一种食品中抗生素抗性基因的PCR检测引物探针组

一种食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组
技术领域
1.本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组。


背景技术：

2.国内外对于抗生素抗性基因的研究主要集中于土壤、水体和大气等环境介质，也有部分涉及了水产品、乳品等。但是目前对食品及食品相关环境中抗生素抗性基因尚缺乏系统性的研究，而食品作为抗生素抗性基因的储存库和传播工具，被认为是抗生素抗性基因进入人体最直接的载体，应当给予高度的关注，因此，抗生素抗性基因的检测及鉴定非常重要。


技术实现要素：

3.针对以上技术问题，本发明公开了一种食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，可以通过一次pcr扩增，完成多个样品，进行包括抗四环素类、磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、β-内酰胺类等抗生素的典型抗性基因的多个靶标的检测。
4.对此，本发明采用的技术方案为：一种食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，包括针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的引物探针；针对氨基糖苷类抗生素，包括第一组氨基糖苷类检测引物探针和第二组氨基糖苷类检测引物探针，所述第一组氨基糖苷类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.1，反向引物核苷酸序列如seq id no.2所示，探针核苷酸序列如seq id no.3所示；所述第二组氨基糖苷类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.4，反向引物核苷酸序列如seq id no.5所示，探针核苷酸序列如seq id no.6所示；针对β-内酰胺类，包括第一组β-内酰胺类检测引物探针、第二组β-内酰胺类检测引物探针和第三组β-内酰胺类检测引物探针，所述第一组β-内酰胺类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.7，反向引物核苷酸序列如seq id no.8所示，探针核苷酸序列如seq id no.9所示；所述第二组β-内酰胺类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.10，反向引物核苷酸序列如seq id no.11所示，探针核苷酸序列如seq id no.12所示；所述第三组β-内酰胺类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.13，反向引物核苷酸序列如seq id no.14所示，探针核苷酸序列如seq id no.15所示；针对氟喹诺酮类抗生素，包括第一组氟喹诺酮类检测引物探针和第二组氟喹诺酮类检测引物探针，所述第一组氟喹诺酮类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.16，反向引物核苷酸序列如seq id no.17所示，探针核苷酸序列如seq id no.18所示；所述第二组氟喹诺酮类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.19，反向引物核苷酸序列如seq id no.20所示，探针核苷酸序列如seq id no.21所示；
针对糖肽类抗生素，包括第一组糖肽类检测引物探针、第二组糖肽类检测引物探针、第三组糖肽类检测引物探针、第四组糖肽类检测引物探针、第五组糖肽类检测引物探针、第六组糖肽类检测引物探针、第七组糖肽类检测引物探针、第八组糖肽类检测引物探针，所述第一组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.22，反向引物核苷酸序列如seq id no.23所示，探针核苷酸序列如seq id no.24所示；所述第二组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.25，反向引物核苷酸序列如seq id no.26所示，探针核苷酸序列如seq id no.27所示；所述第三组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.28，反向引物核苷酸序列如seq id no.29所示，探针核苷酸序列如seq id no.30所示；所述第四组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.31，反向引物核苷酸序列如seq id no.32所示，探针核苷酸序列如seq id no.33所示；所述第五组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.34，反向引物核苷酸序列如seq id no.35所示，探针核苷酸序列如seq id no.36所示；所述第六组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.37，反向引物核苷酸序列如seq id no.38所示，探针核苷酸序列如seq id no.39所示；所述第七组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.40，反向引物核苷酸序列如seq id no.41所示，探针核苷酸序列如seq id no.42所示；所述第八组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.43，反向引物核苷酸序列如seq id no.44所示，探针核苷酸序列如seq id no.45所示；针对大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类抗生素，包括第一组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针和第二组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针，所述第一组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.46，反向引物核苷酸序列如seq id no.47所示，探针核苷酸序列如seq id no.48所示；所述第二组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.49，反向引物核苷酸序列如seq id no.50所示，探针核苷酸序列如seq id no.51所示；针对恶唑烷酮类抗生素，包括恶唑烷酮类检测引物探针，所述恶唑烷酮类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.52，反向引物核苷酸序列如seq id no.53所示，探针核苷酸序列如seq id no.54所示；针对氯霉素类抗生素，包括氯霉素类检测引物探针，所述氯霉素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.55，反向引物核苷酸序列如seq id no.56所示，探针核苷酸序列如seq id no.57所示；针对利福毒素类抗生素，包括利福毒素类检测引物探针，所述利福毒素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.58，反向引物核苷酸序列如seq id no.59所示，探针核苷酸序列如seq id no.60所示；针对四环素类抗生素，包括第一组四环素类检测引物探针、第二组四环素类检测引物探针、第三组四环素类检测引物探针、第四组四环素类检测引物探针、第五组四环素类检测引物探针、第六组四环素类检测引物探针、第七组四环素类检测引物探针、第八组四环素类检测引物探针，所述第一组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.61，反向引物核苷酸序列如seq id no.62所示，探针核苷酸序列如seq id no.63所示；
所述第二组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.64，反向引物核苷酸序列如seq id no.65所示，探针核苷酸序列如seq id no.66所示；所述第三组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.67，反向引物核苷酸序列如seq id no.68所示，探针核苷酸序列如seq id no.69所示；所述第四组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.70，反向引物核苷酸序列如seq id no.71所示，探针核苷酸序列如seq id no.72所示；所述第五组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.73，反向引物核苷酸序列如seq id no.74所示，探针核苷酸序列如seq id no.75所示；所述第六组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.76，反向引物核苷酸序列如seq id no.77所示，探针核苷酸序列如seq id no.78所示；所述第七组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.79，反向引物核苷酸序列如seq id no.80所示，探针核苷酸序列如seq id no.81所示；所述第八组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.82，反向引物核苷酸序列如seq id no.83所示，探针核苷酸序列如seq id no.84所示；针对甲氧苄啶抗生素，包括甲氧苄啶检测引物探针，所述甲氧苄啶检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.85，反向引物核苷酸序列如seq id no.86所示，探针核苷酸序列如seq id no.87所示。
5.采用此技术方案，该引物探针组包含了抗四环素类、磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、β-内酰胺类等抗生素的典型抗性基因的引物、探针，可以通过一次pcr扩增，完成多个样品，多个靶标的检测，实现高通量、快速检测。
6.作为本发明的进一步改进，所述针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的引物探针中的探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
7.作为本发明的进一步改进，所述荧光报告基团为fam、vic、joe、tet、cy3、cy5、rox、texas red或lc red460中的一种，所述荧光淬灭基因为bhq1、bhq2、bhq3、dabcy1或tamra中的一种。
8.本发明还公开了一种食品中抗生素抗性基因的荧光检测试剂盒，包括权利要求1~3任意一项所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组。
9.作为本发明的进一步改进，所述的食品中抗生素抗性基因的荧光检测试剂盒还包括pcr预混液和无核酸酶水。
10.本发明还公开了一种食品中抗生素抗性基因的检测方法，所述方法用于非疾病诊断用途，包括如下步骤：步骤s1，提取待测样本的dna；其中，所述待测样本为食品；步骤s2，以待测样本的dna为模板，进行pcr反应，所述pcr反应的体系包括如上任一项所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组；步骤s3，pcr反应结束后，对pcr扩增曲线分析，确定待测样本中是否存在氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素。
11.作为本发明的进一步改进，所述pcr反应的程序为：95℃，30sec；95℃，5sec，60℃，34sec，共计40个循环。
12.与现有技术相比，本发明的有益效果为：采用本发明的技术方案，针对食品中的抗生素抗性基因开发出针对抗四环素类、磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、β-内酰胺类等抗生素的典型抗性基因的引物、探针，通过一次pcr扩增，可实现多个抗生素抗性基因靶标的检测，达到高通量、快速检测的目的，可以更好地为食品安全监管服务。
附图说明
13.图1是本发明实施例进行pcr扩增的曲线图。
实施方式
14.下面对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明。
实施例
15.一种食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，包括针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的引物探针.针对氨基糖苷类抗生素，包括第一组氨基糖苷类检测引物探针和第二组氨基糖苷类检测引物探针；所述第一组氨基糖苷类检测引物探针为：aph3-id:z48231:820正向引物：ctgtgccaaccgtcgtcaact（seq id no.1），aph3-id:z48231:820反向引物：gggcattcaatcgttgggatc（seq id no.2），aph3-id:z48231:820探针：tgttcgcaccctcgacgaagcgtgg（seq id no.3）；所述第二组氨基糖苷类检测引物探针为：strb:fj474091:264正向引物：cgacctttgtctcgatccta（seq id no.4），strb:fj474091:264反向引物：cccataagcgtacgcctggt（seq id no.5），strb:fj474091:264探针：acgcattgcacagatggcggacgca（seq id no.6）。
16.针对β-内酰胺类，包括第一组β-内酰胺类检测引物探针、第二组β-内酰胺类检测引物探针和第三组β-内酰胺类检测引物探针；所述第一组β-内酰胺类检测引物探针为：amps:nc_014932:210005正向引物：aacggttggtttagcagatg（seq id no.7），amps:nc_014932:210005反向引物：cagttggaatgttagggttac（seq id no.8），amps:nc_014932:210005探针：acatgaatggcatggaggtacctcg（seq id no.9）；所述第二组β-内酰胺类检测引物探针为：blasfo-1:fj848785:4719正向引物：tctttgactcatcccgtctg（seq id no.10），blasfo-1:fj848785:4719反向引物：caccagctgcgcggtggtta（seq id no.11），blasfo-1:fj848785:4719探针：tgatcgagagcgctatccattccgg（seq id no.12）；所述第三组β-内酰胺类检测引物探针为：pena:ab511945:1298正向引物：tttcgcttgaagacagtttg（seq id no.13），pena:ab511945:1298反向引物：ctttattgcgcggagaatcc（seq id no.14），
pena:ab511945:1298探针：atgctggagaaggtgcggaagtcgt（seq id no.15）。
17.针对氟喹诺酮类抗生素，包括第一组氟喹诺酮类检测引物探针和第二组氟喹诺酮类检测引物探针；所述第一组氟喹诺酮类检测引物探针为：oqxa:eu370913:46652正向引物：acggtgtacgtctactttgacg（seq id no.16），oqxa:eu370913:46652反向引物：agcgcctgattatcgctgga（seq id no.17），oqxa:eu370913:46652探针：tgacgtcgacgagtcaacctacctc（seq id no.18）；所述第二组氟喹诺酮类检测引物探针为：oqxbgb:eu370913:47851正向引物：ggtgaccatcgccatctcga（seq id no.19），oqxbgb:eu370913:47851反向引物：atcagccgggtagggaggtc（seq id no.20），oqxbgb:eu370913:47851探针：acggtgatctcggccatcaactcgc（seq id no.21）。
18.针对糖肽类抗生素，包括第一组糖肽类检测引物探针、第二组糖肽类检测引物探针、第三组糖肽类检测引物探针、第四组糖肽类检测引物探针、第五组糖肽类检测引物探针、第六组糖肽类检测引物探针、第七组糖肽类检测引物探针、第八组糖肽类检测引物探针；所述第一组糖肽类检测引物探针为：vana-d:ay082011:5901正向引物：tgcttccgatgattcatgga（seq id no.22），vana-d:ay082011:5901反向引物：tgaatgtcgcatcccacata（seq id no.23），vana-d:ay082011:5901探针：tggcgaggacggaaccatacagggt（seq id no.24）；所述第二组糖肽类检测引物探针为：vanr-a:m97297:3976正向引物：caagcacacctatccgattatc（seq id no.25），vanr-a:m97297:3976反向引物：tacccgagcaattaactccagt（seq id no.26），vanr-a:m97297:3976探针：tgctgaccgggaaagatacagaggt（seq id no.27）；所述第三组糖肽类检测引物探针为：vanr-b:ay655721:69正向引物：gtttctggctgaggcaggat（seq id no.28），vanr-b:ay655721:69反向引物：tcacgcaaaagttcatgccc（seq id no.29），vanr-b:ay655721:69探针：tcaggtggatgcctgcacagatgga（seq id no.30）；所述第四组糖肽类检测引物探针为：vanrc3:ay033764:3846正向引物：gaccaagcccttcaatcctt（seq id no.31），vanrc3:ay033764:3846反向引物：aatcttctggggattcgctgac（seq id no.32），vanrc3:ay033764:3846探针：gaagtcgttgctcgggtcaaaacgc（seq id no.33）；所述第五组糖肽类检测引物探针为：vanr-d:ab242319:1正向引物：ttacgaagccgtttaatccg（seq id no.34），vanr-d:ab242319:1反向引物：tatcgtattccgtgcgttca（seq id no.35），vanr-d:ab242319:1探针：taatccgctggaagtggttgcgagg（seq id no.36）；所述第六组糖肽类检测引物探针为：vanr-f:af155139:1512正向引物：ccatttatacccattgaattgg（seq id no.37），vanr-f:af155139:1512反向引物：caaactctttcggtgttaactc（seq id no.38），vanr-f:af155139:1512探针：ggtagctcgggtaaatgcacagctg（seq id no.39）；
所述第七组糖肽类检测引物探针为：vanr-l:eu250284:4731正向引物：catgctacctgatattgatggg（seq id no.40），vanr-l:eu250284:4731反向引物：cccgggcaactacttctattgg（seq id no.41），vanr-l:eu250284:4731探针：tgatgggtttcgaatcttgcaagaa（seq id no.42）；所述第八组糖肽类检测引物探针为：vanr-m:fj349556:982正向引物：gtacatgacggacaagaagcc（seq id no.43），vanr-m:fj349556:982反向引物：cgggttacttcatatccatcc（seq id no.44），vanr-m:fj349556:982探针：acaagaagccctccatgtaatccag（seq id no.45）。
19.针对大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类抗生素，包括第一组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针和第二组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针；所述第一组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针为：car(a):m80346:411正向引物：tggagatcgactccggcaag（seq id no.46），car(a):m80346:411反向引物：acgttggacgcgatcaggt（seq id no.47），car(a):m80346:411探针：aggtgatgcgctacggcaacggcta（seq id no.48）；所述第二组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针为：msr(e):jf769133:7246正向引物：cattctagcggatgaaccaa（seq id no.49），msr(e):jf769133:7246反向引物：ctcccatatcttgtctacaacca（seq id no.50），msr(e):jf769133:7246探针：accagccaccttgatctcaatggaa（seq id no.51）。
20.针对恶唑烷酮类抗生素，包括恶唑烷酮类检测引物探针，所述恶唑烷酮类检测引物探针为：optra_11:kx620934:1正向引物：tcaatggtggatgaagtccg（seq id no.52），optra_11:kx620934:1反向引物：gacctccaagagccatatacct（seq id no.53），optra_11:kx620934:1探针：agtccgtacggtatttaagacgcttat（seq id no.54）。
21.针对氯霉素类抗生素，包括氯霉素类检测引物探针，所述氯霉素类检测引物探针为：cmlv:u09991:28正向引物：ctctcaagaacgaggtcgcca（seq id no.55），cmlv:u09991:28反向引物：aggtacgagaaggcgcagaa（seq id no.56），cmlv:u09991:28探针：agaacgaggtcgccatctaccgcga（seq id no.57）。
22.针对利福毒素类抗生素，包括利福毒素类检测引物探针，所述利福毒素类检测引物探针为：iri:u56415:280正向引物：cgacgacatcaaacaacagc（seq id no.58），iri:u56415:280反向引物：acaccgagattgagaccttg（seq id no.59），iri:u56415:280探针：actggccattgccggtaccgacttc（seq id no.60）。
23.针对四环素类抗生素，包括第一组四环素类检测引物探针、第二组四环素类检测引物探针、第三组四环素类检测引物探针、第四组四环素类检测引物探针、第五组四环素类检测引物探针、第六组四环素类检测引物探针、第七组四环素类检测引物探针、第八组四环素类检测引物探针；所述第一组四环素类检测引物探针为：tet(34):ab061440:306正向引物：tcgtcacgttgataccatttg（seq id no.61），
tet(34):ab061440:306反向引物：aaccttcgccatcaccttct（seq id no.62），tet(34):ab061440:306探针：agctacgatcatgatcaccagcgtg（seq id no.63）。
24.所述第二组四环素类检测引物探针为：tet(39):ay743590:749正向引物：atttcaattgctggtgcaac（seq id no.64），tet(39):ay743590:749反向引物：cagccatgttggcacctgta（seq id no.65），tet(39):ay743590:749探针：acggctgattatctcctaatggctg（seq id no.66）。
25.所述第三组四环素类检测引物探针为：tet(58):ng_056048:1正向引物：cacttcctcgctgcatttga（seq id no.67），tet(58):ng_056048:1反向引物：gctcgatcagcaggtctgta（seq id no.68），tet(58):ng_056048:1探针：tgactgtcgaggattcggttgacat（seq id no.69）。
26.所述第四组四环素类检测引物探针为：tet(60):ng_056045:1正向引物：gaaattatctcgcacttgca（seq id no.70），tet(60):ng_056045:1反向引物：ataatttcatccgcatgacg（seq id no.71），tet(60):ng_056045:1探针：acaagaacgcggaggttgtatgaatat（seq id no.72）。
27.所述第五组四环素类检测引物探针为：teta:jx424423:94438正向引物：actcatgctcggaatgattg（seq id no.73）。
28.teta:jx424423:94438反向引物：ctgcctggacaacattgctt（seq id no.74）。
29.teta:jx424423:94438探针：acaggctacatcctgcttgccttcg（seq id no.75）。
30.所述第六组四环素类检测引物探针为：tetb(60):ng_056046:1正向引物：gatacagaatcagtgcgtgc（seq id no.76），tetb(60):ng_056046:1反向引物：ctctgccatagaatcatcaca（seq id no.77），tetb(60):ng_056046:1探针：tcagtgcgtgcaaacttctacgtga（seq id no.78）。
31.所述第七组四环素类检测引物探针为：tett:l42544:478正向引物：atataaagatagcccaaccgg（seq id no.79），tett:l42544:478反向引物：tgatttctccagtatctccg（seq id no.80），tett:l42544:478探针：tagcccaaccggcattgagagcatc（seq id no.81）。
32.所述第八组四环素类检测引物探针为：tetx:m37699:586正向引物：cagctatgcaatggaaaccg（seq id no.82），tetx:m37699:586反向引物：cagaagaaaatcaacgacact（seq id no.83），tetx:m37699:586探针：tggaaaccggctaatggcatctcac（seq id no.84）。
33.针对甲氧苄啶抗生素，包括甲氧苄啶检测引物探针，所述甲氧苄啶检测引物探针为：dfra26:am403715:303正向引物：gcgaaatctatacccaagcc（seq id no.85），dfra26:am403715:303反向引物：tcttgatattggctgaggtc（seq id no.86），dfra26:am403715:303探针：taccgcaagccgacattctctatct（seq id no.87）。
34.上述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。所述荧光报告基团为fam、vic、joe、tet、cy3、cy5、rox、texas red或lc red460中的一种，所述荧光淬灭基因为bhq1、bhq2、bhq3、dabcy1或tamra中的一种。
实施例
35.一种食品中抗生素抗性基因的荧光检测试剂盒，包括实施例1所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，还包括pcr预混液和无核酸酶水。
实施例
36.一种食品中抗生素抗性基因的检测方法，所述方法用于非疾病诊断用途，包括如下步骤：步骤s1，提取待测样本的dna；其中，所述待测样本为食品；步骤s2，以待测样本的dna为模板，进行pcr反应，所述pcr反应的体系包括如实施例1所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组；步骤s3，pcr反应结束后，对pcr扩增曲线分析，确定待测样本中是否存在氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素。
37.进一步的，所述pcr反应的程序为：95℃，30sec；95℃，5sec，60℃，34sec，共计40个循环。
38.采用上述方法，在用于食品检测时，对水产品、畜禽产品、蔬菜、发酵食品等食品样品经过dna提取后，用高通量测序仪进行全基因组测序，通过搜索相应的抗生素抗性基因数据库，获得上述几类样品中含有的抗生素抗性基因，将上述抗性基因合成为6个质粒样品，该6个样品包含了上述10类抗生素抗性基因。针对上述含有10类抗生素抗性基因的6个质粒样品进行扩增，结果如图1所示，可见6个样品中的10类抗生素抗性基因均有扩增曲线。从扩增曲线中可以看出该29对引物探针能够实现多个抗生素抗性基因靶标的检测。
39.以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

技术特征：
1.一种食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，其特征在于：包括针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的引物探针；针对氨基糖苷类抗生素，包括第一组氨基糖苷类检测引物探针和第二组氨基糖苷类检测引物探针，所述第一组氨基糖苷类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.1，反向引物核苷酸序列如seq id no.2所示，探针核苷酸序列如seq id no.3所示；所述第二组氨基糖苷类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.4，反向引物核苷酸序列如seq id no.5所示，探针核苷酸序列如seq id no.6所示；针对β-内酰胺类，包括第一组β-内酰胺类检测引物探针、第二组β-内酰胺类检测引物探针和第三组β-内酰胺类检测引物探针，所述第一组β-内酰胺类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.7，反向引物核苷酸序列如seq id no.8所示，探针核苷酸序列如seq id no.9所示；所述第二组β-内酰胺类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.10，反向引物核苷酸序列如seq id no.11所示，探针核苷酸序列如seq id no.12所示；所述第三组β-内酰胺类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.13，反向引物核苷酸序列如seq id no.14所示，探针核苷酸序列如seq id no.15所示；针对氟喹诺酮类抗生素，包括第一组氟喹诺酮类检测引物探针和第二组氟喹诺酮类检测引物探针，所述第一组氟喹诺酮类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.16，反向引物核苷酸序列如seq id no.17所示，探针核苷酸序列如seq id no.18所示；所述第二组氟喹诺酮类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.19，反向引物核苷酸序列如seq id no.20所示，探针核苷酸序列如seq id no.21所示；针对糖肽类抗生素，包括第一组糖肽类检测引物探针、第二组糖肽类检测引物探针、第三组糖肽类检测引物探针、第四组糖肽类检测引物探针、第五组糖肽类检测引物探针、第六组糖肽类检测引物探针、第七组糖肽类检测引物探针、第八组糖肽类检测引物探针，所述第一组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.22，反向引物核苷酸序列如seq id no.23所示，探针核苷酸序列如seq id no.24所示；所述第二组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.25，反向引物核苷酸序列如seq id no.26所示，探针核苷酸序列如seq id no.27所示；所述第三组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.28，反向引物核苷酸序列如seq id no.29所示，探针核苷酸序列如seq id no.30所示；所述第四组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.31，反向引物核苷酸序列如seq id no.32所示，探针核苷酸序列如seq id no.33所示；所述第五组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.34，反向引物核苷酸序列如seq id no.35所示，探针核苷酸序列如seq id no.36所示；所述第六组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.37，反向引物核苷酸序列如seq id no.38所示，探针核苷酸序列如seq id no.39所示；所述第七组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.40，反向引物核苷酸序列如seq id no.41所示，探针核苷酸序列如seq id no.42所示；所述第八组糖肽类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.43，反向引物核苷酸序列如seq id no.44所示，探针核苷酸序列如seq id no.45所示；针对大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类抗生素，包括第一组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针和第二组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针，所述第一组大
环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.46，反向引物核苷酸序列如seq id no.47所示，探针核苷酸序列如seq id no.48所示；所述第二组大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.49，反向引物核苷酸序列如seq id no.50所示，探针核苷酸序列如seq id no.51所示；针对恶唑烷酮类抗生素，包括恶唑烷酮类检测引物探针，所述恶唑烷酮类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.52，反向引物核苷酸序列如seq id no.53所示，探针核苷酸序列如seq id no.54所示；针对氯霉素类抗生素，包括氯霉素类检测引物探针，所述氯霉素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.55，反向引物核苷酸序列如seq id no.56所示，探针核苷酸序列如seq id no.57所示；针对利福毒素类抗生素，包括利福毒素类检测引物探针，所述利福毒素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.58，反向引物核苷酸序列如seq id no.59所示，探针核苷酸序列如seq id no.60所示；针对四环素类抗生素，包括第一组四环素类检测引物探针、第二组四环素类检测引物探针、第三组四环素类检测引物探针、第四组四环素类检测引物探针、第五组四环素类检测引物探针、第六组四环素类检测引物探针、第七组四环素类检测引物探针、第八组四环素类检测引物探针，所述第一组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.61，反向引物核苷酸序列如seq id no.62所示，探针核苷酸序列如seq id no.63所示；所述第二组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.64，反向引物核苷酸序列如seq id no.65所示，探针核苷酸序列如seq id no.66所示；所述第三组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.67，反向引物核苷酸序列如seq id no.68所示，探针核苷酸序列如seq id no.69所示；所述第四组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.70，反向引物核苷酸序列如seq id no.71所示，探针核苷酸序列如seq id no.72所示；所述第五组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.73，反向引物核苷酸序列如seq id no.74所示，探针核苷酸序列如seq id no.75所示；所述第六组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.76，反向引物核苷酸序列如seq id no.77所示，探针核苷酸序列如seq id no.78所示；所述第七组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.79，反向引物核苷酸序列如seq id no.80所示，探针核苷酸序列如seq id no.81所示；所述第八组四环素类检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.82，反向引物核苷酸序列如seq id no.83所示，探针核苷酸序列如seq id no.84所示；针对甲氧苄啶抗生素，包括甲氧苄啶检测引物探针，所述甲氧苄啶检测引物探针为：正向引物核苷酸序列如seq id no.85，反向引物核苷酸序列如seq id no.86所示，探针核苷酸序列如seq id no.87所示。2.根据权利要求1所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，其特征在于：所述针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的引物探针中的探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。3. 根据权利要求2所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组，其特征在于：
所述荧光报告基团为fam、vic、joe、tet、cy3、cy5、rox、texas red或lc red460中的一种，所述荧光淬灭基因为bhq1、bhq2、bhq3、dabcy1或tamra中的一种。4.一种食品中抗生素抗性基因的荧光检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1~3任意一项所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组。5.根据权利要求4所述的食品中抗生素抗性基因的荧光检测试剂盒，其特征在于：还包括pcr预混液和无核酸酶水。6.一种食品中抗生素抗性基因的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤s1，提取待测样本的dna；所述待测样本为食品；步骤s2，以待测样本的dna为模板，进行pcr反应，所述pcr反应的体系包括如权利要求1～3任一项所述的食品中抗生素抗性基因的pcr检测引物探针组；步骤s3，pcr反应结束后，对pcr扩增曲线分析，确定待测样本中是否存在氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的抗性基因。7.根据权利要求6所述的食品中抗生素抗性基因的检测方法，其特征在于： 所述pcr反应的程序为：95℃，30sec；95℃，5sec，60℃，34sec，共计40个循环。

技术总结
本发明提供了一种食品中抗生素抗性基因的PCR检测引物探针组，包括针对氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、糖肽类、大环内酯-林可酰胺-链阳菌素类、恶唑烷酮类、氯霉素类、利福毒素类、四环素类、甲氧苄啶抗生素的引物探针。采用本发明的技术方案，针对食品中的抗生素抗性基因开发出针对抗四环素类、磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、β-内酰胺类等抗生素的典型抗性基因的引物、探针，通过一次PCR扩增，可实现多个抗生素抗性基因靶标的检测，达到高通量、快速检测的目的，可以更好地为食品安全监管服务。管服务。管服务。


技术研发人员：王坤 陈亚波 林霖 谭贵良 张倩 朱成杰 余灏 赖心田 刘子雄
受保护的技术使用者：中山市食品药品检验所 电子科技大学中山学院
技术研发日：2022.12.15
技术公布日：2023/7/21