GLP-1、GIP和胰高血糖素受体三重激动剂的制作方法

glp-1、gip和胰高血糖素受体三重激动剂
技术领域
1.本发明涉及作为胰高血糖素样肽1受体(glp-1r)、葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体(gipr)和胰高血糖素受体(gcgr)的激动剂的新型化合物，其具有延长的作用谱。
2.序列表的援引并入
3.本技术与电子形式的序列表一起提交。该序列表的全部内容通过引用并入本文。名称为“200078wo01 sequence listing_st25”的序列表为37,918个字节，创建于2021年10月21日。


背景技术：

4.胰高血糖素样肽1(glp-1)是肠道肠内分泌细胞衍生的激素，并且是两种重要的内源性生理性肠降血糖素之一。glp-1通过刺激响应于营养物质(葡萄糖)的葡萄糖依赖性胰岛素分泌来改善血糖控制，抑制胰腺α细胞分泌胰高血糖素，减缓胃排空，并且主要通过减少食物摄取来诱导体重减轻。葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(gip)是另一种重要的肠降血糖素，它通过刺激响应于营养物质(脂肪、葡萄糖)的胰岛素分泌来改善血糖控制。此外，gip似乎改善血浆脂质分布并刺激骨骼中的钙积累。gip类似物通过在双重给药中与glp-1类似物的叠加/协同作用以及作为单分子共激动剂而诱导体重减轻并改善血糖控制(finan等人,sci transl med,2013,5(209):209ra151；frias等人,cell metab,2017,26(2):343-352；coskun等人,mol metab,2018,18:3-14；frias等人,lancet,2018,392(10160):2180-2193)，因此代表了用于放大基于glp-1的药理学的合适候选物。
5.胰高血糖素(gcg)通过促进糖原分解和糖异生来提高肝葡萄糖产生，从而防止低血糖的发生。另外，已证明胰高血糖素能刺激脂解，增加能量消耗，并减少肝脂蛋白产生。已经表明，与单独的glp-1所达到的效果相比，胰高血糖素在与glp-1联合时提供额外的体重减轻(evers等人,j med chem,2017,60(10):4293-4303；henderson等人,diabetes obes metab 2016,18(12):1176-1190；day等人,nat chem biol,2009,5(10):749-757)。这似乎是由glp-1的厌食/饱腹作用与胰高血糖素的产热和解脂作用相结合来驱动的。如两种glp-1/gcg受体共激动剂的临床研究所示，glp-1的促胰岛素和胰岛素致敏作用可以抵消慢性胰高血糖素作用的潜在致糖尿病倾向(tillner等人,diabetes obes metab,2019,21(1):120-128；parker等人,j clin endocrinol metab,2019,105(3):803-820)。然而，必须仔细控制glp-1活性与胰高血糖素活性的比率，以维持血糖控制，从而限制可实现的体重减轻功效。
6.当与glp-1和gip两者联合时，胰高血糖素有限的治疗窗口可以得到缓解，glp-1和gip都能急性刺激葡萄糖依赖性胰岛素分泌并长期增强胰岛素敏感性。这种双重肠降血糖素活性根据小鼠药理学来预测，以允许更积极的胰高血糖素药理学，从而推动额外的功效，而具有较低的致糖尿病倾向。另外，胰高血糖素对能量消耗的影响既不会被glp-1也不会被gip抵消，而glp-1和gip继而提供了它们自己的厌食作用。因此，三重激动剂肽有望提供葡萄糖控制，并伴有比使用glp-1/gip或glp-1/gcg共激动作用所能达到的效果更高的脂肪量
减少(finan等人,nat.med.,2015,21(1):27-36)。
7.glp-1/gip/gcg受体三重激动剂及其潜在的医药用途在数篇专利申请中有所描述。wo 2019/125929、wo 2019/125938和wo 2015/067716中描述了适用于人类每周一次给药的长效三重激动剂。wo 2017/009236中描述了长效胰高血糖素类似物与长效glp-1/gip共激动剂的共同给药。us 2019/0218269和us 2019/0153060中描述了旨在通过与fc片段偶联而延长的三重激动剂。wo2017/009236、wo 2015/155141、wo 2014/096145、wo 2014/096148和wo 2014/096150中描述了适用于人类每日一次给药的具有三重激动活性和延长作用的毒蜥外泌肽-4衍生物。然而，迄今为止尚没有任何一种三重激动剂产品获得上市批准。


技术实现要素：

8.本发明涉及包含肽和取代基的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中该取代基在选自位置16、17和21的位置处共价连接至该肽，例如，该取代基通过该肽中选自位置16、17和21的位置处的赖氨酸的ε-氨基而连接。该取代基延长了三重激动剂的半衰期，并且包含含有二脂肪酸的延长体a-和连接体b-c-。本发明还涉及包含这类三重激动剂和药学上可接受的辅料的药物组合物，以及所述三重激动剂的医药用途。
9.在一方面，本发明涉及包含肽和取代基的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
10.x1x2x3gtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
x
21
fvx
24
wllx
28
ggpss gappps(seq id no:45)，其中
11.x1为h或y
12.x2为aib
13.x3为h或q
14.x
12
为k、i或y
15.x
13
为y或l
16.x
15
为d或e
17.x
17
为q、r或k
18.x
18
为a、y或k
19.x
20
为aib、q、e、r或h
20.x
21
为e或k
21.x
24
为n或q
22.x
28
为a或e；
23.其中所述肽具有c末端酸或酰胺；并且
24.其中所述取代基共价连接至选自位置16、17和21的位置处的k的ε-氨基；
25.或其药学上可接受的盐。
26.此外或备选地，在第二方面，本发明涉及包含glp-1/gip/gcg受体三重激动剂和可选的至少一种药学上可接受的辅料的药物组合物。
27.此外或备选地，在另一方面，本发明涉及用作药物的如本文所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
28.此外或备选地，在另一方面，本发明涉及用于预防和/或治疗糖尿病、肥胖症和/或肝脏疾病的如本文所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
附图说明
29.图1显示了在dio小鼠中的最大功效研究中体重随时间的变化，其中比较了媒介物(
‑□‑
)；第21号化合物(-·-)；第30号化合物(-δ-)；第33号化合物(
‑▼‑
)。按照表4中描述的滴定计划表，dio小鼠每天接受一次皮下剂量。
30.图2显示了在dio小鼠中的最大功效研究中的累积食物摄入量，其中比较了媒介物(
‑□‑
)；第21号化合物(-·-)；第30号化合物(-δ-)；第33号化合物(
‑▼‑
)。按照表4中描述的滴定计划表，dio小鼠每天接受一次皮下剂量。
具体实施方式
31.本发明涉及作为glp-1、gip和胰高血糖素受体中每一种的激动剂的化合物。
32.在下文中，希腊字母可用其符号或相应的书面名称表示，例如：α＝alpha；β＝beta；ε＝epsilon；γ＝gamma；ω＝omega；等等。此外，希腊字母μ也可用“u”表示，例如μl＝ul或μm＝um。
33.除非在本说明书中另有说明，否则以单数形式呈现的术语通常也包括复数情况。
34.本文还描述了三重激动剂、药物组合物及其用途，其中开放式术语如“包含”和“包括”可用封闭式术语如“由...组成”等代替。
35.glp-1/gip/胰高血糖素受体三重激动剂
36.本发明涉及作为glp-1受体、gip受体和胰高血糖素受体的激动剂的化合物。这些激动剂中的每一种也可称为“glp-1/gip/gcg受体三重激动剂”或“三重激动剂”。如本文所述的受体激动剂是与受体结合并引发天然配体的应答的化合物(参见例如“principles of biochemistry”,al lehninger,dl nelson,mm cox,第二版,worth publishers,1993,第763页)。
37.在一些实施方案中，glp-1/gip/gcg三重激动剂是结合glp-1r、gipr和gcgr这三种受体中的每一种并在每种受体处引发响应的化合物，即能够激活glp-1r、gipr和gcgr受体中的每一种的化合物。
38.本文使用术语“化合物”来表示分子实体，因此，“化合物”除了具有针对每种化合物或每组化合物定义的最小元件外，还可具有不同的结构元件。因此，化合物可以是肽或其衍生物，只要该化合物包含所定义的结构元件和/或功能元件即可。
39.术语“化合物”还旨在涵盖其药学上相关的形式，即，本文所定义的化合物或其药学上可接受的盐、酰胺或酯。
40.术语“肽”是指两个或更多个氨基酸的序列。“肽”还可包括在n末端和/或c末端位置的氨基酸延长以及/或者在n末端和/或c末端位置的截短。通常，氨基酸残基可用其全名、其单字母代码和/或其三字母代码来表示。这三种方式完全等效。
41.氨基酸是含有氨基和羧酸基团并任选地含有一个或多个常常被称为侧链的额外基团的分子。
42.术语“氨基酸”包括蛋白型(proteinogenic)(或天然)氨基酸(其中20种标准氨基
酸)以及非蛋白型(或非天然)氨基酸。蛋白型氨基酸是天然地并入蛋白质中的氨基酸。标准氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸。非蛋白型氨基酸或者不存在于蛋白质中，或者不通过标准细胞机制产生(例如，它们可能已经经历翻译后修饰)。非蛋白型氨基酸的非限制性实例是aib(α-氨基异丁酸或2-氨基异丁酸)、正亮氨酸(nle)、正缬氨酸以及蛋白型氨基酸的d-异构体。
43.在下文中，未说明其光学异构体的肽的各个氨基酸都应被理解为意指l-异构体(除非另有说明)。
44.本文所述的glp-1/gip/gcg三重激动剂包含肽和取代基或者由肽和取代基组成。在一些实施方案中，该肽是为了优化对glp-1、gip和gcg受体的活性而产生的合成肽。如本文实施例中所证明的，已经鉴定了对glp-1受体、gip受体和gcg受体中的每一种均具有受体活性的化合物。
45.本文所述的三重激动剂还表现出通过包含脂肪酸的取代基而获得的延长的半衰期。
46.在一些实施方案中，三重激动剂的羧基末端具有羧酸基团(-cooh)，也称为c末端酸。在一些实施方案中，三重激动剂的羧基末端可以任选地包含酰胺基团(c(＝o)-nh2)，也称为c末端酰胺，这是某些蛋白质中天然存在的用-nh2代替-oh的修饰，例如天然毒蜥外泌肽-4所见。
47.肽
48.本文所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂包含肽和取代基，其中该取代基通过氨基酸残基，例如通过氨基酸侧链上的官能团连接至肽骨架。在一些实施方案中，本文所述的三重激动剂由肽和取代基组成。
49.在一些实施方案中，所述肽的氨基酸序列为：
50.x1x2x3gtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
x
21
fvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:45)，其中
51.x1为h或y
52.x2为aib
53.x3为h或q
54.x
12
为k、i或y
55.x
13
为y或l
56.x
15
为d或e
57.x
17
为q、r或k
58.x
18
为a、y或k
59.x
20
为aib、q、e、r或h
60.x
21
为e或k
61.x
24
为n或q
62.x
28
为a或e；
63.其中所述肽具有c末端酸或酰胺。
64.在一些实施方案中，所述肽的氨基酸序列为：
65.hx2hgtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:47)，其中
66.x2为aib
67.x
12
为i或y
68.x
13
为y或l
69.x
15
为d或e
70.x
17
为q或k
71.x
18
为a或y
72.x
20
为aib
73.x
24
为n或q
74.x
28
为a或e。
75.在一些实施方案中，所述肽的氨基酸序列为：
76.yx2qgtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:50)，其中
77.x2为aib
78.x
12
为i或y
79.x
13
为y或l
80.x
15
为d或e
81.x
17
为q或k
82.x
18
为a或y
83.x
20
为aib
84.x
24
为n或q
85.x
28
为a或e。
86.在一些实施方案中，x1x2x3选自haibh和yaibq。在一些实施方案中，x1x2x3为haibh。在一些实施方案中，x1x2x3为yaibq。
87.在一些实施方案中，x
12
为i或y。在一些实施方案中，x
15
为d。在一些实施方案中，x
15
为e。在一些实施方案中，sx
12
x
13
lx
15
选自syyle(seq id no:54)、sille(seq id no:55)、sylle(seq id no:56)、siyle(seq id no.57)和siyld(seq id no:58)。在一些实施方案中，sx
12
x
13
lx
15
选自syyle、sille、siyle和siyld。在一些实施方案中，sx
12
x
13
lx
15
选自syyle和sille。
88.在一些实施方案中，kx
17
x
18
ax
20
选自kqaaaib(seq id no:59)、kkaaaib(seq id no:60)、kqyaaib(seq id no.61)和kkyaaib(seq id no:62)。在一些实施方案中，kx
17
x
18
ax
20
为kqaaaib。
89.在一些实施方案中，x
24
为n。在一些实施方案中，x
24
为q。
90.在一些实施方案中，x
28
为a。在一些实施方案中，x
28
为e。
91.在一些实施方案中，所述肽选自seq id no:1-33中的任一个。在一些实施方案中，所述肽的氨基酸序列选自seq id no:1、11、13-14、17-18、20和26。在一些实施方案中，所述肽的氨基酸序列选自seq id no:11、14和26。
92.在一些实施方案中，所述肽具有c末端酸或酰胺。在一些实施方案中，所述肽具有c末端酸。在一些实施方案中，所述肽具有c末端酰胺。
93.衍生物
94.在一些实施方案中，所述glp-1/gip/gcg受体三重激动剂包含与肽共价连接的取
代基。这样的化合物还可被称为肽的衍生物，因为它们是通过将取代基共价连接至肽骨架(例如通过氨基酸侧链上的官能团)而获得的。在一些实施方案中，所述glp-1/gip/gcg受体三重激动剂由肽和取代基组成。
95.本发明的一个方面涉及包含肽和取代基的化合物，其中所述肽的氨基酸序列为：
96.x1x2x3gtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
x
21
fvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:45)，其中
97.x1为h或y
98.x2为aib
99.x3为h或q
100.x
12
为k、i或y
101.x
13
为y或l
102.x
15
为d或e
103.x
17
为q、r或k
104.x
18
为a、y或k
105.x
20
为aib、q、e、r或h
106.x
21
为e或k
107.x
24
为n或q
108.x
28
为a或e；
109.其中所述肽具有c末端酸或酰胺；并且
110.其中所述取代基共价连接至选自位置16、17和21的位置处的k的ε-氨基；或其药学上可接受的盐。
111.在进一步的实施方案中，所述肽可以如上文所述定义。
112.取代基
113.在一些实施方案中，取代基共价连接至如本文所述的三重激动剂的肽骨架，例如通过赖氨酸(k)残基的ε-氨基。在一些实施方案中，取代基通过选自骨架的位置16、17和21的位置处赖氨酸(k)的ε-氨基共价连接。在优选的实施方案中，取代基通过位置16的赖氨酸(k)的ε-氨基共价连接。
114.在一方面，取代基能够与蛋白质例如白蛋白或血清白蛋白形成非共价复合物，从而促进三重激动剂在血流中的循环，并且还具有延长三重激动剂的作用时间的效果，这是由于三重激动剂与白蛋白的复合物仅通过肾脏清除缓慢地除去。
115.在一方面，取代基通过酰化，即经由在取代基的羧酸基团与肽骨架中赖氨酸的ε-氨基之间形成的酰胺键，共价连接至所述赖氨酸残基。在一些实施方案中，所述赖氨酸的氨基通过还原胺化与取代基的醛偶联。
116.在一些实施方案中，所述取代基是a-b-c-，其包含延长体(a-)和连接体元件(b-c-)。在一些实施方案中，延长体是脂肪酸，并且是负责延长化合物半衰期的取代基的末端部分。
117.在一些实施方案中，延长体a-是脂肪酸，例如可由化学式1定义的脂肪二酸：
118.化学式1：hooc-(ch2)
p-co-*
119.其中p为8-20范围内的整数。在一些实施方案中，a-为化学式1，且p为14-20范围内
的整数，如16或18。化学式1还可被称为c(n+2)二酸。
120.在一些实施方案中，取代基还包含连接体元件b-c-，其中b-选自化学式2或化学式3：
121.化学式2：*-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-co-*
122.化学式2还可被称为γglu，其还可被描述为
123.化学式2a：并且包括r-和s-两种形式。在一些实施方案中，化学式2是γglu的s-异构体。
124.化学式3：*-nh-ch
2-(c6h
10
)-co-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-co-*，其还可被描述为化学式3a或化学式3b：
125.化学式3a：
126.化学式3b：
127.化学式3还可被称为trx-γglu，其中trx是指氨甲环酸或反式-4-(氨基甲基)环己烷羧酸，其中化学式3涵盖(1,2)、(1,3)和(1,4)形式，而化学式3a和化学式3b指定(1,4)形式。
128.在一些实施方案中，取代基还包含可由b-c-定义的连接体元件，其中c-选自化学式4或化学式5：
129.化学式4：*-[nh-((ch2)
2-o)
2-ch
2-co]
2-*，其还可被称为ado-[0130]
ado，由两个通过酰胺键连接的8-氨基-3,6-二氧杂辛酸部分组成，其还可被描述为：
[0131][0132]
化学式4a：
[0133]
化学式5：*-[nh-(ch2)
4-ch(nh2)-co]
2-*，其还可被称为εlys-[0134]
εlys，由两个通过酰胺键连接的ε赖氨酸部分组成，其还可被描述为：
[0135]
化学式5a：并且包括r-和s-两种形式。在一个实施方案中，化学式5是两个εlys部分的s-异构体。
[0136]
符号*表示连接点，并且a-、b-和c-以所示顺序通过酰胺键互相连接。
[0137]
在一些实施方案中，取代基a-b-c-选自：
[0138]
化学式6：
[0139]
化学式7：
[0140]
化学式8：；
[0141]
化学式9：；
[0142]
化学式10：
[0143]
化学式11：
[0144]
化学式12：
[0145]
和化学式13：
[0146]
在一些实施方案中，取代基选自化学式6、化学式7、化学式12和化学式13。在特定实施方案中，取代基a-b-c-选自化学式12或化学式13。
[0147]
药学上可接受的盐
[0148]
在一些实施方案中，本文所述的三重激动剂为药学上可接受的盐的形式。
[0149]
例如，通过碱与酸之间的化学反应来形成盐，例如：2nh3+h2so4→
(nh4)2so4。
[0150]
所述盐可以是碱式盐、酸式盐，或者其可以两者都不是(即，中性盐)。在水中，碱式盐产生氢氧根离子而酸式盐产生水合氢离子。
[0151]
在一些实施方案中，通过分别在阴离子或阳离子基团之间添加的阳离子或阴离子来形成本发明三重激动剂的盐。这些基团可以位于肽部分中，和/或三重激动剂的侧链中。
[0152]
本文所述三重激动剂的阴离子基团的非限制性实例包括侧链中的游离羧基和肽部分中的游离羧基。在一些实施方案中，肽部分包括c末端的游离羧酸基团。在一些实施方案中，肽部分包括在内部酸性氨基酸残基如asp和glu处的游离羧基。在一些实施方案中，本
文所述的三重激动剂不包括游离羧基。
[0153]
肽部分中的阳离子基团的非限制性实例包括n末端的游离氨基，和内部碱性氨基酸残基如his、arg和lys的游离氨基。在一些实施方案中，本文所述的三重激动剂不包括n末端的游离氨基。
[0154]
在特定实施方案中，所述三重激动剂是药学上可接受的盐的形式。
[0155]
功能性质
[0156]
在第一方面，如本文所述的三重激动剂是针对glp-1r、gipr和gcgr所有受体的激动剂，如通过本文实施例2中描述的体外效力所测试的。因此，本文所述的三重激动剂可以激活glp-1r、gipr和gcgr中的每一种。
[0157]
此外或备选地，在第二功能方面，三重激动剂对体重、食物摄入量和葡萄糖耐量具有体内作用。
[0158]
此外或备选地，在第三功能方面，相比于天然激素glp-1、gip和gcg，三重激动剂产生改善的药代动力学性质。
[0159]
生物活性——体外效力
[0160]
在本节中，术语“效力”可与“生物活性”和“活性”互换使用。
[0161]
根据第一功能方面，本文所述的三重激动剂对glp-1r、gipr和gcgr是有效的。本文所述的肽对glp-1r、gipr和gcgr也是有效的。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂具有激活hglp-1r、hgipr和hgcgr的有效体外作用。
[0162]
在一些实施方案中，效力由体外效力来确定，即本文所述的三重激动剂(或本文所述的肽)在功能受体测定中对glp-1r、gipr和gcgr中的每一种的表现。在一些实施方案中，功能受体测定分别确定本文所述的三重激动剂(或本文所述的肽)对hglp-1r、hgipr和hgcgr中的每一种的体外效力。
[0163]
术语“半数最大有效浓度”(也称为“ec
50”)是指参照剂量响应曲线，诱导基线与最大值之间的一半的响应时的浓度。ec
50
用来衡量化合物的效力，并且代表观察到其最大效应的50％时的浓度。
[0164]
因此，如本文所述的三重激动剂的体外效力可以如下所述通过测定ec
50
来确定。ec
50
值越低，效力越好。为了进一步表征此类化合物，可能还需要考虑相对于每种受体的天然激素(即hglp-1(7-37)(seq id no:35)、hgip(seq id no:36)和hgcg(seq id no:37))的体外效力。
[0165]
例如，可以在含有表达适当受体的膜的介质中，和/或在使用表达适当受体的全细胞的测定中确定体外效力。
[0166]
例如，可以在报告基因测定中，例如在稳定转染的bhk细胞系中测量人glp-1、gip或gcg受体的功能响应，该bhk细胞系表达人或小鼠glp-1、gip或gcg受体并且含有与启动子偶联的camp响应元件(cre)dna以及萤火虫萤光素酶(cre萤光素酶)基因。当camp由于glp-1、gip或gcg受体的激活而产生时，这进而导致萤光素酶得到表达。可通过添加萤光素来测定萤光素酶，该萤光素被该酶转化成氧化萤光素并产生生物发光，该生物发光被测量为体外效力的报告指标。这类测定的一个非限制性实例在本文描述的实施例2中描述。
[0167]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂能够激活hglp-1r、hgipr和hgcgr。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂能够在体外激活hglp-1r、hgipr和hgcgr，在
如本文实施例2描述的cre萤光素酶报告基因测定中，ec
50
小于500pm，如小于100pm，如小于50pm。
[0168]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂具有针对hglp-1r、hgipr和hgcgr的体外效力，如使用实施例2的方法所测定的，对应于等于或低于200pm，更优选低于75pm，或最优选低于50pm的ec
50
。
[0169]
在一个实施方案中，在如实施例2描述的人glp-1、gip和gcg受体测定中，ec
50
为0.5-500pm，如0.5-100pm，或如0.5-50pm。
[0170]
生物活性——在dio小鼠中的药效学研究
[0171]
根据第二功能方面，如本文所述的三重激动剂在体内具有生物活性，这可以通过本领域已知的任何技术在任何合适的动物模型中以及在临床试验中确定。
[0172]
饮食诱发的肥胖(dio)小鼠是合适的动物模型的一个实例，并且可以在该模型的亚慢性给药过程中评估对体重、食物摄入量和葡萄糖耐量的影响。如本文所述的三重激动剂对体重、食物摄入量和葡萄糖耐量的影响可以在这类小鼠体内确定，例如，如本文实施例4所述。
[0173]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂在dio小鼠中表现出降低体重、食物摄入量和改善葡萄糖耐量的能力，如实施例4所述。
[0174]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂减轻dio小鼠的体重。
[0175]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂减少dio小鼠的食物摄入量。
[0176]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂改善dio小鼠的葡萄糖耐量。
[0177]
在一些实施方案中，在dio小鼠中每日一次施用1nmol/kg的所述化合物13天后，如本文所述的三重激动剂减轻体重至少10％，或者在每日一次施用3nmol/kg的所述化合物13天后减轻体重至少25％。在一些实施方案中，在dio小鼠中每日一次施用1nmol/kg的所述化合物13天后，如本文所述的三重激动剂与媒介物相比减少食物摄入量至少20％，或者在每日一次施用3nmol/kg的所述化合物13天后与媒介物相比减少食物摄入量至少50％。在一些实施方案中，如在ipgtt(腹膜内葡萄糖耐量试验)中所测量的，在dio小鼠中每日一次施用1nmol/kg或3nmol/kg的所述化合物13天后，与媒介物相比，所述三重激动剂使葡萄糖耐量改善至少30％。
[0178]
药代动力学谱——在小型猪中的体内半衰期
[0179]
根据第三功能方面，如本文所述的三重激动剂具有改善的药代动力学特性，例如延长的终末半衰期，例如与天然激素glp-1、gip和gcg相比。终末半衰期的延长意味着所讨论的化合物更慢地从身体中清除。对于本文所述的三重激动剂，这导致(entails)延长的药理作用持续时间。
[0180]
如本文所述的三重激动剂的药代动力学性质可以在药代动力学(pk)研究中在体内适当地确定。进行这样的研究来评价随着时间的推移，药物化合物在体内如何被吸收、分布和消除，以及这些过程如何影响三重激动剂在体内的浓度。
[0181]
在药物开发的发现和临床前阶段，可使用诸如小鼠、大鼠、猴、犬或猪等动物模型进行pk研究。任何这样的模型都可用来测试本文所述的三重激动剂的pk性质。
[0182]
在这类研究中，通常以相关制剂的形式向动物静脉内(i.v.)、皮下(s.c.)或经口(p.o.)施用单剂量的药物。在给药后的预定时间点抽取血液样品，并通过相关的定量测定
分析样品的药物浓度。基于这些测量，绘制所研究的化合物的时间-血浆浓度曲线，并对数据进行所谓的非房室药代动力学分析。
[0183]
终末半衰期是一个重要的参数，因为长半衰期表明化合物的较低频率给药是可能的。在一些实施方案中，终末半衰期是在静脉内给药后在小型猪体内的半衰期(t
1/2
)，例如，如本文实施例3所述。
[0184]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂在小型猪中的终末半衰期至少为30小时，优选至少40小时，甚至更优选至少60小时，如静脉内给药后所测量的。
[0185]
生产过程
[0186]
可以通过经典的肽合成，例如使用t-boc或fmoc化学法的固相肽合成或其他确立的技术，来生产本文所述的三重激动剂或其片段，参见，例如，greene和wuts,“protective groups in organic synthesis”,john wiley&sons,1999，florencio zaragoza“organic synthesis on solid phase”,wiley-vch verlag gmbh,2000，以及由w.c.chan和p.d.white编著的“fmoc solid phase peptide synthesis”,oxford university press,2000。在一些实施方案中，本文描述了用于制备三重激动剂的方法。在一些实施方案中，用于制备本文所述三重激动剂的方法包括固相肽合成步骤。
[0187]
此外或备选地，如本文所述的三重激动剂可以通过重组方法来产生，即通过培养含有编码三重激动剂肽序列的dna序列并能够在允许该肽表达的条件下在合适的营养培养基中表达该肽的宿主细胞。适合表达肽的宿主细胞的非限制性实例是：大肠杆菌(escherichia coli)、酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)以及哺乳动物bhk或cho细胞系。
[0188]
例如，包含非天然氨基酸的本文所述三重激动剂可以如实验部分中的“通用制备方法”所述产生。或者参见，例如，hodgson等人:"the synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids",chemical society reviews,第33卷,第7期(2004),第422-430页。
[0189]
例如，包含取代基的本文所述三重激动剂可以如实验部分中的“通用制备方法”所述产生。在一些实施方案中，取代基作为固相肽合成的部分来构建，或者单独构建并在固相肽合成后经由赖氨酸残基连接。
[0190]
下文提供了制备多种本文所述三重激动剂的方法的具体实例。
[0191]
药物组合物
[0192]
包含本文所述三重激动剂或其药学上可接受的盐和可选的一种或多种药学上可接受的辅料的药物组合物可以如本领域已知的那样制备。
[0193]
术语“辅料”宽泛地指除活性治疗成分以外的任何组分。辅料可以是惰性物质、无活性物质和/或非药学活性物质。
[0194]
辅料可用于各种目的，例如作为载体、媒介物、稀释剂、片剂助剂和/或用来改善活性物质的给药和/或吸收。
[0195]
药物活性成分与各种辅料的配制是本领域已知的，参见例如remington:the science and practice of pharmacy(例如第19版(1995)和任何后续版本)。
[0196]
在一些实施方案中，包含本文所述三重激动剂的药物组合物是液体制剂，如水性制剂。
[0197]
例如适合注射的液体制剂可采用制药工业的常规技术来制备，该常规技术包括酌情将成分溶解并混合以得到所需终产物。
[0198]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂在合适的ph下溶解在合适的缓冲液中，因此最小化或避免了沉淀。例如，可以通过除菌过滤对用于注射的组合物进行灭菌。
[0199]
药物适应症
[0200]
本发明的另一方面涉及用作药物的如本文所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0201]
在本发明的特定方面，如本文所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂可用于以下的医学治疗：
[0202]
(i)例如通过减少食物摄入量、增加能量消耗、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食失调，如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药或类固醇给药诱发的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，如骨关节炎和/或尿失禁；
[0203]
(ii)成功减肥(无论是药物引起的还是饮食和运动引起的)后的体重维持——即，防止成功减肥后的体重增加。
[0204]
(iii)预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、糖耐量减低、1型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、mody(青年成熟发作型糖尿病)、妊娠糖尿病，和/或用于减少hba1c；
[0205]
(iv)延缓或预防糖尿病进展，如2型糖尿病的进展，延缓糖耐量减低(igt)进展成需要胰岛素的2型糖尿病，延缓或预防胰岛素抵抗，和/或延缓无需胰岛素的2型糖尿病进展成需要胰岛素的2型糖尿病；
[0206]
(v)预防和/或治疗肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝。
[0207]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂用于预防和/或治疗肥胖症。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂用于预防和/或治疗2型糖尿病。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂用于预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0208]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与预防和/或治疗肥胖症的方法有关。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与预防和/或治疗2型糖尿病的方法有关。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法有关。
[0209]
在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与体重管理方法有关。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与用于降低食欲的方法有关。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与用于减少食物摄入量的方法有关。在一些实施方案中，如本文所述的三重激动剂与预防或治疗受试者超重的方法有关。
[0210]
特定实施方案
[0211]
通过以下非限制性实施方案进一步描述本发明：
[0212]
1.包含肽和取代基的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0213]
x1x2x3gtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
x
21
fvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:45)，
其中
[0214]
x1为h或y
[0215]
x2为aib
[0216]
x3为h或q
[0217]
x
12
为k、i或y
[0218]
x
13
为y或l
[0219]
x
15
为d或e
[0220]
x
17
为q、r或k
[0221]
x
18
为a、y或k
[0222]
x
20
为aib、q、e、r或h
[0223]
x
21
为e或k
[0224]
x
24
为n或q
[0225]
x
28
为a或e；
[0226]
其中所述肽具有c末端酸或酰胺；并且
[0227]
其中所述取代基共价连接至选自位置16、17和21的位置处的k的ε-氨基；
[0228]
或其药学上可接受的盐。
[0229]
2.根据实施方案1所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0230]
x1x2x3gtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
x
21
fvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:46)，其中
[0231]
x1为h或y
[0232]
x2为aib
[0233]
x3为h或q
[0234]
x
12
为i或y
[0235]
x
13
为y或l
[0236]
x
15
为d或e
[0237]
x
17
为q、r或k
[0238]
x
18
为a、y或k
[0239]
x
20
为aib、q、e、r或h
[0240]
x
21
为e或k
[0241]
x
24
为n或q
[0242]
x
28
为a或e；
[0243]
其中所述肽具有c末端酸或酰胺；并且
[0244]
其中所述取代基共价连接至选自位置16、17和21的位置之一处的k的ε氨基；
[0245]
或其药学上可接受的盐。
[0246]
3.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x1x2x3选自haibh和yaibq。
[0247]
4.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x1x2x3为haibh。
[0248]
5.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x1x2x3为yaibq。
[0249]
6.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
12
为i。
[0250]
7.根据实施方案1-5中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
12
为y。
[0251]
8.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
13
为y。
[0252]
9.根据实施方案1-7中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
13
为l。
[0253]
10.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
15
为d。
[0254]
11.根据实施方案1-9中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
15
为e。
[0255]
12.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中sx
12
x
13
lx
15
选自syyle、sille、sylle、siyle和siyld。
[0256]
13.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中sx
12
x
13
lx
15
选自syyle、sille、siyle和siyld。
[0257]
14.根据实施方案1-9或11-13中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中sx
12
x
13
lx
15
选自syyle和sille。
[0258]
15.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
17
为k。
[0259]
16.根据实施方案1-14中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
17
为q。
[0260]
17.根据实施方案1-14中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
17
为r。
[0261]
18.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
18
为a。
[0262]
19.根据实施方案1-17中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
18
为y。
[0263]
20.根据实施方案1-17中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
18
为k。
[0264]
21.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
20
为aib。
[0265]
22.根据实施方案1-20中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
20
为q。
[0266]
23.根据实施方案1-20中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
20
为e。
[0267]
24.根据实施方案1-20中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
20
为r。
[0268]
25.根据实施方案1-20中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
20
为
h。
[0269]
26.根据实施方案1-16、18-19或21中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中kx
17
x
18
ax
20
选自kqaaaib、kkaaaib、kqyaaib和kkyaaib。
[0270]
27.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
21
为e。
[0271]
28.根据实施方案1-26中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
21
为k。
[0272]
29.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
24
为q。
[0273]
30.根据实施方案1-28中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
24
为n。
[0274]
31.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
28
为e。
[0275]
32.根据实施方案1-30中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
28
为a。
[0276]
33.根据实施方案1-4、6-16、18-19、21、26-27或29-32中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0277]
hx2hgtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:47)，其中
[0278]
x2为aib
[0279]
x
12
为i或y
[0280]
x
13
为y或l
[0281]
x
15
为d或e
[0282]
x
17
为q或k
[0283]
x
18
为a或y
[0284]
x
20
为aib
[0285]
x
24
为n或q
[0286]
x
28
为a或e。
[0287]
34.根据实施方案1-4、6-9、11-16、18-19、21、26-27或29-33中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0288]
hx2hgtftsdysx
12
x
13
lekx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:48)，其中
[0289]
x2为aib
[0290]
x
12
为i或y
[0291]
x
13
为y或l
[0292]
x
17
为q或k
[0293]
x
18
为a或y
[0294]
x
20
为aib
[0295]
x
24
为n或q
[0296]
x
28
为a或e。
[0297]
35.根据实施方案1-4、6-9、11-16、18-19、21、26-27、29、31或33-34中任一项所述
的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0298]
hx2hgtftsdysx
12
x
13
lekx
17
x
18
ax
20
efvqwlleggpssgapp
[0299]
ps(seq id no:49)，其中
[0300]
x2为aib
[0301]
x
12
为i或y
[0302]
x
13
为y或l
[0303]
x
17
为q或k
[0304]
x
18
为a或y
[0305]
x
20
为aib。
[0306]
36.根据实施方案1-3、5-16、18-19、21、26-27或29-32中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0307]
yx2qgtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:50)，其中
[0308]
x2为aib
[0309]
x
12
为i或y
[0310]
x
13
为y或l
[0311]
x
15
为d或e
[0312]
x
17
为q或k
[0313]
x
18
为a或y
[0314]
x
20
为aib
[0315]
x
24
为n或q
[0316]
x
28
为a或e。
[0317]
37.根据实施方案1-3、5-9、11-16、18、21、26-27、29、31或36中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0318]
yx2qgtftsdysx
12
x
13
lekx
17
aax
20
efvqwlleggpssgappps
[0319]
(seq id no:51)，其中
[0320]
x2为aib
[0321]
x
12
为i或y
[0322]
x
13
为y或l
[0323]
x
17
为q或k
[0324]
x
20
为aib。
[0325]
38.根据实施方案1-3、5-10、12-13、15-16、18、21、26-27、30、32或36中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：
[0326]
yx2qgtftsdysx
12
x
13
ldkx
17
aax
20
efvnwllaggpssgappp
[0327]
s(seq id no:52)，其中
[0328]
x2为aib
[0329]
x
12
为i或y
[0330]
x
13
为y或l
[0331]
x
17
为q或k
[0332]
x
20
为aib。
[0333]
39.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽具有c末端酰胺。
[0334]
40.根据实施方案1-38中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽具有c末端酸。
[0335]
41.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基为a-b-c-，其中
[0336]
a-为化学式1
[0337]
化学式1：hooc-(ch2)
p-co-*
[0338]
p为16-20范围内的整数；
[0339]
b-选自化学式2或化学式3：
[0340]
化学式2：*-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-co-*
[0341]
化学式3：*-nh-ch
2-(c6h
10
)-co-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-co-*；
[0343]
c-选自化学式4或化学式5：
[0344]
化学式4：*-[nh-((ch2)
2-o)
2-ch
2-co]
2-*
[0345]
化学式5：*-[nh-(ch2)
4-ch(nh2)-co]
2-*
[0346]
其中*表示连接点，并且a-、b-和c-以所示顺序通过酰胺键互相连接。
[0347]
42.根据实施方案41所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中a-为化学式1并且p为16或18。
[0348]
43.根据实施方案41-42中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中b-为化学式2。
[0349]
44.根据实施方案41-42中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中b-为化学式3。
[0350]
45.根据实施方案41-42或44中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中b-为化学式3a或化学式3b。
[0351]
46.根据实施方案41-45中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中c-为化学式4。
[0352]
47.根据实施方案41-45中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中c-为化学式5。
[0353]
48.根据实施方案41-43或46中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中a-为化学式1且p为18；b-为化学式2；并且c-为化学式4。
[0354]
49.根据实施方案41-43或47中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中a-为化学式1且p为18；b-为化学式2；并且c-为化学式5。
[0355]
50.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基a-b-c-选自化学式6、化学式7、化学式8、化学式9、化学式10、化学式11、化学式12和化学式13。
[0356]
51.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基a-b-c-选自化学式12和化学式13。
[0357]
52.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基共价连接至位置16的k的ε-氨基。
[0358]
53.根据实施方案1-15或18-51中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
17
为k，并且所述取代基共价连接至位置17的所述k的ε-氨基。
[0359]
54.根据实施方案1-26、28-32或39-51中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x
21
为k，并且所述取代基共价连接至位置21的所述k的ε-氨基。
[0360]
55.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中三重激动剂选自第1-57号化合物。
[0361]
56.根据实施方案1-52或55中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述三重激动剂选自第1、5-6和12-57号化合物。
[0362]
57.根据实施方案1-51、53或55中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述三重激动剂选自第2和9-10号化合物。
[0363]
58.根据实施方案1-51或54-55中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述三重激动剂选自第3-4、7-8和11号化合物。
[0364]
59.根据实施方案1-52或55-56中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中三重激动剂是第26号化合物。
[0365]
60.根据实施方案1-52或55-56中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中三重激动剂是第43号化合物。
[0366]
61.根据实施方案1-52或55-56中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中三重激动剂是第44号化合物。
[0367]
62.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中三重激动剂为针对hglp-1r、hgipr和hgcgr的激动剂。
[0368]
63.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/胰高血糖素受体三重激动剂，其中三重激动剂能够激活hglp-1r、hgipr和hgcgr。
[0369]
64.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中在采用表达以下三种受体中每一种的全细胞的试验中，三重激动剂能够激活hglp-1r、hgipr和hgcgr。
[0370]
65.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中在cre萤光素酶试验中，例如本文描述的实施例2中，三重激动剂能够在体外激活hglp-1r、hgipr和hgcgr。
[0371]
66.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其为针对hglp-1r的激动剂，当在不存在hsa的情况下在体外测量时，如在本文所述的实施例2中测定时，ec
50
不超过50pm，例如不超过10pm。
[0372]
67.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其为针对hgipr的激动剂，当在不存在hsa的情况下在体外测量时，如在本文所述的实施例2中测定时，ec
50
不超过50pm，例如不超过20pm。
[0373]
68.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其为针对hgcgr的激动剂，当在不存在hsa的情况下在体外测量时，如在本文所述的实施例2中测定时，ec
50
不超过500pm，例如不超过250pm，例如不超过50pm。
[0374]
69.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其为针对hglp-1r、hgipr和hgcgr全部受体的激动剂，当在不存在hsa的情况下在体外测量时，如在本
文所述的实施例2中测定时，ec
50
不超过500pm，例如不超过100pm。
[0375]
70.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其具有改善的药代动力学性质。
[0376]
71.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其具有延长的半衰期。
[0377]
72.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，当在小型猪中测量时，如在本文所述的实施例3中测定时，其具有改善的半衰期。
[0378]
73.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，如在本文所述的实施例3中所测定的，其在小型猪中的半衰期为至少30小时，如至少40小时，或者如至少60小时。
[0379]
74.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，如在dio小鼠中所测定的，如在本文描述的实施例4中，其在体内具有减少食物摄入量的作用。
[0380]
75.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，如在dio小鼠中所测定的，如在本文描述的实施例4中，其在体内具有诱发体重减轻的作用。
[0381]
76.根据前述实施方案中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，如在dio小鼠中所测定的，如在本文描述的实施例4中，其在体内具有改善葡萄糖耐量的作用。
[0382]
77.药物组合物，其包含根据前述实施方案中任一项所述的三重激动剂。
[0383]
78.根据实施方案77所述的药物组合物，任选地包含至少一种药学上可接受的辅料。
[0384]
79.根据实施方案77-78所述的药物组合物，其中所述三重激动剂选自第1-57号化合物。
[0385]
80.根据实施方案77-79所述的药物组合物，其中所述三重激动剂是第26号化合物。
[0386]
81.根据实施方案77-79所述的药物组合物，其中所述三重激动剂是第43号化合物。
[0387]
82.根据实施方案77-79所述的药物组合物，其中所述三重激动剂是第44号化合物。
[0388]
83.根据实施方案77-82中任一项所述的药物组合物，其用作药物。
[0389]
84.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用作药物。
[0390]
85.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于治疗：
[0391]
(i)例如通过减少食物摄入量、增加能量消耗、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食失调，如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药或类固醇给药诱发的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，如骨关节炎和/或尿失禁；
[0392]
(ii)成功减肥(无论是药物引起的还是饮食和运动引起的)后的体重维持——即，防止成功减肥后的体重增加。
[0393]
(iii)预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、糖耐量减低、1
型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、mody(青年成熟发作型糖尿病)、妊娠糖尿病，和/或用于减少hba1c；
[0394]
(iv)延缓或预防糖尿病进展，如2型糖尿病的进展，延缓糖耐量减低(igt)进展成需要胰岛素的2型糖尿病，延缓或预防胰岛素抵抗，和/或延缓无需胰岛素的2型糖尿病进展成需要胰岛素的2型糖尿病；
[0395]
(v)预防和/或治疗肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝。
[0396]
86.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、糖耐量减低、1型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、mody(青年成熟发作型糖尿病)、妊娠糖尿病，和/或用于减少hba1c。
[0397]
87.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于例如通过减少食物摄入量、增加能量消耗、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食失调，如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药或类固醇给药诱发的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，如骨关节炎和/或尿失禁。
[0398]
88.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于成功减肥(无论是药物诱发的还是饮食和运动诱发的)后的体重维持——即，预防成功减肥后的体重增加。
[0399]
89.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于预防和/或治疗肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝。
[0400]
90.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于体重管理、治疗和/或预防肥胖症和与肥胖症有关的病症。
[0401]
91.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病，例如2型糖尿病，以及与糖尿病有关的病症。
[0402]
92.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于
[0403]
(i)例如通过减少食物摄入量、增加能量消耗、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食失调，如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药或类固醇给药诱发的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，如骨关节炎和/或尿失禁；
[0404]
(ii)成功减肥(无论是药物引起的还是饮食和运动引起的)后的体重维持——即，防止成功减肥后的体重增加。
[0405]
(iii)预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、糖耐量减低、1型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、mody(青年成熟发作型糖尿病)、妊娠糖尿病，和/或用于减少hba1c；
[0406]
(iv)延缓或预防糖尿病进展，如2型糖尿病的进展，延缓糖耐量减低(igt)进展成需要胰岛素的2型糖尿病，延缓或预防胰岛素抵抗，和/或延缓无需胰岛素的2型糖尿病进展成需要胰岛素的2型糖尿病；
[0407]
(v)预防和/或治疗肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝。
[0408]
93.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、糖耐量减低、1型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、mody(青年成熟发作型糖尿病)、妊娠糖尿病，和/或用于减少hba1c。
[0409]
94.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于例如通过减少食物摄入量、增加能量消耗、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食失调，如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药或类固醇给药诱发的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，如骨关节炎和/或尿失禁。
[0410]
95.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于成功减肥(无论是药物诱发的还是饮食和运动诱发的)后的体重维持——即，预防成功减肥后的体重增加。
[0411]
96.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于预防和/或治疗肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝。
[0412]
97.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于体重管理、治疗和/或预防肥胖症和与肥胖症有关的病症。
[0413]
98.根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂在制备药物中的用途，该药物用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病，例如2型糖尿病，以及与糖尿病有关的病症。
[0414]
99.例如通过减少食物摄入量、增加能量消耗、降低体重、抑制食欲、诱导饱腹感来预防和/或治疗饮食失调，如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药或类固醇给药诱发的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，如骨关节炎和/或尿失禁的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0415]
100.成功减肥(无论是药物诱发的还是饮食和运动诱发的)后维持体重——即，防止成功减肥后的体重增加的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0416]
101.预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、糖耐量减低、1型糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病、mody(青年成熟发作型糖尿病)、妊娠糖尿病，和/或用于减少hba1c的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0417]
102.延缓或预防糖尿病进展，如2型糖尿病的进展，延缓糖耐量减低(igt)进展成需要胰岛素的2型糖尿病，延缓或预防胰岛素抵抗，和/或延缓无需胰岛素的2型糖尿病进展成需要胰岛素的2型糖尿病的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0418]
103.预防和/或治疗肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒
精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0419]
104.体重管理、治疗和/或预防肥胖症和与肥胖症有关的病症的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0420]
105.治疗和/或预防所有形式的糖尿病，例如2型糖尿病，和与糖尿病有关的病症的方法，该方法包括施用药学活性量的根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂。
[0421]
106.制备根据实施方案1-76中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂的方法。
[0422]
实施例
[0423]
该实验部分开始于缩写列表，随后是包括用于合成和表征本文所述三重激动剂的通用方法的部分。随后是一些与具体三重激动剂和选定的比较化合物的制备有关的实施例，最后是一些与三重激动剂的活性和性质有关的实施例。
[0424]
实施例用来说明本发明。
[0425]
缩写列表
[0426]
以下按字母顺序列出的缩写在下文使用：
[0427]
ac：乙酰基
[0428]
ado：8-氨基-3,6-二氧杂辛酸
[0429]
aib：alpha-氨基异丁酸(或α-氨基异丁酸)
[0430]
amu：原子质量单位
[0431]
api-es：大气压电离-电喷雾
[0432]
auc：曲线下面积
[0433]
bhk：幼仓鼠肾
[0434]
boc：叔丁氧羰基
[0435]
bw：体重
[0436]
cl-hobt：6-氯-1-羟基苯并三唑
[0437]
cre：camp响应元件
[0438]
dcm：二氯甲烷
[0439]
dic：二异丙基碳二亚胺
[0440]
dipea：n,n-二异丙基乙胺
[0441]
dmem：dulbecco改良eagle培养基
[0442]
dpbs：dulbecco磷酸盐缓冲盐水
[0443]
edta：乙二胺四乙酸
[0444]
elisa：酶联免疫吸附测定equiv：摩尔当量
[0445]
fbs：胎牛血清
[0446]
fmoc：9-芴基甲氧羰基
[0447]
gcg：胰高血糖素
[0448]
gcgr：胰高血糖素受体
[0449]
gip：葡萄糖依赖性促胰岛素多肽
[0450]
gipr：葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体glp-1：胰高血糖素样肽1glp-1r：胰高血糖素样肽1受体hepes：4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸hfip：1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇或六氟异丙醇hgcgr：人胰高血糖素受体hgipr：人葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体hglp-1r：人胰高血糖素样肽1受体hplc：高效液相色谱法
[0451]
i.p.：腹膜内
[0452]
ipgtt：腹膜内葡萄糖耐量试验
[0453]
i.v.：静脉内
[0454]
lcms：液相色谱质谱法
[0455]
mecn：乙腈
[0456]
mm：毫摩尔浓度
[0457]
mmol：毫摩尔
[0458]
min：分钟
[0459]
mtt：4-甲基三苯甲基
[0460]
mw：分子量
[0461]
nmp：1-甲基-吡咯烷-2-酮
[0462]
otbu：叔丁酯
[0463]
oxyma氰基-羟基亚氨基-乙酸乙酯
[0464]
pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基
[0465]
pbs：磷酸盐缓冲盐水
[0466]
pk：药代动力学
[0467]
pm：皮摩尔浓度
[0468]
rpm：每分钟转数
[0469]
rt：保留时间
[0470]
sem：平均值的标准误差
[0471]
spps：固相肽合成
[0472]
tbu：叔丁基
[0473]
tfa：三氟乙酸
[0474]
tis：三异丙基硅烷
[0475]
trt：三苯基甲基或三苯甲基
[0476]
trx：氨甲环酸
[0477]
tstu：o-(n-琥珀酰亚胺基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐通用制备方法
[0478]
下文描述了固相肽合成方法(spps法，包括氨基酸脱保护方法，从树脂上切割肽的方法，及其纯化方法)，以及检测和表征所得肽的方法(lcms法)。
[0479]
用于制备c末端肽酰胺的树脂是h-rink amide-chemmatrix树脂(例如加载0.5mmol/g)或rink amide am聚苯乙烯树脂(例如加载0.6mmol/g)或pal amide am树脂(例如加载0.6mmol/g)。用于制备c末端肽酸的树脂是预加载了适当的c末端fmoc保护的氨基酸(例如加载0.6mmol/g)的wang-聚苯乙烯树脂。除非另有具体说明，否则使用的fmoc保护的氨基酸衍生物是推荐的标准：例如由aapptec、anaspec、bachem、chemimpex、iris biotech、midwest biotech、gyros protein technologies或novabiochem提供的fmoc-ala-oh、
fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-asn(trt)-oh、fmoc-asp(otbu)-oh、fmoc-cys(trt)-oh、fmoc-gln(trt)-oh、fmoc-glu(otbu)-oh、fmoc-gly-oh、fmoc-his(trt)-oh、fmoc-ile-oh、fmoc-leu-oh、fmoc-lys(boc)-oh、fmoc-met-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-pro-oh、fmoc-ser(tbu)-oh、fmoc-thr(tbu)-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-tyr(tbu)-oh、fmoc-val-oh、fmoc-lys(mtt)-oh、fmoc-aib-oh等。在没有其他任何说明时，使用天然l型的氨基酸。n末端氨基酸在α-氨基处采用boc保护(例如，对于在n末端具有tyr的肽，为boc-tyr(tbu)-oh，或者对于在n末端具有his的肽，为boc-his(trt)-oh)。
[0480]
在使用spps进行模块化白蛋白结合部分连接的情况下，使用以下适当保护的结构单元，例如但不限于fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(fmoc-ado-oh)、fmoc-氨甲环酸(fmoc-trx-oh)、boc-lys(fmoc)-oh、fmoc-glu-otbu、十八烷二酸单叔丁酯、十九烷二酸单叔丁酯、二十烷二酸单叔丁酯或十四烷二酸单叔丁酯。下述所有操作均在0.1-0.5mmol的合成规模范围内进行。
[0481]
1.树脂结合的经保护的肽骨架的合成
[0482]
方法：spps_a
[0483]
使用制造商提供的方案加以少量修改，在protein technologies symphonyx固相肽合成仪上使用基于fmoc的化学法进行spps。通过不时用氮气鼓泡进行混合。使用以下步骤进行分步组装：1)在dmf中预溶胀树脂；2)通过使用在dmf中的20％(v/v)哌啶处理两次、每次10min进行fmoc脱保护；3)用dmf洗涤以除去哌啶；4)通过作为各自在dmf中的0.3-0.6m溶液添加fmoc-氨基酸(4-12equiv)和oxyma(4-12equiv)，随后作为dmf中的0.6-1.2m溶液添加dic(4-12equiv)，任选地添加dmf以在必要时降低各种组分的终浓度，然后混合0.5-4h，来进行fmoc-氨基酸的偶联；5)用dmf洗涤以除去过量的试剂；6)在组装完成时用dcm进行最终洗涤。一些氨基酸，例如但不限于空间位阻型氨基酸(例如，aib)后的氨基酸被偶联延长的反应时间(例如4h)以确保反应完成。
[0484]
方法：spps_b
[0485]
使用制造商提供的通用fmoc方案，根据fmoc策略在applied biosystems 431a固相肽合成仪上合成经保护的肽基树脂。通过涡旋和不时用氮气鼓泡进行混合。使用以下步骤完成分步组装：1)通过将固体fmoc酸(10equiv)溶解在作为nmp中的1m溶液的cl-hobt(10equiv)中，然后作为nmp中的1m溶液添加dic(10equiv)，然后与步骤2-3同时混合，来活化fmoc-氨基酸；2)通过使用nmp中的20％(v/v)哌啶处理一次3min，然后第二次处理15min，进行fmoc脱保护；3)用nmp洗涤以除去哌啶；4)向树脂中加入活化的fmoc-氨基酸溶液，然后混合45-90min；5)用nmp洗涤以除去过量的试剂；6)在组装完成时用dcm进行最终洗涤。以上列出的标准经保护的氨基酸衍生物在预先称重的药筒中提供(例如，来自midwest biotech)，而非标准衍生物手动进行称量。一些氨基酸，例如但不限于空间位阻型氨基酸(例如，aib)后的氨基酸被“双重偶联”以确保反应完成，这意味着在第一次偶联(例如45min)后将树脂排干，添加更多试剂(fmoc-氨基酸、dic、cl-hobt)，并使混合物再次反应(例如45min)。
[0486]
2.取代基与同树脂结合的经保护的肽骨架的连接
[0487]
方法：sc_a
[0488]
通过用dcm中的30％(v/v)hfip洗涤树脂两次，每次处理45min，随后用dcm和dmf洗
涤，来去除n-ε-赖氨酸保护mtt保护基。使用方法spps_a中描述的方案，在protein technologies symphonyx固相肽合成仪上进行酰化，其中采用逐步添加结构单元，例如但不限于boc-lys(fmoc)-oh、fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸、fmoc-氨甲环酸、fmoc-glu-otbu、十八烷二酸单叔丁酯和二十烷二酸单叔丁酯。
[0489]
方法：sc_b
[0490]
通过用dcm中的30％(v/v)hfip洗涤树脂两次，每次处理45min，随后用dcm和dmf洗涤，来去除n-ε-赖氨酸保护mtt保护基。使用方法spps_b中描述的方案，在applied biosystems 431a固相肽合成仪上进行酰化，其中采用逐步添加结构单元，例如但不限于boc-lys(fmoc)-oh、fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸、fmoc-氨甲环酸、fmoc-glu-otbu、十八烷二酸单叔丁酯和二十烷二酸单叔丁酯。
[0491]
方法：sc_c
[0492]
通过用75:2.5:22.5v/v/v hfip/tis/dcm洗涤树脂三次，每次处理30min，随后用dcm和dmf洗涤，来去除n-ε-赖氨酸保护mtt保护基。单独地，将2-氯三苯甲基氯树脂(例如加载1.1mmol/g)转移到烧结分液漏斗并在dcm中溶胀30min，然后排干并与dcm中的10％dipea(v/v)一起振摇10min。然后将树脂排干并立即用dcm中的第一fmoc保护的取代基结构单元(1.0equiv)和dipea(2equiv)处理，并在室温下振摇过夜。然后向混合物中加入甲醇以封闭(cap)树脂的未反应位点。用dcm、dmf和乙醚洗涤树脂，然后在真空下干燥。随后，如方法spps_a中所述，以逐步方式组装取代基。通过使用dcm中的20％ hfip(v/v)进行三次处理，每次10min，从树脂上切下受保护的取代基，并将切割混合物真空浓缩并真空干燥，以产生受保护的取代基，其无需进一步操作即可使用。将受保护的取代基以0.1m的浓度溶解在无水thf中，之后用tstu(1.5equiv)和dipea(3equiv)处理。将混合物在室温下搅拌两小时，过滤，并用乙酸乙酯稀释五倍体积。有机萃取物用等体积的0.1m hcl水溶液洗涤，然后用等体积的水洗涤。随后将有机层用mgso4干燥，并在真空中除去挥发性溶剂。活化的取代基(1.5equiv)作为含有dipea(3equiv)的dmf中的0.1m溶液直接使用，并与带有游离赖氨酸ε-氨基的肽基树脂一起孵育16小时。随后用dmf和dcm洗涤树脂。
[0493]
3.树脂结合的肽的切割和纯化
[0494]
在完成侧链合成后，将肽基树脂用dcm洗涤并干燥，然后用tfa/水/tis(95:2.5:2.5v/v/v)处理大约2-3h，随后用乙醚沉淀。沉淀物用乙醚洗涤，溶解在合适的溶剂(例如2:1的水/mecn)中，静置直至所有不稳定的加合物均分解。通过反相制备型hplc(例如waters2545二元梯度模块，waters 2489紫外/可见光检测仪，waters级分收集器iii；或者例如waters deltaprep 4000)在含有例如c8-或c18-硅胶的合适的柱上进行纯化。使用mecn在含有0.1％ tfa的水中逐渐增加的梯度来完成杂质的分离和产物的洗脱。通过分析型lcms检查相关级分的结构和纯度。合并含有纯所需产物的级分并冷冻干燥，得到呈白色固体的肽tfa盐。
[0495]
4.从tfa到钠盐的盐交换：
[0496]
将冷冻干燥、纯化的肽在合适的水性缓冲液中溶解至3-20mg/ml，该缓冲液例如是但不限于4:1水/mecn、0.2m乙酸钠或50mm hepes缓冲液ph 7.4。如有必要，用naoh水溶液调节溶液的ph，以实现完全溶解。使用sep-pak c18柱(0.5-5g)对含肽的缓冲溶液进行盐交换。该柱首先用异丙醇平衡，然后用mecn，再然后用水平衡。将肽溶液加到该柱上，并重新施
加流通液以确保肽完全保留。用水，然后用含有例如但不限于nahco3、naoac或na2hpo4的缓冲溶液(例如ph 7.5)洗柱。然后用水洗柱，并将肽用50-80％(v/v)mecn水溶液洗脱。将含肽的洗脱液冷冻干燥，得到呈白色固体的肽钠盐，其原样使用。
[0497]
通用检测和表征方法
[0498]
lcms法：
[0499]
方法：lcms_a
[0500]
lcms_a在由agilent 1260infinity系列hplc系统和agilent technologies 6120quadrupole ms组成的装置上进行。洗脱液被定义为：a：0.05％(v/v)tfa水溶液；b：在9:1(v/v)mecn/水中的0.05％(v/v)tfa。通过将适当体积的样品注射到柱上并用a和b的梯度洗脱，在37℃的柱温下进行分析。柱：phenomenex kinetex c8，2.6μm，4.6x 75mm。梯度运行时间：10min内的线性20-100％ b，流速为1.0ml/min。检测：二极管阵列检测器，设置为214nm。ms电离模式：api-es，正极性。ms扫描质量范围：500-2000amu。报告每个m/z的最丰富的同位素。
[0501]
方法：lcms_b
[0502]
lcms_b在由waters acquity h级uplc系统和xevo g2-xs qtof ms组成的装置上进行。洗脱液被定义为：a：0.1％(v/v)甲酸水溶液；b：mecn中的0.1％(v/v)甲酸；c：0.1％(v/v)tfa水溶液。通过将适当体积的样品注射到柱上并用a和b的梯度洗脱，在40℃的柱温下进行分析。柱：waters acquity beh，c-18，1.7μm，2.1x 50mm。梯度运行时间：在恒定5％ c的存在下，在4.0min内的线性5-95％ b，流速为0.4ml/min。ms电离模式：es，正极性。ms扫描质量范围：50-4000amu。报告每个m/z的最丰富的同位素。
[0503]
实施例1：化合物的合成
[0504]
以下使用单字母氨基酸代码描述化合物，aib除外。取代基包含在它所连接至的赖氨酸(k)残基之后。
[0505]
第1号化合物
[0506]
y-aib-qgtftsdysiyld-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0507][0508]
肽骨架：seq id no:1，c末端酰胺
[0509]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式6
[0510]
合成方法：spps_a；sc_a
[0511]
计算的分子量(平均值)：4821.3dalcms_b：rt＝3.4min；实测[m+3h]
3+
1607.1，[m+4h]
4+
1205.6。
[0512]
第2号化合物
[0513]
y-aib-qgtftsdysiyldk-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-aa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0514][0515]
肽骨架：seq id no:2，c末端酰胺
[0516]
取代基：经由k17的ε-氨基连接的化学式6
[0517]
合成方法：spps_a；sc_a
[0518]
计算的分子量(平均值)：4821.4da
[0519]
lcms_b：rt＝3.0min；实测[m+2h]
2+
2411.8，[m+3h]
3+
1607.8，
[0520]
[m+4h]
4+
1206.1。
[0521]
第3号化合物
[0522]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvnwllaggpssgappps-nh2[0523][0524]
肽骨架：seq id no:3，c末端酰胺
[0525]
取代基：经由k21的ε-氨基连接的化学式6
[0526]
合成方法：spps_a；sc_a
[0527]
计算的分子量(平均值)：4820.4dalcms_b：rt＝3.0min；实测[m+3h]
3+
1606.8，[m+4h]
4+
1205.6。
[0528]
第4号化合物
[0529]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvqwlleggpssgappps-nh2[0530][0531]
肽骨架：seq id no:4，c末端酰胺
[0555][0556]
肽骨架：seq id no:4，c末端酰胺
[0557]
取代基：经由k21的ε-氨基连接的化学式12
[0558]
合成方法：spps_a；sc_c
[0559]
计算的分子量(平均值)：4920.5dalcms_b：rt＝3.2min；实测[m+2h]
2+
2461.3，[m+3h]
3+
1640.9。
[0560]
第8号化合物
[0561]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvqwlleggpssgappps-nh2[0562][0563]
肽骨架：seq id no:4，c末端酰胺
[0564]
取代基：经由k21的ε-氨基连接的化学式10
[0565]
合成方法：spps_a；sc_c
[0566]
计算的分子量(平均值)：5059.7dalcms_b：rt＝3.3min；实测[m+3h]
3+
1686.5，[m+4h]
4+
1265.4。
[0567]
第9号化合物
[0568]
y-aib-qgtftsdysiyldk-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-aa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0569][0570]
肽骨架：seq id no:2，c末端酰胺
[0571]
取代基：经由k17的ε-氨基连接的化学式12
[0572]
合成方法：spps_a；sc_c
[0573]
计算的分子量(平均值)：4849.4da
[0594][0595]
肽骨架：seq id no:6，c末端酰胺
[0596]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式10
[0597]
合成方法：spps_a；sc_b
[0598]
计算的分子量(平均值)：5002.6dalcms_a：rt＝6.9min；实测[m+3h]
3+
1668.4，[m+4h]
4+
1251.5。
[0599]
第13号化合物
[0600]
y-aib-qgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0601][0602]
肽骨架：seq id no:6，c末端酰胺
[0603]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式11
[0604]
合成方法：spps_a；sc_b
[0605]
计算的分子量(平均值)：4968.7dalcms_a：rt＝6.3min；实测[m+3h]
3+
1657.0，[m+4h]
4+
1243.1。
[0606]
第14号化合物
[0607]
y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0608][0609]
肽骨架：seq id no:7，c末端酰胺
[0610]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式10
[0611]
合成方法：spps_a；sc_b
[0612]
计算的分子量(平均值)：5102.7dalcms_a：rt＝7.0min；实测[m+3h]
3+
1701.7，[m+
4h]
4+
1276.4。
[0613]
第15号化合物
[0614]
y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0615][0616]
肽骨架：seq id no:6，c末端酰胺
[0617]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式12
[0618]
合成方法：spps_a；sc_a
[0619]
计算的分子量(平均值)：4863.4dalcms_a：rt＝6.9min；实测[m+3h]
3+
1621.7，[m+4h]
4+
1216.7。
[0620]
第16号化合物
[0621]
y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0622][0623]
肽骨架：seq id no:7，c末端酰胺
[0624]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式12
[0625]
合成方法：spps_a；sc_a
[0626]
计算的分子量(平均值)：4935.5dalcms_a：rt＝7.0min；实测[m+3h]
3+
1645.7，[m+4h]
4+
1234.6。
[0627]
第17号化合物
[0628]
y-aib-qgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0629]
[0650][0651]
肽骨架：seq id no:10，c末端酰胺
[0652]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式10
[0653]
合成方法：spps_b；sc_b
[0654]
计算的分子量(平均值)：5117.7dalcms_a：rt＝6.8min；实测[m+3h]
3+
1706.8，[m+4h]
4+
1280.3。
[0655]
第21号化合物
[0656]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0657][0658]
肽骨架：seq id no:11，c末端酰胺
[0659]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式11
[0660]
合成方法：spps_a；sc_b
[0661]
计算的分子量(平均值)：5023.7dalcms_a：rt＝6.1min；实测[m+3h]
3+
1675.3，[m+4h]
4+
1256.7。
[0662]
第22号化合物
[0663]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0664][0665]
肽骨架：seq id no:11，c末端酰胺
[0666]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0667]
合成方法：spps_a；sc_b
[0668]
计算的分子量(平均值)：4884.5dalcms_a：rt＝6.0min；实测[m+3h]
3+
1628.8，[m+
4h]
4+
1222.0。
[0669]
第23号化合物
[0670]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-nh2[0671][0672]
肽骨架：seq id no:12，c末端酰胺
[0673]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式11
[0674]
合成方法：spps_b；sc_b
[0675]
计算的分子量(平均值)：5066.7dalcms_a：rt＝6.0min；实测[m+3h]
3+
1689.7，[m+4h]
4+
1267.5。
[0676]
第24号化合物
[0677]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0678][0679]
肽骨架：seq id no:13，c末端酰胺
[0680]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0681]
合成方法：spps_a；sc_b
[0682]
计算的分子量(平均值)：4976.6dalcms_a：rt＝6.0min；实测[m+3h]
3+
1659.8，[m+4h]
4+
1244.9。
[0683]
第25号化合物
[0684]
h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0685]
[0706][0707]
肽骨架：seq id no:16，c末端酰胺
[0708]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0709]
合成方法：spps_a；sc_b
[0710]
计算的分子量(平均值)：4870.5dalcms_a：rt＝5.9min；实测[m+3h]
3+
1624.4，[m+4h]
4+
1218.5。
[0711]
第29号化合物
[0712]
h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0713][0714]
肽骨架：seq id no:17，c末端酰胺
[0715]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0716]
合成方法：spps_b；sc_b
[0717]
计算的分子量(平均值)：5026.6dalcms_a：rt＝5.8min；实测[m+3h]
3+
1676.2，[m+4h]
4+
1257.5。
[0718]
第30号化合物
[0719]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0720][0721]
肽骨架：seq id no:18，c末端酰胺
[0722]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0723]
合成方法：spps_a；sc_a
[0724]
计算的分子量(平均值)：4976.6dalcms_b：rt＝2.7min；实测[m+3h]
3+
1658.7，[m+4h]
4+
1244.3。
[0725]
第31号化合物
[0726]
h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0727][0728]
肽骨架：seq id no:19，c末端酰胺
[0729]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0730]
合成方法：spps_a；sc_a
[0731]
计算的分子量(平均值)：4934.6dalcms_b：rt＝2.7min；实测[m+3h]
3+
1644.8，[m+4h]
4+
1233.8。
[0732]
第32号化合物
[0733]
h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0734][0735]
肽骨架：seq id no:14，c末端酰胺
[0736]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式7
[0737]
合成方法：spps_b；sc_b
[0738]
计算的分子量(平均值)：4906.5dalcms_a：rt＝5.6min；实测[m+3h]
3+
1636.4，[m+4h]
4+
1227.3。
[0739]
第33号化合物
[0740]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0741][0742]
肽骨架：seq id no:20，c末端酰胺
[0762][0763]
肽骨架：seq id no:22，c末端酰胺
[0764]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0765]
合成方法：spps_b；sc_b
[0766]
计算的分子量(平均值)：4899.5dalcms_a：rt＝5.6min；实测[m+3h]
3+
1633.8，[m+4h]
4+
1225.7。
[0767]
第37号化合物
[0768]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-raa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0769][0770]
肽骨架：seq id no:23，c末端酰胺
[0771]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0772]
合成方法：spps_b；sc_a
[0773]
计算的分子量(平均值)：4912.6dalcms_a：rt＝5.8min；实测[m+3h]
3+
1636.2，[m+4h]
4+
1229.0。
[0774]
第38号化合物
[0775]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0776][0777]
肽骨架：seq id no:18，c末端酰胺
[0778]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式7
[0779]
合成方法：spps_a；sc_a
[0780]
计算的分子量(平均值)：4948.6dalcms_a：rt＝5.5min；实测[m+3h]
3+
1650.2，[m+4h]
4+
1238.0。
[0781]
第39号化合物
[0782]
h-aib-hgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0783][0784]
肽骨架：seq id no:18，c末端酰胺
[0785]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式12
[0786]
合成方法：spps_a；sc_a
[0787]
计算的分子量(平均值)：5010.6dalcms_a：rt＝6.6min；实测[m+3h]
3+
1670.9，[m+4h]
4+
1253.7。
[0788]
第40号化合物
[0789]
h-aib-hgtftsdysyyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0790][0791]
肽骨架：seq id no:14，c末端酰胺
[0792]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式12
[0793]
合成方法：spps_a；sc_a
[0794]
计算的分子量(平均值)：4968.5dalcms_a：rt＝6.5min；实测[m+3h]
3+
1656.9，[m+4h]
4+
1242.9。
[0795]
第41号化合物
[0796]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0797][0798]
肽骨架：seq id no:24，c末端酰胺
[0818][0819]
肽骨架：seq id no:11，c末端酰胺
[0820]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式12
[0821]
合成方法：spps_a；sc_a
[0822]
计算的分子量(平均值)：4918.5dalcms_a：rt＝6.7min；实测[m+3h]
3+
1640.0，[m+4h]
4+
1230.3。
[0823]
第45号化合物
[0824]
h-aib-hgtftsdysille-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0825][0826]
肽骨架：seq id no:26，c末端酰胺
[0827]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式12
[0828]
合成方法：spps_a；sc_a
[0829]
计算的分子量(平均值)：4868.5dalcms_a：rt＝6.7min；实测[m+3h]
3+
1623.4，[m+4h]
4+
1217.9。
[0830]
第46号化合物
[0831]
y-aib-qgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0832][0833]
肽骨架：seq id no:27，c末端酰胺
[0834]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0835]
合成方法：spps_a；sc_a
[0836]
计算的分子量(平均值)：4851.5dalcms_a：rt＝6.3min；实测[m+3h]
3+
1617.8，[m+4h]
4+
1213.6。
[0837]
第47号化合物
[0838]
y-aib-qgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0839][0840]
肽骨架：seq id no:28，c末端酰胺
[0841]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0842]
合成方法：spps_a；sc_a
[0843]
计算的分子量(平均值)：4951.5dalcms_a：rt＝6.2min；实测[m+3h]
3+
1651.1，[m+4h]
4+
1238.7。
[0844]
第48号化合物
[0845]
y-aib-qgtftsdysylle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2[0846][0847]
肽骨架：seq id no:29，c末端酰胺
[0848]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0849]
合成方法：spps_a；sc_a
[0850]
计算的分子量(平均值)：4901.5dalcms_a：rt＝6.3min；实测[m+3h]
3+
1634.5，[m+4h]
4+
1226.3。
[0851]
第49号化合物
[0852]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-nh2[0853][0854]
肽骨架：seq id no:30，c末端酰胺
[0855]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0856]
合成方法：spps_a；sc_a
[0857]
计算的分子量(平均值)：4878.5dalcms_a：rt＝5.9min；实测[m+3h]
3+
1626.9，[m+4h]
4+
1220.3。
[0858]
第50号化合物
[0859]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-oh
[0860][0861]
肽骨架：seq id no:30，c末端酸
[0862]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0863]
合成方法：spps_a；sc_a
[0864]
计算的分子量(平均值)：4879.5dalcms_a：rt＝6.0min；实测[m+3h]
3+
1627.0，[m+4h]
4+
1220.8。
[0865]
第51号化合物
[0866]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-oh
[0867][0868]
肽骨架：seq id no:30，c末端酸
[0869]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式7
[0870]
合成方法：spps_a；sc_a
[0871]
计算的分子量(平均值)：4851.4dalcms_a：rt＝5.7min；实测[m+3h]
3+
1617.8，[m+4h]
4+
1213.7。
[0872]
第52号化合物
[0873]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-oh
[0874][0875]
肽骨架：seq id no:31，c末端酸
[0876]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式7
[0877]
合成方法：spps_a；sc_a
[0878]
计算的分子量(平均值)：4850.4dalcms_a：rt＝5.6min；实测[m+3h]
3+
1617.5，[m+4h]
4+
1213.4。
[0879]
第53号化合物
[0880]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-oh
[0881][0882]
肽骨架：seq id no:31，c末端酸
[0883]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0884]
合成方法：spps_a；sc_a
[0885]
计算的分子量(平均值)：4878.5dalcms_a：rt＝5.9min；实测[m+3h]
3+
1626.8，[m+4h]
4+
1220.3。
[0886]
第54号化合物
[0887]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaarefvqwlleggpssgappps-oh
[0888][0889]
肽骨架：seq id no:32，c末端酸
[0890]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式7
[0891]
合成方法：spps_a；sc_a
[0892]
计算的分子量(平均值)：4878.5dalcms_a：rt＝5.4min；实测[m+3h]
3+
1626.8，[m+4h]
4+
1220.4。
[0893]
第55号化合物
[0894]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaarefvqwlleggpssgappps-oh
[0895][0896]
肽骨架：seq id no:32，c末端酸
[0897]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0898]
合成方法：spps_a；sc_a
[0899]
计算的分子量(平均值)：4878.5dalcms_a：rt＝5.6min；实测[m+3h]
3+
1636.2，[m+4h]
4+
1227.4。
[0900]
第56号化合物
[0901]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaahefvqwlleggpssgappps-oh
[0902][0903]
肽骨架：seq id no:33，c末端酸
[0904]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式7
[0905]
合成方法：spps_a；sc_a
[0906]
计算的分子量(平均值)：4859.5dalcms_a：rt＝5.3min；实测[m+3h]
3+
1620.4，[m+4h]
4+
1215.7。
[0907]
第57号化合物
[0908]
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaahefvqwlleggpssgappps-oh
[0909][0910]
肽骨架：seq id no:33，c末端酸
[0911]
取代基：经由k16的ε-氨基连接的化学式13
[0912]
合成方法：spps_a；sc_a
[0913]
计算的分子量(平均值)：4887.5dalcms_a：rt＝5.6min；实测[m+3h]
3+
1629.8，[m+4h]
4+
1222.7。标准和比较化合物的结构：
[0914]
天然人glp-1(7-37)，seq id no:35
[0915][0916]
天然人gip，seq id no:36
[0917][0918]
天然人胰高血糖素，seq id no:37
[0919][0920]
天然小鼠gip，seq id no:34
[0921][0922]
第58号化合物
[0923]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-efvnwllaggpssgappps-k[十六碳酰基]-nh2[0924][0925]
肽骨架：seq id no:53，c末端酰胺
[0926]
取代基：经由k40的ε-氨基连接的十六碳酰基
[0927]
合成方法：参见us9062124实施例18，seq id no 124
[0928]
计算的分子量(平均值)：4472.1da
[0929]
lcms_a：rt＝7.1min；实测[m+3h]
3+
1491.4，[m+4h]
4+
1118.9。
[0930]
第59号化合物
[0931]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-efvnwllaggpssgappps-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-nh2[0932][0933]
肽骨架：seq id no:53，c末端酰胺
[0934]
取代基：经由k40的ε-氨基连接的化学式6
[0935]
合成方法：spps_a；sc_a
[0936]
计算的分子量(平均值)：4949.5dalcms_a：rt＝6.1min；实测[m+3h]
3+
1650.4，[m+4h]
4+
1238.2。
[0937]
第60号化合物
[0938]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基
十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]
‑‑
efvnwllaggpssgappps-nh2[0939][0940]
肽骨架：seq id no:38，c末端酰胺
[0941]
取代基：经由k20的ε-氨基连接的化学式6
[0942]
合成方法：spps_a；sc_b
[0943]
计算的分子量(平均值)：4864.4dalcms_a：rt＝6.1min；实测[m+3h]
3+
1622.1，[m+4h]
4+
1216.8。
[0944]
第61号化合物
[0945]
y-aib-qgtftsdys-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-yldkqaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0946][0947]
肽骨架：seq id no:39，c末端酰胺
[0948]
取代基：经由k12的ε-氨基连接的化学式6
[0949]
合成方法：spps_a；sc_a
[0950]
计算的分子量(平均值)：4836.4dalcms_a：rt＝5.9min；实测[m+3h]
3+
1612.7，[m+4h]
4+
1210.0。
[0951]
第62号化合物
[0952]
y-aib-qgtftsdysi-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-ldkqaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2[0953][0954]
肽骨架：seq id no:40，c末端酰胺
[0955]
取代基：经由k13的ε-氨基连接的化学式6
[0956]
合成方法：spps_a；sc_a
[0974][0975]
肽骨架：seq id no:43，c末端酰胺
[0976]
取代基：经由k29的ε-氨基连接的化学式6
[0977]
合成方法：spps_a；sc_a
[0978]
计算的分子量(平均值)：4892.5dalcms_a：rt＝5.8min；实测[m+3h]
3+
1631.5，[m+4h]
4+
1223.9。
[0979]
第66号化合物
[0980]
y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-efvnwllaggpssg-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-ppps-nh2[0981][0982]
肽骨架：seq id no:44，c末端酰胺
[0983]
取代基：经由k35的ε-氨基连接的化学式6
[0984]
合成方法：spps_a；sc_a
[0985]
计算的分子量(平均值)：4878.4dalcms_a：rt＝6.2min；实测[m+3h]
3+
1626.8，[m+4h]
4+
1220.5。
[0986]
实施例2：体外功能效力(cre萤光素酶；全细胞)
[0987]
本实施例的目的在于测试化合物在体外对人和小鼠glp-1、gip和gcg受体的功能活性或效力。体外功能效力是全细胞测定中靶受体活化的量度。如下所述确定实施例1中列出的化合物的效力。人glp-1(7-37)(seq id no:35)(与小鼠glp-1(7-37)相同)、人gip(seq id no:36)和人胰高血糖素(seq id no:37)(与小鼠胰高血糖素相同)被包括在适当的测定中用于比较。
[0988]
原理
[0989]
通过在单独的细胞系中在报告基因测定中测量靶受体的响应来确定体外功能效力。该测定在稳定转染的bhk细胞系中进行，该bhk细胞系表达以下g蛋白偶联受体之一：人glp-1受体、人gip受体、人gcg受体、小鼠glp-1受体、小鼠gip受体或小鼠gcg受体；并且其中每个细胞系含有与启动子偶联的camp响应元件(cre)dna以及萤火虫萤光素酶(cre萤光素酶)基因。当各自的受体被激活时，其导致camp的产生，这进而导致萤光素酶蛋白质的表达。当测定孵育完成时，添加萤光素酶底物(萤光素)，从而导致萤光素被酶促转化成氧化萤光素并产生生物发光。测量该发光作为该测定的读出。
[0990]
细胞培养和制备
[0991]
这些测定中使用的细胞系是以bhkts13作为亲本细胞系的bhk细胞。该细胞系来源于含有cre萤光素酶元件的克隆，并且是通过用各自的受体进一步转染以获得相关细胞系而建立的。使用以下细胞系：
[0992]
测定细胞系glp-1受体测定bhk cre luc2p hglp-1rgip受体测定bhk cre luc2p hgipr胰高血糖素受体测定bhk cre luc2p hgcgr
[0993]
将细胞在细胞培养基中在5％ co2下于37℃培养。将细胞等分并储存在液氮中。使细胞在连续培养中保持，并在每次测定前一天接种。
[0994]
材料
[0995]
在该测定中使用了以下化学物质：pluronic f-68 10％(gibco2404)、10％胎牛血清(fbs；invitrogen 16140-071)、鸡蛋清卵白蛋白(sigma a5503)、不含酚红的dmem(gibco 21063-029)、dmem(gibco 12430-054)、1m hepes(gibco 15630)、glutamax100x(gibco 35050)、g418(invitrogen 10131-027)、潮霉素(invitrogen 10687-010)和steadylite plus(perkinelmer 6016757)。
[0996]
缓冲液
[0997]
glp-1r和gcgr细胞培养基由含有10％ fbs、500μg/ml g418和300μg/ml潮霉素的dmem培养基组成。gipr细胞培养基由含有10％fbs、400μg/ml g418和300μg/ml潮霉素的dmem培养基组成。测定缓冲液由不含酚红的dmem、10mm hepes、1x glutamax、1％卵白蛋白和0.1％ pluronic f-68组成。将测定缓冲液与等体积的在测定缓冲液中的测试化合物1:1混合，以得到最终测定浓度。
[0998]
程序
[0999]
1)将细胞以5000个细胞/孔进行平板接种，并在测定板中孵育过夜。
[1000]
2)将细胞在dpbs中洗涤一次。
[1001]
3)将浓度范围为100-300μm的测试化合物和参考化合物的储备液在测定缓冲液中1:150稀释。然后将化合物在96深孔稀释板的第1列中1:10稀释，然后从该行开始，产生3.5倍、12点稀释曲线。
[1002]
4)向测定板的每个孔中添加测定缓冲液(50μl等份)。
[1003]
5)将50μl等份的化合物或空白从稀释板转移至含有测定缓冲液的测定板。
[1004]
6)将测定板在5％ co2培养箱中于37℃孵育3h。
[1005]
7)将细胞用dpbs洗涤一次。
[1006]
8)向测定板的每个孔添加100μl等份的dpbs。
[1007]
9)向测定板的每个孔添加100μl等份的steadylite plus试剂(光敏的)。
[1008]
10)将每个测定板用铝箔覆盖以避光，并在室温下以250rpm振摇30min。
[1009]
11)在微量滴定板读板仪中读取每个测定板。
[1010]
计算和结果
[1011]
来自微量滴定板读板仪的数据首先在excel中回归，以便根据单个测试化合物的储备浓度和该测定的稀释度计算x轴、对数标尺浓度。然后将该数据传输到graphpad prism
软件以进行绘图和统计分析。该软件执行非线性回归(log(激动剂)相对于响应)。用该软件计算并以pm为单位报告的ec
50
值在以下表1和表2中示出。对每个样品最少测量两个重复。所报告的值是重复测量的平均值。
[1012]
表1：改变取代基位置的三重激动剂针对人glp-1r、gipr和gcgr的功能效力。
[1013][1014]
nd＝未测定。
[1015]
第58号化合物是已知的(us9062124实施例18，seq id no 124)且有效的三重激动剂，具有与lys40的ε-氨基连接的十六碳酰基部分。预计将lys40处的取代基更换为取代基化学式6(即第59号化合物)将产生半衰期更长的等效化合物。然而，上述结果表明，第59号化合物针对全部三种受体都具有更低的效力，尤其是对gipr和gcgr。因此，取代基从脂肪一元酸变为脂肪二酸无法获得相似的效力。表1中的结果表明，当赖氨酸位于肽骨架的位置16、17或21时，基于脂肪二酸的取代基取代赖氨酸ε-胺是优选的，而当基于c18二酸的取代基化学式6处于位置12、13、14、20、24、29、35或40中的任何位置时，观察到针对一种或多种
受体的效力显著降低。表2.本发明的三重激动剂(其中取代基存在于位置16、17或21处)针对人glp-1r、gipr和gcgr的功能效力。
[1016]
[1017]
[1018][1019]
nd＝未测定。
[1020]
表2中的结果表明，本发明化合物展现出人glp-1r、人gipr和人gcgr的有效功能活化，这是由肽骨架与位置16、17或21处的取代基相结合而获得的。
[1021]
实施例3：在小型猪中的药代动力学研究
[1022]
本实施例的目的是确定本文所述三重激动剂在静脉内施用于小型猪后的体内半衰期，即它们在体内的时间的延长，从而其作用时间的延长。这在确定所讨论的三重激动剂的终末半衰期的药代动力学(pk)研究中完成。终末半衰期通常是指在初始分布阶段后测得的，使某种血浆浓度减半所花费的时间长度。
[1023]
研究
[1024]
在研究中使用的雌性小型猪从ellegaardminipigs(dalmose，丹麦)获得，约7-14个月龄，体重约16-35kg。将小型猪单独圈养，并且每天限制饲喂一次sds小型猪饮食(special diets services，essex，uk)。
[1025]
适应环境3周后，将两根永久性中心静脉导管植入每只动物的尾腔静脉中。手术后使动物恢复1周，然后用于重复的药代动力学研究，在连续给药之间具有适当的洗脱期。
[1026]
动物在给药前禁食大约18小时，并在给药后0至4小时禁食，但在整个时间段内可随意饮水。
[1027]
将实施例1的三重激动剂的钠盐在含有0.025％(v/v)聚山梨醇酯20、10mm磷酸钠、250mm甘油的ph 7.4缓冲液中溶解至浓度为20-40nmol/ml。通过一根导管静脉内注射三重激动剂(体积通常对应于1.5-2nmol/kg，例如0.1ml/kg)，并在预定时间点采集血液样品，持续可达给药后14天(优选通过另一根导管)。将血液样品(例如0.8ml)采集到8mm edta缓冲液中，然后在4℃下以1942g离心10分钟。
[1028]
采样与分析
[1029]
将血浆吸移至干冰上的micronic管中，并保持在-20℃下，直到使用elisa或类似基于抗体的测定或lcms来分析三重激动剂的血浆浓度。通过phoenix winnonlin ver.6.4(pharsight inc.,mountain view,ca,usa)中的非房室模型分析各个血浆浓度-时间曲线，并确定所得到的终末半衰期(调和平均值)。
[1030]
结果
[1031]
表3：小型猪静脉内给药后测得的终末半衰期
[1032][1033][1034]
与天然激素相比，所测试的本文所述三重激动剂具有非常长的半衰期。据报道，在人类中测得的hglp-1和hgip的半衰期分别为大约2-4min和5-7min(meier等人,diabetes,2004,53(3):654-662)。据报道，在人类中测得的胰高血糖素的半衰期在5min与30min之间
不等，这取决于给药途径(pontiroli等人,eur j clin pharmacol 1993,45:555-558)。
[1035]
实施例4：在饮食诱发的肥胖(dio)小鼠中的药效学研究
[1036]
本实施例的目的是在饮食诱发的肥胖(dio)小鼠中评估所选三重激动剂对药效学参数的体内影响。每天一次通过皮下注射待测三重激动剂的液体制剂对动物进行治疗，以评估对体重、食物摄入量和葡萄糖耐量的影响。
[1037]
动物与饮食
[1038]
c57bl/6j雄性小鼠购自jackson laboratories，大约8周龄。小鼠被分组圈养，并饲喂来自research diets的高脂肪、高糖饮食(d12331)。在开始药理学研究之前，小鼠以这种饮食维持12周。测得体重超过50克的小鼠被认为具有饮食诱发的肥胖(dio)，并包括在药理学研究中。小鼠在环境室温(22℃)下暴露于受控的12h:12h光暗循环，随意获取食物和水。研究得到了辛辛那提大学机构动物照护与使用委员会的批准并按照其指南进行。
[1039]
给药与配制
[1040]
该研究中的所有化合物均在以下缓冲液中配制：50mm磷酸盐；70mm氯化钠；0.05％吐温80，ph 7.4。给药溶液在玻璃小瓶中配制，并保存在2-8℃。给药溶液在给药前升至室温，并在给药后恢复至2-8℃。
[1041]
将dio小鼠分组(每组n＝8)，以使各组之间脂肪量和体重的平均值和标准偏差的统计学差异最小化。将动物分组以接受如下治疗：媒介物或如本文所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中媒介物是50mm磷酸盐，70mm氯化钠；0.05％(v/v)吐温-80，ph 7.4。将测试化合物溶解在媒介物中，达到100μm的储备浓度，然后在媒介物中稀释50至200倍以达到所需的给药溶液浓度。对于每个治疗日，每天一次在早上对动物进行皮下给药，给药溶液的体积为必要时每克体重2-5μl，以达到所需剂量(例如0.3nmol/kg、1.0nmol/kg或3.0nmol/kg)。
[1042]
体重与食物摄入量
[1043]
每天在临给药前测量体重(bw)和食物摄入量。基于第一次注射前的初始体重，单独计算每只小鼠的体重变化百分比。
[1044]
ipgtt(腹膜内葡萄糖耐量试验)
[1045]
在葡萄糖耐量试验当天，将动物禁食4h。取出食物，将动物转移到新的笼子中。动物可以饮水，但不能食用食物。测量尾部血糖水平，并向小鼠注射(t＝0)2g/kg的腹膜内(i.p.)葡萄糖负荷(200mg/ml葡萄糖溶液，剂量体积10ml/kg)。腹膜内注射葡萄糖负荷后0、15、30、60、90、120分钟测量尾部血糖水平。在ipgtt期间的动物分层使得，例如，对来自第1组的两只小鼠进行给药，随后是来自第2、3、4组的两只小鼠，之后处理来自第1、2、3等组的下面两只小鼠。这允许在所有组中等同地分配“一天中的时间”。
[1046]
结果：
[1047]
在一项研究中，dio小鼠每天接受以下物质之一的皮下剂量最长达60天：媒介物、第21号化合物、第30号化合物或第33号化合物。基于表4中包括的滴定计划表，将每种化合物的剂量向上滴定至最大功效。达到体重正常化(定义为22.5g或更低的体重)的小鼠自动从研究中移除。结果在表5和图1-图2中示出。所测试的所有三重激动剂化合物导致的体重和食物摄入量减少均明显大于媒介物。在第42天之前的时间点(见图1)，与第30号化合物和第33号化合物相比，用第21号化合物治疗导致类似的食物摄入量减少，但体重减轻较差。这
可以由以下事实来解释：当除了使用小鼠特异性受体外采用实施例2中描述的方案进行研究时，与第30号化合物和第33号化合物相比，第21号化合物具有类似的glp-1r和gipr体外效力，但具有降低的体外gcgr效力。针对小鼠glp-1r、小鼠gipr和小鼠gcgr的体外效力在表6中示出。
[1048]
表4：表5中描述的dio小鼠研究的剂量滴定计划表。
[1049][1050]
表5：在按照表4中所示的剂量滴定计划表，每天用媒介物或glp-1/gip/gcg三重激动剂治疗最长达60天的dio小鼠中，对食物摄入量和体重的影响。还包括任何小鼠在从研究中移除之前在该组中接受治疗的最后一天。
[1051][1052]
结果被表示为平均值
±
sem，n＝1-2(食物摄入量)或n＝5-8(体重)。表6：选定的本发明三重激动剂针对小鼠特异性glp-1r、gipr和gcgr的功能效力。
[1053][1054]
nd＝未测定。
[1055]
使用第26、43和44号化合物的另一项小鼠研究表明，经13天每天皮下给药后，与媒介物相比，dio小鼠有更好的食物摄入量减少和体重减轻。结果在表7中示出。第44号化合物对食物摄入量减少和体重减轻表现出剂量依赖性作用，并且在1.0nmol/kg和3.0nmol/kg剂量时，与媒介物相比，表现出改善的葡萄糖耐量。这表明三重激动剂可以增加体重降低功效，而对葡萄糖耐量没有不利影响。
[1056]
表7：在每天用指定剂量的媒介物或glp-1/gip/gcg三重激动剂治疗的dio小鼠中对食物摄入量、体重和葡萄糖耐量的影响。
[1057]
[1058]
结果被表示为平均值
±
sem，n＝2(食物摄入量)或n＝7-8(体重，ipgtt)。iauc＝减去基线的曲线下面积。nd＝未测定。
[1059]
虽然本文已经阐述并描述了本发明的某些特征，但是本领域普通技术人员现在将会想到许多修改、替换、改变和等同方案。因此，应当理解，意欲以所附权利要求书涵盖所有这些落入本发明真正范围内的修改和改变。

技术特征：
1.包含肽和取代基的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：x1x2x3gtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
x
21
fvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:45)，其中x1为h或yx2为aibx3为h或qx
12
为k、i或yx
13
为y或lx
15
为d或ex
17
为q、r或kx
18
为a、y或kx
20
为aib、q、e、r或hx
21
为e或kx
24
为n或qx
28
为a或e；其中所述肽具有c末端酸或酰胺；并且其中所述取代基共价连接至选自位置16、17和21的位置处的k的ε-氨基；或其药学上可接受的盐。2.根据权利要求1所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基共价连接至位置16的k的ε-氨基。3.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中x1x2x3选自haibh和yaibq。4.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中sx
12
x
13
lx
15
选自syyle(seq id no:54)、sille(seq idno:55)、sylle(seq id no:56)、siyle(seq id no.57)和siyld(seq id no:58)。5.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中kx
17
x
18
ax
20
选自kqaaaib(seq id no:59)、kkaaaib(seq id no:60)、kqyaaib(seq id no:61)和kkyaaib(seqid no:62)。6.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：hx2hgtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:47)，其中x2为aibx
12
为i或yx
13
为y或lx
15
为d或ex
17
为q或kx
18
为a或yx
20
为aibx
24
为n或qx
28
为a或e。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述肽的氨基酸序列为：yx2qgtftsdysx
12
x
13
lx
15
kx
17
x
18
ax
20
efvx
24
wllx
28
ggpssgappps(seq id no:50)，其中x2为aibx
12
为i或yx
13
为y或lx
15
为d或ex
17
为q或kx
18
为a或yx
20
为aibx
24
为n或qx
28
为a或e。8.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基为a-b-c-，其中a-为化学式1化学式1：hooc-(ch2)
p-co-*p为16-20范围内的整数；b-选自化学式2或化学式3：化学式2：*-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-co-*化学式3：*-nh-ch
2-(c6h
10
)-co-nh-ch(cooh)-(ch2)
2-co-*；并且c-选自化学式4或化学式5：化学式4：*-[nh-((ch2)
2-o)
2-ch
2-co]
2-*化学式5：*-[nh-(ch2)
4-ch(nh2)-co]
2-*其中*表示连接点，并且a、b和c以所示顺序通过酰胺键互相连接。9.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中所述取代基a-b-c-选自：化学式6：；化学式7：；化学式8：；
化学式9：；化学式10：化学式11：化学式12：和化学式13：10.根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其中三重激动剂选自：y-aib-qgtftsdysiyld-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第1号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyldk-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-aa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第2号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基
十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvnwllaggpssgappps-nh2(第3号化合物)：y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvqwlleggpssgappps-nh2(第4号化合物)：y-aib-qgtftsdysiyld-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第5号化合物)：y-aib-qgtftsdysiyld-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第6号化合物)：y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvqwlleggpssgappps-nh2(第7号化合物)：
；y-aib-qgtftsdysiyldkqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvqwlleggpssgappps-nh2(第8号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyldk-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-aa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第9号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyldk-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-aa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第10号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiylekqaa-aib-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-fvqwlleggpssgappps-nh2(第11号化合物)：
y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第12号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第13号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第14号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvnwllaggpssgappps-nh2(第15号化合物)：
；y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第16号化合物)：；y-aib-qgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第17号化合物)：；y-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第18号化合物)：；h-aib-qgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第19号化合物)：
y-aib-qgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-nh2(第20号化合物)：h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第21号化合物)：；h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第22号化合物)：；h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-nh2(第23号化合物)：h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第24号化合物)：
h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-[[4-[(19-羧基十九碳酰基氨基)甲基]环己烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第25号化合物)：h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第26号化合物)：h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-nh2(第27号化合物)：h-aib-hgtftsdysiyld-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第28号化合物)：；
h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第29号化合物)：；h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第30号化合物)：；h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第31号化合物)：；h-aib-hgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第32号化合物)：；h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第33号化合物)：
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h-aib-hgtftsdysiyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第38号化合物)：；h-aib-hgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第39号化合物)：；h-aib-hgtftsdysyyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第40号化合物)：；h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-kya-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第41号化合物)：；h-aib-hgtftsdysylle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第42号化合物)：
；h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第43号化合物)：；h-aib-hgtftsdysiyle-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第44号化合物)：；h-aib-hgtftsdysille-k[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第45号化合物)：；y-aib-qgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第46号化合物)：；
y-aib-qgtftsdysyyle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第47号化合物)：y-aib-qgtftsdysylle-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaa-aib-efvqwlleggpssgappps-nh2(第48号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-nh2(第49号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-oh(第50号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaeefvqwlleggpssgappps-oh(第51号化合物)：
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-oh(第52号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaaqefvqwlleggpssgappps-oh(第53号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaarefvqwlleggpssgappps-oh(第54号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaarefvqwlleggpssgappps-oh(第55号化合物)：
h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaahefvqwlleggpssgappps-oh(第56号化合物)：h-aib-hgtftsdysille-k[(2s)-2-氨基-6-[[(2s)-2-氨基-6-[[(4s)-4-羧基-4-(19-羧基十九碳酰基氨基)丁酰基]氨基]己酰基]氨基]己酰基]-qaahefvqwlleggpssgappps-oh(第57号化合物)：11.药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，以及任选地，至少一种药学上可接受的辅料。12.根据权利要求1-10中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用作药物。13.根据权利要求1-10中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于体重管理、治疗和/或预防肥胖症和与肥胖症有关的病症。14.根据权利要求1-10中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病，例如2型糖尿病，以及与糖尿病有关的病症。15.根据权利要求1-10中任一项所述的glp-1/gip/gcg受体三重激动剂，其用于治疗和/或预防肝脏病症，如肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肝脏炎症或脂肪肝。

技术总结
本发明涉及作为GLP-1/GIP/胰高血糖素受体三重激动剂的肽及其衍生物，并且描述了它们在治疗和/或预防肥胖症、糖尿病和/或肝脏疾病中的医药用途。中的医药用途。中的医药用途。


技术研发人员：P
受保护的技术使用者：诺和诺德股份有限公司
技术研发日：2021.10.29
技术公布日：2023/7/22