人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p的用途

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p的用途。


背景技术：

2.病毒性心肌炎(vmc)是儿童和青少年最常见的获得性心脏病之一，其是扩张型心肌病和心源性猝死的主要原因。vmc的主要原因通常来自多种病毒感染，从而导致随后的心肌炎性破坏，包括肠道病毒、腺病毒、细小病毒b19、人类疱疹病毒6和其他微生物感染。vmc可引起严重的心脏病，如急性心力衰竭、室性心律失常和心源性休克。目前，vmc已被确定为对年轻人心脏健康的威胁，导致高达12％的心源性猝死，迫切需要寻找有效的干预方案来缓解vmc。
3.铁死亡是由铁依赖性脂质过氧化引起的遗传编码的细胞死亡程序。谷胱甘肽(gsh)是谷胱甘苷过氧化物酶(gpx)的底物，其负责降低细胞中可溶性过氧化物的水平，并特异性地靶向酰基过氧化物。gsh合成受损或gpx4活性受到抑制都会诱导细胞铁死亡发生，从而引起脂质过氧化物的积累而导致细胞死亡。此外，据报道，在脑损伤的铁死亡过程中，铁水平升高，smad通路被激活。zfp36是一种特性良好的细胞质mrna衰变激活剂，在上皮间充质细胞转化过程中高度表达。经鉴定，zfp36可结合多种mrna,包括肿瘤坏死因子、白介素(il)-6、ili7a、il33和前列腺素g/h合酶2(ptgs2)，可调节靶基因转录后活性。zfp36负责调节脂质过氧化、氧化应激、细胞凋亡和免疫刺激反应。我们先前的研究发现，柯萨奇病毒b3(cvb3)可以诱导心肌细胞(cmcs)发生铁死亡，与此同时，心肌细胞铁死亡被认为积极参与cmcs死亡过程的调节。但是，精确的机制还远未被探索。
4.外泌体是细胞主动分泌的单层膜囊泡，含有多种生物活性物质，如mrna、lncrna和mirna。人脐带间充质干细胞(hucmscs)分泌的外泌体对多种疾病都有治疗作用，包括急性肝损伤、椎间盘退变(ivdd)和炎症性肠病(ibd)。已有报道来自hucmscs的外泌体可以通过激活ampk/mtor介导的自噬通量通路来缓解病毒性心肌炎。外泌体let-7a-5p可作为细胞通信的中介物和心血管疾病的生物标志物。研究表明，外泌体let-7可通过不同的信号通路有效改善肺纤维化和调节细胞增殖、凋亡和焦亡。而let-7a-5p参与了smad2抑制肿瘤和调节细胞过程。
5.但是，关于外泌体中let-7a-5p在病毒性心肌炎上的用途尚未见报道。为此，本发明旨在提供人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p的用途。


技术实现要素：

6.本发明的目的是为了解决上述问题，提供人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p的用途。本发明通过研究证明了人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p如何缓解cvb3诱导病毒性心肌炎这一过程，从cvb3诱导产生的心肌细胞铁死亡的角度，提供了一种新的有效的治疗方法。
7.为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：
8.本发明提供了人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p在制备治疗病毒性心肌炎的药物中的应用。
9.进一步地，所述外泌体中let-7a-5p抑制cvb3诱导的心肌细胞铁死亡。
10.进一步地，所述外泌体中let-7a-5p通过介导smad2以促进zfp36表达的途径抑制cvb3诱导的心肌细胞铁死亡。
11.与现有技术相比，本方案的有益效果：
12.本发明克服了现有技术中的不足，将人脐带间充质干细胞外泌体应用于病毒性心肌炎的治疗，并且通过研究证明了人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p如何缓解cvb3诱导病毒性心肌炎这一过程，从cvb3诱导产生的心肌细胞铁死亡的角度，提供了一种新的有效的治疗方法；同时，本发明还能够应用于治疗病毒性心肌炎的药物的制备。
附图说明
13.图1是本发明实施例中vmc小鼠的心肌组织损伤和铁死亡的发展((a)电镜研究了正常小鼠和vmc小鼠离体心肌的结构。(b)正常小鼠和vmc小鼠的超声心电图检查。(c)正常小鼠和vmc小鼠的lvef％和lvfs％的比较。(d和e)smad2和zfp36在vmc模型中的表达。(f)vmc模型中slc7a11的免疫组化。*p《0.05)；
14.图2是本发明实施例中外泌体let-7a-5p可有效抑制cmcs中的铁死亡((a)不同治疗组cmcs的细胞活力。(b、c)tunel检测显示不同组cmcs的凋亡率。不同处理下gxp4的(d)表达。(e-h)gsh、mda、ros、fe
2+
水平的变化在不同的治疗。*p《0.05)；
15.图3是本发明实施例中smad2的表达与cmcs中铁死亡的发展呈正相关((a)cmcs中smad2和zfp36的ip检测。(b)敲除smad2并过表达zfp36时cmcs的细胞活力。(c)经erastin处理的cmcs中smad2和zfp36的mrna表达和蛋白水平。(d)电镜下不同处理下cmcs线粒体形态和结构的变化。(e)不同处理条件下gxp4的表达情况。(f-i)gsh、mda、ros、fe
2+
水平的变化在不同的治疗。*p《0.05)；
16.图4是本发明实施例中let-7a-5p与smad2相互作用，下调其在cmcs中的表达((a)let-7a-5p与smad2 mrna相互作用的预测。(b)通过双荧光素酶报告基因检测，证实了let-7a-5p与smad2 mrna之间的相互作用。(c-d)let-7a-5p和smad2的水平。(e)let-7a-5p与smad2的表达呈负相关。*p《0.05)；
17.图5是本发明实施例中let-7a-5p下调smad2以抑制cmcs的铁死亡。((a)不同处理下smad2和let-7a-5p的表达。(b、c)edu法检测cmcs的增殖情况。(d)流式细胞术检测不同处理下cmcs的凋亡率。(e)不同处理下slc7a11和gxp4的表达。(f-i)gsh、mda、ros、fe
2+
水平的变化在不同的处理方法下。*p《0.05)；
18.图6是本发明实施例中外泌体let-7a-5p抑制smad2促进的细胞铁死亡。((a)在不同处理下lvef％和lvsf％水平的变化。(b)不同处理下vmc小鼠smad2、zfp36和gxp4表达的变化。(c、d)不同处理条件下slc7a11、ptgs2、p53的表达变化。(e和f)从体内模型中分离出的cmcs的凋亡率受到smad2和let-7a-5p的影响。*p《0.05)；
19.图7是本发明实施例中间充质干细胞和外泌体的鉴定((a)人脐带间充质干细胞的形态学。(b)流式细胞术通过检测生物标记物来鉴定人脐带间充质干细胞。(c)人脐带间充
质干细胞的成骨诱导分化。(d)人脐带间充质干细胞的成脂诱导分化。(e)纳米颗粒跟踪分析。(f)电镜下外泌体的鉴定。(g)外泌体表面生物标志物的wb鉴定。(h)通过qrt-pcr定量hucmscs和外泌体中的let-7a-5p；
20.图8是本发明实施例中来自hucmscs的外泌体抑制cmcs的铁死亡。((a)分别在12h、24h、48h检测cmcs的增殖情况。(b、c)cmcs的细胞凋亡率。(d)gpx4蛋白的表达。(e-h)gsh、mda、ros、fe
2+
的水平。(i)slc7a11、p53、ptgs2的基因和蛋白水平。*p《0.05)。
具体实施方式
21.为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明的实施例及附图，对本发明的技术方案进行进一步详细地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
22.需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
23.实施例：
24.本发明实施例提供的方案为：将人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p应用于制备治疗病毒性心肌炎病药物中。
25.本发明的外泌体let-7a-5p抑制cvb3诱导的心肌细胞铁死亡，且是通过介导smad2以促进zfp36表达的途径抑制cvb3诱导的心肌细胞铁死亡。
26.以下为本发明实施例的具体实验：
27.方法和材料
28.人脐带间充质干细胞的分离和培养
29.如前所述，人脐带间充质干细胞是知情同意的胎盘端的新鲜脐带分离出来的。该研究获得了伦理批准。细胞在37℃的dmem中培养。3～5代后，将人脐带间充质干细胞(hucmscs)用于进一步实验。
30.流式细胞仪
31.为了描述hucmscs，cd44、cd45、cd90和cd105被鉴定为之前的报告，细胞被收集并用4％的多聚甲醛固定。加入anti-cd44(#12-0441-82,ebioscience,usa)、anti-cd45(#12-0459-42,ebioscience,usa)、anti-cd90(#12-0909-42,ebioscience,usa)和anti-cd105(#12-1057-42,ebioscience,usa)，孵育30分钟。用流式细胞仪检测细胞(beckman coulter,usa)。凋亡率由annexin v-apc/pi调亡检测试剂盒(#kga1030-100,keygen biotech,中国)根据厂家说明书测定。加入annexin v-fitc和碘化丙啶(pi)工作液10min,用流式细胞术分析凋亡率。
32.成骨分化和成脂分化
33.hucmscs被诱导进行成骨和成脂分化。采用茜素红和油红o染色法评价hucmscs的成骨和成脂分化潜能。
34.外泌体提取
35.收集hucmscs培养上清液。使用exoquick外泌体沉淀溶液(#ex0q5a-1，sbi，usa)根据制造商的说明分离外泌体。外泌体用100μl的pbs重悬。采用纳米颗粒跟踪分析(nta)检测
外泌体的大小，采用透射电镜(tem)观察外泌体的形态。
36.动物和治疗
37.使用柯萨奇病毒b3(cvb3)(atcc,manassas,va,usa)生成体内vmc小鼠模型。将balb/c小鼠随机分为7组，分别为正常组、vmc组、husmscs-exo组、hucmscs-exo-inhibitor nc组、hucmsc-exo-let-7a-5p inhibitor nc组、hucmsc-exo-let-7a-5p mimic nc组、hucmsc-exo-let-7a-5p mimic组。balb/c小鼠腹腔注射0.1ml的1x103在pbs中注射tcid50cvb3诱导vmc模型，pbs腹腔注射作为对照(正常)。husmscs-exo、hucmscs-exo-inhibitor nc、hucmsc-exo-let-7a-5p inhibitor nc、hucmsc-exo mimic nc、hucmsc-exo-let-7a-5p mimic组小鼠在pbs中注射0.1ml cvb3,50μg husmscs-exo-exo-inhibitor nc、hucmsc-exo-let-7a-5p mimic nc、hucmsc-exo-let-7a-5p mimic nc、hucmsc-exo-mimicnc、hucmsc-exo-let-7a-5p mimi。7d后，所有小鼠均行心脏超声心动图检查，并测定心功能参数。整个操作及与动物相关的实验均获得动物伦理委员会批准。
38.透射电镜扫描
39.心脏和细胞样本用戊二醛固定。样品经不同浓度的酒精处理后，用环氧丙烷和环氧树脂渗透。然后对环氧树脂包埋的样品进行超薄切片。用醋酸铀酰和柠檬酸铅染色后，用透射电镜进行观察。
40.细胞实验
41.原代cmcs从新生balb/c小鼠中分离，cvb3由hela细胞维持。hela细胞和cmcs在dulbecco改良的eagle's培养基(dmem)中培养。采用50％组织培养感染剂量(tcid 50)法测定hela细胞中的病毒滴度。对照组用感染了cvb3的hela细胞培养cmcs，正常组不使用任何处理。
42.转染和病毒感染
43.抑制剂nc、let-7a-5p抑制剂、模拟物nc和let-7a-5p模拟物均购自genepharma(中国)。用抑制剂nc、let-7a-5p抑制剂、nc模拟物nc和脂质体2000的let-7a-5p模拟物转染hucmscs24h。在达到80％的融合细胞后进行外泌体提取。si-smad2、oe-smad2、oe-zfp36、let-7a-5p模拟物及其阴性对照(nc)购自genepharma(中国)，并转染到cmcs中。24h后，用erastin诱导产生细胞铁死亡和cvb3感染处理细胞。
44.免疫印迹
45.使用放射免疫沉淀(ripa)缓冲液从细胞和外泌体中提取蛋白质。操作bca蛋白检测试剂盒(#p0012,beyotime，中国)检测蛋白质浓度。蛋白质在含十二烷基硫酸钠(sds-page)的10％聚丙烯酰胺凝胶中分离。5％的脱脂牛奶被用来阻断硝化纤维素过滤膜。将滤膜与一抗和二抗在室温下孵育90分钟。用化学发光成像系统(chemiscope6100,clinx,china)评估蛋白表达。一抗cd63(#25682-1-ap)、抗tsg101(#28283-1-ap)、抗smad2(#12570-1-ap)、抗zfp36(#12737-1-ap)、抗gpx4(#14432-1-ap)、抗slc7all(#26832-1-ap)、抗p53(#10442-1-ap)、抗ptgs2(#12375-1-ap)和抗gapdh(#60004-1-ig)购自proteintech(美国)。抗calnexin(#ab22595)购自abcam(英国)。所使用的二抗为hrp山羊抗小鼠igg(#sa00001-1,proteintech,usa)和hrp山羊抗兔igg(#sa00001-2,proteintech,usa)。gapdh被用作蛋白质含量的阴性对照。
46.实时荧光定量pcr(qrt-pcr)
47.用trizol(#15596062，thermo，ma，usa)提取rna样本。使用hifiscriptcdna合成试剂盒(#cw2569，cw生物技术，中国)和mirnacdna合成试剂盒(#cw2141，cw生物技术，中国)，将rna逆转录为cdna。加入ultrasybr混合物(#cw2601，cwbio技术，中国)进行pcr扩增。相对rna的数量是用2来计算的
‑△△
ct
方法归一化后。引物序列见补充表1。
48.免疫组化
49.心肌组织载玻片在4℃与抗slc7a11一抗(#26864-1-ap，蛋白蛋白，美国)孵育过夜，然后在37℃与hrp偶联的二抗。接下来的30个min。切片用dab工作溶液开发，并用苏木精染色进行显微镜观察。
50.cck8检测
51.cck8检测采用cck8试剂盒(#nu679，dojindo，日本)进行。按照制造商的说明，在每孔中加入30μl cck8溶液。细胞在37℃和5％co2下连续培养4小时，用450nm处的吸光度评价细胞活力。
52.tunel染色
53.石蜡切片脱蜡，加入50μl tunel溶液。加入转化剂-过氧化物酶，用dab进行开发。采用苏木精、95％乙醇、无水乙醇和二甲苯处理切片。研究结果在光学显微镜下进行了分析。
54.测定gsh、mda和fe
2+
的水平
55.gsh、mda和fe
2+
的水平在滋养层细胞中检测。gsh(#a006-2-1)和mda(#a003-1)的试剂盒购自南京建成生物工程研究所(中国)。fe
2+
的试剂盒(#ab83366)购自abcam(英国)。
56.ros检测
57.采用ros检测试剂盒(#：s0033s，beyotime生物技术公司，中国)检测ros水平。去除生长培养基后收集细胞，加入稀释后的dcfh-da溶液浸没细胞。细胞在37℃下孵育20min，然后用无血清培养基洗涤3次。胰蛋白酶消化后采用流式细胞术检测。
58.ip测定
59.细胞使用抗smad2(12570-1-ap,proteintech,usa)进行，细胞用细胞裂解缓冲液裂解western和ip(#awb0144a,abiowell,中国)。将上清液与抗smad2在4℃下混合过夜，然后与磁珠(santa cruz)在4℃下共培养2h。westernblot检测smad2和zfp36(#12737-1-ap,proteintech,usa)的表达。
60.双荧光素酶报告基因检测
61.具有smad23-untranslation region(utr)、mir-133a mimics和mimics nc的野生型(wt)或突变型(mut)序列的pgl3-m载体从honorgene(中国)购买。这些载体连同mir-133a模拟物或模拟物nc,通过lipofectamine 2000共转染到cmcs中。48h后检测荧光素酶活性。
62.edu染色
63.edu染色分析细胞增殖。在培养细胞中加入50μm edu工作溶液。用4％多聚甲醛固定细胞。采用荧光显微镜进行观察。
64.统计分析
65.使用graphpad prism 8.0.2软件(graphpad软件，圣地亚哥，美国)进行统计数据分析。数据以三次独立实验的平均
±
标准差(sd)的形式呈现。采用双侧学生t检验来评估组间的差异。采用皮尔逊相关系数分析基因间的相关性。p值《0.05被认为显著。
66.结果
67.在cvb3诱导的vmc小鼠中发现并证实了cmcs的铁死亡。
68.我们建立了cvb3诱导的体内vmc小鼠模型。检测vmc模型心肌组织的病理损伤情况(如图1中a所示)。与正常心肌组织相比，vmc模型的心肌组织在电镜下显示出损伤结构。进一步的心脏超声心动图显示vmc小鼠的心脏结构受损(如图1中b所示)。此外，建模组显示左心室射血分数(lvef)衰减和左部分心室缩短(lvfs)(如图1中的c所示)。
69.与正常组相比，两项参数均明显降低。vmc组的lvef比normal组约低一半，而lvfs则更低，仅为normal组的40％。通过qrt-pcr定量，测定smad2和zfp36的mrna表达量(图1中的d)。由于铁死亡的原因，vmc组中smad2的表达比对照组更为活跃，而zfp36的表达则被大幅抑制。此外，两种蛋白在vmc小鼠中的相对表达量与mrna表达量呈相似趋势(如图1中的e所示)。smad2维持了较高水平，而zfp36则被抑制在较低水平。在vmc小鼠中，根据免疫组化结果，心肌组织中slc7a11的表达减弱，表明存在持续性铁死亡(如图1中的f所示)。因此，基于这些数据，vmc小鼠中cmcs的铁死亡可以由smad2高表达但zfp36低表达的cvb3诱导。
70.外泌体let-7a-5p可抑制cvb3诱导的cmcs铁死亡
71.利用流式细胞术分离和鉴定hucmscs的标记蛋白(cd44、cd45、cd90和cd105)(图7中的a和图7中的b)。用茜素红和油红o染色评价hucmscs的成骨和成脂分化潜力(图7中的c和图7中的d)。接下来，从hucmscs培养上清中分离外泌体。然后，采用纳米粒子跟踪分析(nta)检测外泌体的大小和浓度，并采用透射电镜(tem)观察外泌体的形态(图7中的e和图7中的f)，同时采用westem blot检测外泌体和hucmscs的标志物(calnexin、cd63和tsg101)(图7中的g)。然后，采用cvb3感染cmcs建立体外模型，其中，模型组用hucmscs-exo处理。与对照组相比，hucmscs-exo组cmcs的增殖活性增加(图8中的a)，凋亡率下降(图8中的b和图8中的c)，hucmscs-exo组中gpx4、gsh、slc7a11水平高于对照组，而mda、ros、自由离子(fe
2+
),p53、ptgs2均下降(图8中的d-图8中的di)。由于外泌体的免疫原性低且无自我复制，它是一种合格的转运体，可用于确保细胞间的交流。发现let-7a-5p的表达在hucmsc-外泌体(hucmsc-exo)中富集(图7中的h)。
72.此外，为了检测hucmscs-exo中转移的let-7a-5p是否对进展起重要作用，我们分别用hucmscs-exo或hucmscs-exo+let-7a-5pmimic处理模型细胞。发明人量化了不同处理下cmcs的细胞增殖情况(图2a)。当被病毒感染时，cmcs的增殖下降，这一趋势被hucmscs-exo逆转，hucmscs-exo+let-7a-5p模拟组的细胞增殖高于hucmscs-exo+模拟nc组。同时，操作tunel实验，vmc模型中cmcs的凋亡率升高(图2中的b和图2中的c)，可见let-7a-5p mimic使cmcs能够抑制cvb3引起的细胞死亡。此外，let-7a-5p能够平衡cvb3诱导的氧化还原变化(图2中的d-图2中的f)。对照组的gpx4和gsh水平低于正常组，但let-7a-5p mimic组的gpx4和gsh水平恢复(图2中的d和图2中的e)。gpx4水平和gsh水平的恢复量分别约为40％和30％。感染后mda升高，let-7a-5p模拟物能够降低mda水平(图2中的f)。同时，vmc模型中ros水平升高(图2中的g)。相比之下，当应用let-7a-5p模拟物时，ros水平下降。fe
2+
的积累vmc的cmcs中含量最高，而let-7a-5p模拟物显著缓解了离子积累的增加(图2中的h)。因此，在体外模型中，病毒使cmcs中的vmc产生了一系列的铁死亡现象，而let-7a-5pmimic可以抑制cvb3诱导的铁死亡。
73.抑制smad2表达可使zfp36水平上调从而抑制cmcs的铁死亡
exo、hucmscs-exo-let-7a-5p抑制剂和hucmscs-exolet7a-5p模拟物注射到vmc小鼠体内。为了检验vmc模型中功能的恢复情况，我们测量了不同处理小鼠的lvef和lvfs(图6中的a)。这两个参数在vmc组中均极低，提示心功能存在缺陷。在接受hucmscs-exo治疗时，无论是lvef还是lvfs都有明显上升，这是心功能恢复的标志。接下来，我们分析了smad2和zfp36在加入或不加入let-7a-5p mimic的模型小鼠中的表达情况(图6中的b)。vmc小鼠表现为smad2高表达而zfp36低表达，提示为活动性铁死亡。然而，let-7a-5p的内化有利于vmc小鼠的zfp36表达，抑制smad2表达。在let-7a-5p模拟处理组中，zfp36蛋白水平也上调，而smad2蛋白水平则下调。与体外实验结果一致的是，vmc小鼠的gpx4主要被下调，但hucmscs-exo-let-7a-5p模拟物能够诱导gpx4恢复(图6中的b)。与hucmscs-exo-let-7a-5p mimic nc相比，hucmscs-exo-let-7a-5p mimic组ptgs2和p53表达降低，而slc7a11表达升高(图6中的c和图6中的d)。对铁死亡相关蛋白(包括slc7a11、ptgs2和p53)表达的调控，再次证实了let-7a-5p对铁死亡的抑制。通过tunel法测定从不同小鼠组心肌组织中分离的cmcs的凋亡情况(图6中的e和图6中的f)。let-7a-5p模拟物可以抑制cmcs的凋亡率，维持cmcs的细胞活力。因此，富集let-7a-5p的外泌体可以介导smad2的下调，促进zfp36，从而发挥治疗作用，挽救cvb3诱导的小鼠vmc。
81.通过上述实验，通过ip确定了smad2和zfp36之间的相互作用。抑制smad2可以上调zfp36的表达。同样，过表达zfp36可以降低smad2的表达水平。同时沉默smad2和过表达zfp36进一步抑制了vmc细胞的铁死亡。通过对smad2与let-7a-5p相互作用的预测和表征，我们进一步确认了它们之间的靶向关系。let-7a-5p通过靶向smad2 mrna抑制smad2的表达。这种上游抑制最终导致对铁死亡过程的抑制，表现为生物标志物水平的变化。在建立的vmc小鼠模型中，smad2过表达对铁死亡发展的影响在很大程度上被let-7a-5p的内化逆转。因此，外泌体中富集的let-7a-5p可以通过调节smad2信号通路来缓解cvb3诱导的细胞性铁死亡。
82.结合以上分析，可以得出结论，来自hucmscs的外泌体中let-7a-5p可以通过调节smad2信号通路来缓解cvb3诱导心肌细胞铁死亡。外泌体中let-7a-5p的有效性的确定，能够为vmc的治疗方法的正确设计和开发打开一扇门,拓展了vmc治疗的研究。
83.因此，通过本发明的上述实施例，本发明克服了现有技术中的不足，将人脐带间充质干细胞的外泌体let-7a-5p应用于病毒性心肌炎的治疗，并且通过研究证明了人脐带间充质干细胞的外泌体let-7a-5p如何缓解cvb3诱导病毒性心肌炎这一过程，从cvb3诱导心肌细胞产生的铁死亡角度，提供了一种新的有效的治疗方法；同时，本发明还能够应用于治疗病毒性心肌炎的药物的制备。
84.以上具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

技术特征：
1.人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p在制备治疗病毒性心肌炎的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征是：所述外泌体中let-7a-5p抑制cvb3诱导的心肌细胞铁死亡。3.如权利要求2所述的应用，其特征是：所述外泌体中let-7a-5p通过介导smad2以促进zfp36表达的途径抑制cvb3诱导的心肌细胞铁死亡。

技术总结
本发明公开了人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p的用途，涉及生物医药技术领域，其技术要点为：本发明将人脐带间充质干细胞外泌体中的let-7a-5p应用在制备治疗病毒性心肌炎的药物中；所述外泌体中let-7a-5p通过介导SMAD2以促进ZFP36表达的途径抑制CVB3诱导的心肌细胞铁死亡，实现对病毒性心肌炎的治疗。本发明通过研究证明了人脐带间充质干细胞外泌体中let-7a-5p如何缓解CVB3诱导病毒性心肌炎这一过程，根据CVB3诱导病毒性心肌炎的机制，提供了一种新的有效的治疗方法。提供了一种新的有效的治疗方法。提供了一种新的有效的治疗方法。


技术研发人员：李欣
受保护的技术使用者：四川大学华西第二医院
技术研发日：2022.11.25
技术公布日：2023/7/21