犬过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及方法与流程

犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及方法
技术领域
1.本发明涉及过敏原特异性ige抗体检测技术领域，具体为犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及方法。


背景技术：

2.免疫球蛋白(ige)存在于血中，是一种存在于血液中的免疫球蛋白，例如当犬血清ige升高是过敏性疾病最有力的提示，过敏原进入机体诱导产生特异性ige，ige的结合会使机体进入对该过敏原的特异致敏状态。
3.随着宠物市场的不断发展，犬的生存环境和条件逐渐改善，而在犬类动物中过敏性疾病很常见，犬类ige通常在血清中存在，在遇到过敏原时能够参与过敏机制，即发病机制，出现过敏症状，例如犬特应性皮炎(cad)是一种与ige和igg抗体(ab)相关的过敏性皮肤病，因此过敏原特异性ige血清学检测被广泛用于诊断和治疗过敏性疾病；目前检测血液中过敏原特异性ige抗体浓度，筛查致病过敏原的方法有酶免疫法、免疫印迹法、胶体金侧流层析法、蛋白芯片法等。
4.除此之外，诱发犬类过敏性疾病的过敏原种类广泛多样，常见发病过敏原包括犬特应性皮炎(cad)、跳蚤过敏性皮炎(fad)、葡萄球菌、马拉色菌、链格孢菌等，还包括食物源过敏，例如鸡、火鸡、糙米、大豆酵母、大豆、兔子、鸭、金枪鱼、牛奶等；目前的单一过敏原检测较为繁琐或一次检测筛查的过敏原较少，导致许多犬类动物对它们的过敏性疾病并没有得到足够的发现和控制。因此非常需要一种用于犬血清或血浆中特异性抗体ige的检测试剂盒，并且要求能够多筛查过敏原，并使其能够降低外界因素干扰，提高其检测的准确性。鉴于此，我们提出犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及方法。


技术实现要素：

5.为了弥补以上不足，本发明提供了犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及方法。
6.本发明的技术方案是：
7.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，包括比色卡和能够承载液剂或待检测样本的反应槽，还包括：过敏原蛋白抗原包被试纸条、hrp标记抗犬ige二抗、浓缩细胞清洗缓冲液和tmb底物色原试剂。tmb底物色原试剂作为显色剂使用，正常应无色，若变质呈蓝色就不能使用。
8.优选的，每个所述过敏原蛋白抗原包被试纸条上均设有多个均匀分布的测试点，且每个测试点处设有不同的过敏原蛋白抗原。
9.优选的，多个所述测试点呈双排对称结构设置在所述过敏原蛋白抗原包被试纸条上。
10.优选的，所述反应槽内设有硝酸纤维膜，且所述过敏原蛋白抗原包被试纸条固定安装在所述反应槽内。
11.优选的，所述待检测样本采用不溶血犬血清或血浆，且控制所述检测试剂盒保存
环境温度为2-8℃；其中不溶血犬血清或血浆在2-8℃可稳定7天，-20℃可稳定三个月，但是-20℃下保存的样本仅可复溶一次,不能反复融冻。
12.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，适用于上述犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，检测方法步骤具体为：
13.步骤一：将浓缩细胞清洗缓冲液稀释25-32倍，配制成清洗液，混匀备用；
14.步骤二：使用清洗液湿润反应槽内的硝酸纤维膜，接着向反应槽内滴加0.5ml或10滴犬血清或血浆后充分浸润处理；
15.步骤三：倒尽反应槽内的液体，用备用的清洗液冲洗1-2s，重复多次后甩干，完成洗膜；
16.步骤四：继续向反应槽内滴加0.5ml或10滴hrp标记抗犬ige二抗，充分浸润处理；
17.步骤五：再次倒尽反应槽内液体，用备用的清洗液冲洗2s，滴加0.5ml或10滴用的清洗液清洗后甩干；
18.步骤六：向反应槽内继续滴加0.5ml或10滴tmb底物色原试剂，置于室温环境下并避光反应8-12min；
19.步骤七：反应结束后倒尽反应槽内tmb底物色原试剂，使用蒸馏水或去离子水冲洗5s后甩干，或用干净吸水纸吸干反应槽中残留水分，晾干后通过比色卡目测比较对应的显色结果定性。
20.具体的，本检测试剂盒上述检测方法采用间接检测法原理，待反应结束晾干观察比较各个测试点的显色深浅程度，其中显色深浅程度与被犬血清或血浆中的特异性ige含量成正相关。因此基于检测方法得到的最后显色深浅程度，可获得半定量的分析结果。
21.需要说明的是，犬血清或血浆中对某种或者某几种物质特异性ige抗体升高，并不一定绝对表明该犬对该物质过敏，有可能在再度接触该物质时受到刺激导致的ige大幅度升高出现过敏症状。
22.优选的，所述步骤二中，充分浸润处理的具体条件及方法为：控制在室温环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡4小时，或控制温度为4-8℃下过夜。
23.优选的，所述步骤四中，充分浸润处理的具体条件及方法为：控制在室温环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡2小时。
24.优选的，所述步骤五中，所述清洗的具体条件及方法为：控制在室温环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的频率震荡2min，重复三次。
25.优选的，所述室温环境为控制温度23-27℃，并且所述检测试剂盒检测取出后，需要预先平衡试剂至室温方可检测。
26.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
27.该犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及方法，其检测方法简便可控，能够用于犬血清或血浆中特异性抗体ige的检测；其中浓缩细胞清洗缓冲液的使用能够避免外界影响因素干扰，有利于提供一种稳定的检测环境，能够使得检测数据稳定可靠；并且该过敏原蛋白抗原包被试纸条设有多个测试点，能够在同一反应槽内反应检测，有利于减少漂移并提高检测速率；而设有的双排对称结构位于同一反应槽内的结构能够优化长宽比，以便于提高震荡效果，有利于被震荡的血清、hrp标记抗犬ige二抗、清洗液等液体均匀的流平并充分浸润，继而保障了所有测试点的有效性，有利于保障检测的准确性。
附图说明
28.图1为本发明过敏原蛋白抗原包被试纸条之一；
29.图2为本发明过敏原蛋白抗原包被试纸条之二。
具体实施方式
30.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
31.请参阅图1-2，本发明通过以下实施例来详述上述技术方案：
32.实施例1
33.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，包括比色卡和能够承载液剂或待检测样本的反应槽，还包括：
34.两条过敏原蛋白抗原包被试纸条、5ml的hrp标记抗犬ige二抗、20ml的浓缩清洗液(25x)和5ml的tmb底物色原试剂。
35.如图1和图2所示的两条过敏原蛋白抗原包被试纸条上均设有四十个均匀分布的测试点，且每个测试点处设有不同的过敏原蛋白抗原，且测试点呈双排对称结构设置在过敏原蛋白抗原包被试纸条上。
36.反应槽内设有硝酸纤维膜，且过敏原蛋白抗原包被试纸条固定安装在反应槽内。
37.待检测样本采用不溶血犬血清，控制检测试剂盒保存环境温度为4℃。
38.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，适用于上述犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，检测方法步骤具体为：
39.步骤一：首先取出检测试剂盒，将所有试剂组分平衡至室温25℃；接着将浓缩清洗液(25x)稀释25倍，分别混匀后配制成清洗液备用；
40.步骤二：使用清洗液湿润反应槽内的硝酸纤维膜，接着向反应槽内滴加0.5ml犬血清或血浆后充分浸润处理；充分浸润处理的具体条件及方法为：控制在室温25℃环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡4小时。
41.步骤三：倒尽反应槽内的液体，用备用的清洗液冲洗2s，重复3次后甩干，完成洗膜；
42.步骤四：继续向反应槽内滴加0.5mlhrp标记抗犬ige二抗，充分浸润处理；控制在室温25℃环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡2小时；
43.步骤五：再次倒尽反应槽内液体，用备用的清洗液冲洗2s，滴加0.5ml的清洗液清洗后甩干；控制在室温25℃环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的频率震荡2min，重复三次；
44.步骤六：向反应槽内继续滴加0.5ml的tmb底物色原试剂，置于室温环境25℃下并避光反应12min；
45.步骤七：反应结束后倒尽反应槽内tmb底物色原试剂，使用蒸馏水冲洗5s后甩干，并用干净吸水纸吸干反应槽中残留水分，晾干后通过比色卡比较对应的显色目测结果。
46.实施例2
47.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，包括比色卡和能够承载液剂或待检测样本的反应槽，还包括：
48.两条过敏原蛋白抗原包被试纸条、5ml的hrp标记抗犬ige二抗、20ml的浓缩清洗液(25x)和5ml的tmb底物色原试剂。
49.如图1和图2所示的两条过敏原蛋白抗原包被试纸条上均设有四十个均匀分布的测试点，且每个测试点处设有不同的过敏原蛋白抗原，且测试点呈双排对称结构设置在过敏原蛋白抗原包被试纸条上。
50.反应槽内设有硝酸纤维膜，且过敏原蛋白抗原包被试纸条固定安装在反应槽内。
51.待检测样本采用不溶血犬血清，控制检测试剂盒保存环境温度为4℃。
52.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，适用于上述犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，检测方法步骤具体为：
53.步骤一：首先取出检测试剂盒，将所有试剂组分平衡至室温25℃；接着将浓缩清洗液(25x)稀释25倍，分别混匀后配制成清洗液备用；
54.步骤二：使用清洗液湿润反应槽内的硝酸纤维膜，接着向反应槽内滴加0.5ml犬血清或血浆后充分浸润处理；充分浸润处理的具体条件及方法为：控制温度为4℃下过夜；
55.步骤三：倒尽反应槽内的液体，用备用的清洗液冲洗2s，重复3次后甩干，完成洗膜；
56.步骤四：继续向反应槽内滴加0.5mlhrp标记抗犬ige二抗，充分浸润处理；控制在室温25℃环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡2小时；
57.步骤五：再次倒尽反应槽内液体，用备用的清洗液冲洗2s，滴加0.5ml的清洗液清洗后甩干；控制在室温25℃环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的频率震荡2min，重复三次；
58.步骤六：向反应槽内继续滴加0.5ml的tmb底物色原试剂，置于室温环境25℃下并避光反应12min；
59.步骤七：反应结束后倒尽反应槽内tmb底物色原试剂，使用蒸馏水冲洗5s后甩干，并用干净吸水纸吸干反应槽中残留水分，晾干后通过比色卡比较对应的显色目测结果。
60.上述实施例1和实施例2的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒及方法，检测人员可以采用不同的使用方法通过清洗液充分清洗浸润反应槽内的硝酸纤维膜，使用震荡的方法将震荡的血清、hrp标记抗犬ige二抗、清洗液等液体均匀的流平并充分浸润，继而保障了所有测试点的有效性，有利于保障检测的准确性，如图1和图2所示，两条过敏原蛋白抗原包被试纸条分别设有40中不同的测试点，采用的对称结构能够便于快速浸润，继而有利于提高测试的可靠性和效率。
61.根据本试剂盒所采用的间接检测法原理，反应结束后的显色深浅程度与被检血清中的特异性ige含量成正相关。所以可根据实验的最后显色深浅程度，可获得半定量的分析结果.宠物体液中对某种或者某几种物质特异性ige抗体低滴度升高，并不一定表明宠物对该物质过敏，但有可能在再度接触该物质而受到刺激时ige大幅度升高出现过敏症状。
62.以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种
变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

技术特征：
1.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，包括比色卡和能够承载液剂或待检测样本的反应槽，其特征在于：还包括：过敏原蛋白抗原包被试纸条、hrp标记抗犬ige二抗、浓缩细胞清洗缓冲液和tmb底物色原试剂。2.如权利要求1所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，其特征在于：每个所述过敏原蛋白抗原包被试纸条上均设有多个均匀分布的测试点，且每个测试点处设有不同的过敏原蛋白抗原。3.如权利要求2所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，其特征在于：多个所述测试点呈双排对称结构设置在所述过敏原蛋白抗原包被试纸条上。4.如权利要求3所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，其特征在于：所述反应槽内设有硝酸纤维膜，且所述过敏原蛋白抗原包被试纸条固定安装在所述反应槽内。5.如权利要求1所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，其特征在于：所述待检测样本采用不溶血犬血清或血浆，且控制所述检测试剂盒保存环境温度为2-8℃。6.一种犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，适用于权利要求1-5中任意一项所述犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒，其特征在于：检测方法步骤具体为：步骤一：将浓缩细胞清洗缓冲液稀释25-32倍，配制成清洗液，混匀备用；步骤二：使用清洗液湿润反应槽内的硝酸纤维膜，接着向反应槽内滴加0.5ml或10滴犬血清或血浆后充分浸润处理；步骤三：倒尽反应槽内的液体，用备用的清洗液冲洗1-2s，重复多次后甩干，完成洗膜；步骤四：继续向反应槽内滴加0.5ml或10滴hrp标记抗犬ige二抗，充分浸润处理；步骤五：再次倒尽反应槽内液体，用备用的清洗液冲洗2s，滴加0.5ml或10滴用的清洗液清洗后甩干；步骤六：向反应槽内继续滴加0.5ml或10滴tmb底物色原试剂，置于室温环境下并避光反应8-12min；步骤七：反应结束后倒尽反应槽内tmb底物色原试剂，使用蒸馏水或去离子水冲洗5s后甩干，或用干净吸水纸吸干反应槽中残留水分，晾干后通过比色卡目测比较对应的显色结果定性。7.如权利要求6所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤二中，充分浸润处理的具体条件及方法为：控制在室温环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡4小时，或控制温度为4-8℃下过夜。8.如权利要求7所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤四中，充分浸润处理的具体条件及方法为：控制在室温环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的震荡频率连续震荡2小时。9.如权利要求8所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤五中，所述清洗的具体条件及方法为：控制在室温环境下，通过摇摆震荡器以30次/min的频率震荡2min，重复三次。10.如权利要求9所述的犬过敏原特异性ige抗体检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述室温环境为控制温度23-27℃，并且所述检测试剂盒检测取出后，需要预先平衡试剂至室温方可检测。

技术总结
本发明涉及过敏原特异性IgE抗体检测技术领域，具体为犬过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及方法，该犬过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及方法，其检测方法简便可控，能够用于犬血清或血浆中特异性抗体IgE的检测；浓缩细胞清洗缓冲液的使用能够避免外界影响因素干扰，有利于提供一种稳定的检测环境，能够使得检测数据稳定可靠；过敏原蛋白抗原包被试纸条设有多个测试点，能够在同一反应槽内反应检测，有利于减少漂移并提高检测速率；而设有的双排对称结构位于同一反应槽内的结构能够优化长宽比，以便于提高震荡效果，有利于被震荡的血清、HRP标记抗犬IgE二抗、清洗液等液体均匀的流平并充分浸润，继而保障了所有测试点的有效性，有利于保障检测的准确性。利于保障检测的准确性。利于保障检测的准确性。


技术研发人员：詹尼弗
受保护的技术使用者：绍兴美迪康生物技术有限公司
技术研发日：2023.03.30
技术公布日：2023/8/4