一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒及检测方法与流程

1.本发明涉及免疫比浊体外诊断技术领域，尤其涉及一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒及检测方法。


背景技术：

2.糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。糖化血红蛋白可反映2-3个月长期血糖水平，无需空腹或特定时间取血，不受急性的血糖波动的影响，取血量少，快速简便，易于接受。
[0003][0004]
常用的测定糖化血红蛋白百分比的方法有高效液相色谱法、免疫法、酶法等，其中高效液相色谱法需要高效液相仪器进行测试，测试时间久，且需要很专业的分析人员。酶法检测需要多种酶参与，容易导致测试不准确。而临床上常使用的免疫方法有两种，一种是需要单独测定血液样本中的总血红蛋白和糖化血红蛋白的浓度，并且随后计算糖化蛋白与总蛋白的比值的免疫竞争抑制法，另一种是可以直接测定糖化血红蛋白百分比的凝胶聚集法，此法需要在使用前配制抗体工作液，且配制好的抗体工作液稳定期较短。无法满足长期保存的需要，最终也会导致测试不准确。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于提供一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒及检测方法，旨在解决测定糖化血红蛋白百分比的方法的测试结果不准确的问题。
[0006]
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，包括溶血剂、第一试剂、第二试剂和校准品；
[0007]
所述校准品包括糖化血红蛋白和糖化血红蛋白用标准品稀释液；
[0008]
所述糖化血红蛋白用标准品稀释液包括氯化钠7份、叠氮化钠1份、氢氧化钠2.3份、磷酸氢二钠2份和磷酸二氢钠3份；
[0009]
所述溶血剂包括叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份；
[0010]
所述第一试剂包括胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份；
[0011]
所述第二试剂包括磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份、纯化水40-55份、羊抗鼠igg多克隆抗体1-46份、特异性鼠igg抗1-5份和纯化水1000份。
[0012]
其中，所述溶血剂的制备方法包括：
[0013]
将叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份在22-28℃下混合，得到第一混合液；
[0014]
将所述第一混合液过滤，得到溶血剂，并将所述溶血剂放置在2-8℃的环境下保存。
[0015]
其中，所述第一试剂的制备方法包括：
[0016]
将胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份
和纯化水40-55份在22-28℃下混合，得到第二混合液；
[0017]
将所述第二混合液过滤，得到第一试剂，并将所述第一试剂放置在2-8℃的环境下保存。
[0018]
其中，所述第二试剂的制备方法包括：
[0019]
将磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份和纯化水40-55份在22-28℃搅拌15分钟，得到第三混合液；
[0020]
将羊抗鼠igg多克隆抗体1-46份加入所述第三混合液，在22-28℃搅拌15分钟，得到第四混合液；
[0021]
将特异性鼠igg抗1-5份和纯化水1000份加入所述第四混合液，在22-28℃搅拌25分钟，得到第五混合液；
[0022]
将所述第五混合液过滤，得到第二试剂，并将所述第二试剂放置在2-8℃的环境下保存。
[0023]
其中，所述校准品的制备方法包括：
[0024]
将糖化血红蛋白按预设比例加入糖化血红蛋白用标准品稀释液，配制称浓梯度为0％、3.6％、7.2％、12.5％、15.6％的校准品溶液，并分装成0.5ml后采用冻干技术进行冻干，得到5个浓度的校准品。
[0025]
第二方面，本发明提供了一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
[0026]
向待测样品中加入第一试剂混匀，37℃孵育，得到第一待测液，在660nm波长下，读取所述第一待测液的吸光度，得到第一读取值；
[0027]
向所述第一待测液中加入第二混匀，37℃孵育，得到第二待测液，在660nm波长下，读取所述第二待测液的吸光度，得到第二读取值；
[0028]
使用所述第二读取值减去所述第一读取值，得到吸光度差值；
[0029]
使用校准品在全自动生化仪上通过内置曲线你和模式拟合标准曲线，根据所述吸光度差值计算出待测样品中糖化血红蛋白百分比含量。
[0030]
本发明的一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，包括溶血剂、第一试剂、第二试剂和校准品；所述校准品包括糖化血红蛋白和糖化血红蛋白用标准品稀释液；所述溶血剂包括叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份；所述糖化血红蛋白用标准品稀释液包括氯化钠7份、叠氮化钠1份、氢氧化钠2.3份、磷酸氢二钠2份和磷酸二氢钠3份；所述第一试剂包括胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份；所述第二试剂包括磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份、纯化水1040-1055份、羊抗鼠igg多克隆抗体1-46份和特异性鼠igg抗1-5份，本发明提供的糖化血红蛋白试剂盒无沉淀、性能稳定、成本低廉，测试结果准确，重复性好，同时可广泛用于各种生化仪配套使用，具有更广泛的通用性。具体的，采用胶乳免疫比浊法，检验原理为乳胶试剂中加入全血样本，总血红蛋白和糖化血红蛋白与乳胶颗粒结合，具有相同的吸附速率；当再加入鼠抗人糖化血红蛋白单克隆抗体，则形成乳胶-糖化血红蛋白-鼠抗人糖化血红蛋白抗体的复合物。此复合物由于加入羊抗鼠igg抗体的产生凝集，凝集量因乳胶表面吸附的糖化血红蛋白量不同而不同。解决了测定糖化血红蛋白百分比的方法的测试结果不准确的问题。
附图说明
[0031]
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0032]
图1是溶血剂的制备方法的流程图。
[0033]
图2是第一试剂的制备方法的流程图。
[0034]
图3是第二试剂的制备方法的流程图。
[0035]
图4是本发明提供的一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒的检测方法的流程图。
具体实施方式
[0036]
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0037]
请参阅图1至图3，第一方面，本发明提供一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，包括溶血剂、第一试剂、第二试剂和校准品；
[0038]
所述校准品包括糖化血红蛋白和糖化血红蛋白用标准品稀释液；
[0039]
所述糖化血红蛋白用标准品稀释液包括氯化钠7份、叠氮化钠1份、氢氧化钠2.3份、磷酸氢二钠2份和磷酸二氢钠3份；
[0040]
所述溶血剂包括叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份；
[0041]
所述第一试剂包括胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份；
[0042]
所述第二试剂包括磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份、纯化水40-55份、羊抗鼠igg多克隆抗体(1.92mg/l)1-46份、特异性鼠igg抗(10.0mg/l)1-5份和纯化水1000份。
[0043]
具体的，本发明提供的糖化血红蛋白试剂盒无沉淀、性能稳定、成本低廉，测试结果准确，重复性好，同时可广泛用于各种生化仪配套使用，具有更广泛的通用性。具体的，采用胶乳免疫比浊法，检验原理为乳胶试剂中加入全血样本，总血红蛋白和糖化血红蛋白与乳胶颗粒结合，具有相同的吸附速率；当再加入鼠抗人糖化血红蛋白单克隆抗体，则形成乳胶-糖化血红蛋白-鼠抗人糖化血红蛋白抗体的复合物。此复合物由于加入羊抗鼠igg抗体的产生凝集，凝集量因乳胶表面吸附的糖化血红蛋白量不同而不同。
[0044]
进一步的，所述溶血剂的制备方法包括：
[0045]
s11将叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份在22-28℃下混合，得到第一混合液；
[0046]
s12将所述第一混合液过滤，得到溶血剂，并将所述溶血剂放置在2-8℃的环境下保存。
[0047]
所述第一试剂的制备方法包括：
[0048]
s21将胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份在22-28℃下混合，得到第二混合液；
[0049]
s22将所述第二混合液过滤，得到第一试剂，并将所述第一试剂放置在2-8℃的环境下保存。
[0050]
所述第二试剂的制备方法包括：
[0051]
s31将磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份和纯化水40-55份在22-28℃搅拌15分钟，得到第三混合液；
[0052]
s32将羊抗鼠igg多克隆抗体1-46份加入所述第三混合液，在22-28℃搅拌15分钟，得到第四混合液；
[0053]
s33将特异性鼠igg抗1-5份和纯化水1000份加入所述第四混合液，在22-28℃搅拌25分钟，得到第五混合液；
[0054]
s34将所述第五混合液过滤，得到第二试剂，并将所述第二试剂放置在2-8℃的环境下保存。
[0055]
所述校准品的制备方法包括：
[0056]
将糖化血红蛋白按预设比例加入糖化血红蛋白用标准品稀释液，配制称浓梯度为0％、3.6％、7.2％、12.5％、15.6％的校准品溶液，并分装成0.5ml后采用冻干技术进行冻干，得到5个浓度的校准品。
[0057]
本发明中提供糖化血红蛋白检测试剂盒中涉及的原料来源如下表所示：
[0058][0059][0060]
表1
[0061]
具体实施例如下：
[0062]
实施例1
[0063]
糖化血红蛋白检测试剂盒
[0064]
第一试剂
[0065]
试剂名称用量胶乳(150nm)3份叠氮化钠1份氯化钠1份磷酸氢二钠2.3份
磷酸二氢钠2.3份
[0066]
表2第二试剂
[0067]
试剂名称用量叠氮化钠2份吐温2份磷酸氢二钠2份磷酸二氢钠3份羊抗鼠igg多克隆抗体3份特异性鼠igg抗体3份
[0068]
表3
[0069]
实施例2
[0070]
糖化血红蛋白检测试剂盒
[0071]
第一试剂
[0072]
试剂名称用量胶乳(150nm)2份叠氮化钠3份氯化钠4份磷酸氢二钠3.3份磷酸二氢钠3.3份
[0073]
表4
[0074]
第二试剂
[0075][0076][0077]
表5
[0078]
实施例3
[0079]
糖化血红蛋白检测试剂盒
[0080]
第一试剂
[0081]
试剂名称用量胶乳(150nm)4份叠氮化钠3份氯化钠1份磷酸氢二钠2.7份磷酸二氢钠2.9份
[0082]
表6
[0083]
第二试剂
[0084]
试剂名称用量叠氮化钠2份吐温3份磷酸氢二钠4份磷酸二氢钠3份羊抗鼠igg多克隆抗体4.2份特异性鼠igg抗体3.2份
[0085]
表7
[0086]
实施例4
[0087]
糖化血红蛋白检测试剂盒
[0088]
第一试剂
[0089]
试剂名称用量胶乳(150nm)2份叠氮化钠6份氯化钠5份磷酸氢二钠2.7份磷酸二氢钠2.2份
[0090]
表8
[0091]
第二试剂
[0092]
试剂名称用量叠氮化钠1份吐温3份磷酸氢二钠2份磷酸二氢钠6份羊抗鼠igg多克隆抗体5份特异性鼠igg抗体6份
[0093]
表9
[0094]
实施例5
[0095]
糖化血红蛋白检测试剂盒
[0096]
第一试剂
[0097]
试剂名称用量胶乳(150nm)2份叠氮化钠6份氯化钠5份磷酸氢二钠2.7份磷酸二氢钠2.2份
[0098]
表10
[0099]
第二试剂
[0100]
试剂名称用量叠氮化钠1份吐温3份磷酸氢二钠2份磷酸二氢钠6份羊抗鼠igg多克隆抗体5份特异性鼠igg抗体6份
[0101]
表11
[0102]
不同实施例检测结果比较
[0103]
分别配制一份糖化血红蛋白浓度为4.6％的样本，用实施例1的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0104]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月14.634.354.864.634.514.3324.844.694.424.354.794.7734.894.634.494.34.394.43理论浓度4.604.604.604.604.604.60相对偏差10.65％-5.43％5.65％0.65％-1.96％-5.87％相对偏差25.22％1.96％-3.91％-5.43％4.13％3.70％相对偏差36.30％0.65％-2.39％-6.52％-4.57％-3.70％
[0105]
表12
[0106]
由表12可见，实施例1在1个月6个月和12个月测得的糖化血红蛋白浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于10％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。实施例1为最优配制比例。
[0107]
分别配制一份糖化血红蛋白浓度为7.63％的样本，用实施例2的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0108][0109][0110]
表13
[0111]
由表13可见，实施例2在1个月6个月和12个月测得的糖化血红蛋白浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于10％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0112]
分别配制一份糖化血红蛋白浓度为10.00％l的样本，用实施例3的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0113]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月110.4710.759.9310.4710.1710.1429.989.8510.489.8210.439.76310.7810.4110.659.599.8510.51理论浓度10.0010.0010.0010.0010.0010.00相对偏差14.70％7.50％-0.70％4.70％1.70％1.40％相对偏差2-0.20％-1.50％4.80％-1.80％4.30％-2.40％相对偏差37.80％4.10％6.50％-4.10％-1.50％5.10％
[0114]
表14
[0115]
由表14可见，实施例3在1个月6个月和12个月测得的糖化血红蛋白浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于10％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0116]
分别配制一份糖化血红蛋白浓度为12.70％的样本，用实施例4的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0117]
/0个月4个月8个月12个月13个月14个月110.4112.3510.5410.298.088.99210.0210.899.8810.911.938.53311.5610.9110.889.359.147.11理论浓度12.7012.7012.7012.7012.7010.70相对偏差1-18.03％-2.76％-17.01％-18.98％-36.38％-15.98％相对偏差2-21.10％-14.25％-22.20％-14.17％-6.06％-20.28％相对偏差3-8.98％-14.09％-14.33％-26.38％-28.03％-33.55％
[0118]
表15
[0119]
由表15可见，实施例4在1个月6个月和12个月测得的糖化血红蛋白浓度均偏离真实值，并且放置8个月时，相对偏差大于15％，说明本发明的试剂盒重复性不好，测量不准确。
[0120]
分别配制一份糖化血红蛋白浓度为6.71％的样本，用实施例5的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0121][0122][0123]
表16
[0124]
由表16可见，实施例5在1个月6个月和12个月测得的糖化血红蛋白浓度均偏离真实值，并且放置8个月时，相对偏差大于15％，说明本发明的试剂盒重复性不好，测量不准确。
[0125]
实施例1的开瓶性能验证：
[0126]
采用企业内部标准品糖化血红蛋白浓度为8.90％，用实施例5的试剂盒对样本重复检测7次，检测9结果如表所示：
[0127]
表17
[0128][0129]
由表17可见，实施例1在0至40天测得的糖化血红蛋白浓度均接近真实值，并且相对偏差均小于5％，说明本发明的试剂盒重复性好，测量准确。
[0130]
请参阅图4，第二方面，本发明提供了一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
[0131]
s101向待测样品中加入第一试剂混匀，37℃孵育，得到第一待测液，在660nm波长下，读取所述第一待测液的吸光度，得到第一读取值a1；
[0132]
具体的，待测样品与第一试剂按体积比为4：300加入。
[0133]
s102向所述第一待测液中加入第二混匀，37℃孵育，得到第二待测液，在660nm波长下，读取所述第二待测液的吸光度，得到第二读取值a2；
[0134]
具体的，第二试剂与第一试剂按体积比为1：3加入。
[0135]
s103使用所述第二读取值减去所述第一读取值，得到吸光度差值
△
a；
[0136]
具体的，
△
a＝a2-a1。
[0137]
s104使用校准品在全自动生化仪上通过内置曲线你和模式拟合标准曲线，根据所述吸光度差值计算出待测样品中糖化血红蛋白百分比含量。
[0138]
以上所揭露的仅为本发明一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒及检测方法较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。

技术特征：
1.一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，其特征在于，包括溶血剂、第一试剂、第二试剂和校准品；所述校准品包括糖化血红蛋白和糖化血红蛋白用标准品稀释液；所述糖化血红蛋白用标准品稀释液包括氯化钠7份、叠氮化钠1份、氢氧化钠2.3份、磷酸氢二钠2份和磷酸二氢钠3份；所述溶血剂包括叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份；所述第一试剂包括胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份；所述第二试剂包括磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份、纯化水40-55份、羊抗鼠igg多克隆抗体1-46份、特异性鼠igg抗1-5份和纯化水1000份。2.如权利要求1所述的测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，其特征在于，所述溶血剂的制备方法包括：将叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份在22-28℃下混合，得到第一混合液；将所述第一混合液过滤，得到溶血剂，并将所述溶血剂放置在2-8℃的环境下保存。3.如权利要求2所述的测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂的制备方法包括：将胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份在22-28℃下混合，得到第二混合液；将所述第二混合液过滤，得到第一试剂，并将所述第一试剂放置在2-8℃的环境下保存。4.如权利要求3所述的测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，其特征在于，所述第二试剂的制备方法包括：将磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份和纯化水40-55份在22-28℃搅拌15分钟，得到第三混合液；将羊抗鼠igg多克隆抗体1-46份加入所述第三混合液，在22-28℃搅拌15分钟，得到第四混合液；将特异性鼠igg抗1-5份和纯化水1000份加入所述第四混合液，在22-28℃搅拌25分钟，得到第五混合液；将所述第五混合液过滤，得到第二试剂，并将所述第二试剂放置在2-8℃的环境下保存。5.如权利要求4所述的测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，其特征在于，所述校准品的制备方法包括：将糖化血红蛋白按预设比例加入糖化血红蛋白用标准品稀释液，配制称浓梯度为0％、3.6％、7.2％、12.5％、15.6％的校准品溶液，并分装成0.5ml后采用冻干技术进行冻干，得到5个浓度的校准品。6.一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒的检测方法，采用权利要求5所述的测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒，其特征在于，包括以下步骤：向待测样品中加入第一试剂混匀，37℃孵育，得到第一待测液，在660nm波长下，读取所述第一待测液的吸光度，得到第一读取值；
向所述第一待测液中加入第二混匀，37℃孵育，得到第二待测液，在660nm波长下，读取所述第二待测液的吸光度，得到第二读取值；使用所述第二读取值减去所述第一读取值，得到吸光度差值；使用校准品在全自动生化仪上通过内置曲线你和模式拟合标准曲线，根据所述吸光度差值计算出待测样品中糖化血红蛋白百分比含量。

技术总结
本发明涉及免疫比浊体外诊断技术领域，具体涉及一种测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂盒及检测方法，包括溶血剂、第一试剂、第二试剂和校准品；校准品包括糖化血红蛋白和糖化血红蛋白用标准品稀释液；溶血剂包括叠氮化钠3份、吐温5份和纯化水1000份；糖化血红蛋白用标准品稀释液包括氯化钠7份、叠氮化钠1份、氢氧化钠2.3份、磷酸氢二钠2份和磷酸二氢钠3份；第一试剂包括胶乳3-8份、氯化钠1-4份、磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-2份、叠氮化钠1-2份和纯化水40-55份；第二试剂包括磷酸氢二钠1-3份、磷酸二氢钠1-8份、叠氮化钠1-9份、纯化水1040-1055份、羊抗鼠IgG多克隆抗体1-46份和特异性鼠IgG抗1-5份，解决了测试结果不准确的问题。解决了测试结果不准确的问题。解决了测试结果不准确的问题。


技术研发人员：赵丽珍 覃肖珍 苟文来 黄艳妮 叶志杰 周晓贞
受保护的技术使用者：桂林优利特医疗电子有限公司
技术研发日：2022.12.31
技术公布日：2023/7/21