一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法及其应用与流程

1.本发明属于微生物领域，具体涉及一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法及其应用。


背景技术：

2.最低抑菌浓度(minimum inhibit concentration)为最低抑制病原微生物繁殖的药物浓度，用于衡量抗感染药(包括抗生素、抗菌药、化学合成药)抵抗病原微生物的能力。
3.cn115418388a公开了一种改进二倍稀释法测定真菌最低抑菌浓度(mic)的测定方法。所述改进方法为使用倒置显微镜在微观水平上观察孢子的萌发状态，从而判定真菌的最低抑菌浓度。所述方法可以避免肉眼观察是否生成沉淀的主观判断，还可以防止某些真菌因生长缓慢在24h后未形成可见沉淀，无法判断最低抑菌浓度的缺陷；所述方法可以解决以od值判断真菌生长情况和确定最低抑菌浓度不准确的难题，更好的避免抑菌剂本身颜色所带来的od值影响，拓宽二倍稀释法的应用背景，更好的适应真菌mic的测定。
4.cn110628592a公开了一种快速检测淋球菌最低抑菌浓度的装置，包括测试平台，测试平台包括基底层、测试层和加料层，测试层复合在基底层和加料层之间，加料层上开设加料孔，测试层上对应每个加料孔的位置设有测试区，测试区通过第一隔断结构与测试层上的空白位置隔离开来，每个测试区和相邻的其他测试区之间设有第二隔断结构，第一隔断结构和第二隔断结构内设有隔断物。本发明还公开了该装置的制备方法，该发明还公开了一种快速检测淋球菌最低抑菌浓度的检测方法。该发明检测装置结构设计简洁，携带方便；检测装置制备方法简单，成本低；该发明的检测方法能够简便的测试出抗生素最低抑菌浓度，结果准确。
5.检测药物最低抑菌浓度，目前采用的主要的方法有常量肉汤稀释法、琼脂稀释法、微量肉汤稀释法等。但是当同时检测多种药物、多种细菌的最低抑菌浓度时，常常出现质控失控的情况或质控组过多的问题，因此，从减少质控实验的角度出发，优化最低抑菌浓度检测试验是非常有意义的。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法及其应用。
7.为达此目的，本发明采用以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法包括：
9.(1)设置实验组、阳性对照组、一个阴性对照组和一个质控组；向各组检测容器中加入培养基；其中实验组和质控组继续加入待测药物，并依次梯度稀释；
10.(2)实验组和阳性对照组的检测容器中接种待测菌株；质控组的检测容器中接种
质控菌株；
11.(3)各组检测容器在33-37℃下静置16-24h，根据菌株生长情况确定最低抑菌浓度。
12.本发明创造性地提出在同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度时，仅需设置一个质控组即可，无需根据细菌种类设置多组质控，可以有效避免质控实验过多，存在的个别实验组中质控菌株的最低抑菌浓度不在质控菌株质控范围内的问题。此外，减少检测操作步骤也有利于提高整体检测效率，尤其是检测多种微生物的最低抑菌浓度时，减少质控组将显著提升检测效率。
13.所述33-37℃中的具体数值可以选择33℃、34℃、35℃、36℃或37℃等；
14.所述16-24h中的具体数值可以选择16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h等；
15.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
16.优选地，步骤(1)所述梯度稀释的稀释倍数为2倍；
17.优选地，步骤(1)所述梯度稀释的次数为5-20次。
18.所述5-20次中的具体数值可以选择5次、7次、9次、11次、13次、15次、17次、19次或20次等；
19.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
20.优选地，步骤(1)所述检测容器为96孔板；
21.优选地，所述实验组96孔板1板上的药物数量为1种。
22.本发明所涉及的检测容器为96孔板，且实验组每个96孔板上的药物数量仅为1组，在同一个96孔板上设置两种以上的药物会造成药物之间的干扰，进而影响最终检测结果的准确性。
23.优选地，步骤(1)所述加入待测药液后混匀至少5次以上。
24.所述5次以上的具体数值可以选择5次、6次、7次或8次等；
25.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
26.本发明所涉及地待测药液后混匀至少5次以上，才能保证药物与培养基成分混合均匀，从而避免由于初始溶液不均匀造成的后续以此为基础的稀释溶液严重的浓度差异。因此待测药液后混匀至少5次以上可以有效提升最低抑菌浓度的检测准确性。
27.优选地，步骤(1)所述药物包括亚胺培南、左氧氟沙星、头孢曲松钠、万古霉素、克拉霉素、阿莫西林或罗红霉素中的任意一种。
28.本发明所述的待测药物可以选择本领域技术人员熟知的任意一种药物，例如常见的抗生素药物：亚胺培南、左氧氟沙星、头孢曲松钠、万古霉素、克拉霉素、阿莫西林、罗红霉素。
29.优选地，步骤(2)所述待测菌株包括铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、乳酸菌或芽孢杆菌中的任意一种。
30.本发明所述的待测菌株可以选择本领域技术人员熟知的任意一种细菌，例如铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、乳酸菌、芽孢杆菌。
31.优选地，步骤(2)所述质控的菌株类型包括革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。
32.优选地，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌。
33.优选地，所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌。
34.本发明所述质控的菌株类型包括革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌，其中常用的革兰氏阴性菌为大肠杆菌，例如atcc 25922菌株等，革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌，例如atcc 29213菌株等。
35.优选地，步骤(2)所述待测菌株接种后菌液中活菌数为5
×
104cfu；
36.优选地，步骤(2)所述质控菌株接种后菌液中活菌数为5
×
104cfu。
37.本发明所述待测菌株及质控菌株常用的接种后的菌液中活菌数为5
×
104cfu。
38.优选地，步骤(2)所述接种操作的总时间不超过30min。
39.所述不超过30min的具体数值可以选择30min、29min、28min、27min、26min或25min等；
40.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
41.本发明所涉及地菌株接种总时间不应超过30min，由于在同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度时，往往需要设置多组实验，过多的实验组会造成菌种接种时间较长。当菌株接种总时间超过30min时，接种的第一个与最后一个的微生物生长时间差异巨大，但检测生长情况时为同一时间，从而造成检测准确性下降。
42.第二方面，本发明提供如第一方面所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法在抗生素耐药性检测中的应用。
43.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
44.本发明创造性地提出在同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度时，仅需设置一个质控组即可，无需根据细菌种类设置多组质控，可以有效避免质控实验过多，存在的个别实验组中质控菌株的最低抑菌浓度不在质控菌株质控范围内的问题。此外，减少检测操作步骤也有利于提高整体检测效率，尤其是检测多种微生物的最低抑菌浓度时，减少质控组将显著提升检测效率。
具体实施方式
45.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
46.实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。各实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
47.除非另有说明，本说明书中使用的全部专业术语和科学用语的含义均与本发明所属技术领域的技术人员一般理解的含义相同。但如有冲突，以包含定义的本说明书为准。
48.下述内容中mh肉汤培养基(t1031)购自江门市凯林贸易有限公司；下述内容中的药物来源；质控菌株大肠杆菌为atcc 25922，质控菌株金黄色葡萄球菌为atcc 29213。
49.实施例1
50.本实施例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法具体如下：
51.(1)取4个96孔板，其中3个96孔板上设置实验组、阳性对照组和质控组，命名为a板、b板、c板，每个板上仅含1种药物；其中1个96孔板d板仅设置阴性对照组；随后向各组96孔板每孔加入100μl mh肉汤培养基；
52.(2)各组加药情况：
53.实验组：向a板、b板、c板上的实验组第1-6排第1孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀5次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀5次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
54.质控组：向a板、b板、c板上的实验组第7-8排第一孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀5次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀5次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
55.阳性对照组：a板、b板、c板第12孔不加药物，作为阳性对照组。
56.阴性对照组：d板添加培养基后不添加药物，作为阴性对照组。
57.(3)将待测菌株a接种至a板、b板、c板的第1-2排，待测菌株b接种至a板、b板、c板的第3-4排，待测菌株c接种至a板、b板、c板的第5-6排，将质控菌株接种至a板、b板、c板的7-8排，接种后，每孔内的活菌数为5
×
104cfu，接种操作总时间为20min。
58.(4)将96孔板置于35℃，静置培养20h，随后根据各孔的菌株生长情况确定最低抑菌浓度，实验组96孔板上随着药液浓度由低至高的方向，每排第一个出现培养基清澈的孔对应的浓度即为最低抑菌浓度。
59.实施例2
60.本实施例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法具体如下：
61.(1)取4个96孔板，其中3个96孔板上设置实验组、阳性对照组和质控组，命名为a板、b板、c板，每个板上仅含1种药物；其中1个96孔板d板仅设置阴性对照组；随后向各组96孔板每孔加入100μl mh肉汤培养基；
62.(2)各组加药情况：
63.实验组：向a板、b板、c板上的实验组第1-6排第1孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀6次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀6次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
64.质控组：向a板、b板、c板上的实验组第7-8排第一孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀6次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀6次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
65.阳性对照组：a板、b板、c板第12孔不加药物，作为阳性对照组。
66.阴性对照组：d板添加培养基后不添加药物，作为阴性对照组。
67.(3)将待测菌株a接种至a板、b板、c板的第1-2排，待测菌株b接种至a板、b板、c板的第3-4排，待测菌株c接种至a板、b板、c板的第5-6排，将质控菌株接种至a板、b板、c板的7-8排，接种后，每孔内的活菌数为5
×
104cfu，接种操作总时间为25min。
68.(4)将96孔板置于33℃，静置培养24h，随后根据各孔的菌株生长情况确定最低抑菌浓度，实验组96孔板上随着药液浓度由低至高的方向，每排第一个出现培养基清澈的孔对应的浓度即为最低抑菌浓度。
69.实施例3
70.本实施例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法具体如下：
71.(1)取4个96孔板，其中3个96孔板上设置实验组、阳性对照组和质控组，命名为a板、b板、c板，每个板上仅含1种药物；其中1个96孔板d板仅设置阴性对照组；随后向各组96孔板每孔加入100μl mh肉汤培养基；
72.(2)各组加药情况：
73.实验组：向a板、b板、c板上的实验组第1-6排第1孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀7次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀7次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
74.质控组：向a板、b板、c板上的实验组第7-8排第一孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀7次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀7次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
75.阳性对照组：a板、b板、c板第12孔不加药物，作为阳性对照组。
76.阴性对照组：d板添加培养基后不添加药物，作为阴性对照组。
77.(3)将待测菌株a接种至a板、b板、c板的第1-2排，待测菌株b接种至a板、b板、c板的第3-4排，待测菌株c接种至a板、b板、c板的第5-6排，将质控菌株接种至a板、b板、c板的7-8排，接种后，每孔内的活菌数为5
×
104cfu，接种操作总时间为28min。
78.(4)将96孔板置于37℃，静置培养16h，随后根据各孔的菌株生长情况确定最低抑菌浓度，实验组96孔板上随着药液浓度由低至高的方向，每排第一个出现培养基清澈的孔对应的浓度即为最低抑菌浓度。
79.实施例4
80.本实施例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述方法与实施例1的区别仅在于步骤(2)吹吸混匀次数均由5次更换为3次，其余均与实施例1相同。
81.实施例5
82.本实施例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述方法与实施例1的区别仅在于延长菌株接种时间，将20min的总时长更换为35min，其余操作均与实施例1相同。
83.实施例6
84.本实施例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，所述方法与实施例1的区别仅在于96孔板上设置药物种类数量由1种调整为2种，即将b板上的第3-4排孔与a板上的第3-4排孔的处置操作交换，其余操作均与实施例1相同。
85.对比例1
86.本对比例提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的常规方法，所述方法与实施例1的区别仅在于同种药物，根据细菌数量3种设置9组质控组，而非1组质控组，具体为：
87.(1)取10个96孔板，其中9个96孔板上设置实验组、阳性对照组和质控组，命名为a1板、a2板、a3板、b1板、b2板、b3板、c1板、c2板、c3板，每个板上仅含1种药物，a1板、a2板、a3板为同一种药物，b1板、b2板、b3板为同一种药物，c1板、c2板、c3板为同一种药物；其中1个96孔板d板仅设置阴性对照组；随后向各组96孔板每孔加入100μl mh肉汤培养基；
88.(2)各组加药情况：
89.实验组：向a1板、a2板、a3板、b1板、b2板、b3板、c1板、c2板、c3板上的实验组第1-2
排第1孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀5次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀5次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
90.质控组：向a1板、a2板、a3板、b1板、b2板、b3板、c1板、c2板、c3板上的实验组第3-4排第一孔中分别继续加入3种待测药物100μl(药物浓度为16μg/ml)，吹吸混匀5次，接下来进行二倍稀释，吸取第一孔100μl混合液加入第二孔中，吹吸混匀5次，照此重复直至第11孔，第11孔吸出100μl混合液弃掉。
91.阳性对照组：a1板、a2板、a3板、b1板、b2板、b3板、c1板、c2板、c3板第12孔不加药物，作为阳性对照组。
92.阴性对照组：d板添加培养基后不添加药物，作为阴性对照组。
93.(3)将待测菌株a接种至a1板、b1板、c1板的第1-2排，待测菌株b接种至a2板、b2板、c2板的第1-2排，待测菌株c接种至a3板、b3板、c3板的第1-2排，将质控菌株接种至a1板、a2板、a3板、b1板、b2板、b3板、c1板、c2板、c3板的3-4排，接种后，每孔内的活菌数为5
×
104cfu，接种操作总时间为20min。
94.(4)将96孔板置于37℃，静置培养20h，随后根据各孔的菌株生长情况确定最低抑菌浓度，实验组96孔板上随着药液浓度由低至高的方向，每排第一个出现培养基清澈的孔对应的浓度即为最低抑菌浓度。
95.测试例1
96.本测试例对各实施例或对比例检测方法的准确性进行评价。具体评价方法为：
97.药物：a板待测药物使用亚胺培南(毕得医药)、b板待测药物使用左氧氟沙星(毕得医药)、c板待测药物使用头孢曲松(毕得医药)(a1/a2/a3属于本段a板，b板、c板同理)。
98.待测菌株：待测菌株a为阴沟肠杆菌(痰液样本中通过平板划线分离培养法分离)、待测菌株b为大肠埃希菌(痰液样本中通过平板划线分离培养法分离)、待测菌株c为肺炎克雷伯菌(痰液样本中通过平板划线分离培养法分离)(均为革兰氏阴性菌)。
99.质控菌株：大肠杆菌(atcc 25922)。
100.使用实施例或对比例的方法检测上述菌株对特定药物的最低抑菌浓度，结果如表1所示。
101.表1
102.[0103][0104]
由结果可知，阴性对照组未出现培养基浑浊，阳性对照组各孔菌液浑浊度相似，表明实验未出现染菌，且培养基、待测菌株、质控菌株的生长状态正常。
[0105]
由表2数据可知，对比例1为常规最低抑菌浓度的检测方法，实施例1 3种细菌对应3种抗生素的最低抑菌浓度与对比例1相比，数据相似，但对比例1的实验操作时间较实施例1长15min，表明本发明所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法中一个批次同种药物仅设置一组质控实验即可，无需根据细菌种类数量增加质控组，有利于节约时间与实验资源。
[0106]
实施例4步骤(2)吹吸混匀次数为3次，少于实施例1的5次，阴沟肠杆菌的亚胺培南、头孢曲松最低抑菌浓度及大肠埃希菌的亚胺培南、左氧氟沙星最低抑菌浓度及肺炎克雷伯菌的亚胺培南、左氧氟沙星、头孢曲松最低抑菌浓度与对比例1相比更高，表明加药操作后混匀次数不低于5次有利于增加最低抑菌浓度的准确性。
[0107]
实施例5的菌株总接种时间为35min，其阴沟肠杆菌的左氧氟沙星、头孢曲松最低抑菌浓度及大肠埃希菌的左氧氟沙星、头孢曲松最低抑菌浓度及肺炎克雷伯菌的亚胺培
南、左氧氟沙星、头孢曲松最低抑菌浓度与对比例1相比更低，表明菌株的总接种时间不超过30min时，使用本发明所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法的准确性更高。
[0108]
实施例6置换了两个96孔板上的两排孔，置换后同一个板上存在两种药物，其阴沟肠杆菌的左氧氟沙星最低抑菌浓度及大肠埃希菌的亚胺培南、左氧氟沙星、头孢曲松最低抑菌浓度及肺炎克雷伯菌的头孢曲松最低抑菌浓度与对比例1相比更低，其阴沟肠杆菌的头孢曲松及肺炎克雷伯菌的左氧氟沙星与对比例1相比更高，表明同一个96孔板设置检测药物超过一种，会造成药物的相互影响，从而影响最终结果的准确性。
[0109]
测试例2
[0110]
本测试例对实施例1或对比例1检测方法对革兰氏阳性菌的适用性进行评价。具体评价方法为：
[0111]
药物：a板待测药物使用左氧氟沙星(毕得医药)、b板待测药物使用头孢曲松(毕得医药)、c板待测药物使用万古霉素(毕得医药)(a1/a2/a3属于本段a板，b板、c板同理)。
[0112]
待测菌株：待测菌株a为表皮葡萄球菌(伤口分泌物样本中通过平板划线分离培养法分离)、待测菌株b为无乳链球菌(阴道分泌物样本中通过平板划线分离培养法分离)、待测菌株c为金黄色葡萄球菌(伤口分泌物样本中通过平板划线分离培养法分离)(均为革兰氏阳性菌)。
[0113]
质控菌株：金黄色葡萄球菌(atcc 29213)。
[0114]
使用实施例或对比例的方法检测上述菌株对特定药物的最低抑菌浓度，结果如表2所示。
[0115]
表2
[0116][0117]
由表2数据可知，当所测菌株为革兰氏阳性菌时，本发明所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法测得的结果与对比例1的常规方法无显著差异，表明本发明所述的方法减少了质控组数量，提升了检测效率，且广泛使用于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，应用前景广阔。
[0118]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的制备工艺，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术
人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
[0119]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0120]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

技术特征：
1.一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法包括：(1)设置实验组、阳性对照组、一个阴性对照组和一个质控组；向各组检测容器中加入培养基；其中实验组和质控组继续加入待测药物，并依次梯度稀释；(2)实验组和阳性对照组的检测容器中接种待测菌株；质控组的检测容器中接种质控菌株；(3)各组检测容器在33-37℃下静置16-24h，根据菌株生长情况确定最低抑菌浓度。2.如权利要求1所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(1)所述梯度稀释的稀释倍数为2倍；优选地，步骤(1)所述梯度稀释的次数为5-20次；优选地，步骤(1)所述检测容器为96孔板；优选地，所述实验组96孔板1板上的药物数量为1种。3.如权利要求1或2所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(1)所述加入待测药液后混匀至少5次以上。4.如权利要求1-3中任一项所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(1)所述药物包括亚胺培南、左氧氟沙星、头孢曲松钠、万古霉素、克拉霉素、阿莫西林或罗红霉素中的任意一种。5.如权利要求1-4中任一项所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(2)所述待测菌株包括铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、乳酸菌或芽孢杆菌中的任意一种或至少两种的组合。6.如权利要求1-5中任一项所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(2)所述质控的菌株类型包括革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。7.如权利要求6所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌；优选地，所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌。8.如权利要求1-7中任一项所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(2)所述待测菌株接种后菌液中活菌数为5
×
104cfu；优选地，步骤(2)所述质控菌株接种后菌液中活菌数为5
×
104cfu。9.如权利要求1-8中任一项所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法，其特征在于，步骤(2)所述接种操作的总时间不超过30min。10.如权利要求1-9中任一项所述的同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法在抗生素耐药性检测中的应用。

技术总结
本发明提供一种同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法及其应用，所述同时检测多种药物多种细菌最低抑菌浓度的方法包括：设置实验组、阳性对照组、一个阴性对照组和一个质控组；向各组检测容器中加入培养基；其中实验组和质控组继续加入待测药物，并依次梯度稀释；实验组和阳性对照组的检测容器中接种待测菌株；质控组的检测容器中接种质控菌株；各组检测容器在33-37℃下静置16-24h，根据菌株生长情况确定最低抑菌浓度。本发明所述方法可以有效避免个别实验组中质控菌株的最低抑菌浓度不在质控菌株质控范围内的问题，也有利于提高整体检测效率。高整体检测效率。


技术研发人员：李奎 滕祥云 观海霞 周梓红 黄珊珊 全智慧
受保护的技术使用者：广州华银医学检验中心有限公司
技术研发日：2023.03.24
技术公布日：2023/7/25