一种阿哌沙班中间体APM3有关物质的检测方法及应用与流程

一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法及应用
技术领域
1.本发明属于药物杂质检测技术领域，具体涉及一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法及应用。


背景技术：

2.阿哌沙班是一种强效、口服有效的，可逆、直接、高选择性的xa因子活性位点抑制剂，可用于髋关节或膝关节择期置换术的成年患者，预防静脉血栓栓塞事件。apm3是合成阿哌沙班的关键中间体，其化学式为(甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-(2-氧代哌啶-1-基)苯基]-4,5,6,7-四氢-1h-吡唑并[3,4-c]吡啶-3-甲酸乙酯。
[0003]
作为合成阿哌沙班的关键中间体，中间体apm3的品质直接影响阿哌沙班的品质。现有技术中，关于apm3的合成方法如式6所示：
[0004][0005]
由于阿哌沙班中间体apm3的生产工艺为化学合成，容易引入工艺杂质，且这些杂质与主成分极性相近、难以分离，因此需要对中间体的有关物质进行检测和控制，进而保证阿哌沙班的产品质量。
[0006]
综上，建立一种能够准确测定阿哌沙班中间体apm3中有关物质含量的方法是本领域技术人员亟待解决的问题。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的在于提供一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，采用该方法能使阿哌沙班中间体各杂质相互之间能够很好地分离并准确计算阿哌沙班中间体中杂质的含量。具有定性准确、方便可靠且重复性好的有益效果。
[0008]
为实现上述目的，本发明提供一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，具体包括以下步骤：
[0009]
以乙腈-水为溶剂溶解apm3，得到供试品溶液；
[0010]
以乙腈-水为溶剂溶解apm1、apm2、apsm1、apsm3和apm3，得到系统适应性溶液；
[0011]
以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以醋酸铵溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中有关物质含量。
[0012]
在一优选的实施方式中，所述apm3具有式1的结构式：
[0013][0014]
在一优选的实施方式中，所述apm1、apm2、apsm1、apsm3分别具有式2-5的结构式：
[0015][0016]
在一优选的实施方式中，所述供试品溶液中apm3的浓度为0.1～5mg/ml。
[0017]
在一优选的实施方式中，所述流动相a中醋酸铵的浓度为5～15mmol/l。
[0018]
在一优选的实施方式中，所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为3～5μm。
[0019]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中采用梯度洗脱的方式，使流动相通过色谱柱，洗脱程序具体包括：
[0020]
在0～25min，所述流动相a在流动相中的体积含量从80％～90％下降到15％～25％，所述流动相b在流动相中的体积含量从10％～20％增加到75％～85％；
[0021]
在25～30min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为15％～25％，所述流动相b在流动相中的体积含量为75％～85％；
[0022]
在30～30.1min，所述流动相a在流动相中的体积含量从15％～25％增加到80％～90％，所述流动相b在流动相中的体积含量从75％～85％下降到10％～20％；
[0023]
在30.1～35min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为80％～90％，所述流动相b在流动相中的体积含量为10％～20％。
[0024]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中流动相流速为0.5～1.5ml/min，所述色谱柱的柱温为30～40℃。
[0025]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中紫外检测波长为220～260nm。
[0026]
本发明的另一目的在于提供一种上述任意一项方法在制备阿哌沙班的粗品、干品、精制品中的应用。
[0027]
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下优点：
[0028]
本发明提供一种简单、可行的方式，采用hplc方法使主成分与有关物质分离并准确计算供试品溶液中apm3的含量，从而能够快速、准确、简便地检测阿哌沙班中间体apm3中杂质的含量。为控制阿派沙班中间体质量建立了严格标准，并通过控制中间体质量有效提高阿哌沙班产品质量。
附图说明
[0029]
从下面结合附图对本发明实施例的详细描述中，本发明的这些和/或其它方面和优点将变得更加清楚并更容易理解，其中：
[0030]
附图1为本发明实施例1中阿哌沙班中间体apm3供试品的色谱图；
[0031]
附图2为本发明实施例1-a系统适用性溶液的色谱图；
[0032]
附图3为本发明实施例1-b系统适用性溶液的色谱图；
[0033]
附图4为本发明实施例1-c系统适用性溶液的色谱图；
[0034]
附图5为本发明实施例2中混合溶液的色谱图；
[0035]
附图6为本发明实施例2中apm1定位溶液的色谱图；
[0036]
附图7为本发明实施例2中apm2定位溶液的色谱图；
[0037]
附图8为本发明实施例2中apm3定位溶液的色谱图；
[0038]
附图9为本发明实施例2中apsm1定位溶液的色谱图；
[0039]
附图10为本发明实施例2中apsm3定位溶液的色谱图。
具体实施方式
[0040]
为了使本领域技术人员更好地理解本发明，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
[0041]
本发明实施例通过提供一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，解决现有技术中没有阿哌沙班中间体apm3的质量控制标准，无法分离、并准确计算阿哌沙班中间体有关物质的技术问题。
[0042]
本发明中的技术方案为解决上述问题，总体思路如下：
[0043]
本发明的目的在于提供一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，具体包括以下步骤：
[0044]
以乙腈-水为溶剂溶解apm3，得到供试品溶液；
[0045]
以乙腈-水为溶剂溶解apm1、apm2、apsm1、apsm3和apm3，得到系统适应性溶液；
[0046]
以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以醋酸铵溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中有关物质含量。
[0047]
在一优选的实施方式中，所述apm3具有式1的结构式：
[0048][0049]
在一优选的实施方式中，所述apm1、apm2、apsm1、apsm3分别具有式2-5的结构式：
[0050][0051][0052]
在一优选的实施方式中，所述供试品溶液中apm3的浓度为0.1～5mg/ml。
[0053]
优选的，所述供试品溶液中apm3的浓度为0.5～1.5mg/ml。
[0054]
更优选的，所述供试品溶液中apm3的浓度为0.55mg/ml、0.6mg/ml、0.65mg/ml、0.7mg/ml、0.75mg/ml、0.8mg/ml、0.85mg/ml、0.9mg/ml、0.95mg/ml、0.98mg/ml、1mg/ml、1.02mg/ml、1.05mg/ml、1.1mg/ml、1.15mg/ml、1.2mg/ml、1.25mg/ml、1.3mg/ml、1.35mg/ml、1.4mg/ml、1.45mg/ml。
[0055]
在一优选的实施方式中，所述系统适应性溶液中apm1、apm2、apsm1和apsm3的浓度分别为5～15μg/ml。
[0056]
优选的，所述系统适应性溶液中apm1、apm2、apsm1和apsm3的浓度分别为6～14μg/ml。
[0057]
更优选的，所述系统适应性溶液中apm1、apm2、apsm1、apsm3和apm3的浓度均为6.5μg/ml、7μg/ml、7.5μg/ml、8μg/ml、8.5μg/ml、9μg/ml、9.5μg/ml、9.8μg/ml、10μg/ml、10.2μg/ml、10.5μg/ml、11μg/ml、11.5μg/ml、12μg/ml、12.5μg/ml、13μg/ml、13.5μg/ml。
[0058]
在一优选的实施方式中，所述系统适应性溶液中apm3的浓度为0.5～1.5mg/ml。
[0059]
更优选的，所述供试品溶液中apm3的浓度为0.55mg/ml、0.6mg/ml、0.65mg/ml、0.7mg/ml、0.75mg/ml、0.8mg/ml、0.85mg/ml、0.9mg/ml、0.95mg/ml、0.98mg/ml、1mg/ml、1.02mg/ml、1.05mg/ml、1.1mg/ml、1.15mg/ml、1.2mg/ml、1.25mg/ml、1.3mg/ml、1.35mg/ml、1.4mg/ml、1.45mg/ml。
[0060]
在一优选的实施方式中，所述供试品溶液溶剂和系统适应性溶液溶剂中，乙腈和水的体积比为2:8～8:2。
[0061]
优选的，所述溶剂中乙腈和水的体积比为3:7～7:3。
[0062]
更优选的，所述溶剂中乙腈和水的体积比为4:6、5:5、6:4。
[0063]
在一优选的实施方式中，所述流动相a的制备方法为：将醋酸铵中加水溶解，即得。
[0064]
在一优选的实施方式中，所述流动相a中醋酸铵的浓度为5～15mmol/l。
[0065]
更优选的，所述流动相a中醋酸铵的浓度为6mmol/l、7mmol/l、8mmol/l、9mmol/l、10mmol/l、11mmol/l、12mmol/l、13mmol/l、14mmol/l。
[0066]
在一优选的实施方式中，所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为3～5μm。
[0067]
更优选的，所述色谱柱为岛津shim-pack gis c18，规格为4.6
×
250mm，5μm。
[0068]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中采用梯度洗脱的方式，使流动相通过色谱柱，洗脱程序具体包括：
[0069]
在0～25min，所述流动相a在流动相中的体积含量从80％～90％下降到15％～25％，所述流动相b在流动相中的体积含量从10％～20％增加到75％～85％；
[0070]
在25～30min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为15％～25％，所述流动相b在流动相中的体积含量为75％～85％；
[0071]
在30～30.1min，所述流动相a在流动相中的体积含量从15％～25％增加到80％～90％，所述流动相b在流动相中的体积含量从75％～85％下降到10％～20％；
[0072]
在30.1～35min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为80％～90％，所述流动相b在流动相中的体积含量为10％～20％。
[0073]
更优选的，所述洗脱程序具体包括：
[0074]
在0～25min，所述流动相a在流动相中的体积含量从85％下降到20％，所述流动相b在流动相中的体积含量从15％增加到80％；
[0075]
在25～30min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为20％，所述流动相b在流动相中的体积含量为80％；
[0076]
在30～30.1min，所述流动相a在流动相中的体积含量从20％增加到85％，所述流动相b在流动相中的体积含量从80％下降到15％；
[0077]
在30.1～35min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为85％，所述流动相b在流动相中的体积含量为15％
[0078]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中流动相流速为0.5～1.5ml/min。
[0079]
更优选的，所述流动相流速为0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、0.9ml/min、1ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min。
[0080]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中色谱柱的柱温为30～40℃；更优选的，所述柱温为35℃。
[0081]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中进样量为10～50μl。
[0082]
优选的，所述高效液相色谱法检测过程中进样量为5～15μl。
[0083]
更优选的，所述高效液相色谱法检测过程中进样量为6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、11μl、12μl、13μl、14μl。
[0084]
在一优选的实施方式中，所述高效液相色谱法检测过程中紫外检测波长为220～
260nm。更优选的，所述紫外检测波长为240nm。
[0085]
将待测样品按照上述条件进行高效液相色谱检测后，得到高效液相色谱图，根据色谱图计算各个有关物质的含量。在本发明的具体实施例中，优选先配制各个有关物质的标准品溶液，然后按照上述检测条件进行高效液相色谱检测，根据标准品在高效液相色谱图中的保留时间和待测样品在高效液相色谱图中的保留时间对分离的各个有关物质进行定性，根据标准品在高效液相色谱图中的峰面积、标准品浓度以及待测样品在高效液相色谱图中的峰面积进行计算，即可对待测样品中各个有关物质进行定量。本发明对具体的计算方法没有特殊要求，按照本领域技术人员熟知的方法进行计算即可。优选的，所述计算方法为面积归一法。
[0086]
本发明的另一目的在于提供一种上述任意一项方法在制备阿哌沙班的粗品、干品、精制品中的应用。
[0087]
在一优选的实施方式中，所述应用为检测阿哌沙班中间体apm3的粗品、干品、精制品中的应用。
[0088]
下面通过具体实施例详细说明本技术的技术方案：
[0089]
若未特别指明，本发明中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，本发明中所用的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。本发明所用试剂如无特殊说明均为分析纯。具体的，本发明实施例所用的仪器及试剂如下：
[0090]
ulimate 3000hplc系统，包括dpg3600a泵(带脱气机)，tcc-3100柱温箱(带六通阀)，wps 3000tsl自动进样器，vwd-3400rs可变波长检测器，chromeleon 7s色谱工作站，电子分析天平(岛津，万分之一)；
[0091]
阿哌沙班中间体对照品(外购，纯度≥95％)，阿哌沙班中间体供试品apm3(实验室自制)，apm1、apm2、apsm1、apsm3(外购，纯度≥95％)，醋酸铵为分析纯，乙腈、甲醇为色谱纯。
[0092]
实施例1
[0093]
步骤1、流动相的配制：
[0094]
流动相a：醋酸铵溶液(取0.77g醋酸铵加水1000ml溶解，制得10mmol/l醋酸铵溶液)；流动相b:乙腈。
[0095]
步骤2、溶液配制：
[0096]
空白溶剂：分别量取乙腈、水各500ml，混匀，过滤。
[0097]
供试品溶液：取阿哌沙班中间体apm3供试品25mg，精密称定，置于25ml量瓶中，溶剂溶解定容，摇匀，作为供试品溶液。
[0098]
系统适应性溶液：取apm1、apm2、apsm1、apsm3和apm3对照品加入溶剂配制成混合溶液，其中，apm1、apm2、apsm1、apsm3的浓度为10μg/ml，apm3对照品的浓度为1mg/ml。
[0099]
步骤3、采用高效液相色谱法，将上述溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图至洗脱程序结束，根据色谱图的峰面积，计算各杂质的含量。阿哌沙班中间体apm3的色谱图如图1所示。
[0100]
在本实施例中，通过改变色谱条件，如色谱柱、梯度洗脱顺序等筛选确定色谱条件。
[0101]
实施例1-a
[0102]
色谱条件：
[0103]
色谱柱：安捷伦sb-c8色谱柱(4.6
×
250mm,5μm)
[0104]
流动相a：醋酸铵溶液(取0.77g醋酸铵加水1000ml溶解，制得10mmol/l醋酸铵溶液)，流动相b:乙腈
[0105]
流速：1ml/min；检测波长：240nm；柱温：35℃；进样量：10μl；
[0106]
洗脱程序：
[0107][0108]
实施例1-a系统适用性溶液的色谱图，如图2所示。由图中可以看出：系统适用性溶液中仅出三个峰，说明色谱柱不合适。
[0109]
实施例1-b
[0110]
色谱条件
[0111]
色谱柱：岛津shim-pack gis c18(250
×
4.6mm,5μm)
[0112]
流动相a：醋酸铵溶液(取0.77g醋酸铵加水1000ml溶解，制得10mmol/l醋酸铵溶液)，流动相b:乙腈
[0113]
流速：1ml/min；检测波长：240nm；柱温：35℃；进样量：10μl；
[0114]
洗脱程序：
[0115][0116]
实施例1-b系统适用性溶液的色谱图，如图3所示。由图中可以看出：系统适用性溶液图谱中仅有两个组分峰，说明梯度洗脱顺序不合适。
[0117]
实施例1-c
[0118]
色谱条件
[0119]
色谱柱：岛津shim-pack gis c18(250
×
4.6mm,5μm)
[0120]
流动相a：醋酸铵溶液(取0.77g醋酸铵加水1000ml溶解，制得10mmol/l醋酸铵溶
液)，流动相b:乙腈
[0121]
流速：1ml/min；检测波长：240nm；柱温：35℃；进样量：10μl；
[0122]
洗脱程序：
[0123][0124]
实施例1-c系统适用性溶液的色谱图，如图4和表1所示。由图表中可以看出：通过调整流动相梯度，系统适用性溶液中各组分均能检测到且各峰间的分离度均能达到要求，可满足检测要求。
[0125]
表1系统适用性溶液的实验结果
[0126][0127]
实施例2方法专属性
[0128]
根据实施例1-c的方法进行专属性试验。
[0129]
步骤1、流动相的配制：
[0130]
流动相a：醋酸铵溶液(取0.77g醋酸铵加水1000ml溶解，制得10mmol/l醋酸铵溶液)；流动相b:乙腈；溶剂：乙腈-水(体积比1:1)。
[0131]
步骤2、溶液配制：
[0132]
空白溶剂：分别量取乙腈、水各500ml，混匀，过滤。
[0133]
供试品溶液：取阿哌沙班中间体apm3供试品25mg，精密称定，置于25ml量瓶中，溶剂溶解定容，摇匀，作为供试品溶液。
[0134]
混合溶液：取apm1、apm2、apsm1、apsm3加入溶剂配制成各组分浓度为10μg/ml的溶液作为混合溶液。
[0135]
组分定位溶液：取各组分对照品约10mg，精密称定，置于10ml量瓶中，用溶剂溶解定容，作为定位溶液。
[0136]
步骤3、采用高效液相色谱法，取各组分定位溶液和混合溶液分别进样，记录色谱图，得到的混合溶液色谱图如图5所示，各组分定位如图6～10所示。所用具体色谱条件如
下：
[0137]
色谱柱：岛津shim-pack gis c18(250
×
4.6mm,5μm)
[0138]
流动相a：醋酸铵溶液(取0.77g醋酸铵加水1000ml溶解，制得10mmol/l醋酸铵溶液)，流动相b:乙腈
[0139]
流速：1ml/min；检测波长：240nm；柱温：35℃；进样量：10μl；
[0140]
洗脱程序：
[0141][0142]
实施例3精密度实验
[0143]
按实施例2的方法，取混合溶液，连续进样6次，记录色谱图，并对结果进行评价，结果见表2。
[0144]
表2进样精密度实验结果
[0145][0146]
进样精密度测试结果显示：进样精密度溶液中各组分的峰面积的rsd％≤2％，说明此方法适宜检测apm3中各杂质含量，仪器进样精密度好。
[0147]
实施例4耐用性实验
[0148]
按实施例2的方法，通过单因素控制变量法调整色谱条件的流速、流动相起始比例、柱温等条件，测定结果不受影响的承受程度。耐用性结果见表3至表5。
[0149]
表3不同流速的分离度
[0150]
[0151]
耐用性不同流速的测试结果显示：本测试方法在流速0.95ml/min至1.05ml/min之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。
[0152]
表4不同流动相起始比例的分离度
[0153][0154][0155]
耐用性不同流动相起始比例的测试结果显示：本测试方法的流动相起始比例在87:13至83:17之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。
[0156]
表5不同柱温的分离度
[0157][0158]
耐用性不同柱温的测试结果显示：本测试方法的柱温在30℃至40℃之间变化，对测定结果影响不大，表明本方法的耐用性良好。
[0159]
实施例5检测限与定量限实验
[0160]
根据实施例1-c的方法进行检测限与定量限实验。
[0161]
供试品溶液：各取apm1、apm2、apsm1、apsm3、apm3分别加入溶剂配制成浓度为5μg/ml的溶液作起始溶液。将各起始溶液逐步稀释，当信噪比约为10时其浓度为定量限，当信噪比约为3时其浓度为检测限。
[0162]
各组分的检测限和定量限结果见表6
[0163]
表6不同组分的检测限和定量限
[0164]
[0165][0166]
检测限和定量限实验的测试结果显示：各组分的定量限远低于其标准限度，说明此方法对各组分的检出能力较强。
[0167]
实施例6线性关系实验
[0168]
根据实施例1-c的方法进行线性关系实验。
[0169]
将apm1、apm2、apsm1、apsm3、apm3分别配制浓度为0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.8μg/ml、1.0μg/ml、1.2μg/ml、1.5μg/ml、1.8μg/ml、2.0μg/ml的溶液进行线性关系确认，其结果如表7所示。
[0170]
表7
[0171]
组分名称线性关系apm1y＝0.4182x-0.0112(r2＝0.9960)apm2y＝0.2742x-0.0012(r2＝0.9981)apsm1y＝0.2846x-0.0114(r2＝0.9944)apsm3y＝0.2074x+0.0006(r2＝0.9963)apm3y＝0.3493x-0.0050(r2＝0.9944)
[0172]
线性关系实验的测试结果显示：各组分在定量限以上一定范围内线性关系良好，说明此方法对各组分的检出能力稳定，可对各组分进行定量分析。
[0173]
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

技术特征：
1.一种阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：以乙腈-水为溶剂溶解apm3，得到供试品溶液；以乙腈-水为溶剂溶解apm1、apm2、apsm1、apsm3和apm3，得到系统适应性溶液；以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以醋酸铵溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中有关物质含量。2.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述apm3具有式1的结构式：3.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述apm1、apm2、apsm1、apsm3分别具有式2-5的结构式：4.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中apm3的浓度为0.1～5mg/ml。5.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相a中醋酸铵的浓度为5～15mmol/l。6.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为3～5μm。7.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测过程中采用梯度洗脱的方式，使流动相通过色谱柱，洗脱程序具体包括：在0～25min，所述流动相a在流动相中的体积含量从80％～90％下降到15％～25％，所述流动相b在流动相中的体积含量从10％～20％增加到75％～85％；在25～30min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的
体积含量为15％～25％，所述流动相b在流动相中的体积含量为75％～85％；在30～30.1min，所述流动相a在流动相中的体积含量从15％～25％增加到80％～90％，所述流动相b在流动相中的体积含量从75％～85％下降到10％～20％；在30.1～35min，所述流动相a和所述流动相b进行等度洗脱，所述流动相a在流动相中的体积含量为80％～90％，所述流动相b在流动相中的体积含量为10％～20％。8.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测过程中流动相流速为0.5～1.5ml/min，所述色谱柱的柱温为30～40℃。9.如权利要求1所述的阿哌沙班中间体apm3有关物质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测过程中紫外检测波长为220～260nm。10.如权利要求1-9任意一项所述方法在制备阿哌沙班的粗品、干品、精制品中的应用。

技术总结
本发明提供了一种阿哌沙班中间体APM3有关物质的检测方法及应用，涉及药物杂质检测技术领域。具体包括以下步骤：以乙腈-水为溶剂溶解APM3，得到供试品溶液；以乙腈-水为溶剂溶解APM1、APM2、APSM1、APSM3和APM3，得到系统适应性溶液；以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，以醋酸铵溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，采用高效液相色谱法检测所述供试品溶液中有关物质含量。本发明提供的技术方案能使阿哌沙班中间体各杂质相互之间能够很好地分离并准确计算阿哌沙班中间体中杂质的含量。具有定性准确、方便可靠且重复性好的有益效果。方便可靠且重复性好的有益效果。方便可靠且重复性好的有益效果。


技术研发人员：钱丹 耿电光 杨明 曹琳琳 刘玲 张念 卢思敏 殷恒亮 王俊臣 刘学威 靳朋飞 贾秧秧 姚娜 刘田丰 张慧婷
受保护的技术使用者：天方药业有限公司
技术研发日：2023.05.19
技术公布日：2023/7/26