一种衢枳壳饮片的制备方法和应用

1.本发明涉及中药材加工技术领域，特别是涉及一种衢枳壳饮片的制备方法和应用。


背景技术：

2.衢枳壳为芸香科植物常山胡柚(citruschangshan-huyouy.b.chang)的干燥未成熟果实，主产于浙江衢州，具有理气宽中、行气消胀之功效，用于治疗胸胁气滞，胀满疼痛等症。
3.衢枳壳在2015版《浙江省中药炮制规范》规定胡柚青果7月份果皮尚绿时采收，自中部横切为两半，晒干或低温干燥成药材；取原药材，洗净，润透，切薄片，干燥，筛去碎落的瓤核，得衢枳壳饮片。可见衢枳壳的传统加工方式存在水处理又重复干燥的过程，由于衢枳壳的主要药效成分包括黄酮苷、挥发油、生物碱等化合物，这样势必会造成有效成分的流失，同时工序交叉重复，浪费人力、物力和时间。


技术实现要素：

4.为了解决上述问题，本发明提供了一种衢枳壳饮片的制备方法和应用，本发明以醇溶性浸出物、多种黄酮类成分含量为评价指标，对衢枳壳切制过程中的关键因素进行考察，得出制备的工艺参数，为衢枳壳一体化饮片的实际生产奠定基础。
5.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.本发明提供了一种衢枳壳饮片的制备方法，包括以下步骤：将胡柚青果从中部切开，在55～60℃下干燥至含水量为26.5～40％时，切制成2mm薄片，将所述薄片50～50.5℃烘4～5h，得到衢枳壳饮片。
7.优选的，所述含水量为26.5％，所述薄片的厚度为2mm，所述薄片烘的时间为4.2h。
8.优选的，所述含水量为30％，所述薄片的厚度为2mm，所述薄片烘的时间为5h。
9.优选的，所述含水量为40％，所述薄片的厚度为2mm，所述薄片烘的时间为4h。
10.优选的，所述胡柚青果为7月份果皮尚绿的胡柚青果。
11.优选的，所述胡柚青果从中部切开后，除去瓤后再进行干燥。
12.本发明还提供了采用上述技术方案所述制备方法得到的衢枳壳饮片在制备提高小肠推进率药物中的应用。
13.本发明还提供了采用上述技术方案所述的制备方法得到的衢枳壳饮片在制备提高胃排空率药物中的应用。
14.本发明还提供了采用上述技术方案所述的制备方法得到的衢枳壳饮片在制备增加促胃肠动力药物中的应用。
15.本发明的有益效果为：
16.本发明以醇溶性浸出物、多种黄酮类成分含量为评价指标，对衢枳壳切制过程中的关键因素进行考察，得出制备的工艺参数，为衢枳壳一体化饮片的实际生产奠定基础。采
用本发明提供的制备方法醇溶性浸出物和多种黄酮类成分的含量高，对小肠推进率、胃排空率等效果要优于传统饮片。
附图说明
17.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
18.图1为高效液相色谱图，其中1-芸香柚皮苷；2-柚皮苷；3-橙皮苷；4-新橙皮苷；5-木犀草素；6-桔皮素；7-川陈皮素；
19.图2为各因素交互作用等高线和响应面；
20.图3为各组大鼠小肠推进率、胃排空率测定结果比较(x
±
s，％)，注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
具体实施方式
21.本发明提供了一种衢枳壳饮片的制备方法，包括以下步骤：将胡柚青果从中部切开，在55～60℃下干燥至含水量为26.5～40％时，切制成2mm薄片，将所述薄片在50～50.5℃下烘4～5h，得到衢枳壳饮片。在本发明中，所述含水量优选为26.5％，所述薄片的厚度优选为2mm，所述薄片烘的时间优选为4.2h。在本发明中，所述含水量优选为30％，所述薄片的厚度优选为2mm，所述薄片烘的时间优选为5h。在本发明中，所述含水量优选为40％，所述薄片的厚度优选为2mm，所述薄片烘的时间优选为4h。在本发明中，所述胡柚青果优选为7月份果皮尚绿的胡柚青果。在本发明中，所述胡柚青果从中部切开后，优选除去瓤后再进行干燥。
22.本发明还提供了采用上述技术方案所述制备方法得到的衢枳壳饮片在制备提高小肠推进率药物中的应用。本发明对所述药物没有特殊限定，本领域技术人员按照常规方法制备即可。
23.本发明还提供了采用上述技术方案所述的制备方法得到的衢枳壳饮片在制备提高胃排空率药物中的应用。本发明对所述药物没有特殊限定，本领域技术人员按照常规方法制备即可。
24.本发明还提供了采用上述技术方案所述的制备方法得到的衢枳壳饮片在制备增加促胃肠动力药物中的应用。本发明对所述药物没有特殊限定，本领域技术人员按照常规方法制备即可。
25.为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
26.实施例1
27.1.仪器和材料
28.1.1仪器
29.岛津lc20高效液相色谱仪，电子天平(pl203梅特勒－托利多仪器有限公司，f-300型超声波清洗机(福洋超声仪器有限公司)。
30.1.2试药
31.芸香柚皮苷对照品(批号：b22358)，柚皮苷(批号：b21519)，橙皮苷对照品(批号：
b22804)，新橙皮苷对照品(批号：b22127)，木犀草素对照品(批号：b22326)，川陈皮素对照品(批号：b22115)，桔皮素对照品(批号：b22315)均购自上海源叶生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为娃哈哈纯净水，衢枳壳经宁波卫生职业技术学院张海丰副教授鉴定常山胡柚(citruschangshan-huyouy.b.chang)的干燥未成熟果实。
32.2.方法
33.2.1一体化饮片制备
34.采摘胡柚青果，自中部横切为两半，烘干至一定水分，切薄片，干燥。
35.2.2醇溶性浸出物含量测定
36.按照2020版《中国药典》第四部通则2201项热浸法测定。
37.2.3黄酮类化合物含量测定
38.2.3.1色谱条件
39.色谱柱：hypersilc18色谱柱(250mm
×
4.6mm，5μm)；流动相：a相为乙腈溶液，b相为0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱：0-2min，10％b；2-5min，10％
→
18％b；5-10min，18％b；10-25min，18％
→
20％b；25-45min，20％
→
50％b；45-70min，50％
→
100％b。流速：1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：330nm；进样量：10μl。
40.2.3.2混合对照品溶液的制备
41.分别称取芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、木犀草素、川陈皮素和桔皮素7个对照品适量，精密称定，置于不同量瓶中，加70％甲醇使之溶解并制成质量浓度均为1.0mg/ml的单一对照品贮备液；精密吸取7种对照品贮备液适量，混合，制成含芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、木犀草素、川陈皮素和桔皮素质量浓度分别为45.80，355.20，20.15，300.56，10.04,10.12，11.05μg/ml的混合对照品溶液，备用。
42.2.3.3供试品溶液的制备
43.取衢枳壳样品，粉碎，过3号筛；取粉末约0.5g，精密称定，置于200ml具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇100ml，密塞，称定质量；超声(功率：200w，频率：40khz)提取30min，放冷至室温，密塞；再次称定质量，用70％醇补足减失的质量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。
44.2.3.4线性关系考察
45.取混合对照品溶液1,2,4,8,10,20μl，分别进样，按照“2.3.1”项下色谱条件测定进样，以对照品的进样量为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得到各成分回归方程。
46.2.3.5精密度试验
47.取混合对照品溶液适量，按规定项下色谱条件连续进样测定6次，计算7种化学成分峰面积的rsd。
48.2.3.6稳定性试验
49.取衢枳壳供试品溶液适量，分别在0、2、4、6、12、24h，按规定项下色谱条件进样测定，计算7种化学成分峰面积的rsd。
50.2.3.7重复性试验
51.精密称取同一批衢枳壳供试品适量，按“3.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，计算7种化学成分的峰面积rsd。
52.2.3.8加样回收率试验
53.精密称取同一批供试品6份，分别精密加入相同量对照品，计算7种化学成分平均回收率。
54.2.4.box-behnken效应面法优选衢枳壳加工一体化工艺
55.2.4.1试验设计
56.在单因素实验考察基础上，结合实际生产工艺参数，选择含水量、饮片切制厚度、干燥温度和干燥时间为考察因素，每个因素3个水平，以醇浸出物、有效成分含量的总评“归一值”od为评价指标，根据星点设计的原理，各因素的水平设计见表1。od＝(d1d2……dk
)
1/k
(k为指标数)，3个指标的数值均为越大越好，故采用hassan方法进行数学转换求od，dmax＝(yi－ymin)/(ymax－ymin)。
57.表1因素与水平
[0058][0059]
3.结果
[0060]
3.1黄酮类化合物含量测定
[0061]
3.1.1色谱图见图1，从图1中可以得出，各成分色谱峰峰形较好，分离度良好。
[0062]
3.1.2线性关系考察
[0063]
各成分回归方程结果见表2，表明各种成分的质量均与色谱峰面积线性关系良好。
[0064]
表27种化学成分的线性关系
[0065][0066]
[0067]
3.1.3精密度试验
[0068]
计算得到7种化学成分峰面积的rsd分别为0.73％、0.54％、1.32％、0.67％、0.72％、1.41％，0.98％，表明仪器精密度良好。
[0069]
3.1.4稳定性试验
[0070]
计算得到7种化学成分峰面积的rsd分别1.67％、2.00％、2.24％、1.53％、1.14％、1.06％、1.42％，均小于3.0％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
[0071]
3.1.5重复性试验
[0072]
计算得到7种化学成分的峰面积rsd分别为0.22％、1.10％、1.27％、1.59％、1.03％、0.97％、1.08％,均小于2.0％，表明该方法重复性良好。
[0073]
3.1.6加样回收率试验
[0074]
结果显示7种化学成分平均回收率为97.15％～99.7％,rsd为1.04％～～2.19％,表明该方法回收率良好。
[0075]
3.2box-behnken效应面法优选衢枳壳加工一体化工艺
[0076]
3.2.1实验安排与结果见表3。
[0077]
表3响应面分析方案及试验结果
[0078]
[0079][0080]
3.2.2数据分析
[0081]
采用design expert12.0软件进行数据处理，得拟合方程y＝-12.3898-0.0526a+1.3043b+0.3808c+0.7308d+0.0015ab-0.0002ac-0.0033ad-0.001cd-0.0003a
2-0.3365b
2-0.0037c
2-0.07275d2(r2＝0.9186，p《0.0001)，说明该方程拟合度较好，绘制各自变量的相应曲面，见图2。以最大od值为目标，进行最优值预测得衢枳壳产地加工一体工艺最优参数为50.5℃干燥至含水量约26.5％时，切制成2mm薄片烘4.2h，预测od值是0.82。
[0082]
3.3最佳工艺验证
[0083]
根据优选出的最佳工艺将胡柚青果加工衢枳壳饮片，制备一体化饮片饮片各3批，测定醇溶性浸出物及各化学成分含量。预测值与真实值的偏差0.61％，说明优选的炮制工艺稳定可靠，见表4。
[0084]
表4验证试验结果
[0085][0086]
实施例2
[0087]
1.实验材料
[0088]
1.1实验动物
[0089]
取健康spf级雄性sd大鼠50只，体质量(200
±
20)g，由上海西普尔－必凯实验动物有限公司提供，饲养浙江药科职业大学动物实验研究中心，饲养许可证号syxk(浙)2022-0005。
[0090]
1.2试剂与仪器
[0091]
衢枳壳购自浙江中医药大学中药饮片有限公司，经宁波卫生职业技术学院凌庆枝教授鉴定为芸香科植物常山胡柚(citruschangshan-huyouy.b.chang)的干燥未成熟果实。多潘立酮片(西安杨森制药有限公司，国药准字h10420112)；血浆胃泌素(gas)、胃动素(mtl)、血管活性肠肽(vip)和生长抑素(ss)酶联免疫吸附试剂盒(南京建成生物工程研究
所k20220523、k20220432、k20220061、k20223241)；tgl-16b型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，multiskanmk3型酶标仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)，fa1004b型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。
[0092]
2.方法
[0093]
2.1饮片制备
[0094]
2.1.1传统生枳壳
[0095]
取原药材，除去杂质，洗净，润透，去瓤，切薄片，干燥，筛去碎落的瓤核。
[0096]
2.1.2产地加工一体化衢枳壳(一体化衢枳壳)
[0097]
胡柚青果自中部切开，50.5℃干燥至含水量为26.5％时，切制成2mm薄片烘4.2h，即得。
[0098]
2.2药物制备
[0099]
取适量衢枳壳传统饮片、一体化饮片，分别加入10倍量水煎煮30min，重复2次，合并滤液，减压浓缩成1g
·
ml-1
的药液，冷藏备用。
[0100]
2.3分组与造模
[0101]
取sd大鼠50只，平均分成5组，分别为空白组、传统饮片组、一体化饮片组、多潘立酮片组(阳性组)和fd模型组，每组10只。除空白组外，其余各组采用复合病因造模法(夹尾激怒+饮食失节+饮用盐酸水溶液)
[2]
复制fd大鼠模型，连续给药14d。
[0102]
2.4给药
[0103]
造模成功后，自从第15天起，各给药组每天上午给大鼠灌服相应药物。正常对照组及模型组大鼠给予生理盐水10ml/kg灌胃，阳性组给予多潘立酮3mg/kg灌胃，传统饮片组、一体化饮片组均以4g/kg剂量灌胃；每日灌胃1次，连续14d。
[0104]
2.5观察指标及检测方法
[0105]
2.5.1小肠推进率、胃排空率测定
[0106]
实验第28天，末次给药后禁食12h，所有实验动物均灌胃给予营养性半糊剂2ml，30min后用10％水合氯醛按剂量3ml
·
kg-1
进行麻醉，腹主动脉取血，结扎胃贲门和幽门，取胃囊及小肠，按文献(祝婧,钟凌云,龚千锋,等.升麻不同炮制品对脾气虚动物胃肠功能的影响.中国实验方剂学杂志，2015,21(21):1-4.)的方法操作，计算胃排空率[胃残留率＝(胃全重-胃净重)/半固体糊质量
×
100％]和小肠推进率(小肠推进率＝炭末推进距离/小肠全长
×
100％)。
[0107]
2.5.2大鼠血浆gas、mtl、vip和ss的含量测定
[0108]
末次给药后禁食、不禁水12h，麻醉大鼠，大鼠腹主动脉取血，3500r/min离心15min，分离血浆，置于－80℃冰箱备用。elisa检测血浆gas、mtl、vip和ss的含量。
[0109]
3.结果
[0110]
3.1对fd大鼠胃残留率及肠推进率的影响
[0111]
采用spss13.0软件进行分析，结果见图3。由图3可知，与空白正常组相比，fd模型组大鼠胃残留率与肠推进率均具有极显著性差异，表明造模成功。与fd模型组相比，衢枳壳一体化组与传统饮片组对fd大鼠胃残留率与肠推进率均具有极显著或显著影响，并且衢枳壳一体化组与空白组相比差异性最小，提示衢枳壳一体化饮片组对fd大鼠的治疗作用优于传统饮片组。
[0112]
3.2对fd大鼠血清gas、mtl、vip和ss含量的影响
[0113]
结果见表5。结果发现fd模型组与空白组相比，血清中gas、mtl、vip和ss含量均存在极显著性差异，提示造模成功。与模型组相比，衢枳壳组对fd大鼠血清gas、mtl、vip和ss含量均具有显著性影响；与空白组比较，衢枳壳一体化饮片组血清gas、mtl、vip和ss含量较之传统饮片组更接近正常水平。其中，衢枳壳给药组和阳性药组均能提高血浆gas、mtl含量，vip、ss含量明显降低，说明衢枳壳组可增加促胃肠动力的作用。
[0114]
表5各组大鼠血清gas、mtl、vip和ss质量浓度的测定(x
±
s)
[0115]
组别动物数gas(ng/l)mtl(ng/l)vip(ng/l)ss(pg/l)空白组101800.65+20.12**201.65**0.66**66.85**模型组101008.35+13.42114.351.99101.25多潘立酮组101787.25+15.62**188.06**0.88**87.55*一体化组101577.36+17.62*185.35**0.97**90.54*传统组101486.17+10.62*144.35*1.14**93.52*
[0116]
注：与模型组相比，*p《0.05，**p《0.01。
[0117]
表6各组大鼠的小肠推进率和为残留率
[0118] 小肠推进率(％)胃残留率(％)正常组50.3852.76模型组35.6565.02多潘立酮组48.8754.85一体化枳壳组46.0453.07传统枳壳组42.7656.92
[0119]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

技术特征：
1.一种衢枳壳饮片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将胡柚青果从中部切开，在55～60℃下干燥至含水量为26.5～40％时，切制成2mm薄片，将所述薄片在50～50.5℃下烘4～5h，得到衢枳壳饮片。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含水量为26.5％，所述薄片的厚度为2mm，所述薄片烘的时间为4.2h。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含水量为30％，所述薄片的厚度为2mm，所述薄片烘的时间为5h。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含水量为40％，所述薄片的厚度为2mm，所述薄片烘的时间为4h。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述胡柚青果为7月份果皮尚绿的胡柚青果。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述胡柚青果从中部切开后，除去瓤后再进行干燥。7.采用权利要求1所述制备方法得到的衢枳壳饮片在制备提高小肠推进率药物中的应用。8.采用权利要求1所述的制备方法得到的衢枳壳饮片在制备提高胃排空率药物中的应用。9.采用权利要求1所述的制备方法得到的衢枳壳饮片在制备增加促胃肠动力药物中的应用。

技术总结
本发明提供了一种衢枳壳饮片的制备方法和应用，涉及中药材加工技术领域。包括：将胡柚青果从中部切开，在55～60℃下干燥至含水量为26.5～40％时，切制成2mm薄片，将所述薄片在50～50.5℃烘4～5h，得到衢枳壳饮片。本发明以醇溶性浸出物、多种黄酮类成分含量为评价指标，对衢枳壳切制过程中的关键因素进行考察，得出制备的工艺参数，为衢枳壳一体化饮片的实际生产奠定基础。采用本发明提供的制备方法醇溶性浸出物和多种黄酮类成分的含量高，对小肠推进率、胃排空率等效果要优于传统饮片。胃排空率等效果要优于传统饮片。胃排空率等效果要优于传统饮片。


技术研发人员：周芷晴 张薇 孟振豪
受保护的技术使用者：宁波卫生职业技术学院
技术研发日：2023.04.17
技术公布日：2023/7/21