一种从组分Ⅰ+Ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺的制作方法

一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺
技术领域
1.本发明涉及血液制品技术领域，尤其涉及一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺。


背景技术：

2.人凝血酶是一种白色至灰白色非结晶物质，一般为冻干粉，凝血酶为止血药，临床上主要适用于结扎止血困难的小血管、毛细血管以及实质性脏器出血的止血；用于外伤、手术、口腔、耳、鼻、喉、泌尿、烧伤、骨科、神经外科、眼科、妇产科以及消化道等部位出血的止血，凝血酶直接作用于血液凝固过程的最后一步，促使血浆中的可溶性纤维蛋白原转变成不溶的纤维蛋白，从而达到速效止血的目的，而且还能促进上皮细胞的有丝分裂，加速创伤愈合，是一种速效的局部止血药，凝血酶适用于结扎止血困难的小血管、毛细血管、实质性脏器的出血及其他各种出血；
3.目前市场上人凝血酶产品的产生工艺，基本源于人血白蛋白生产工艺的基础，如果血白蛋白生产工艺中没有组分ⅲ沉淀提取步骤，就必须重新进行临床报批研究，即影响人血白蛋白产品的生产，同时也增加研发成本，因此，本发明提出一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺以解决现有技术中存在的问题。


技术实现要素：

4.针对上述问题，本发明提出一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，该从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺人血白蛋白生产工艺过程中放弃的组分ⅰ+ⅲ沉淀，来制备人凝血酶产品，无原料的成本，不会对现有的人血白蛋白生产工艺产生影响。
5.为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案实现：一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，包括以下步骤：
6.s1：取组分ⅰ+ⅲ沉淀，用0～10℃的7倍溶解液溶解1h以上，检测溶解液ph值，将ph值调整在6.4-7.4之间，继续搅拌2h以上静置，静置不少于2h；
7.s2：用14000转管式离心机进行离心，收集上清液，按0.02-0.04％上清液重量加入a-50干粉凝胶，或按0.3-0.5％上清液重量加入使用后再生的湿胶；
8.s3：加胶后继续搅拌1h以上静置，静置不少于1h，用专用凝胶收集器或300目绢布对吸附后的凝胶进行收集，上清液废弃；
9.s4：用3-4倍收集后凝胶重量的洗涤液进行洗涤，洗涤上清废弃，用3-4倍收集后凝胶重量的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，接着用0.45um滤芯对洗脱液进行澄清过滤，收集过滤液；
10.s5：用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍；
11.s6：按超滤后制品重量加入s/d溶液，至聚山梨酯-80最终浓度为1％，磷酸三丁酯最终浓度为0.3％，添加后将温度控制在24-26℃、保温6h进行病毒灭活；
12.s7：s/d病毒灭活开始时同时进行凝血酶激活，按加入s/d溶液后的制品重量1/50加入激活液，24-26℃保温搅拌≤24h；
13.s8：用0.45um滤芯对激活后制品进行澄清过滤，收集过滤液，用sp-80凝胶对激活后过滤液进行上样、洗涤、洗脱，收集洗脱液；
14.s9：用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍，接着配液，超滤后制品凝血酶效价含量不低于500iu/ml、ph值6.4-7.4；
15.s10：根据不同产品规格，超滤后制品经dv20纳米膜除病毒过滤，再经0.2um除菌分装，分装后制品用冻干机进行冻干并最终形成成品。
16.进一步改进在于：所述s1中，溶解液通过量枸橼酸钠加注射用水稀释而成，温度控制在2-5℃。
17.进一步改进在于：所述s4中，洗涤液配制具体为：取枸橼酸钠、氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用浓盐酸调ph值至6.9-7.1，温度控制在5～20℃。
18.进一步改进在于：所述s4中，洗脱液配制具体为：取枸橼酸钠和氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用浓盐酸调ph值至6.9-7.1，温度控制在5～20℃。
19.进一步改进在于：所述s5中，透析液配制具体为：取枸橼酸钠和氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用hc1溶液调ph值至6.95～7.05，温度控制在20～30℃。
20.进一步改进在于：所述s6中，s/d溶液配制具体为：取聚山梨酯-80、磷酸三丁酯，用注射用水溶解，根据制品量配制。
21.进一步改进在于：所述s7中，激活液配制具体为：取二水氯化钙加入到s5配制的透析液中，搅拌混匀后温度控制在20～30℃。
22.进一步改进在于：所述s8中，洗涤、洗脱时，洗涤液配制具体为：取tris和氯化钠，加入注射用水搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.20士0.05；洗脱液配制具体为：取tris和氯化钠，加入注射用水搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.20士0.05，温度控制为20～26℃。
23.进一步改进在于：所述s9中，透析液配制具体为：取tris、氯化钠和甘氨酸，加入注射用水搅拌混匀后后用盐酸调节ph至7.20士0.05，温度控制在20～30℃。
24.进一步改进在于：所述s10中，冻干工艺要求：将搁板降至0℃，并在0℃维持2h进行消泡；将搁板迅速降至-50℃，并在-50℃以下维持6h；将搁板在20h内匀速升至-30℃，并在-30℃维持15-20h，最终依据产品水线消失速度确定时间，前箱真空度控制在10pa；将搁板在4h内匀速升至10℃，并在10℃维持10-15h，前箱真空度控制在10pa；将搁板在5个小时内匀速升至35℃，并在35℃维持约15h，后10h开始抽极限真空；在抽极限真空程序结束之前，开始做压力升实验，当5min内前箱压力回升不超过2pa，则进行压塞操作；当超过2pa，继续抽真空至合格范围。
25.本发明的有益效果为：
26.1、本发明以人血白蛋白生产工艺过程中放弃的组分ⅰ+ⅲ沉淀，来制备人凝血酶产品，无原料的成本，不会对现有的人血白蛋白生产工艺产生影响，对比现有上市产品，本发明生产工艺简单，生产成本更低，另制成的人凝血酶产品可以加到创可贴中起到迅速止血作用。
27.2、本发明将废弃的组分ⅰ+ⅲ沉淀作为原料，提高了血浆的综合利用度，组分ⅰ+ⅲ沉淀可以长期冷冻储存，批投料量可以灵活控制，对比现有上市产品及发明专利，生产工艺
简单，凝血酶激活时间短、效价高。
28.3、本发明用国产sp-80凝胶，代替进口凝胶降低生产成本，采用国际通认的dv20纳米膜除病毒技术，既保证病毒去除效果，同时解决了干热灭活(99
±
1℃)除病毒方法带来的凝血酶效价大幅度降低及产品稳定性的问题，临床报批不影响现有的人血白蛋白生产工艺。
附图说明
29.图1为本发明的流程图。
具体实施方式
30.为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明做进一步详述，本实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
31.实施例一
32.根据图1所示，本实施例提出了一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，包括以下步骤：
33.s1：取组分ⅰ+ⅲ沉淀，用0～10℃的7倍溶解液溶解1h以上，检测溶解液ph值，将ph值调整在6.4-7.4之间，继续搅拌2h以上静置，静置不少于2h；
34.s2：用14000转管式离心机进行离心，收集上清液，按0.02-0.04％上清液重量加入a-50干粉凝胶，或按0.3-0.5％上清液重量加入使用后再生的湿胶；
35.s3：加胶后继续搅拌1h以上静置，静置不少于1h，用专用凝胶收集器或300目绢布对吸附后的凝胶进行收集，上清液废弃；
36.s4：用3-4倍收集后凝胶重量的洗涤液进行洗涤，洗涤上清废弃，用3-4倍收集后凝胶重量的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，接着用0.45um滤芯对洗脱液进行澄清过滤，收集过滤液；
37.s5：用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍；
38.s6：按超滤后制品重量加入s/d溶液，至聚山梨酯-80最终浓度为1％，磷酸三丁酯最终浓度为0.3％，添加后将温度控制在24-26℃、保温6h进行病毒灭活；
39.s7：s/d病毒灭活开始时同时进行凝血酶激活，按加入s/d溶液后的制品重量1/50加入激活液，24-26℃保温搅拌≤24h；
40.s8：用0.45um滤芯对激活后制品进行澄清过滤，收集过滤液，用sp-80凝胶对激活后过滤液进行上样、洗涤、洗脱，收集洗脱液；
41.s9：用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍，接着配液，超滤后制品凝血酶效价含量不低于500iu/ml、ph值6.4-7.4；
42.s10：根据不同产品规格，超滤后制品经dv20纳米膜除病毒过滤，再经0.2um除菌分装，分装后制品用冻干机进行冻干并最终形成成品。
43.本发明以人血白蛋白生产工艺过程中放弃的组分ⅰ+ⅲ沉淀，来制备人凝血酶产品，无原料的成本，不会对现有的人血白蛋白生产工艺产生影响，对比现有上市产品，本发明生产工艺简单，生产成本更低。
44.实施例二
45.根据图1所示，本实施例提出了一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，包括以下步骤：
46.取组分ⅰ+ⅲ沉淀，用0～10℃的7倍溶解液溶解1h以上，检测溶解液ph值，将ph值调整在6.4-7.4之间，继续搅拌2h以上静置，静置不少于2h；溶解液通过量枸橼酸钠加注射用水稀释而成，温度控制在2-5℃；
47.用14000转管式离心机进行离心，收集上清液，按0.02-0.04％上清液重量加入(进口)a-50干粉凝胶，或按0.3-0.5％上清液重量加入使用后再生的湿胶；
48.加胶后继续搅拌1h以上静置，静置不少于1h，用专用凝胶收集器或300目绢布对吸附后的凝胶进行收集，上清液废弃；
49.用3-4倍收集后凝胶重量的洗涤液进行洗涤，洗涤上清废弃，用3-4倍收集后凝胶重量的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，接着用0.45um滤芯对洗脱液进行澄清过滤，收集过滤液；洗涤液配制具体为：取枸橼酸钠、氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用浓盐酸调ph值至6.9-7.1，温度控制在5～20℃；洗脱液配制具体为：取枸橼酸钠和氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用浓盐酸调ph值至6.9-7.1，温度控制在5～20℃；
50.用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍；透析液配制具体为：取枸橼酸钠和氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用hc1溶液调ph值至6.95～7.05，温度控制在20～30℃；
51.按超滤后制品重量加入s/d溶液，至聚山梨酯-80最终浓度为1％，磷酸三丁酯最终浓度为0.3％，添加后将温度控制在24-26℃、保温6h进行病毒灭活；s/d溶液配制具体为：取聚山梨酯-80、磷酸三丁酯，用注射用水溶解，根据制品量配制；
52.s/d病毒灭活开始时同时进行凝血酶激活，按加入s/d溶液后的制品重量1/50加入激活液，24-26℃保温搅拌≤24h；激活液配制具体为：取二水氯化钙加入到s5配制的透析液中，搅拌混匀后温度控制在20～30℃；
53.用0.45um滤芯对激活后制品进行澄清过滤，收集过滤液，用(国产)sp-80凝胶对激活后过滤液进行上样、洗涤、洗脱，收集洗脱液；洗涤、洗脱时，洗涤液配制具体为：取tris和氯化钠，加入注射用水搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.20士0.05；洗脱液配制具体为：取tris和氯化钠，加入注射用水搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.20士0.05，温度控制为20～26℃；
54.用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍，接着配液，超滤后制品凝血酶效价含量不低于500iu/ml、ph值6.4-7.4；透析液配制具体为：取tris、氯化钠和甘氨酸，加入注射用水搅拌混匀后后用盐酸调节ph至7.20士0.05，温度控制在20～30℃；
55.根据不同产品规格，超滤后制品经dv20纳米膜除病毒过滤，再经0.2um除菌分装，分装后制品用冻干机进行冻干并最终形成成品，冻干工艺要求：将搁板降至0℃，并在0℃维持2h进行消泡；将搁板迅速降至-50℃，并在-50℃以下维持6h；将搁板在20h内匀速升至-30℃，并在-30℃维持15-20h，最终依据产品水线消失速度确定时间，前箱真空度控制在10pa；将搁板在4h内匀速升至10℃，并在10℃维持10-15h，前箱真空度控制在10pa；将搁板在5个小时内匀速升至35℃，并在35℃维持约15h，后10h开始抽极限真空；在抽极限真空程序结束
之前，开始做压力升实验，当5min内前箱压力回升不超过2pa，则进行压塞操作；当超过2pa，继续抽真空至合格范围。
56.实验例：
57.从-25℃沉淀库中取组分ⅰ+ⅲ沉淀40g放于操作间自然溶解，操作间温度20℃，用2～5℃的7倍溶解液溶解2h以上，溶解液配制280kg，通过量枸橼酸钠4117g加注射用水稀释而成280kg，温度控制在4℃；然后将组分ⅰ+ⅲ沉淀40g投入到280kg溶解液中，溶解时间8:30-10:30，测ph7.14，继续搅拌10:30-16:30，制品温度3.0℃,静置不少于2h；
58.用14000转管式离心机进行离心，离心时间8:13-8:59，收集上清液247kg；
59.上清液247kg，加入a-50干粉凝胶50g，搅拌时间9:11-10:11，静置时间10:11-13:30；
60.用专用凝胶收集器或300目绢布对吸附后的凝胶进行收集，上清液废弃；凝胶收集时间13:31-13:56，收集凝胶926g；
61.用3-4倍收集后凝胶重量的洗涤液进行洗涤，洗涤上清废弃，洗涤液12kg配制具体为：取枸橼酸钠31g、氯化钠105.4g，加入注射用水5000g，搅拌混匀后用3ml浓盐酸调ph值至6.98，温度控制在18℃；用洗涤液3kg洗涤a-50凝胶，洗涤时间14:20-14:47。
62.用3-4倍收集后凝胶重量的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液5kg配制具体为：取枸橼酸钠25.8g和氯化钠146.3g，加入注射用水5000g，搅拌混匀后用3ml浓盐酸调ph值至6.99，温度控制在18℃，用洗脱液3kg洗脱时间14:50-15:07，收集洗脱液1.6kg，其中有1.4kg废弃；
63.接着用0.45um滤芯对洗脱液进行澄清过滤，收集过滤液；过滤时间15:10-15:20，过滤后制品1.5kg；
64.用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍；透析液配制具体为：取枸橼酸钠20.6g和氯化钠46.8g，加入注射用水8000g，搅拌混匀后用1mol/l hc1溶液3ml调ph值至7，温度控制在28.2℃；制品浓缩时间15：25-15:34，浓缩后制品0.6kg，制品透析时间15:34-16:18，透析液用量3.6kg，透析后制品0.5kg，od280值45。
65.按超滤后制品重量加入s/d溶液，至聚山梨酯-80最终浓度为1％，磷酸三丁酯最终浓度为0.3％，添加后将温度控制在24-26℃、保温6h进行病毒灭活；s/d溶液配制具体为：取11g聚山梨酯-80、3.3g磷酸三丁酯，用注射用水溶解至100g，制品0.5kg，加入s/d溶液0.05kg，灭活时间16:45-22：45，温度25℃。
66.s/d病毒灭活开始时同时进行凝血酶激活，按加入s/d溶液后的制品重量1/50加入激活液，24-26℃保温搅拌≤24h；激活液配制具体为：取二水氯化钙29.4g加入到200g的上述配制的透析液中，搅拌混匀后温度控制在18.2℃；超滤后制品0.55kg，加入激活液11g，激活时间16:50-次日9:00；
67.[0068][0069]
用0.45um滤芯对激活后制品进行澄清过滤，收集过滤液，过滤时间9:00-9:10，过滤后制品550g
[0070]
用(国产)sp-80凝胶对激活后过滤液进行上样、洗涤、洗脱，收集洗脱液；上样时，用sp-80凝胶200ml柱层析，上样量550g，上样时间9:20-10:40。
[0071]
洗涤时，洗涤液配制具体为：取tris7.3g和氯化钠17.5g，加入注射用水至3000g搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.1；洗涤液用量1000g，洗涤时间10:40-11:20；
[0072]
洗脱时，洗脱液配制具体为：取tris7.3g和氯化钠175.5g，加入注射用水3000g搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.11，温度控制为22℃；洗脱液用量1000g，洗脱时间11:20-12:10，洗脱制品1000g。
[0073]
用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍，透析液配制具体为：取tris12.1g、氯化钠117g和甘氨酸50g，加入注射用水5000g搅拌混匀后后用盐酸调节ph至7.10，温度控制在25℃；制品浓缩时间12:10-12:10，浓缩后制品0.5kg，制品透析时间12:20-14:00，透析液用量3.2kg，透析后制品0.5kg，od280值20；接着配液，超滤后制品凝血酶效价3100iu/ml、制品500g，ph值7，按照550iu/ml配制出2800ml。
[0074]
根据不同产品规格，超滤后制品经dv20纳米膜除病毒过滤，再经0.2um除菌分装，用50ml玻璃模制瓶分装，每瓶10g
±
0.2g。
[0075]
分装后制品用冻干机进行冻干并最终形成成品，冻干工艺要求：将搁板降至0℃，并在0℃维持2h进行消泡；将搁板迅速降至-50℃，并在-50℃以下维持6h；将搁板在20h内匀速升至-30℃，并在-30℃维持15-20h，最终依据产品水线消失速度确定时间，前箱真空度控制在10pa；将搁板在4h内匀速升至10℃，并在10℃维持10-15h，前箱真空度控制在10pa；将搁板在5个小时内匀速升至35℃，并在35℃维持约15h，后10h开始抽极限真空；在抽极限真空程序结束之前，开始做压力升实验，当5min内前箱压力回升不超过2pa，则进行压塞操作；当超过2pa，继续抽真空至合格范围。
[0076][0077][0078]
出柜：冻干制品出柜时间11:00-12:00，出柜瓶数250瓶。
[0079]
本发明以人血白蛋白生产工艺过程中放弃的组分ⅰ+ⅲ沉淀，来制备人凝血酶产品，无原料的成本，不会对现有的人血白蛋白生产工艺产生影响，对比现有上市产品，本发明生产工艺简单，生产成本更低，具体为：
[0080]
1、将废弃的组分ⅰ+ⅲ沉淀作为原料，提高了血浆的综合利用度；
[0081]
2、组分ⅰ+ⅲ沉淀可以长期冷冻储存，批投料量可以灵活控制；
[0082]
3、对比现有上市产品及发明专利，生产工艺简单，凝血酶激活时间短、效价高；
[0083]
4、用国产sp-80凝胶，代替进口凝胶降低生产成本；
[0084]
5、采用国际通认的dv20纳米膜除病毒技术，既保证病毒去除效果，同时解决了干热灭活(99
±
1℃)除病毒方法带来的凝血酶效价大幅度降低及产品稳定性的问题；
[0085]
6、临床报批不影响现有的人血白蛋白生产工艺。
[0086]
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原
理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

技术特征：
1.一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于，包括以下步骤：s1：取组分ⅰ+ⅲ沉淀，用0～10℃的7倍溶解液溶解1h以上，检测溶解液ph值，将ph值调整在6.4-7.4之间，继续搅拌2h以上静置，静置不少于2h；s2：用14000转管式离心机进行离心，收集上清液，按0.02-0.04％上清液重量加入a-50干粉凝胶，或按0.3-0.5％上清液重量加入使用后再生的湿胶；s3：加胶后继续搅拌1h以上静置，静置不少于1h，用专用凝胶收集器或300目绢布对吸附后的凝胶进行收集，上清液废弃；s4：用3-4倍收集后凝胶重量的洗涤液进行洗涤，洗涤上清废弃，用3-4倍收集后凝胶重量的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，接着用0.45um滤芯对洗脱液进行澄清过滤，收集过滤液；s5：用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍；s6：按超滤后制品重量加入s/d溶液，至聚山梨酯-80最终浓度为1％，磷酸三丁酯最终浓度为0.3％，添加后将温度控制在24-26℃、保温6h进行病毒灭活；s7：s/d病毒灭活开始时同时进行凝血酶激活，按加入s/d溶液后的制品重量1/50加入激活液，24-26℃保温搅拌≤24h；s8：用0.45um滤芯对激活后制品进行澄清过滤，收集过滤液，用sp-80凝胶对激活后过滤液进行上样、洗涤、洗脱，收集洗脱液；s9：用10-30kd超滤膜对过滤液进行浓缩、透析，透析液用量不低于浓缩后液体重量的6倍，接着配液，超滤后制品凝血酶效价含量不低于500iu/ml、ph值6.4-7.4；s10：根据不同产品规格，超滤后制品经dv20纳米膜除病毒过滤，再经0.2um除菌分装，分装后制品用冻干机进行冻干并最终形成成品。2.根据权利要求1所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s1中，溶解液通过量取枸橼酸钠加注射用水稀释而成，温度控制在2-5℃。3.根据权利要求2所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s4中，洗涤液配制具体为：取枸橼酸钠、氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用浓盐酸调ph值至6.9-7.1，温度控制在5～20℃。4.根据权利要求3所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s4中，洗脱液配制具体为：取枸橼酸钠和氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用浓盐酸调ph值至6.9-7.1，温度控制在5～20℃。5.根据权利要求4所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s5中，透析液配制具体为：取枸橼酸钠和氯化钠，加入注射用水，搅拌混匀后用hc1溶液调ph值至6.95～7.05，温度控制在20～30℃。6.根据权利要求5所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s6中，s/d溶液配制具体为：取聚山梨酯-80、磷酸三丁酯，用注射用水溶解，根据制品量配制。7.根据权利要求6所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s7中，激活液配制具体为：取二水氯化钙加入到s5配制的透析液中，搅拌混匀后温度控制在20～30℃。
8.根据权利要求7所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s8中，洗涤、洗脱时，洗涤液配制具体为：取tris和氯化钠，加入注射用水搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.20士0.05；洗脱液配制具体为：取tris和氯化钠，加入注射用水搅拌混匀后用浓盐酸调节ph至7.20士0.05，温度控制为20～26℃。9.根据权利要求8所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s9中，透析液配制具体为：取tris、氯化钠和甘氨酸，加入注射用水搅拌混匀后后用盐酸调节ph至7.20士0.05，温度控制在20～30℃。10.根据权利要求9所述的一种从组分ⅰ+ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，其特征在于：所述s10中，冻干工艺要求：将搁板降至0℃，并在0℃维持2h进行消泡；将搁板迅速降至-50℃，并在-50℃以下维持6h；将搁板在20h内匀速升至-30℃，并在-30℃维持15-20h，最终依据产品水线消失速度确定时间，前箱真空度控制在10pa；将搁板在4h内匀速升至10℃，并在10℃维持10-15h，前箱真空度控制在10pa；将搁板在5个小时内匀速升至35℃，并在35℃维持约15h，后10h开始抽极限真空；在抽极限真空程序结束之前，开始做压力升实验，当5min内前箱压力回升不超过2pa，则进行压塞操作；当超过2pa，继续抽真空至合格范围。

技术总结
本发明提供了一种从组分Ⅰ+Ⅲ沉淀中制备人凝血酶工艺，涉及血液制品技术领域，包括以下步骤：S1：取组分Ⅰ+Ⅲ沉淀，用0～10℃的7倍溶解液溶解1h以上，检测溶解液pH值，将pH值调整在6.4-7.4之间，继续搅拌2h以上静置，静置不少于2h；S2：用14000转管式离心机进行离心，收集上清液，按0.02-0.04％上清液重量加入A-50干粉凝胶，或按0.3-0.5％上清液重量加入使用后再生的湿胶；本发明以人血白蛋白生产工艺过程中放弃的组分Ⅰ+Ⅲ沉淀，来制备人凝血酶产品，无原料的成本，不会对现有的人血白蛋白生产工艺产生影响，生产工艺简单，生产成本更低，可以加到创可贴中起到迅速止血作用。加到创可贴中起到迅速止血作用。加到创可贴中起到迅速止血作用。


技术研发人员：谢长福 邓坤 陈昱宏 刘健
受保护的技术使用者：同路生物制药有限公司
技术研发日：2023.03.16
技术公布日：2023/7/25