一种含硒桑黄多糖的提取工艺的制作方法

1.本发明涉及桑黄多糖提取领域，尤其涉及一种含硒桑黄多糖的提取工艺。


背景技术：

2.桑黄多糖是从桑黄中提取的活性成分，其已经广泛地应用于抗肿瘤、抗氧化等的免疫治疗中。由于桑黄多糖具有毒副作用小、作用机制独特等特点，其已成为国内外的研究热点。桑黄多糖的提取工艺主要包括热水浸提法、稀酸提取法、稀碱提取法、超声波浸提法等。由于桑黄多糖易溶于水，在加上热水浸提法具有成本低、操作简便等方面的优势，该方式成为桑黄多糖提取最为广泛、经济的工艺，经过提取后桑黄多糖溶解在热水中形成浸提液，然后经过进一步的提取工艺将所述浸提液中的桑黄多糖提取出来得到多糖产品。然而，虽然桑黄中含有丰富的硒元素，但目前的这类工艺难以有效地将这些硒元素提取到桑黄多糖产品中，给桑黄的药用价值造成了较大的损失。


技术实现要素：

3.本发明提供一种含硒桑黄多糖的提取工艺，该工艺提取的桑黄多糖含有一定的硒元素，不仅有助于弥补现有提取工艺导致的桑黄药用价值损失，而且这种硒元素易于被人体吸收。具体地，所述含硒桑黄多糖的提取工艺包括步骤：
4.(1)将桑黄粉碎后与清水混合后搅拌，然后在加热条件下进行提取。完成后去除提取液中的桑黄残渣，得到的提取液备用。
5.(2)将所述提取液进行脱色、脱蛋白处理，得到桑黄多糖粗提液。
6.(3)对所述桑黄多糖粗提液进行浓缩，得到浓缩液。然后在该浓缩液中加入硒化卡拉胶并搅拌形成均匀混合液。然后在该混合液中加入乙醇，搅拌均匀后静置，最后进行固液分离，将得到的固体产物干燥，即得含硒桑黄多糖。
7.在进一步的方案中，所述(1)步骤中，桑黄与清水的比例为1g：30～50ml。可选地，将两者混合后搅拌10～15min，使所述桑黄充分与清水浸润。
8.在进一步的方案中，所述(1)步骤中，加热温度为80～90℃，并在该条件下提取2～3小时。
9.在进一步的方案中，所述(1)步骤中，提取的过程中施加200～300w功率的超声振动进行辅助提取，有助于加快对桑黄多糖的提取效率。
10.在进一步的方案中，所述(2)步骤中，按照3～5g/l的比例在所述提取液中加入固体脱色剂，搅拌均匀后加热至设定温度后保温，完成后过滤去除所述固体脱色剂，即得脱色液。可选地，所述加热温度为40～50℃，保温时间为25～40min。
11.在进一步的方案中，所述固体脱色剂包括活性炭、硅藻土、吸附树脂等中的任意一种。
12.在进一步的方案中，所述(2)步骤中，脱蛋白是指采用sevage法对所述脱色液进行处理，完成后得到所述桑黄多糖粗提液。该方法为去除桑黄多糖提取液中蛋白质的常用方
法，本发明不再详述。
13.在进一步的方案中，所述(3)步骤中，将所述桑黄多糖粗提液加热浓缩至初始体积的40～50％，即得所述浓缩液。可选地，所述加热温度为70～80℃。
14.在进一步的方案中，所述(3)步骤中，桑黄多糖粗提液与硒化卡拉胶的比例为1l：0.5～0.72g。
15.在进一步的方案中，所述(3)步骤中，所述混合液与乙醇的体积比为1：3～4.5。优选地，所述乙醇的质量分数不小于95％。在所述乙醇的作用下粗提液中的桑黄多糖和硒化卡拉胶同时析出形成含硒桑黄多糖。
16.在进一步的方案中，所述(3)步骤中，静置时间为30～50min，以便所述粗提液中的含硒桑黄多糖充分析出、沉淀。
17.在进一步的方案中，所述(3)步骤中，所述干燥的方式包括真空干燥、冻干等中的任意一种。
18.与现有技术相比，本发明至少具有以下方面的有益效果：传统的热水浸提这种工艺虽然具有低成本、易操作、更加绿色环保等方面的优势，但由于提取的剧烈程度有限，难以有效地将桑黄中的硒元素提取到桑黄多糖产品中，这导致桑黄的药用价值受到了损失。为此，本发明采用硒化卡拉胶作为改性剂对桑黄提取液进行处理，本发明利用硒化卡拉胶不仅含有硒元素，而且具有良好的水溶性和不溶于乙醇的特点，将其加入到所述提取液进中溶解后形成同时含有桑黄多糖和含硒化合物的混合液。当在该混合液中进一步加入乙醇后，由于所述桑黄多糖和硒化卡拉胶均难溶于乙醇中而共同析出，而且由于所述硒化卡拉胶具有胶凝特点，析出后将所述桑黄多糖包覆在其中，经过进一步干燥后形成密实包覆体可有效避免所述桑黄多糖与外界氧气接触，克服在储存过程中桑黄多糖因氧化而变质、失效，进而造成桑黄多糖产品效力降低的问题。另外，本发明制备的这种形式的桑黄多糖产品在进入人体后还具有缓释作用，既有助于避免桑黄多糖在短时间内持续高浓度而容易刺激胃部引起不适的问题，又可以稳定地延长多糖成分的供给时间、延长药效。除此之外，由于本发明的采用的改性剂中的硒元素以有机硒的形式存在，其更容易被人体吸收，从而确保了对本发明制备的含硒桑黄多糖中硒元素的利用率。
具体实施方式
19.需要说明的是，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同，除非另行定义。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。现结合具体实施例对本发明进一步说明。
20.实施例1
21.一种含硒桑黄多糖的提取工艺，包括如下步骤：
22.(1)将桑黄子实体粉碎后与清水按照1g：40ml的比例混合，然后机械搅拌10min，使桑黄粉末与清水充分浸润。然后将得到的混合体系密闭后水浴加热至85℃保持2.5小时。完成后进行过滤去除桑黄残渣，收集滤液，即得提取液，备用。
23.(2)按照4.5g/l的比例在步骤(1)得到的所述提取液中加入活性炭，搅拌均匀后加热至45℃保温30min，以对所述提取液进行脱色处理，完成后过滤去除所述活性炭，收集液
相，即得脱色液。然后在所述脱色液中加入sevage试剂(氯仿：正丁醇＝5：1，体积比)后震荡，然后静置，待分层完毕后收集上层清液，重复上述步骤对所述上层清液进行重复处理至中间层的变性蛋白层消失，即得桑黄多糖粗提液。
24.(3)将步骤(2)得到的所述桑黄多糖粗提液水浴加热至80℃进行浓缩处理，并浓缩至初始体积的45％，得到浓缩液。然后按照0.65g/l的比例在所述浓缩液中加入硒化卡拉胶粉末(辽宁众发生物科技有限公司、kappa-硒化卡拉胶)并搅拌至形成均匀混合液。然后在该混合液中加入其体积4倍的乙醇(质量分数99％)搅拌后静置40min进行醇沉。最后进过滤分离出沉淀的固体产物，将该固体产物在50℃真空干燥2小时，即得含硒桑黄多糖。
25.1、采用根据硫酸-苯酚法对本实施例制备的所述含硒桑黄多糖中的多糖含量进行测试。另外，采用icp-ms法对所述含硒桑黄多糖中的硒含量进行测试，结果为：多糖含量＝41.67％，硒含量16.03μg/g。
26.2、将本实施例制备的含硒桑黄多糖置于氧气浓度为40％的密封箱中，测定放置30天后所述含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量变化，并计算多糖保持率(％)，以衡量所述含硒桑黄多糖在空气中的抗氧化性能，所述多糖保持率＝(初始含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量-放置30天后含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量)/初始含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量，结果为99.31％。
27.3、取浓度为1.5mol/ml的稀盐酸，加如蒸馏水进行稀释，然后将ph调至1.5。然后按照1g/100ml的比例加入胃蛋白酶，混匀后过滤，即得模拟胃液。将本实施例制备的所述含硒桑黄多糖置于该模拟胃液中，测试该含硒桑黄多糖完全崩解的时间，结果显示为78.2min。
28.实施例2
29.一种含硒桑黄多糖的提取工艺，包括如下步骤：
30.(1)将桑黄子实体粉碎后与清水按照1g：50ml的比例混合，然后机械搅拌10min，使桑黄粉末与清水充分浸润。然后将得到的混合体系密闭后水浴加热至90℃保持2.0小时，提取的过程中施加200w功率的超声振动进行辅助提取。完成后进行过滤去除桑黄残渣，收集滤液，即得提取液，备用。
31.(2)按照5g/l的比例在步骤(1)得到的所述提取液中加入硅藻土，搅拌均匀后加热至40℃保温40min，以对所述提取液进行脱色处理，完成后过滤去除所述硅藻土，收集液相，即得脱色液。然后在所述脱色液中加入sevage试剂(氯仿：正丁醇＝5：1，体积比)后震荡，然后静置，待分层完毕后收集上层清液，重复上述步骤对所述上层清液进行重复处理至中间层的变性蛋白层消失，即得桑黄多糖粗提液。
32.(3)将步骤(2)得到的所述桑黄多糖粗提液水浴加热至75℃进行浓缩处理，并浓缩至初始体积的40％，得到浓缩液。然后按照0.5g/l的比例在所述浓缩液中加入硒化卡拉胶粉末(辽宁众发生物科技有限公司、kappa-硒化卡拉胶)并搅拌至形成均匀混合液。然后在该混合液中加入其体积3倍的乙醇(质量分数95％)搅拌后静置30min进行醇沉。最后进过滤分离出沉淀的固体产物，将该固体产物在50℃真空干燥2小时，即得含硒桑黄多糖。
33.1、采用根据硫酸-苯酚法对本实施例制备的所述含硒桑黄多糖中的多糖含量进行测试。另外，采用icp-ms法对所述含硒桑黄多糖中的硒含量进行测试，结果为：多糖含量＝37.58％，硒含量14.62μg/g。
34.2、将本实施例制备的含硒桑黄多糖置于氧气浓度为40％的密封箱中，测定放置30
天后所述含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量变化，并计算多糖保持率(％)，以衡量所述含硒桑黄多糖在空气中的抗氧化性能，所述多糖保持率＝(初始含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量-放置30天后含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量)/初始含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量，结果为99.56％。
35.3、取浓度为1.5mol/ml的稀盐酸，加如蒸馏水进行稀释，然后将ph调至1.5。然后按照1g/100ml的比例加入胃蛋白酶，混匀后过滤，即得模拟胃液。将本实施例制备的所述含硒桑黄多糖置于该模拟胃液中，测试该含硒桑黄多糖完全崩解的时间，结果显示为73.7min。
36.实施例3
37.一种含硒桑黄多糖的提取工艺，包括如下步骤：
38.(1)将桑黄子实体粉碎后与清水按照1g：30ml的比例混合，然后机械搅拌15min，使桑黄粉末与清水充分浸润。然后将得到的混合体系密闭后水浴加热至80℃保持3.0小时，提取的过程中施加300w功率的超声振动进行辅助提取。完成后进行过滤去除桑黄残渣，收集滤液，即得提取液，备用。
39.(2)按照3g/l的比例在步骤(1)得到的所述提取液中加入活性炭，搅拌均匀后加热至50℃保温25min，以对所述提取液进行脱色处理，完成后过滤去除所述活性炭，收集液相，即得脱色液。然后在所述脱色液中加入sevage试剂(氯仿：正丁醇＝5：1，体积比)后震荡，然后静置，待分层完毕后收集上层清液，重复上述步骤对所述上层清液进行重复处理至中间层的变性蛋白层消失，即得桑黄多糖粗提液。
40.(3)将步骤(2)得到的所述桑黄多糖粗提液水浴加热至70℃进行浓缩处理，并浓缩至初始体积的50％，得到浓缩液。然后按照0.72g/l的比例在所述浓缩液中加入硒化卡拉胶粉末(辽宁众发生物科技有限公司、kappa-硒化卡拉胶)并搅拌至形成均匀混合液。然后在该混合液中加入其体积4.5倍的无水乙醇搅拌后静置50min进行醇沉。最后进过滤分离出沉淀的固体产物，将该固体产物在50℃真空干燥2小时，即得含硒桑黄多糖。
41.1、采用根据硫酸-苯酚法对本实施例制备的所述含硒桑黄多糖中的多糖含量进行测试。另外，采用icp-ms法对所述含硒桑黄多糖中的硒含量进行测试，结果为：多糖含量＝40.23％，硒含量16.74μg/g。
42.2、将本各实施例制备的含硒桑黄多糖置于氧气浓度为40％的密封箱中，测定放置30天后所述含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量变化，并计算多糖保持率(％)，以衡量所述含硒桑黄多糖在空气中的抗氧化性能，所述多糖保持率＝(初始含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量-放置30天后含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量)/初始含硒桑黄多糖中的多糖成分的含量，结果为99.24％。
43.3、取浓度为1.5mol/ml的稀盐酸，加如蒸馏水进行稀释，然后将ph调至1.5。然后按照1g/100ml的比例加入胃蛋白酶，混匀后过滤，即得模拟胃液。将本实施例制备的所述含硒桑黄多糖置于该模拟胃液中，测试该含硒桑黄多糖完全崩解的时间，结果显示为75.4min。
44.实施例4
45.一种含硒桑黄多糖的提取工艺，包括如下步骤：
46.(1)将桑黄子实体粉碎后与清水按照1g：40ml的比例混合，然后机械搅拌10min，使桑黄粉末与清水充分浸润。然后将得到的混合体系密闭后水浴加热至85℃保持2.5小时。完成后进行过滤去除桑黄残渣，收集滤液，即得提取液，备用。
47.(2)按照4.5g/l的比例在步骤(1)得到的所述提取液中加入活性炭，搅拌均匀后加热至45℃保温30min，以对所述提取液进行脱色处理，完成后过滤去除所述活性炭，收集液相，即得脱色液。然后在所述脱色液中加入sevage试剂(氯仿：正丁醇＝5：1，体积比)后震荡，然后静置，待分层完毕后收集上层清液，重复上述步骤对所述上层清液进行重复处理至中间层的变性蛋白层消失，即得桑黄多糖粗提液。
48.(3)将步骤(2)得到的所述桑黄多糖粗提液水浴加热至80℃进行浓缩处理，并浓缩至初始体积的45％，得到浓缩液。然后在该混合液中加入其体积4倍的乙醇(质量分数99％)搅拌后静置40min进行醇沉。最后进过滤分离出沉淀的固体产物，将该固体产物在50℃真空干燥2小时，即得桑黄多糖产物。
49.1、采用根据硫酸-苯酚法对本实施例制备的所述桑黄多糖产物中的多糖含量进行测试。另外，采用icp-ms法对所述桑黄多糖产物中的硒含量进行测试，结果为：多糖含量＝82.96％，硒含量0.24μg/g。
50.2、将本各实施例制备的桑黄多糖产物置于氧气浓度为40％的密封箱中，测定放置30天后所述桑黄多糖产物中的多糖成分的含量变化，并计算多糖保持率(％)，以衡量所述桑黄多糖产物在空气中的抗氧化性能，所述多糖保持率＝(初始桑黄多糖产物中的多糖成分的含量-放置30天后桑黄多糖产物中的多糖成分的含量)/初始桑黄多糖产物中的多糖成分的含量，结果为97.13％。
51.3、取浓度为1.5mol/ml的稀盐酸，加如蒸馏水进行稀释，然后将ph调至1.5。然后按照1g/100ml的比例加入胃蛋白酶，混匀后过滤，即得模拟胃液。将本实施例制备的所述桑黄多糖产物置于该模拟胃液中，测试该桑黄多糖产物完全崩解的时间，结果显示为26.3min。
52.从上述实施例的测试结果可以看出，实施例1～3采用硒化卡拉胶作为改性剂对桑黄提取液进行处理后得到的含硒桑黄多糖含有一定含量的硒元素，而实施例4采用传统的热水浸提方法得到的桑黄多糖产物中的硒含量明显低于实施例1～3，这说明通过所述硒化卡拉胶的处理可有效提高桑黄多糖产品的硒含量。
53.另外，从上述的测试结果可以看出，相对于实施例4，实施例1～3制备的含硒桑黄多糖明显具有更好的多糖保持率和完全崩解时间，这说明利用所述硒化卡拉胶的胶凝特点将所述桑黄多糖包覆在其中，经过进一步干燥后形成密实包覆体可有效避免所述桑黄多糖与外界氧气接触，克服在储存过程中桑黄多糖因氧化而变质、失效，进而造成桑黄多糖产品效力降低的问题。同时，这种形式的桑黄多糖产品在进入人体后还具有缓释作用，既有助于避免桑黄多糖在短时间内持续高浓度而容易刺激胃部引起不适的问题，又可以稳定地延长多糖成分供给时间、延长药效。
54.以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：
1.一种含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：(1)将桑黄粉碎后与清水混合后搅拌，然后在加热条件下进行提取；完成后去除提取液中的桑黄残渣，得到的提取液备用；(2)将所述提取液进行脱色、脱蛋白处理，得到桑黄多糖粗提液；(3)对所述桑黄多糖粗提液进行浓缩，得到浓缩液；然后在该浓缩液中加入硒化卡拉胶并搅拌形成均匀混合液；然后在该混合液中加入乙醇，搅拌均匀后静置，最后进行固液分离，将得到的固体产物干燥，即得含硒桑黄多糖。2.根据权利要求1所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(1)步骤中，桑黄与清水的比例为1g：30～50ml；可选地，将两者混合后搅拌10～15min。3.根据权利要求1所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(1)步骤中，加热温度为80～90℃，并在该条件下提取2～3小时；优选地，所述(1)步骤中，提取的过程中施加200～300w功率的超声振动进行辅助提取。4.根据权利要求1所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(2)步骤中，按照3～5g/l的比例在所述提取液中加入固体脱色剂，搅拌均匀后加热至设定温度后保温(加热温度为40～50℃，保温时间为25～40min)，完成后过滤去除所述固体脱色剂，即得脱色液；可选地，所述固体脱色剂包括活性炭、硅藻土、吸附树脂等中的任意一种。5.根据权利要求4所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(2)步骤中，脱蛋白是指采用sevage法对所述脱色液进行处理，完成后得到所述桑黄多糖粗提液。6.根据权利要求1所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(3)步骤中，将所述桑黄多糖粗提液加热浓缩至初始体积的40～50％，即得所述浓缩液；可选地，所述加热温度为70～80℃。7.根据权利要求1所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(3)步骤中，桑黄多糖粗提液与硒化卡拉胶的比例为1l：0.5～0.72g。8.根据权利要求1所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(3)步骤中，所述混合液与乙醇的体积比为1：3～4.5；优选地，所述乙醇的质量分数不小于95％。9.根据权利要求1-8任一项所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(3)步骤中，静置时间为30～50min，以便所述粗提液中的含硒桑黄多糖充分析出、沉淀。10.根据权利要求1-8任一项所述的含硒桑黄多糖的提取工艺，其特征在于，所述(3)步骤中，所述干燥的方式包括真空干燥、冻干中的任一种。

技术总结
本发明公开一种含硒桑黄多糖的提取工艺，包括如下步骤：(1)将桑黄粉碎后与清水混合后搅拌，然后在加热条件下进行提取；完成后去除提取液中的桑黄残渣，得到的提取液备用。(2)将所述提取液进行脱色、脱蛋白处理，得到桑黄多糖粗提液。(3)对所述桑黄多糖粗提液进行浓缩，得到浓缩液；然后在该浓缩液中加入硒化卡拉胶并搅拌形成均匀混合液；然后在该混合液中加入乙醇，搅拌均匀后静置，最后进行固液分离，将得到的固体产物干燥，即得含硒桑黄多糖。本发明采用硒化卡拉胶作为改性剂对桑黄提取液进行处理，提取的桑黄多糖含有一定的硒元素，不仅有助于弥补现有提取工艺导致的桑黄药用价值损失，而且这种硒元素易于被人体吸收。而且这种硒元素易于被人体吸收。


技术研发人员：陈安徽 郭红伟 邵颖 陈艳丽 马伟 陈凯
受保护的技术使用者：宁波御菌生物技术有限公司
技术研发日：2023.04.28
技术公布日：2023/8/4