)tw19g00978微粒体制备
[0064]
1)挑取单菌落于5ml sd-leu+2％glc液体培养基，30℃200rpm过夜培养进行活化；
[0065]
2)将活化菌液以初始od
600
0.05接入150ml sd-leu+2％glc液体培养基，30℃200rpm培养至od
600
0.8-1，室温4000
×
g离心5min，弃上清；
[0066]
3)用150mlyp(1％yeastextract，2％peptone)+2％gal液体培养基重悬菌体，30℃，200rpm诱导16h；
[0067]
4)室温4000
×
g离心3min，弃上清，用15ml tek溶液(50mm tris-hcl,1mm edta,ph 7.5,0.1m kcl)重悬菌体，室温静置5min；
[0068]
5)4℃，4000
×
g离心3min，弃上清，用100ml预冷的tesb(50mm tris-hcl,1mm edta,ph 7.5,0.1m kcl,0.6m sorbitol)重悬菌体；
[0069]
6)将菌体重悬液使用提前预冷的ats高压细胞破碎仪以》1000psi的压力破碎7min，收集破碎液；
[0070]
7)4℃，12000
×
g离心15min，取上清液加入nacl(至终浓度0.15mm)和peg 4000(至终浓度为0.1g
·
ml-1
)，充分混匀后冰中静置15min，使微粒体完全沉降；
[0071]
8)4℃，12000
×
g离心15min，弃上清，沉淀微粒体用2ml预冷的teg(含20％甘油的te溶液)溶解，即可用于后续酶促反应。
[0072]
(3)tw19g00978微粒体酶促反应及产物检测
[0073]
微粒体酶促体系如下：
[0074][0075][0076]
上述体系加完各组分之后充分混匀，30℃100rpm，反应12h后，用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，氮气吹干后，加入100μl色谱级甲醇，涡旋30s复溶，12000
×
g高速离心10min，取上清进uplc/q-tof ms进行产物分析，结果如图4所示。
[0077]
uplc/q-tof ms液相条件：
[0078]
使用watersacquity uplc hss t3分析色谱柱，流动相为0.1％甲酸水(a)，乙腈(b)，流速为0.4ml/min。0min-5％b，2min-40％b，3min-40％b，13min-60％b，14.5min-100％b，15min-100％b，15.5min-5％b，16min-95％b。进样量：2μl。uplc/q-tof ms质谱条件：正离子模式、负离子模式均检测，高能扫描时，斜坡碰撞能量设置为20～40ev。数据采集ms范围为50-1500da。
[0079]
结果发现，以16-羟基-对映-贝壳杉烯酸为底物的实验组相比于照组在负离子模式下可以检测到一个新的产物c峰(peak c)，保留时间为4.68min，分子量为335.2173，产物c相比于底物的分子量增加16，因此推定该产物是底物发生羟化反应而来；同时，正离子模式下，检测到产物a(peak a)，保留时间为6.31min，分子量为319.2290，与雷公藤福定的标准品峰一致。说明tw19g00978就是参与雷公藤福定生物合成途径最后一步关键的cyp450基因。
[0080]
实施例4、产雷公藤福定和新雷公藤福定的工程酵母菌构建
[0081]
1.途径基因整合至by-hz16酵母染色体
[0082]
(1)启动子序列、终止子、途径基因、头尾同源臂序列克隆
[0083]
根据启动子、终止子、途径基因和头尾同源臂序列信息，设计带限制性内切酶bsal识别位点的引物，引物如下：
his固体平板中央，用涂布器涂布均匀，直至涂布的全部菌液吸收完全，置于30℃恒温箱中倒立培养2-3d。
[0112][0113]
(4)前体化合物发酵检测
[0114]
1)分别挑取5个单菌落于50ml sd-ura-his液体培养基中，30℃，200rpm振荡培养3d；
[0115]
2)收集发酵菌液，加入等体积乙酸乙酯，低温超声1h；
[0116]
3)3000
×
g，离心2min收集上层提取液，下层发酵液摇匀后加入等体积乙酸乙酯再次超声萃取一次；
[0117]
4)合并两次上层提取液，使用旋转蒸发仪减压蒸发除去乙酸乙酯溶剂(水温设为30℃)，用500μl乙酸乙酯清洗旋蒸瓶内壁，共3次，合并复溶液；
[0118]
5)使用高纯氮气吹干复溶液，加入100μl色谱级甲醇，涡旋30s复溶，12000
×
g高速离心10min，取上清进uplc/q-tof ms进行产物分析，能检测到终产物16α-hydroxyl-ent-kaurenoic acid的菌株表明途径基因(twcps3，twksl2，twcpr3，twko)整合成功，将该菌株命名为by-hz16-16oh菌株，加入等体积50％甘油，保存于-80℃冰箱，备用。
[0119]
2.tw19g00978表达载体转化by-hz16-16oh
[0120]
(1)tw19g00978表达载体转化by-hz16-16oh
[0121]
使用zymo research frozen-ez酵母转化试剂盒ii制作by-hz16-16oh酵母感受态细胞，取1μg表达载体质粒pesc-leu::(twcpr3+tw19g00978)转化入酵母感受态细胞，涂sd-his-ura-leu平板，30℃培养2-3d，等待单菌落长出；挑取单菌落于5ml sd-ura-his-leu+2％glc液体培养基，30℃，200rpm培养过夜进行活化。
[0122]
(2)菌液诱导发酵
[0123]
1)将活化菌液以初始od
600
0.05接种至20ml sd-ura-his-leu+2％glc液体培养基中，30℃，200rpm震荡培养24h至od
600
达到0.8-1.0左右；
[0124]
2)3000
×
g，离心3min收集菌体；
[0125]
3)以20mlyp(1％yeast extract，2％peptone)+2％gal重悬菌体，30℃，200rpm继续诱导发酵72h。
[0126]
(3)发酵产物提取及检测
[0127]
1)收集发酵菌液，加入等体积乙酸乙酯20ml，低温超声1h；
[0128]
2)3000
×
g，离心2min收集上层提取液，下层发酵液摇匀后加入等体积乙酸乙酯再次超声萃取一次；
[0129]
3)合并两次上层提取液，使用旋转蒸发仪减压蒸发除去乙酸乙酯溶剂(水温设为30℃)，用500μl乙酸乙酯清洗旋蒸瓶内壁，共3次，合并复溶液；
[0130]
4)使用高纯氮气吹干复溶液，加入100μl色谱级甲醇，涡旋30s复溶，12000
×
g高速离心10min，取上清进uplc/q-tof ms进行产物分析，结果如图5所示，
[0131]
结果发现，含有tw19g00978基因的酵母，发酵产物相比于空载对照组，检查到包含雷公藤福定和新雷公藤福定的4个新产物峰。正离子模式下，产物a(peak a)，保留时间为6.31min，分子量为319.2290，与标准品雷公藤福定的峰一致；正离子模式下，产物b(peakb)，保留时间为7.64min，分子量为319.2290，与标准品新雷公藤福定的峰一致；负离
子模式下，产物c(peak c)，保留时间为4.68min，分子量为335.2173；负离子模式下，产物d(peak d)，保留时间为4.93min，分子量为335.2253(推测产物c和产物d是内酯化前的过渡产物)。
[0132]
将这个能生产雷公藤福定及新雷公藤福定的酵母菌株(导入质粒pesc-leu::(twcpr3+tw19g00978)的by-hz16-16oh酵母菌，可以回补his-ura-leu)命名为mw-1。

技术特征：
1.分离的蛋白，所述蛋白为(1)seq id no：2所示的氨基酸序列；或(2)seq id no：2所示的氨基酸序列经取代、缺失或增加一个或多个氨基酸且功能相同的多肽。2.编码权利要求1所述蛋白的多核苷酸。3.根据权利要求2所述多核苷酸，所述多核苷酸为如下中的至少一种：(1)seq id no：1所示的核苷酸分子；或(2)seq id no：1所示的核苷酸分子经取代、缺失或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白的核苷酸序列；或(3)在严谨条件下与seq id no：1所示核苷酸分子杂交的核苷酸序列，所述严谨条件为：在含0.1％sds的0.1
×
sspe或含0.1％的sds的0.1
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ssc溶液中杂交。4.表达载体，其包含启动子、权利要求2或3所示多核苷酸和转录终止子，其中所述启动子与所述多核苷酸可操作地连接，并且所述多核苷酸与所述转录终止子可操作地连接。5.重组宿主菌，其包含权利要求2或3所述多核苷酸分子、或权利要求4所述表达载体，所述宿主菌为酵母菌。6.根据权利要求5所述的宿主菌，其中所述酵母菌选自by系酵母菌或wat系酵母菌。7.根据权利要求6所述宿主菌，其中所述酵母菌为by系酵母。8.权利要求1所述蛋白、或权利要求2或3所述多核苷酸、或权利要求4所述表达载体、或权利要求5-7任意一权利要求所述宿主菌在催化16-羟基-对映-贝壳杉烯酸发生c-20发生羟化方面的应用。9.权利要求1所述蛋白、或权利要求2或3所述多核苷酸、或权利要求4所述表达载体、或权利要求5-7中任意一权利要求所述宿主菌在合成雷公藤福定和/或新雷公藤福定方面的应用。

技术总结
本发明涉及一种细胞色素P450氧化酶，以及所述细胞色素P450氧化酶编码所述酶的基因，所述酶涉及雷公藤重要活性成分雷公藤福定和/或新雷公藤福定生物合成的最终关键步骤，可用于生物合成雷公藤福定和/或新雷公藤福定。生物合成雷公藤福定和/或新雷公藤福定。生物合成雷公藤福定和/或新雷公藤福定。


技术研发人员：王家典 黄璐琦 王荣凤 高伟
受保护的技术使用者：首都医科大学
技术研发日：2022.11.14
技术公布日：2023/7/20