苯磺顺阿曲库铵关键中间体R-四氢罂粟碱-N-乙酰-L-亮氨酸盐有关物质及纯度检测方法与流程

苯磺顺阿曲库铵关键中间体r-四氢罂粟碱-n-乙酰-l-亮氨酸盐有关物质及纯度检测方法
技术领域
1.本发明属于药物分析技术领域，特别提供一种bhs-2有关物质的检测方法。


背景技术：

2.苯磺顺阿曲库铵由葛兰素史克研发，是一种神经肌肉阻断剂，在运动终板上与胆碱能受体结合，以拮抗乙酰胆碱的作用，从而可以使神经肌肉传到阻滞，导致肌肉萎缩。该药用于住院和门诊患者的全身麻醉辅助用药，以便进行气管内插管，提供手术期间的骨骼肌松弛或icu 病房中的人工呼吸机通气。于1995 年12 月15 日获美国食品药品监督管理局批准上市，商品名nimbex
®
，为静脉注射剂，1995 年12 月26 号在英国获批上市，2004 年6 月4 号在中国获批上市，商品名为赛机宁。
3.苯磺顺阿曲库铵是阿曲库铵的同分异构体，为强效、中时效、非去极化肌松剂，起效时间与剂量有关，约为4-5 分钟，稍慢于阿曲库铵，但作用强度和作用时间强于阿曲库铵，并兼有稳定心血管的特点，大剂量使用不释放组胺。该产品应用范围广，在不同病人其药代学差异很小，无肝肾损害，适于老年、儿童、心脏和肝肾功能异常等特殊患者以及icu 病人，复合给药或持续静脉给药无蓄积作用，安全性好，是目前较为理想的一款肌松药。苯磺顺阿曲库铵2010 年以前增长非常迅速，之后略微放缓，2016 年样本医院销售额为5.12亿元，粗略推算全国市场约在15 亿元以上，在肌松药市场上独领风骚。
4.r-四氢罂粟碱-n-乙酰-l-亮氨酸盐（bhs
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2）是苯磺顺阿曲库铵的关键中间体，其基本信息如下：1、化学名称：r-四氢罂粟碱-n-乙酰-l-亮氨酸盐2、分子量/分子量：c
28h40
n2o
7 516.633、cas#：141109-12-084、结构式：
5.bhs
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2中的主要杂质如下所示：
6.bhs-2有关物质及纯度检测方法开发的难点在于主成份与杂质二氢罂粟碱结构相似，极性相近，在色谱柱上的保留行为接近，难以达到基线分离。对此，我们为bhs-2有关物质及纯度的检测提供了一种便捷、高效、经济和准确的检测方法。
7.本发明公开bhs-2有关物质及纯度的检测是通过高效液相色谱仪配置紫外检测器的方法来控制的，为bhs-2有关物质及纯度的检测提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能有效检测bhs-2的有关物质及纯度，从而有效保障苯磺顺阿曲库铵的用药安全。


技术实现要素：

8.本发明提供了一种bhs-2有关物质及纯度的检测方法，该方法具有便捷、高效、经济和准确的特点。所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液：空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液；（2）测定方法：采用液相色谱法测定bhs-2的有关物质，待系统稳定后，分别进样空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液，记录色谱图。
9.色谱条件如下：色谱柱：kromasil100-5c184.6
×
150mm，5μm或效能相当的色谱柱流动相a：磷酸-水（1：1000）流动相b：乙腈梯度洗脱表：
10.检测波长：280nm柱温：30℃进样体积：10μl流速：1.0ml/min所述空白溶液为甲醇-水=3：7（v/v）；所述系统适用性溶液：取二氢罂粟碱对照品约20mg，置20ml容量瓶中，用稀释剂溶
解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质贮备液；取bhs-2对照品约100mg，置100ml容量瓶中，用适量稀释剂溶解后，再加入0.1ml杂质贮备液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
11.所述测试溶液：取bhs-2供试品约20mg，置20ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
12.本发明的有益效果为：本发明公开的bhs-2有关物质及纯度的检测是通过高效液相色谱仪配置紫外检测器的方法来控制的，为bhs-2有关物质及纯度的检测提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能有效检测bhs-2的有关物质及纯度，从而有效保障苯磺顺阿曲库铵的用药安全。
附图说明
13.图1实施例1系统适用性溶液典型色谱图图2实施例2系统适用性溶液典型色谱图图3实施例3系统适用性溶液典型色谱图图4实施例4系统适用性溶液典型色谱图图5实施例5系统适用性溶液典型色谱图
实施方式实施例1
14.一种bhs-2有关物质的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液：空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液；所述空白溶液为甲醇-水=3：7（v/v）；所述系统适用性溶液：取二氢罂粟碱对照品约20mg，置20ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质贮备液；取bhs-2对照品约100mg，置100ml容量瓶中，用适量稀释剂溶解后，再加入0.1ml杂质贮备液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
15.所述测试溶液：取bhs-2供试品约20mg，置20ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
16.（2）测定方法：采用液相色谱法测定bhs-2的有关物质，待系统稳定后，分别进样空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液，记录色谱图。
17.采用普通的c18色谱柱试验，色谱条件如下：
18.得到系统适用性溶液典型色谱图如图1所示。
19.结果分析：bhs-2在色谱柱agilent zorbax eclipse xdb-c18上保留相对较弱，且bhs-2与杂质二氢罂粟碱的出峰位置重合。
实施例2
20.按实施例1所示配制配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液。为了增强bhs-2在色谱柱上的保留，使bhs-2与杂质二氢罂粟碱达到基线分离，在流动相中添加离子对试剂辛烷磺酸钠，色谱条件如下：
21.得到系统适用性溶液典型色谱图如图2所示。
22.结果分析：在流动相中添加离子对试剂辛烷磺酸钠后，主成份bhs-2在色谱柱上的保留显著增强，但是bhs-2与杂质二氢罂粟碱的出峰位置仍然重合，二者未分离。
实施例3
23.按实施例1所示配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液。为了使bhs-2与杂质二氢罂粟碱达到基线分离，使用亲水性的ymc-triart diol-hilic 色谱柱试验，并将洗脱方式改为梯度洗脱，色谱条件如下：
24.得到系统适用性溶液典型色谱图如图3所示。
25.结果分析：采用ymc-triart diol-hilic 色谱柱梯度洗脱后，bhs-2与杂质二氢罂粟碱达到基线分离（分离度为5.0），但是主峰出现拖尾（拖尾因子为2.2），且ymc-triart diol-hilic成本较高，离子对试剂辛烷磺酸钠对色谱柱伤害较大，故进一步进行方法优化。
实施例4
26.按实施例1所示配制配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液。为了解决bhs-2主峰拖尾的问题，同时从成本考虑，拟更换有高对称峰形和高分离效能的kromasil 100-5 c18色谱柱试验，同时更换流动相a的组成，色谱条件如下：
27.得到系统适用性溶液典型色谱图如图4所示。
28.结果分析：更换色谱柱和流动相a的组成后，bhs-2与杂质二氢罂粟碱可达到基线
分离（分离度为1.5），但是存在一定的风险，拟进一步优化。
实施例5
29.按实施例1所示配制配制空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液。为了进一步优化bhs-2与杂质二氢罂粟碱之间的分离度，拟调整梯度试验，色谱条件如下：
30.得到系统适用性溶液典型色谱图如图5所示。
31.结果分析：调整梯度后，基线更平稳，且bhs-2与杂质二氢罂粟碱之间的分离度为2.7，达到基线分离。
32.通过上述方法对比，从bhs-2主峰峰型、杂质二氢罂粟碱之间的分离度、操作的便捷和高效经济综合考虑下，确定实施例5为最终的分析方法。
33.本次发明为解决苯磺顺阿曲库铵关键中间体r-四氢罂粟碱-n-乙酰-l-亮氨酸盐（bhs
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2）有关物质及纯度的检测问题，提供了一种便捷、高效、经济和准确的检测方法。该方法能有效检测bhs-2的有关物质及纯度，从而有效保证bhs-2的质量控制，从而有效保障苯磺顺阿曲库铵的用药安全。本发明通过大量实验筛选出有出色峰型和较好分离能力的kromasil 100-5 c18 4.6
×
150mm，5μm色谱柱、乙腈和缓冲盐作为流动相的检测分析方法，可有效解决主峰bhs-2峰型差、保留弱、主峰与杂质二氢罂粟碱分离度不好的问题，且便于操作、高效和经济。
34.本发明未尽事宜为公知技术。上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种苯磺顺阿曲库铵关键中间体r-四氢罂粟碱-n-乙酰-l-亮氨酸盐有关物质及纯度检测方法，其特征在于，包括如下步骤，（1）配制溶液：空白溶液、系统适用性溶液、测试溶液；（2）测定方法：采用液相色谱法测定bhs-2的有关物质，待系统稳定后，分别进样空白溶液、系统适用性溶液和测试溶液，记录色谱图；色谱条件如下：色谱柱：kromasil100-5c184.6
×
150mm，5μm；流动相a为磷酸-水的体积比为1：1000；流动相b：乙腈；梯度洗脱表：检测波长：280nm柱温：30℃进样体积：10μl流速：1.0ml/min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述空白溶液为甲醇-水的体积比为3：7；所述系统适用性溶液：取二氢罂粟碱对照品约20mg，置20ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为杂质贮备液；取bhs-2对照品约100mg，置100ml容量瓶中，用适量稀释剂溶解后，再加入0.1ml杂质贮备液，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；所述测试溶液：取bhs-2供试品约20mg，置20ml容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。

技术总结
本发明属于药物分析技术领域。具体涉及麻醉用药苯磺顺阿曲库铵的关键中间体R-四氢罂粟碱-N-乙酰-L-亮氨酸盐（BHS-2）的有关物质及纯度检测，为其提供了一种便捷、高效、经济和准确的检测方法。该方法能有效检测BHS-2中的有关物质及纯度。关物质及纯度。


技术研发人员：蔡强 吴涛 高丽 谢林霞 凌宇凤
受保护的技术使用者：润都制药（荆门）有限公司 润都制药（武汉）研究院有限公司
技术研发日：2023.03.29
技术公布日：2023/7/22