一种灭活SARS病毒的溶毒仿生酶及其制备方法与流程

一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法
技术领域：
1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法。


背景技术：

2.非典型肺炎是一种急性呼吸道传染病，国外称其为重症急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，sars)，简称为sars。sars是由一种冠状病毒引起的严重急性呼吸道综合症，主要通过近距离空气飞沫和密切接触传播，起病急、传播快，病死率超过5％。
3.病毒是由一个核酸分子(dna或rna)与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体。其主要特点是：1、形体极其微小，必须在电子显微镜下才能观察；2、没有细胞构造，其主要成分仅为核酸和蛋白质两种；3、一种病毒只含一种核酸(dna或rna)；4、体内无酶系，只能利用宿主活细胞内现成代谢系统合成自身的核酸和蛋白质成分；5、以核酸和蛋白质等“元件”的装配实现其大量繁殖；6、在离体条件下，能以无生命的生物大分子状态存在，并长期保持其侵染活力；7、对一般抗生素不敏感，但对干扰素敏感；8、有些病毒的核酸还能整合到宿主的基因组中，并诱发潜伏性感染。
4.病毒是由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，病毒没有自己的代谢机构，没有酶系统。病毒离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化学物质。因此，病毒和人体细胞几乎都是一样的生存环境，目前还没有任何医疗手段可以定点灭活病毒而不伤害自身的细胞。为了解决现有的技术问题，开发一种在灭活sars病毒的同时保护自身细胞不受伤害的产品具有重要的意义。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法。本发明制备得到的溶毒仿生酶能够有效灭活sars病毒，且不伤害细胞。
6.本发明一方面提供了一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶，所述的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括：大黄200-600份、甘草100-500份、元胡80-200份、川乌80-150份、黄芪60-120份、赤芍60-100份、香葱50-80份、碳酸钙10-30份、低聚果糖8-16份、壳聚糖6-12份、有机硒10-30份。
7.优选地，所述的大黄和元胡的重量比为2-5:1，更优选地，所述的大黄和元胡的重量比为3:1。
8.优选地，所述的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括：大黄300份、甘草200份、元胡100份、川乌95份、黄芪80份、赤芍75份、香葱70份、碳酸钙20份、低聚果糖12份、壳聚糖8份、有机硒20份。
9.本发明所述的有机硒是富硒酵母、硒化卡拉胶、富硒麦芽粉提取物中的一种。
10.本发明另一方面提供了上述的溶毒仿生酶的制备方法，所述的制备方法包括以下
步骤：
11.(1)按照重量份取清洗干净的大黄、甘草、元胡、川乌、黄芪、赤芍、香葱，粉碎成浆料，过滤除去渣，取汁液，蒸煮40-60min，过滤出液体，自然冷却；
12.(2)按照重量份取低聚果糖加入到步骤(1)得到的汁液中，搅拌均匀，置于发酵罐中，30-36℃放置24-36h，过滤，得到发酵液1；
13.(3)按照重量份取壳聚糖加入到步骤(2)得到的发酵液1中，搅拌均匀，置于发酵罐中，30-36℃放置24-36h，过滤，得到发酵液2，用蒸炉进行蒸溜，蒸馏至无馏出液，得到蒸馏后的发酵液2；
14.(4)按照重量份取碳酸钙粉碎，粉末置于1800-2200℃高温炉中，烧制80-100min，冷却后，将烧制得到的粉末置于800-1200目的布袋中，用蒸炉进行蒸溜，得到蒸馏液；
15.(5)按照重量份取有机硒，和步骤(3)得到的蒸馏后的发酵液2、步骤(4)得到的蒸馏液混合，搅拌混匀，得到混合液，在混合液中加入正己烷，混合液和正己烷体积比为1:5-8，保留正己烷层，回收正己烷至尽，得到灭活sars病毒的溶毒仿生酶。
16.本发明另一方面还提供了上述的溶毒仿生酶在sars病毒产品中的应用。例如，该溶毒仿生酶可以单独使用，或者也可以加入口罩、酒精、消毒水、炭包中等等。
17.从多种植物、藻类中提取的溶液经过多次发酵后，萃取的溶毒仿生酶经过sars病毒感染者服用后，人体自身的消化系统会产出大量的溶毒仿生酶，人体消化系统内产生的溶毒仿生酶类似唾液、母乳、精液，具有极高的活性，这种酸性的溶毒仿生酶其直径小于病毒约25nm。当一个病毒感染宿主细胞时，将走过六个步骤：吸附、侵入、脱壳、合成、组装和释放。病毒利用其“冠”迷惑健康的人体细胞，然后将多“冠”插在细胞上完成吸附的过程，病毒通过“识别”宿主细胞膜表面特有的受体蛋白分子，往往被病毒感染后的细胞表面都有多聚糖或单糖链，而溶毒仿生酶喜欢黏在细菌表面的多聚糖链上，这就是为什么溶毒仿生酶能够识别被病毒感染细胞的基本原理。
18.溶毒仿生酶生成的一些生理活性物质，包括氨基酸、肽类、维生素、多糖、多酚类、黄酮类、醇类、酯类、酶类、矿物元素、有机酸和各种益生菌等，具有溶解病毒壳体蛋白的功能，以及除臭、净化空气、净化水体、抗菌抑菌的作用。人体的益生菌有细胞壁保护，活体细胞有细胞膜保护，而病毒没有细胞壁、细胞膜，只有蛋白质外壳，溶毒仿生酶可以结合蛋白质，病毒的外壳一旦被溶毒酶解体，也就失去了活性和毒性，所以溶毒仿生酶只灭活病毒，不伤害人体有益的细菌和细胞，弥补了其它抗生素、药物、消杀品等既杀细菌、病毒，也会杀灭真菌和细胞的不足。
19.本发明的有益效果：
20.本发明提供了一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法，本发明制备得到的溶毒仿生酶能够有效灭活sars病毒，灭活率达到99.99％以上，且不伤害细胞；本发明还发现通过调整大黄和元胡的比例，可明显增强灭活sars病毒的效果。另外，本发明提供的制备方法简单易操作，适合工厂化大规模生产。
具体实施方式
21.为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于
实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。
22.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
23.实施例1
24.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
25.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括大黄200份、甘草100份、元胡80份、川乌80份、黄芪60份、赤芍60份、香葱50份、碳酸钙10份、低聚果糖8份、壳聚糖6份、有机硒(富硒酵母)10份。
26.上述的溶毒仿生酶的制备方法包括以下步骤：
27.(1)按照重量份取清洗干净的大黄、甘草、元胡、川乌、黄芪、赤芍、香葱，粉碎成浆料，过滤除去渣，取汁液，蒸煮40min，过滤出液体，自然冷却；
28.(2)按照重量份取低聚果糖加入到步骤(1)得到的汁液中，搅拌均匀，置于发酵罐中，30℃放置24h，过滤，得到发酵液1；
29.(3)按照重量份取壳聚糖加入到步骤(2)得到的发酵液1中，搅拌均匀，置于发酵罐中，30℃放置24h，过滤，得到发酵液2，用蒸炉进行蒸溜，蒸馏至无馏出液，得到蒸馏后的发酵液2；
30.(4)按照重量份取碳酸钙粉碎，粉末置于1800℃高温炉中，烧制80min，冷却后，将烧制得到的粉末置于800目的布袋中，用蒸炉进行蒸溜，得到蒸馏液；
31.(5)按照重量份取有机硒，和步骤(3)得到的蒸馏后的发酵液2、步骤(4)得到的蒸馏液混合，搅拌混匀，得到混合液，在混合液中加入正己烷，混合液和正己烷体积比为1:5，保留正己烷层，回收正己烷至尽，得到灭活sars病毒的溶毒仿生酶。
32.实施例2
33.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
34.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括大黄300份、甘草200份、元胡100份、川乌95份、黄芪80份、赤芍75份、香葱70份、碳酸钙20份、低聚果糖12份、壳聚糖8份、有机硒(硒化卡拉胶)20份。即所述的大黄和元胡的重量比为3:1。
35.上述的溶毒仿生酶的制备方法包括以下步骤：
36.(1)按照重量份取清洗干净的大黄、甘草、元胡、川乌、黄芪、赤芍、香葱，粉碎成浆料，过滤除去渣，取汁液，蒸煮50min，过滤出液体，自然冷却；
37.(2)按照重量份取低聚果糖加入到步骤(1)得到的汁液中，搅拌均匀，置于发酵罐中，32℃放置30h，过滤，得到发酵液1；
38.(3)按照重量份取壳聚糖加入到步骤(2)得到的发酵液1中，搅拌均匀，置于发酵罐中，32℃放置30h，过滤，得到发酵液2，用蒸炉进行蒸溜，蒸馏至无馏出液，得到蒸馏后的发酵液2；
39.(4)按照重量份取碳酸钙粉碎，粉末置于2000℃高温炉中，烧制90min，冷却后，将烧制得到的粉末置于1000目的布袋中，用蒸炉进行蒸溜，得到蒸馏液；
40.(5)按照重量份取有机硒，和步骤(3)得到的蒸馏后的发酵液2、步骤(4)得到的蒸馏液混合，搅拌混匀，得到混合液，在混合液中加入正己烷，混合液和正己烷体积比为1:6，
保留正己烷层，回收正己烷至尽，得到灭活sars病毒的溶毒仿生酶。
41.实施例3
42.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
43.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括大黄600份、甘草500份、元胡200份、川乌150份、黄芪120份、赤芍100份、香葱80份、碳酸钙30份、低聚果糖16份、壳聚糖12份、有机硒(富硒麦芽粉提取物)30份。
44.上述的溶毒仿生酶的制备方法包括以下步骤：
45.(1)按照重量份取清洗干净的大黄、甘草、元胡、川乌、黄芪、赤芍、香葱，粉碎成浆料，过滤除去渣，取汁液，蒸煮60min，过滤出液体，自然冷却；
46.(2)按照重量份取低聚果糖加入到步骤(1)得到的汁液中，搅拌均匀，置于发酵罐中，36℃放置36h，过滤，得到发酵液1；
47.(3)按照重量份取壳聚糖加入到步骤(2)得到的发酵液1中，搅拌均匀，置于发酵罐中，36℃放置36h，过滤，得到发酵液2，用蒸炉进行蒸溜，蒸馏至无馏出液，得到蒸馏后的发酵液2；
48.(4)按照重量份取碳酸钙粉碎，粉末置于2200℃高温炉中，烧制100min，冷却后，将烧制得到的粉末置于1200目的布袋中，用蒸炉进行蒸溜，得到蒸馏液；
49.(5)按照重量份取有机硒，和步骤(3)得到的蒸馏后的发酵液2、步骤(4)得到的蒸馏液混合，搅拌混匀，得到混合液，在混合液中加入正己烷，混合液和正己烷体积比为1:8，保留正己烷层，回收正己烷至尽，得到灭活sars病毒的溶毒仿生酶。
50.实施例4
51.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
52.与实施例2的区别仅在于，大黄200份、元胡100份，即所述的大黄和元胡的重量比为2:1。
53.实施例5
54.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
55.与实施例2的区别仅在于，大黄500份、元胡100份，即所述的大黄和元胡的重量比为5:1。
56.对比例1
57.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
58.与实施例2的区别仅在于，不添加大黄。
59.对比例2
60.种灭活sars病毒的溶毒仿生酶及其制备方法：
61.与实施例2的区别仅在于，不添加元胡。
62.试验例1
63.将上述实施例1-5和对比例1-2制备得到的溶毒仿生酶，进行病毒灭活试验。
64.试验方法参照《消毒技术规范》2020年版-2.1.1.10.7；
65.试验病毒：sars-cov-2病毒，宿主细胞：vero 76细胞系
66.试验药物浓度(以溶毒仿生酶计)：100μg/ml，溶剂为生理盐水；作用时间为2h。
67.试验结果如表1所示：
68.表1：本发明对sars病毒的抑制作用
[0069][0070][0071]
试验结论：上述试验表明，利用本发明提供的制备方法得到灭活sars病毒的溶毒仿生酶，能够有效灭活sars病毒，灭活率达到99.99％以上，且不伤害细胞；将实施例2,4和5与对比例1,2进行比较，发现通过调整大黄和元胡的比例，可明显增强灭活sars病毒的效果，大黄和元胡有协同增效的作用。
[0072]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所做的举例，而并非是对本发明实施方式的限定。其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

技术特征：
1.一种灭活sars病毒的溶毒仿生酶，其特征在于，所述的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括：大黄200-600份、甘草100-500份、元胡80-200份、川乌80-150份、黄芪60-120份、赤芍60-100份、香葱50-80份、碳酸钙10-30份、低聚果糖8-16份、壳聚糖6-12份、有机硒10-30份。2.根据权利要求1所述的溶毒仿生酶，其特征在于，所述的大黄和元胡的重量比为2-5:1。3.根据权利要求1所述的溶毒仿生酶，其特征在于，所述的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，按重量份计包括：大黄300份、甘草200份、元胡100份、川乌95份、黄芪80份、赤芍75份、香葱70份、碳酸钙20份、低聚果糖12份、壳聚糖8份、有机硒20份。4.根据权利要求3所述的溶毒仿生酶，其特征在于，所述的有机硒是富硒酵母、硒化卡拉胶、富硒麦芽粉提取物中的一种。5.根据权利要求1所述的溶毒仿生酶的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：(1)按照重量份取清洗干净的大黄、甘草、元胡、川乌、黄芪、赤芍、香葱，粉碎成浆料，过滤除去渣，取汁液，蒸煮40-60min，过滤出液体，自然冷却；(2)按照重量份取低聚果糖加入到步骤(1)得到的汁液中，搅拌均匀，置于发酵罐中，30-36℃放置24-36h，过滤，得到发酵液1；(3)按照重量份取壳聚糖加入到步骤(2)得到的发酵液1中，搅拌均匀，置于发酵罐中，30-36℃放置24-36h，过滤，得到发酵液2，用蒸炉进行蒸溜，蒸馏至无馏出液，得到蒸馏后的发酵液2；(4)按照重量份取碳酸钙粉碎，粉末置于1800-2200℃高温炉中，烧制80-100min，冷却后，将烧制得到的粉末置于800-1200目的布袋中，用蒸炉进行蒸溜，得到蒸馏液；(5)按照重量份取有机硒，和步骤(3)得到的蒸馏后的发酵液2、步骤(4)得到的蒸馏液混合，搅拌混匀，得到混合液，在混合液中加入正己烷，混合液和正己烷体积比为1:5-8，保留正己烷层，回收正己烷至尽，得到灭活sars病毒的溶毒仿生酶。6.根据权利要求1-4任意一项所述的溶毒仿生酶，其特征在于，所述的溶毒仿生酶在sars病毒产品中的应用。

技术总结
本发明提供了一种灭活SARS病毒的溶毒仿生酶及其制备方法，涉及生物医药技术领域。本发明所述的溶毒仿生酶由以下原料制备而成，包括：大黄、甘草、元胡、川乌、黄芪、赤芍、香葱、碳酸钙、低聚果糖、壳聚糖、有机硒。本发明制备得到的溶毒仿生酶能够有效灭活SARS病毒，灭活率达到99.99％以上，且不伤害细胞。另外，本发明提供的制备方法简单易操作，适合工厂化大规模生产。生产。


技术研发人员：何新桥
受保护的技术使用者：常德集智生物科技有限公司
技术研发日：2022.11.01
技术公布日：2023/7/22