降核苷降血尿酸罗伊氏乳杆菌A21160及其应用的制作方法

降核苷降血尿酸罗伊氏乳杆菌a21160及其应用
技术领域
1.本发明涉及肠道微生物领域，功能性乳酸菌开发及其制品生产开发，特别涉及一株具有降解嘌呤核苷、降低高尿酸血症模型小鼠血尿酸的罗伊氏乳杆菌a21160及其应用。


背景技术：

2.高尿酸血症是以人体血清尿酸含量显著高于正常值为特征的代谢性疾病，目前大多数研究将高尿酸血症定义为非同日正常饮食状态下，两次测得男性空腹血尿酸》420μmol/l，女性空腹血尿酸》360μmol/l，高尿酸血症在我国不同地区患病率从5％到23％，发病趋势具有年轻化、高流行、男性高于女性、沿海地区发生率高于内陆地区的特点。长期高血尿酸可使单钠尿酸盐结晶(msu)或尿酸在细胞外液形成超饱和状态，使尿酸盐结晶大量沉积在关节滑膜、滑囊、软骨及其他组织中，引起急性、慢性、反复发作性炎性疾病，即痛风。此外高尿酸血症也是糖尿病、多种心血管疾病和肾脏疾病的独立风险因素。
3.尿酸由嘌呤核酸类物质代谢产生，人类在长期遗传进化的过程中，编码尿酸酶的基因发生失活突变，导致了分解尿酸的缺陷，使尿酸成为体内嘌呤核苷代谢的最终产物。人体中尿酸的来源可分为内源性和外源性，其中2/3的尿酸由内源性的细胞代谢分解的核酸及其他嘌呤类化合物代谢产生，1/3的尿酸则来源于外源性食物中的嘌呤经酶的作用分解，外源性嘌呤主要来源于食物中的核蛋白及呈味核苷酸等，如富含嘌呤核酸的动物内脏，海鲜以及啤酒等，嘌呤类成分的摄入量直接影响血液中尿酸水平，目前控制尿酸水平防治痛风方法主要为药物治疗和食物预防。然而长期药物治疗伴随着诸多副作用，如肝肾损害、胃肠道症状、肌肉与神经病变等。食物预防则通过减少外源性嘌呤类物质的摄入，从而减少尿酸的生成，是控制尿酸水平的主要手段之一，然而日常生活中缺乏各种食物中嘌呤类物质含量的精确信息，且由于缺乏呈味核苷酸，低嘌呤食物适口性差，营养不均衡，使低嘌呤饮食难以长期严格执行。由于肠道核苷转运蛋白对不同嘌呤类底物的亲和力不同，核苷是嘌呤类物质在肠道的主要吸收形式，核苷嘌呤被降解为嘌呤碱后，嘌呤的吸收率降低，减少了生成尿酸的前体物质的吸收。此外有研究表明，与健康人相比，高尿酸血症患者存在菌群失调现象，表现为总需氧菌、拟杆菌、大肠杆菌的数目増多，厚壁菌门如双歧杆菌及乳酸杆菌的数目减少，而益生菌可通过调整肠道菌群平衡等途径降低血尿酸水平。因此通过肠道益生菌摄取、降解消化道中的嘌呤核苷类物质，调整肠道菌群平衡等途径，可达到控制血尿酸水平、预防及治疗高尿酸血症及痛风的效果。
4.乳酸菌通常被认为是安全的食品级微生物(gras)，在预防与治疗代谢调控类疾病中发挥着重要作用。近年发现了一些具有降嘌呤核苷、降尿酸等功能的乳酸菌菌株：明治株式会社报道了一株格氏乳杆菌0ll2922，1
×
109cfu/ml的菌悬液对1.25mm的鸟苷和1.25mm的肌苷的降解率分别为90％及70％，此外，该株式会社于2015年分别申请了抑制嘌呤吸收的乳酸菌及其用途(cn106460029a)和具有嘌呤摄取能力的乳酸菌的筛选方法(cn107208029a)。大连医科大学报道了一株短乳杆菌dm9218，同时降解1.26mm肌苷和1.26mm鸟苷，降解率分别为99.31％及99.64％。吉林省农业科学院农产品加工研究所机构
报道了一株植物乳杆菌ua149对1.25mm肌苷、鸟苷降解率约为60％，丰华生物科技股份有限公司发现的具有体外降核苷能力的罗伊氏乳杆菌tsr332及发酵乳杆菌tsf331，可以降解1.26mm肌苷、鸟苷(cn111388509a)，广西大学王成华等发现的发酵乳杆菌lactobacillus fermentum 9-4对1mm肌苷、鸟苷降解率约为60％(cn110684685a)。此外，朱珺等人从新疆传统酸奶中分离并鉴定了一株发酵乳杆菌，并证实其具有体外降鸟苷能力，鸟苷浓度为1mm时，鸟苷降解率为63.06％，动物实验表明其具有降血尿酸功能(cn110079476a)。崔伟东等人从发酵食品中分离鉴定了一株植物乳杆菌，并通过模型动物实验证明其具有降血尿酸、提高尿素氮、肌酐水平、抑制血清总黄嘌呤氧化酶活性功能(cn108048368a)。兰州大学叶泽等人报道了一株降尿酸菌株jl-3，体外降尿酸能力，中南大学蒋云生等人通过基因工程手段，构建了一株产尿酸氧化酶的乳酸乳球菌，该菌株于2009年申请专利并获得授权(cn101451146)。由于核苷转运蛋白对核苷的亲和力更强，核苷是嘌呤类物质在肠道内吸收的主要形式，核苷降解为嘌呤碱后，可以减少嘌呤类物质的摄取。然而目前报道的菌株降嘌呤核苷能力普遍不强，而日常饮食中摄入的核蛋白中的核酸、嘌呤类物质含量较高，因此需要开发具备更高嘌呤核苷降解能力的菌株，通过减少生成尿酸的前体物的吸收，控制血尿酸水平，对预防与治疗痛风和高尿酸血症具有重要意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的是提供一株罗伊氏乳杆菌a21160及其应用，该菌株具有高效降解核苷如肌苷、鸟苷、腺苷的能力。
6.为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：罗伊氏乳杆菌a21160菌株，gdmcc no：62960，其具有核苷降解能力。
7.所述的罗伊氏乳杆菌a21160（limosilactobacillus reuteri）于2022年11月11日保藏于中国典型培养物保藏中心（广州市先烈中路 100 号，广东省科学院微生物研究所），保藏编号为gdmcc no：62960。
8.所述保藏编号为gdmcc no：62960的罗伊氏乳杆菌a21160的16s rdna序列如序列表中seq in no.1所示。
9.所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株的菌落特征为：菌落表面光滑，呈白色或乳白色的单个菌落，无芽孢，革兰氏染色呈阳性。
10.所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株的筛选方法，包括如下步骤为：
11.(1)将样本稀释涂布于mrs平板，挑选特征菌落并进行分离纯化，获得纯化候选菌株；
12.(2)进行16s rdna测序，通过ncbi数据库进行blast比对，鉴定并保存乳杆菌菌株；
13.(3)以静息细胞降核苷能力为检测指标，利用酶标仪对乳酸菌的核苷能力进行初步筛选；
14.(4)使用配备2998pda光电二极管矩阵色谱检测器的water e2695 hplc系统对静息细胞降解核苷的能力进行分析。
15.通过步骤(1)-(4)得到具有高效核苷降解能力的罗伊氏乳杆菌a21160菌株，其对10mmol/l肌苷-鸟苷-腺苷的降解分别为率为98.28
±
0.77％，98.59
±
2.14％及94.06
±
4.61％。
16.所述罗伊氏乳杆菌a21160菌株，在mrs培养基上生长良好，菌落为乳白色，表面光滑，边缘齐整。对菌体形态进行镜检，革兰氏染色呈紫色，杆状。
17.所述罗伊氏乳杆菌a21160菌株，采用细菌通用引物16s rdna的27f/1492r对其基因组dna为模板进行pcr扩增并测序，其16s rdna序列如sequence listing no.1中所示。将该序列在ncbi数据库中进行blast比对，并构建系统发育树，鉴定a21160为罗伊氏乳杆菌。
18.所述罗伊氏乳杆菌a21160菌株，在ph 2.5及ph 2.0的人工胃液4h后，存活率分别为186.49
±
8.11％及70.27
±
5.41％，表明罗伊氏乳杆菌a21160对ph 2.0及ph 2.5的人工胃液有较强的耐受性，同时罗伊氏乳杆菌a21160可以耐受0.1-0.3％的胆盐。
19.所述罗伊氏乳杆菌a21160菌株，对结肠上皮细胞ncm460具有一定的黏附作用。
20.所述罗伊氏乳杆菌a21160菌株的发酵液，可使涂满致病菌的平板产生透明圈，表明其可抑制致病菌的生长。
21.所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在制备发酵食品中的应用。
22.所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在制备低嘌呤前体食品中的应用。
23.所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在制备冻干粉剂、胶囊、发酵乳及其制品等产品中的应用。
24.一种降解嘌呤的方法是将所述罗伊氏乳杆菌a21160菌株细胞加入到含有嘌呤的体系中。
25.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
26.本发明提供的罗伊氏乳杆菌a21160菌株是目前发现具有最高嘌呤核苷降解能力的菌株。2ml od
600
为2的a21160的发酵菌液制备成的静息细胞在1h内对10mmol/l的肌苷-鸟苷-腺苷溶液的降解率分别为98.28
±
0.77％，98.59
±
2.14％及94.06
±
4.61％。通过降解核苷，减少肠道核苷转运蛋白对嘌呤的吸收，抑制致病菌调整肠道菌群平衡等，罗伊氏乳杆菌a21160有效降低了高尿酸血症模型小鼠血尿酸的水平。因此，该菌株应用于生产低嘌呤食品，降嘌呤、降尿酸益生菌，对预防、改善和治疗痛风以及高尿酸血症疾病具有重要意义。
27.与已发现的降嘌呤乳杆菌相比，本发明提供的罗伊氏乳杆菌a21160菌株具有更高嘌呤核苷降解能力，并有效降低了模型小鼠的血尿酸水平。
附图说明
28.图1为罗伊氏乳杆菌a21160菌株的菌落形态图。
29.图2为罗伊氏乳杆菌a21160菌株的基因组图2中(a)及16s rdna图2中(b)电泳结果。
30.图3为罗伊氏乳杆菌a21160的系统发育树。
31.图4为罗伊氏乳杆菌a21160降解10mmol/l肌苷-鸟苷(inosine-guanosine)的hplc色谱图。
32.图5为罗伊氏乳杆菌a21160对结肠上皮细胞ncm460的黏附作用
33.图6为罗伊氏乳杆菌a21160耐酸图6中(a)、耐胆盐图6中(b)实验结果。
34.图7为罗伊氏乳杆菌a21160对大肠杆菌图7中(a)、金黄色葡萄球菌图7中(b)、大肠埃希氏菌图7中(c)的抑制情况。
35.图8为罗伊氏乳杆菌a21160对高尿酸血症模型小鼠的降血尿酸作用。
具体实施方式
36.以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明。
37.实施例1
38.菌株的分离、纯化及鉴定
39.罗伊氏乳杆菌a21160菌株是从广西浦北县101岁健康长寿男性老人粪便样品中分离获得，具体分离、纯化、鉴定方法如下所述：
40.mrs培养基的配制：葡萄糖20g，牛肉膏10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，吐温80 1ml，蒸馏水1000ml，ph 6.6-6.8，配置固体培养基时，加入琼脂20g，115℃高压灭菌20min。
41.菌株分离纯化：将0.1ml或0.1g待分离样本加入0.9ml无菌生理盐水，震荡混合均匀得到样本悬液，使用生理盐水进行10倍稀释，获得10-1
～10-5
稀释梯度系列，将稀释度为10-3
～10-5
的稀释液取0.1ml涂布于mrs固体培养基，将平板置于恒温培养箱中37℃培养1-2天。培养结束后根据乳杆菌的菌落形态特征挑选目标菌株，使用平板划线的方法对菌株进行纯化。罗伊氏乳杆菌a21160菌株在mrs平板上生长形态如图1所示。挑取纯化平板上的单菌落接种于mrs液体培养基，37℃静置培养约18h后，将菌液与40％甘油以1:1的比例进行混合，保存于-80℃。
42.菌株16s rdna鉴定：将a21160的培养液按照基因组提取试剂盒说明书进行操作，并进行琼脂糖凝胶电泳验证，结果如图2a所示。取1μl 1ng/μl基因组模板加入16s rdna扩增体系中，50μl扩增体系为：1μl基因组为模板，引物27f(seq id no.2)和引物1492r(seq id no.3)各1μl，2
×
es taq mix加入25μl，ddh2o 22μl，扩增程序为94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，进行30次循环，72℃终延伸2min。扩增结束后进行1％琼脂糖凝胶电泳，罗伊氏乳杆菌a21160菌株16s rdna扩增产物如图2b所示，获得约1500bp的16s rdna，委托上海生工进行测序，获得罗伊氏乳杆菌a21160菌株的16srdna序列如sequence listing(seq id no.1)所示，使用数据库ncbi
43.(www.ncbi.nlm.nih.gov)和获得的16s rdna序列进行比对，使用mega-x分析菌株之间的系统发育关系，系统发育树结果如图3所示，发育树的bootstrap设置为1000，并以百分比形式显示，系统发育树如图3所示。a21160菌株与罗伊氏乳杆菌的亲缘关系最近，与罗伊氏乳杆菌lactobacillus reuteri strain 5菌株(genbank:mn030348.1)的相似性最高，为99.93％，初步鉴定该菌株为罗伊氏乳杆菌。该菌株已于2022年11月11日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为gdmcc no：62960。
44.实施例2
45.hplc测定罗伊氏乳杆菌a21160菌株对核苷的降解
46.在配备waters 2998pda光电二极管矩阵色谱检测器的waters alliance acquity e2695液相色谱仪中，使用waters symmetry shield rp18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，waters，usa)在30℃下对核苷含量进行分析，检测波长254nm，流动相为20mm ph 4.1的h3po
4-kh2po4缓冲液与甲醇(95：5)，流速为0.5ml/min。使用10mmol/l的pbs配置1mmol/l的肌苷、鸟苷、腺苷标准溶液，使用0.22μm的水系滤膜对标准品进行过滤后，按照设置的色谱条件对不同浓度的标品(0，0.25，0.5，0.75，1mmol/l)对标品的保留时间及峰面积进行分析，以各核苷、嘌呤的浓度对峰面积进行线性拟合，建立肌苷和鸟苷含量与峰面积之间的标
准曲线，其中肌苷标准曲线为：y＝2.47275
×
107x，r2＝0.9999；鸟苷标准曲线为：y＝3.08853
×
107x，r2＝0.9999；腺苷标准曲线为：y＝3.19242
×
107x，r2＝0.9999。
47.将经过分离纯化的目标菌株以1％接种量接种于mrs液体培养基，37℃恒温静置培养16h后，取2ml菌液，于4℃，8000rpm，离心2min，弃上清液，收集菌体。向菌体中加入750μl生理盐水洗涤菌体，并重复洗涤1次，收集清洗后的菌体细胞。使用pbs配置1、2、5、10mmol/l肌苷-鸟苷混合液或肌苷-鸟苷-腺苷混合液，将750μl核苷工作液加入到上述收集的菌体细胞中，相同操作下，以不加入菌体的核苷工作液作为核苷降解体系的空白对照，设置沸水浴灭活10min的菌体细胞为热灭活对照。将配制好的核苷降解反应体系置于37℃，120rpm恒温震荡培养60min。反应结束后，将体系置于沸水浴中灭活10min，10000rpm，离心2min，使用0.22μm的pes滤膜对上清进行过滤，置于4℃冰箱备用。根据上述色谱条件对菌株的核苷降解能力进行分析，进样量为5-20μl，根据相应核苷的标准曲线计算降解后体系中剩余的核苷。并根据以下公式计算菌体对核苷的降解率：
48.α＝[(n-x)/n]
×
100％
[0049]
α：降解率(％)，n：降解前肌苷、鸟苷或腺苷的含量(mmol)，x：降解后肌苷、鸟苷和腺苷的含量(mmol)。
[0050]
罗伊氏乳杆菌a21160菌株对10mmol/l降解的hplc检测如图4所示(进样量5μl)，该菌株对不同浓度的三种核苷混合液的降解率如表1所示。
[0051]
表1罗伊氏乳杆菌a21160对不同浓度核苷的降解率
[0052][0053]
实施例3
[0054]
发酵乳杆菌a21160对结肠上皮细胞ncm460的黏附性
[0055]
复苏保存于液氮的第9代结肠上皮细胞ncm460，传代至11代后，将2.5
×
105细胞接种于六孔板，过夜培养待细胞贴壁后，加入使用细胞培养液重悬至od600为2.0的a21160菌液，孵育2h，使用无菌pbs进行4-6次洗涤，并进行革兰氏染色，设置三组平行，统计100个细胞上黏附的罗伊氏乳杆菌a21160菌体，结果为1830/100cells，罗伊氏乳杆菌a21160对结肠上皮细胞ncm460的黏附如图5所示，说明罗伊氏乳杆菌a21160对结肠上皮细胞ncm460具有一定的黏附性。
[0056]
实施例4
[0057]
罗伊氏乳杆菌a21160的耐酸、耐胆盐特性
[0058]
用浓度为1mol/l的无菌hcl及1mol/l naoh将购自的人工胃液的ph分别调至2.0及2.5。将罗伊氏乳杆菌a21160接种于mrs液体培养基，37℃培养18h后，分别取菌液1ml加入9ml ph 2.0及ph 2.5的人工胃液中，充分混匀后取100μl进行梯度稀释并进行活菌计数，作为0h的活菌数，以0h的活菌数为100％，其余置于37℃恒温培养，4h后取样进行稀
释计数，并计算相对存活率。结果如图6a所示，在ph 2.5及ph 2.0的人工胃液4h后，罗伊氏乳杆菌a21160存活率分别为186.49
±
8.11％及70.27
±
5.41％，表明罗伊氏乳杆菌a21160对ph 2.0及ph 2.5的人工胃液有较强的耐受性。
[0059]
用牛胆盐将mrs液体培养基的胆汁盐质量分数分别调为0.1％，0.2％，0.3％，将罗伊氏乳杆菌a21160接种于mrs液体培养基，37℃培养18h后，分别取菌液1ml加入9ml含有不同质量分数的胆盐培养基中，分别在0h，2h，4h，8h对活菌数进行计数，结果如图6b所示，0.1％的胆盐环境中8h后，a21160的活菌数log10值大于7.49，0.2％的胆盐中8h后，a21160的活菌数log10值为4.69
±
0.02，而在高浓度的0.3％胆盐中，8h后，活菌数log10值为3.25
±
0.03，表明罗伊氏乳杆菌a21160可以耐受0.1-0.3％的胆盐。
[0060]
实施例5
[0061]
罗伊氏乳杆菌a21160对致病菌的抑制作用
[0062]
使用lb液体培养金黄色葡萄球菌(atcc43300)、大肠杆菌o157：h7(atcc35150)、大肠埃希氏菌(atcc25922)，37℃，220rpm，18h后，将其100μl菌悬液涂布于lb平板，在平板上放置牛津杯后，在牛津杯中加入a21160的发酵液200μl，以空白mrs培养基作为对照，待牛津杯中液体渗进平板后，将lb平板置于37℃恒温培养。a21160对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌的抑制情况分别如图7中(a)，图7中(b)，图7中(c)所示，其中平板的右上方为空白mrs培养液作为对照，空白mrs周围未形成抑菌圈，mrs不能抑制以上致病菌的生长，在三种致病菌的平板上，a21160的发酵液周围均形成了未有致病菌生长的透明圈，说明罗伊氏乳杆菌a21160的发酵液对三种不同的致病菌均有抑制作用。
[0063]
实施例6
[0064]
罗伊氏乳杆菌a21160对高尿酸血症模型小鼠的作用效果
[0065]
购买spf级4-5周龄昆明雄性小鼠24只，体重16-20g。实验前，小鼠适应一周。适应饲养7天后，随机分为正常对照组，高尿酸血症模型组、别嘌呤醇阳性对照组、益生菌干预组，每组6只。适应期结束后使用益生菌进行预防：对除正常对照组、模型组、阳性对照组外的益生菌组每日11点进行益生菌灌胃0.2ml含1
×
10
10
cfu罗伊氏乳杆菌a21160的脱脂乳，其余分组小鼠每日11点进行灌胃0.2ml脱脂乳。所有大鼠均正常饮食及自由饮水，持续14天。第21天开始，对除正常对照组外的小鼠开始饲喂高嘌呤定制鼠粮，并按照体重标准每日10点腹腔注射0.2ml 350mg/(kg
·
bw)氧嗪酸钾-0.3％羧甲基纤维素钠悬液；正常对照组提供普通鼠粮，对益生菌组治疗组小鼠每天11点时灌胃含1
×
10
10
cfu的脱脂乳。所有小鼠均自由饮水，持续7天，直至28天。实验结束时收集所有小鼠的血液、尿液，血液在3500r/min离心15min，取上清为血清，保存于-80℃冰箱备用。使用购自南京建成生物工程研究所的尿酸检测试剂盒进行尿酸含量的测定。罗伊氏乳杆菌a21160对高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸含量的影响如图8所示，结果具有显著性差异，表明罗伊氏乳杆菌a21160具有降低高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸的能力。
[0066]
实施例7
[0067]
冻干粉剂的制备
[0068]
保护剂配置：使用脱脂奶粉配成浓度为12％的脱脂牛奶溶液，115℃灭菌20min，冷却备用。
[0069]
菌株活化与培养：将保存于-80℃甘油管中的罗伊氏乳杆菌a21160菌株用接种环，
划线接种至mrs平板，于37℃恒温培养24h，将活化后的单菌落再次划线，取二次划线的单菌落接至mrs液体培养基中，37℃恒温培养12h后将4.5ml培养液接种于150ml mrs液体培养基，12h后按照3％接种量，各取10.5ml种子液接种于350ml mrs液体培养基，继续培养20h后，于4℃，4000rpm离心5min收集菌体，使用350ml 4℃的无菌生理盐水对菌体进行重悬洗涤，4000rpm离心5min，并如上述操作重复洗涤一次。对收集的菌体进行称重，并加入1:1(w:v)的脱脂乳作为保护剂，混匀制成菌悬液并分装。
[0070]
真空冷冻干燥：将分装好的菌悬液装入物料瓶，封好口后置于冰箱4℃冷藏室冷藏30min，再转入-20℃冰箱冷冻1.5h，后转入-80℃冰箱冷冻20min，使用四环foring真空冷冻干燥机对样品进行冻干，将物料瓶插入真空冷冻干燥机的t型架上，旋开开关联通安瓿管与真空冷冻干燥机，对菌剂进行干燥，时间一般为8-20h，判断物料已经干燥后，终止干燥并进行真空封口，置于干燥处保存备用，并将冻干粉剂制备成菌悬液进行特异性扩增验证并进行活菌计数。
[0071]
实施例8
[0072]
微胶囊的制备
[0073]
将罗伊氏乳杆菌a21160接种于mrs液体培养基，37℃培养18h后，离心收集菌体并使用生理盐水洗涤两次。分别配置2％海藻酸钠溶液及2％变性淀粉，进行灭菌后，将两种溶液按1：1体积比充分混合均匀，作为壁材溶液，再与离心洗涤后的纯菌体混合，通过喷雾器喷嘴雾化后喷入氯化钙(2％，m/v)溶液中，使钙离子与海藻酸钠交联反应，并静止固化120min形成微胶囊。
[0074]
实施例9
[0075]
固体饮料的制备
[0076]
将罗伊氏乳杆菌a21160如实施例7所示，制备成罗伊氏乳杆菌a21160菌株冻干粉，称取全脂奶粉40％，低聚果糖10％，海藻糖10％，菌株冻干粉10％，乳清蛋白粉10％，柠檬酸5％，麦芽糊精5％，卡拉胶5％，食用香精5％，用搅拌机搅拌20min，使用粉剂包装机对混合物进行分装及密封。
[0077]
实施例10
[0078]
发酵乳的制备
[0079]
将冻存于-20℃的罗伊氏乳杆菌a21160的冻干粉剂取出，以1％接种量接种于事先经过的调配、均质、灭菌的10ml纯牛乳中，40℃发酵24h，随后4℃冷藏。并将改发酵乳作为后续酸乳发酵的种子液，按照2％添加量添加于纯牛乳中，40℃发酵24h，随后4℃冷藏24h。对发酵乳进行活菌计数，其活菌数大于1.0
×
109cfu/ml。
[0080]
实施例11
[0081]
乳酸菌饮料
[0082]
将罗伊氏乳杆菌a21160以5％接种量接种于含有100l豆乳、干酪乳清2kg、蔗糖8kg的无菌混合液中，40℃培养20h后，采用无菌灌装法灌装到纸容器中，即制成乳酸菌饮料，将此饮料于5℃的室温下放置7天后，仍成流动状态，含乳酸1.2％，活菌数大于109cfu/ml。
[0083]
以上实例证明了该菌株的嘌呤核苷降解能力，及其在冻干制剂、酸乳发酵、胶囊制作中的应用。本发明不限于上述技术方案，本发明的任何改进，包括对该技术方案进行多种简单变形，均落在本发明的保护范围内。
[0084]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中描述的各个具体技术特征，在不矛盾情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0085]
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可任意进行组合，只要不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

技术特征：
1.一种罗伊氏乳杆菌a21160，其特征在于，该菌株于2019年8月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：62960，该菌株具有降解嘌呤核苷、降低高尿酸血症模型小鼠血尿酸水平的能力。2.根据权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160，其特征在于，该罗伊氏乳杆菌a21160菌株的16s rdna如序列表中seq in no.1所示。3.根据权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株，其特征在于，其菌落特征为：菌落表面光滑，呈白色或乳白色的单个菌落，显微镜下呈圆形或椭圆形，无芽孢，革兰氏染色呈阳性。4.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在制备发酵食品中的应用。5.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在制备低嘌呤食品中的应用。6.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在制备冻干粉剂、胶囊、发酵乳及其制品产品中的应用。7.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在降解核苷中的应用，其特征在于：是将罗伊氏乳杆菌a21160细胞或其培养物、代谢物加入到含有嘌呤的体系中。8.权利要求1所述的罗伊氏乳杆菌a21160菌株在降低血尿酸中的应用，其特征在于：是使用罗伊氏乳杆菌a21160控制血尿酸水平。

技术总结
本发明涉及微生物领域，公开了一株具有降核苷、降血尿酸功能的罗伊氏乳杆菌A21160及其应用，该罗伊氏乳杆菌A21160菌株于2022年11月11日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO：62960。微生物分类命名为Limosilactobacillus reuteri。本发明菌株能够有效降解核苷嘌呤、降低高尿酸血症模型小鼠血尿酸，适用于低嘌呤食品及降嘌呤、降尿酸功能发酵食品的生产。能发酵食品的生产。


技术研发人员：卢良华 罗卫飞 唐斌 甘彩玉 黄彩图 蔡慧雯
受保护的技术使用者：广西爱生生命科技有限公司
技术研发日：2022.12.13
技术公布日：2023/7/21