一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法与流程

1.本发明涉及海产品检测技术领域，尤其涉及一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法。


背景技术：

2.生物胺是一类具有生物活性的低分子量有机化合物的总称，普遍存在于各类食品如发酵制品、乳制品、酒类、水产品及其制品中。水产品及其制品因具有高蛋白和高水分含量易感染腐败菌，产生大量的生物胺，因此水产品被认为是生物胺含量较高的一类食品。微量生物胺是生物体(包括人体)内的正常活性成分，在生物细胞中具有重要的生理功能。但当人体摄入过量生物胺(尤其是同时摄入多种生物胺)时，会引起诸如头痛、恶心、心悸、血压变化、呼吸紊乱等过敏反应，严重的还会危及生命。
3.各种生物胺中毒性最大的是组胺，其次是酪胺。腐胺和尸胺虽然本身毒性不大，但是可通过协同作用增强组胺毒性，危及人体健康。牡蛎是海洋中养殖产量大、经济价值高的重要贝类，其数量多、分布广，作为重要海洋食物资源被人类广泛利用，具有肉质鲜美、营养丰富、可食部分占比高、药用价值丰富等特点，深受消费者喜爱。冷鲜牡蛎在保藏中极易产生这些有毒的生物胺，消费者食用这些牡蛎会导致生物胺中毒。因此，为更好的检测牡蛎在保藏中产生生物胺的含量，确保牡蛎食用安全，本发明提供一种操作简单、方便的检测方法。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，解决现有食用保藏中的牡蛎容易导致中毒事件的技术问题。本发明提供的检测方法能够检测出保藏中牡蛎产生生物胺的含量，确保牡蛎食用安全，操作简单、方便。
5.为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
6.一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，包括以下步骤：
7.(1)取保藏中的牡蛎，去除内脏后冲洗干净，切碎待用；
8.(2)取切碎后的牡蛎1-3g，加入8-12ml高氯酸溶液，用均质机捣碎均匀后置于离心机中进行离心，离心完成后取上清液，向剩下的沉淀液中再次加入8-12ml高氯酸溶液，搅拌均匀后再重复离心一次，离心完成后取上清液，将两次上清液混合均匀后，加入高氯酸溶液定容到20-30ml，得到提取液，待用；
9.(3)量取1ml提取液置于15ml塑料离心管中，依次加入50-150μl氢氧化钠溶液，250-350μl饱和nahco3溶液和1-3ml衍生试剂，以丙酮为溶剂，涡旋振荡后反应，取出加入50-150μl浓氨水让其终止反应，然后静置，使用乙腈定容至4-6ml，振荡均匀得到混合液，取1ml混合液用滤膜进行过滤，取滤液冷藏，得到冷藏液待用；
10.(4)采用hplc检测分析冷藏液中的生物胺，分析并计算生物胺的含量。
11.进一步地，在步骤(2)中，高氯酸溶液的浓度为0.4mol/l。
b，5-20min；0％ a，100％ b，20-24min；0％～35％ a，65％～100％ b，24-25min；35％ a，65％ b，25-30min。
30.实施例2
31.一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，包括以下步骤：
32.(1)取保藏中的牡蛎，去除内脏后冲洗干净，切碎待用；
33.(2)取切碎后的牡蛎2.0g，加入10ml浓度为0.4mol/l的高氯酸溶液，用均质机捣碎均匀后置于离心机中以离心速率为3000r/min进行离心10min，离心完成后取上清液，向剩下的沉淀液中再次加入10ml浓度为0.4mol/l的高氯酸溶液，搅拌均匀后再重复离心一次，离心完成后取上清液，将两次上清液混合均匀后，加入高氯酸溶液定容到25ml，得到提取液，待用；
34.(3)量取1ml提取液置于15ml塑料离心管中，依次加入100μl浓度为2mol/l的氢氧化钠溶液，300μl饱和nahco3溶液和2ml丹磺酰氯衍生试剂，以浓度为10mg/ml的丙酮为溶剂，涡旋振荡60s后在温度为40℃的条件下反应45min，取出加入100μl浓氨水让其终止反应，然后静置30min，使用乙腈定容至5ml，振荡均匀得到混合液，取1ml混合液用膜孔为0.22μm的滤膜进行过滤，取滤液在温度为4℃的条件下冷藏，得到冷藏液待用；
35.(4)采用hplc检测分析冷藏液中的生物胺，分析并计算生物胺的含量，hplc检测的条件：采用xtimate c18色谱柱，检测波长为254nm，进样量为20μl，色谱柱柱温为30℃，流动相a为水，流动相b为乙腈；
36.梯度洗脱程序为：30％-35％ a，65％-70％ b，0-5min；0％～30％ a，70％～100％ b，5-20min；0％ a，100％ b，20-24min；0％～35％ a，65％～100％ b，24-25min；35％ a，65％ b，25-30min。
37.实施例3
38.一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，包括以下步骤：
39.(1)取保藏中的牡蛎，去除内脏后冲洗干净，切碎待用；
40.(2)取切碎后的牡蛎3g，加入12ml浓度为0.4mol/l的高氯酸溶液，用均质机捣碎均匀后置于离心机中以离心速率为3000r/min进行离心12min，离心完成后取上清液，向剩下的沉淀液中再次加入12ml浓度为0.4mol/l的高氯酸溶液，搅拌均匀后再重复离心一次，离心完成后取上清液，将两次上清液混合均匀后，加入高氯酸溶液定容到30ml，得到提取液，待用；
41.(3)量取1ml提取液置于15ml塑料离心管中，依次加入150μl浓度为2mol/l的氢氧化钠溶液，350μl饱和nahco3溶液和3ml丹磺酰氯衍生试剂，以浓度为10mg/ml的丙酮为溶剂，涡旋振荡70s后在温度为45℃的条件下反应50min，取出加入150μl浓氨水让其终止反应，然后静置30min，使用乙腈定容至6ml，振荡均匀得到混合液，取1ml混合液用膜孔为0.22μm的滤膜进行过滤，取滤液在温度为4℃的条件下冷藏，得到冷藏液待用；
42.(4)采用hplc检测分析冷藏液中的生物胺，，分析并计算生物胺的含量，hplc检测的条件：采用xtimate c18色谱柱，检测波长为254nm，进样量为20μl，色谱柱柱温为30℃，流动相a为水，流动相b为乙腈；
43.梯度洗脱程序为：30％-35％ a，65％-70％ b，0-5min；0％～30％ a，70％～100％ b，5-20min；0％ a，100％ b，20-24min；0％～35％ a，65％～100％ b，24-25min；35％ a，
65％ b，25-30min。
44.以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。


技术特征：
1.一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)取保藏中的牡蛎，去除内脏后冲洗干净，切碎待用；(2)取切碎后的牡蛎1-3g，加入8-12ml高氯酸溶液，用均质机捣碎均匀后置于离心机中进行离心，离心完成后取上清液，向剩下的沉淀液中再次加入8-12ml高氯酸溶液，搅拌均匀后再重复离心一次，离心完成后取上清液，将两次上清液混合均匀后，加入高氯酸溶液定容到20-30ml，得到提取液，待用；(3)量取1ml提取液置于15ml塑料离心管中，依次加入50-150μl氢氧化钠溶液，250-350μl饱和nahco3溶液和1-3ml衍生试剂，以丙酮为溶剂，涡旋振荡后反应，取出加入50-150μl浓氨水让其终止反应，然后静置，使用乙腈定容至4-6ml，振荡均匀得到混合液，取1ml混合液用滤膜进行过滤，取滤液冷藏，得到冷藏液待用；(4)采用hplc检测冷藏液中的生物胺，分析并计算生物胺的含量。2.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：在步骤(2)中，高氯酸溶液的浓度为0.4mol/l。3.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：在步骤(2)中，离心速率为3000r/min，离心时间为8-12min。4.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：在步骤(3)中，氢氧化钠溶液的浓度为2mol/l；衍生试剂为丹磺酰氯；丙酮的浓度为10mg/ml。5.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：在步骤(3)中，涡旋振荡的时间为50-70s；反应的温度为35-45℃，反应时间为40-50min。6.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：静置时间为30min；滤膜的膜孔为0.22μm；冷藏的温度为4℃。7.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：在步骤(4)中，hplc检测的条件：采用xtimate c18色谱柱，检测波长为254nm，进样量为20μl，色谱柱柱温为30℃，流动相a为水，流动相b为乙腈。8.根据权利要求1所述的一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，其特征在于：在步骤(4)中，梯度洗脱程序为：30％-35％a，65％-70％b，0-5min；0％～30％a，70％～100％b，5-20min；0％a，100％b，20-24min；0％～35％a，65％～100％b，24-25min；35％a，65％b，25-30min。

技术总结
本发明提供一种检测牡蛎产品保藏中生物胺水平的方法，属于海产品检测技术领域，先取保藏中的牡蛎，去除内脏冲洗干净后切碎；然后取切碎后的牡蛎1-3g，加入8-12mL高氯酸溶液，用均质机捣碎均匀后置于离心机中进行离心，取上清液，向沉淀液中加入8-12mL高氯酸溶液，搅拌均匀后、重复离心一次，取上清液，混合两次上清液，加入高氯酸溶液定容到20-30mL，得到提取液；接着量取1mL提取液置于15mL塑料离心管中，依次加入50-150μL氢氧化钠溶液，250-350μL饱和NaHCO3溶液和1-3mL衍生试剂，以丙酮为溶剂，涡旋振荡后反应，取出加入50-150μL浓氨水终止反应，然后静置，使用乙腈定容至4-6mL，振荡均匀得到混合液，取1mL混合液用滤膜进行过滤，取滤液冷藏；最后采用HPLC检测分析冷藏液中的生物胺。中的生物胺。


技术研发人员：马华威 吕敏 江林源 潘传燕 王维生 罗旭 阮秋凤 陈伟介 张文敏 王园园
受保护的技术使用者：广西小研人生物科技有限公司
技术研发日：2023.04.24
技术公布日：2023/7/21