一种快速筛选抗体对的分析方法与流程

1.本发明涉及检测技术领域，尤其是涉及一种快速筛选抗体对的分析方法。


背景技术：

2.配对抗体指的是可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。配对抗体，一般应用于双抗夹心法elisa实验。
3.抗体配对的原理如下：
4.通常情况下，一个抗原分子拥有多个抗原决定簇，将抗原注射入动物体内进行免疫，针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的抗体具有特异性与专一性，即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。两个针对不同抗原决定簇的抗体，有可能同时结合到抗原分子上。如果两个抗体同时结合到同一个抗原分子上，那么这两个抗体就是配对抗体。配对抗体的制备与筛选需要注意的是，即使两个抗体针对的是不同的抗原决定簇，也并不意味着这两个抗体分子一定可以同时与抗原分子结合。当一个抗体与抗原结合后，有可能会导致其他结合位点(抗原决定簇)构型的改变，从而导致其他的抗体无法正常结合到抗原上。位阻效应的存在，也可能使两个结合位点距离较近的抗体无法同时结合在抗原上。因此想要得到可以同时结合在抗原分子上的配对抗体，在制备出抗体后，还需要对得到的抗体进行筛选。这就意味着，要制备配对抗体，要完成以下两步工作：抗体的制备；配对抗体的筛选。
5.抗体制备中为了便于后续的筛选，制备的抗体应为单克隆抗体，通常利用杂交瘤技术进行单克隆抗体的制备。其中注意：如果单克隆抗体很少，很可能会找不到可以配对的抗体，因此，在免疫动物的时候，应多免疫几只动物，以获得更多的单克隆抗体。
6.配对抗体的筛选：
7.通常，配对抗体筛选的方法是双抗夹心elisa法。筛选的原理为：在得到了单克隆抗体后，从中取出两种单克隆抗体，一种作为捕获抗体，另一种作为标记抗体(hrp酶标记)，将捕获抗体包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未结合的抗原，再加入标记抗体孵育后洗去未结合的标记抗体，最后加入显色液显色。如果可以显色，说明标记抗体与抗原特异性结合，该捕获抗体与标记抗体为一对配对抗体。如果不能显色，说明标记抗体不能与抗原结合，从而被洗脱，该捕获抗体与标记抗体不是配对抗体。如果选择的两种单克隆抗体不能进行配对，则需重新选择两种单抗，重新进行试验，直至找出可以配对的抗体。
8.现有配对抗体筛选过程中，为了确定与捕获抗体能够形成抗体对的标记抗体具体是哪一种，需要实验人员反复多次地进行上述实验过程，且因为孔板在洗涤时为避免混淆，每个孔板只能针对一种捕获抗体做筛选实验。即使对于同一抗原上不同的抗原决定簇制备的单克隆抗体而言，当制备的单克隆抗体非常多时，对于不同的捕获抗体和标记抗体需要多个孔板进行逐一筛选分析，十分耗时。


技术实现要素：

9.针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种快速筛选抗体对的分析方法，解决现有配对抗体筛选过程，对于不同的捕获抗体和标记抗体是否为抗体对需要多个孔板进行逐一筛选分析，十分耗时的技术问题。
10.本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：
11.本发明提供一种快速筛选抗体对的分析方法，针对同一抗原上不同抗原决定簇对应的抗体，进行抗体对的筛选，包括以下步骤：
12.s1、取出筛选孔板，筛选孔板分为若干列孔洞，每列孔洞对应同一捕获抗体分区，并标记，若干列即为若干捕获抗体分区；
13.s2、在同一捕获抗体分区对同一捕获抗体进行不同标记抗体的双抗夹心法elisa实验；
14.s3、依据显色反应结果判断每一捕获抗体分区的每一孔洞中的标记抗体与捕获抗体是否为抗体对。
15.作为其中的一些实施例，步骤s1中的筛选孔板包括孔板本体和格挡部，所述孔板本体上开设有若干列孔洞，所述孔板本体的顶部位于相邻两列所述孔洞之间固定一格挡部。
16.作为其中的一些实施例，所述孔板本体上开设至少十列孔洞，每一列的孔洞的数量至少为十个，每列的所有孔洞内均为同一捕获抗体。
17.作为其中的一些实施例，所述格挡部包括连接板和两弯折部，所述连接板的底端与所述孔板本体的顶端固定，两所述弯折部对称地固定于所述连接板的顶端，且所述弯折部向孔洞方向弯折。
18.作为其中的一些实施例，步骤s3中，若孔洞中发生显示反应，则表示该孔洞中的标记抗体与捕获抗体为抗体对。
19.本发明的有益技术效果在于：
20.本发明一种快速筛选抗体对的分析方法，本技术的筛选孔板设置格挡部后，格挡部避免了混淆情况发生，对于同一抗原的抗体对的筛选实验，能够同时针对不同捕获抗体进行标记抗体的配对。
附图说明
21.图1为本发明实施例中的筛选孔板的结构示意图；
22.图2为本发明实施例中的筛选孔板的俯视结构示意图；
23.图3为本发明实施例中的筛选孔板的正视结构示意图。
24.附图标记：
25.1、孔板本体；2、格挡部；3、弯折部。
具体实施方式
26.下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述；显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他
实施例，都属于本技术保护的范围。
27.实施例
28.本发明公开的一种快速筛选抗体对的分析方法，针对同一抗原上不同抗原决定簇对应的抗体，进行抗体对的筛选，包括以下步骤：
29.s1、取出筛选孔板，筛选孔板分为若干列孔洞，每列孔洞对应同一捕获抗体分区，并标记，若干列即为若干捕获抗体分区；
30.s2、在同一捕获抗体分区对同一捕获抗体进行不同标记抗体的双抗夹心法elisa实验；
31.s3、依据显色反应结果判断每一捕获抗体分区的每一孔洞中的标记抗体与捕获抗体是否为抗体对。
32.进一步地，步骤s2中，将捕获抗体包被在固相载体并置于孔洞中，先加入抗原，孵育后洗去未结合的抗原，再加入标记抗体，孵育后洗去未结合的标记抗体，最后加入显色液显色。
33.进一步地，步骤s3中，若孔洞中发生显示反应，则表示该孔洞中的标记抗体与捕获抗体为抗体对。
34.如图1-图3所示，其中，步骤s1中的筛选孔板包括孔板本体1和格挡部2，孔板本体1上开设有若干列孔洞，孔板本体1的顶部位于相邻两列孔洞之间固定一格挡部2。
35.进一步地，孔板本体1上开设至少十列孔洞，每一列的孔洞的数量至少为十个，每列的所有孔洞内均为同一捕获抗体。
36.当孔板本体1上开设十列孔洞时，可针对十个不同的捕获抗体进行分区标记，如a区、b区、c区、d区、e区、f区、g区、h区、i区、j区、k区，每一区的每一个孔洞针对同一捕获抗体进行双抗夹心法elisa实验，并观察是否出现显色反应。
37.作为其中的一些实施例，格挡部2包括连接板和两弯折部3，连接板的底端与孔板本体1的顶端固定，两弯折部3对称地固定于连接板的顶端，且弯折部3向孔洞方向弯折。
38.其中，在步骤s2的洗涤操作时，由于弯折部3向孔洞方向弯折，每一区被洗涤出去的不与该区抗原结合的标记抗体不会被混淆到另一区。
39.本实施例的优点在于，本技术的筛选孔板设置格挡部后，格挡部避免了混淆情况发生，对于同一抗原的抗体对的筛选实验，能够同时针对不同捕获抗体进行标记抗体的配对。
40.本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，且上述实施例之间能够相互组合进行使用，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种快速筛选抗体对的分析方法，其特征在于，针对同一抗原上不同抗原决定簇对应的抗体，进行抗体对的筛选，包括以下步骤：s1、取出筛选孔板，筛选孔板分为若干列孔洞，每列孔洞对应同一捕获抗体分区，并标记，若干列即为若干捕获抗体分区；s2、在同一捕获抗体分区对同一捕获抗体进行不同标记抗体的双抗夹心法elisa实验；s3、依据显色反应结果判断每一捕获抗体分区的每一孔洞中的标记抗体与捕获抗体是否为抗体对。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中的筛选孔板包括孔板本体和格挡部，所述孔板本体上开设有若干列孔洞，所述孔板本体的顶部位于相邻两列所述孔洞之间固定一格挡部。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述孔板本体上开设至少十列孔洞，每一列的孔洞的数量至少为十个，每列的所有孔洞内均为同一捕获抗体。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述格挡部包括连接板和两弯折部，所述连接板的底端与所述孔板本体的顶端固定，两所述弯折部对称地固定于所述连接板的顶端，且所述弯折部向孔洞方向弯折。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s3中，若孔洞中发生显示反应，则表示该孔洞中的标记抗体与捕获抗体为抗体对。

技术总结
本发明涉及一种快速筛选抗体对的分析方法，针对同一抗原上不同抗原决定簇对应的抗体，进行抗体对的筛选，包括以下步骤；S1、取出筛选孔板，筛选孔板分为若干列孔洞，每列孔洞对应同一捕获抗体分区，并标记，若干列即为若干捕获抗体分区；S2、在同一捕获抗体分区对同一捕获抗体进行不同标记抗体的双抗夹心法ELISA实验；S3、依据显色反应结果判断每一捕获抗体分区的每一孔洞中的标记抗体与捕获抗体是否为抗体对。其优点在于，本申请的筛选孔板设置格挡部后，格挡部避免了混淆情况发生，对于同一抗原的抗体对的筛选实验，能够同时针对不同捕获抗体进行标记抗体的配对。不同捕获抗体进行标记抗体的配对。不同捕获抗体进行标记抗体的配对。


技术研发人员：李曼
受保护的技术使用者：方临医药技术（上海）有限公司
技术研发日：2023.06.06
技术公布日：2023/7/22